CN103906743B - 与血小板特异性糖蛋白IIb/IIIa结合的化合物以及其血栓成像的用途 - Google Patents

与血小板特异性糖蛋白IIb/IIIa结合的化合物以及其血栓成像的用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及新型的含氟化合物、其制备方法、其中间物的合成、其作为诊断试剂尤其用于血栓成像的试剂的用途。本发明涉及正电子发射层析成像(PET)试剂和其辅助前体试剂以及生产该用于在哺乳动物体内进行血栓成像的放射标记试剂的方法。更具体地，本发明涉及用于血栓成像的小的非肽类高亲合性的特异性结合的糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂。

Description

与血小板特异性糖蛋白IIb/IIIa结合的化合物以及其血栓成 像的用途
发明领域
本发明涉及新型的含氟化合物，19F和相应18F标记的化合物、其制备方法、合成中间体、其作为诊断试剂的用途，尤其是在用于血栓成像的试剂中的用途。本发明涉及正电子发射层析成像(PET)试剂和其辅助前体试剂以及生产该用于在哺乳动物体内进行血栓成像的放射标记试剂的方法。更具体地，本发明涉及用于血栓成像的小的非肽类高亲合性的特异性结合糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂。
背景
1.介绍
心肌梗死(MI)、中风、短暂性缺血发作(TIA)和肺栓塞(PE)是世界范围内发病率和死亡率产生的主要原因。这些威胁生命的临床事件作主要由血栓引起，血栓可以在全身不同血管中分布并且可以有不同尺寸和组成。中风或TIA的起源可以为例如在心脏的左心房(LA)的血栓或为在心脏和大脑之间的大动脉之一如颈动脉的血栓。对于PE的情况，可能是因为通常位于小腿的静脉血栓。
不断增长的血栓中血小板聚集的最后常见步骤的特征为通过活性糖蛋白IIb/IIIa与血纤维蛋白原的结合导致血小板内交联。在对于抗血小板和抗血栓活性的药理学研究中，一直对糖蛋白IIb/IIIa抑制剂的设计和开发有相当大的兴趣(Scarborough R.M.，Gretler D.D.，J.Med.Chem.2000，43，3453-3473)。
然而，医疗保健专业人员不仅需要在急诊护理环境下阻止血栓，而且需要对1mm3以下血栓进行成像的令人满意的方法。更具体地，血栓成像很重要是因为诸如溶栓干预的临床应用要求识别血栓形成部位并且能够监测治疗效果。这样，血栓成像可以帮助避免不必要的预防性应用以及风险相关的抗凝治疗(例如由于凝固能力降低而形成的严重出血)。
可以从该诊断过程中受益的患者人群巨大。根据在美国心脏协会的“心脏病和中风统计-2010更新(Heart disease and Stroke Statistics-2010Update)”，仅在美国就有1760万人经受着冠状动脉心脏疾病。每年估计将有785,000个美国人新增冠状动脉心脏疾病，并且在接近4700,00的人将要复发。每年大约795,000名病人经受新的或复发的中风。其中大约610,000为第一次发作。在所有中风患者中，87%为缺血性的，其中大多数是由于血栓栓塞的原因(Lloyd-Jones，D.等人，Circulation，2010，121(7)：第e46页至第215页)。在美国短暂性缺血发作(TIA)的发病率一直被估计为接近每年200,000人至500,000人，人口患病率为2.3％，转换为约500万人(Easton，J.D.等人，Stroke，2009，40(6)：第2276页至第2293页)。患有TIA的个体中有3.0%至17.3%有90天中风风险并且其中18.8%有10年中风风险。10年中风、心肌梗死或血管性死亡的合并风险甚至为42.8％(Clark，T.G.，M.F.G.Murphy和P.M.Rothwell，Journal of Neurology，Neurosurgery&Psychiatry，2003.74(5)：第577页至第580页)。
成像是识别血栓的最前沿。目前，血栓成像根据血管区域采用不同方式。颈动脉超声用于搜索颈动脉血栓，经食管超声心动图(TEE)搜索心腔凝块，超声搜索肢深静脉血栓，并且CT已成为PE检测的黄金标准。
2.现有技术描述、技术问题及其解决方案
尽管这些技术很成功，仍强烈需要血栓检测和血栓监测的分子成像解决方案：首先，某些血管部位(vascular territories)缺医少药。例如，即使是最好的成像效果仍有30%至40%的缺血性中风是“隐源性”的，也就是不确定病因，或换句话说，血栓栓塞的来源从未被发现(Guercini，F.等人，Journal of Thrombosis and Haemostasis，2008.6(4)：第549页至第554页)。隐源性中风相关来源包括在主动脉弓或颅内动脉中的粥样硬化。尤其是在弓或其他大血管中的斑块破裂被认为是隐源性中风的主要来源，并且用常规方法很难对其进行检测。尽管溃疡主动脉弓斑块与隐源性中风相关，但近来经食管超声心动图(TEE)研究的临床试验数据表明在主动脉弓中存在的增厚的血管壁不能预测缺血性中风。血栓靶向分子成像方法潜在地可以在动脉粥样硬化斑块存在下识别凝块。最后，需要一种可以使用单个方式识别全身的血栓的方法。例如，在TIA或中风随访中，目前需要多种检查以搜索栓塞物的来源(Ciesienski，K.L.和P.Caravan，Curr Cardiovasc Imaging Rep.，2010.4(1)：第77页至第84页)。
如已经提到的糖蛋白IIb/IIIa抑制剂的治疗应用(Scarborough R.M.，GretlerD.D.，J.Med.Chem.2000，43，3453-3473)在过去备受关注。同时三种糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂为市售：重组抗体(Abciximab)、环状七肽(Eptifibatid)和合成非肽类抑制剂(Tirofiban)。Tirofiban(AGGRASTAT的商标名称)属于磺胺类并且是上述药品中唯一的合成小分子。Duggan等人于1994年的专利号为5,292,756的美国专利公开了作为预防和治疗由形成血栓而引起的疾病的治疗药物的纤维蛋白原受体拮抗剂。
完成血栓成像所需要的一种尝试表现为SPECT示踪剂Apticide是Tc-99m标记的与GPIIb/IIIa受体特异性结合的多肽并且用作哺乳动物体内的血栓成像。Dean等人于1996年的专利号为5,508,020的美国专利公开了放射标记的多肽、以及用于通过Tc-99m结合部分使得将该通过Tc-99m结合部分标记有锝-99m的多肽标记成像达哺乳动物体内位点的方法和试剂盒。Dean和Lister-James描述了在活性血小板表面上与GPIIb/IIIa受体特异性结合的多肽(专利号为5,645,815的美国专利；专利号为U.S.5,830,856的美国专利和专利号为6,028,056的美国专利)。Apticide被批准用于深静脉血栓的检测。发现锝标记的多肽所达到的分辨率不令人满意，这是由于非特异性结合和强背景信号(background)。
在现有技术中描述了新型高特异性非肽类糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂(Damiano等人，Thrombosis Research2001104，113-126；Hoekstra，W.J.，等人，J.Med.Chem.，1999，42，5254-5265)。已知这些化合物为GPIIb/IIIa拮抗剂，作为抗血小板和抗血栓形成活性的治疗试剂有效(参见WO95/08536、WO96/29309、WO97/33869、WO9701/60813、专利号为6,515,130的美国专利)。还建议了糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂作为造影剂的潜在用途(美国专利2007/0189970A1)。然而，还没有利用这些化合物来进行血栓成像的实例。
本发明所描述的F-18放射标记的化合物及其前体示出了令人惊异的高代谢稳定性、低蛋白结合和快速消除。成功地示例了使用18F标记的示踪剂在体内对非常小的血栓进行非侵入性PET成像。
成像在动脉血栓和静脉血栓处示出了强信号。与Apticide相反(专利号为5,645,815的美国专利、专利号为5,830,856的美国专利和专利号为6,028,056的美国专利)，除排泄器官肝脏和肾脏以外在整个身体里没有背景信号。最令人惊异地，甚至可以检测到非常小的血栓(厚度<1mm)并且在图像中示出明亮的信号。到目前为止没有关于检测如此小的血栓的描述。Apticide示出的血栓的尺寸为89加/减26mg[平均加/减SEM](Lister-James，J.，等人，J Nucl Med，1996.37(5)：775-81页)。
对于血栓栓塞疾病诸如心肌梗死、肺栓塞、中风和短暂性缺血发作，小血栓的成像尤其重要。另外，敏感的血栓PET标记物可以用于对有心血管病危险的患者的定期健康监测，或者用于对诸如主动脉动脉瘤、慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CETPH)、心房颤动和冠状动脉血栓的危及生命的疾病的诊断。
所公开化合物的体内凝块与血液的比例(clot-to-blood ratio)在高的尤其可取的范围内，之前该性质一直没有被观察到。事实上，新化合物决定性的性质为使其明显优于现有技术的化合物的性质并且能够使其对潜在病患给药的放射剂量小很多(猴子仅需15MBq，这比最接近的现有技术美国专利2007/0189970A1中使用的剂量小了至少20倍)。
概述
本发明涉及与糖蛋白IIb/IIIa结合并且可以用作血栓诊断成像尤其是正电子发射层析成像的放射示踪剂的化合物。所公开的化合物可以以之前从未观测到的灵敏度对动脉血栓和静脉血栓进行成像并且该灵敏度足以在个位数毫克范围对最小的血栓成像。与现有技术相比，所公开的化合物在相关的组织和器官中能够基本无背景信号而成像并且以小很多的放射剂量给药。
说明
·本发明提供了式I的新化合物、式II的新化合物和式III的新化合物。
·本发明还提供了式III的化合物的放射药物组合物或其无机酸或有机酸或无机碱或有机碱的药物可接受的盐、其水合物、络合物和溶剂化物以及任选的药物可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂。
·式III的化合物可以以两性离子存在。将化合物的所有形式，包括游离酸、游离碱和两性离子，都被涵盖在本发明的范围内。本领域已知含有氨基和羧基的化合物常常以其两性离子形式的平衡存在。因此，本文中描述的含有例如氨基和羧基的任何化合物还包括其相应的两性离子。
·本发明还提供了制备含有18F的式III的化合物的方法：
直接方法：
-将式I的化合物进行18F放射标记以获得式II的化合物，并且
-将式II的化合物的保护基团裂解以获得式III的化合物。间接方法：
-将式I的化合物与18F放射标记的结构单元反应，并且
-将保护基团裂解以获得式III的化合物。
·本发明还提供了制备含有19F的式III的化合物的方法：
方法1：
-将式I的化合物19F氟化以获得式II的化合物，
-将式II的化合物的保护基团裂解以获得式III的化合物。
方法2：
-将式I的化合物与19F氟化试剂或19F氟化的结构单元反应，
-将保护基团裂解以获得式III的化合物。
详细说明
在详细描述前，强调式III的主要化合物。
本发明的主要方面和第三方面涉及式III的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐或其络合物：
其中
R3为H、F、CF3、CN或NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH=CH-Z或-C≡C-Z；
X为CH或N；
Y为18F或F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN或NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3。
本发明的第一方面涉及式I的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐或其络合物：
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、F、CF3、CN,和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q、-CH2-CH2-Q、-CH=CH-Q和-C≡C-Q；优选地R4选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q、-CH2-CH2-Q、-CH=CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢或(C1-C6)烷基；优选氢或(C1-C4)烷基，更优选氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为(C1-C6)烷基；优选(C1-C4)烷基，更优选甲基、乙基或叔丁基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基，优选地R11选自(4-甲氧基)苯基和2-噻吩基；
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；优选地W-选自CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R5选自H、CF3、CN,和NO2；
R6选自OH，卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；优选地R6选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
优选地，R1为包含叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧基羰基(FMOC)的胺基保护基团。
更优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)或苄氧羰基(Cbz)。
甚至更优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)。
优选地，R2为选自甲基、乙基、丙基、叔丁基、苄基和对甲氧基苄基的羧基保护基团。
更优选地，R2选自甲基和叔丁基。
优选地，R1为氮保护基团并且R2为羧基保护基团。
更优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)并且R2为甲基或叔丁基。
优选地，X为N。
优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)，R2为甲基或叔丁基，并且X为N。
优选地，R1为选自甲磺酰氧基和(4-甲基苯基)磺酰氧基的离去基团。
更优选地，LG为(4-甲基苯基)磺酰氧基。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R4为-O(CH2)n-LG。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R4为-O(CH2)n-LG，并且R1为Boc并且R2为甲基或叔丁基并且LG为甲磺酰氧基或(4-甲基苯基)磺酰氧基。
式I的化合物是由通式和/或如上述所定义优选特征的组合定义的。
在第一实施方案中，式I的化合物定义为式I-A单个非对映异构体，参见表A中的结构。
在第二实施方案中，式I的化合物定义为式I-A和式I-B的两种非对映异构体，参见表A中的结构。
如上所公开的优选特征并入本文的所有实施方案中。
表A：式I非对映异构体
式I-A的化合物和式I-B的化合物另外包含无机酸或有机酸或无机碱或有机碱的药物可接受的盐、水合物、络合物及其溶剂化物以及任选的药物可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂。
优选的式I的化合物为实施例21
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例22
4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例23
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例24
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例25
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例26
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例27
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例28
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-氰基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例29
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-溴-4-氰基苄基)氧基]-吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例30
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-5-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例31
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[2-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例32
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例33
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-联苯-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例34
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例35
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例36
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例37
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例2b
4-{3-[(3R)-3-({[1-(4-羟基苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例4e
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-1-[3-羟基苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例5e
4-{3-[(5R)-3-({[(1S)-1-[5-(羟基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例6a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例7a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例8d
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例17d
4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-氟-4’-羟基联苯-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例23b
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-[3-叔丁氧基-1-(4-羟基苯基)-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例25e
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例27d
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(4-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例34a
4-(3-{(3R)-3-[(3-叔丁氧基-1-{5-[(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}3-氧代丙基}-氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例35a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例36a
4-(3-{(3R)-3-[(3-叔丁氧基-1-{5-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}-氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式I的化合物为实施例37a
4-(3-{(3R)-3-[(3-叔丁氧基-1-{5-[2-(3-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}-氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
本发明的第二方面涉及式II的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐或其络合物：
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、F、CF3、CN、NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH=CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F或F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；优选氢或(C1-C4)烷基，更优选氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为(C1-C6)烷基；优选(C1-C4)烷基，更优选甲基、乙基或叔丁基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H，CF3，COR9，COOR10，SOR10，SO2R10，CN和NO2；优选地R5选自H，CF3，CN、NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
优选地，R1选自叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧基羰基(FMOC)的胺基保护基团。
更优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)或苄氧羰基(Cbz)。
甚至更优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)。
优选地，R2为选自甲基、乙基、丙基、叔丁基、苄基和对甲氧基苄基的羧基保护基团。
更优选地，R2选自甲基和叔丁基。
优选地，R1为氮保护基团以及R2为羧基保护基团。
更优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)并且R2为甲基或叔丁基。
优选地，X为N。
优选地，R1为叔丁氧羰基(BOC)，R2为甲基或叔丁基，并且X为N。
优选地，Y为。
优选地，Y为F。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R7为–O(CH2)n-F。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R7为–O(CH2)n-18F。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R7为–O(CH2)n-F并且R1为BOC并且R2为甲基或叔丁基。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R7为–O(CH2)n-18F并且R1为BOC并且R2为甲基或叔丁基。
式II的化合物是由通式和/或如上述所定义优选特征的组合定义的。
在第一实施方案中，式II的化合物定义为式II-A单个对映体，参见表B中的结构。
在第二实施方案中，式II的化合物定义为式II-A和式II-B的两个非对映异构体的混合物，参见表B中的结构。
如上所公开的优选特征并入本文的所有实施方案中。
表B：式II非对映异构体
式II-A的化合物和式II-B的化合物另外包含无机酸或有机酸或无机碱或有机碱的药物可接受的盐、水合物、络合物及其溶剂化物以及任选的药物可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂。
优选的式II的化合物为实施例1d
4-{3-[(3R)-3-({[1-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例1e
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例2c
4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例2d
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例3a
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例4f
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例5f
4-{3-[(3R)-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例6b
4-{3-[(3R)-3-{[1-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例6c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例7b
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例7c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例8e
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例8f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例9a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例9b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例10a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例10b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例11a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例11b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例12a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-氰基-4-氟苄基)氧基]-吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例13a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]-吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例15a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例16a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例17e
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)-联苯-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例17f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯基-3-基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为实施例18a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例19a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为实施例20
(E/Z)4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙烯基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[18F]氟乙氧基]苯基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
(3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]-羰基}-氨基)-3-[-3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}丙酸
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-1-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
(3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]-羰基}氨基)-3-{5-[2-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}丙酸
另一个优选的式II的化合物为
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基)-氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]-羰基}氨基)-3-{5-[2-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}丙酸
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
(3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]-羰基}-氨基)-3-(5-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}吡啶-3-基)丙酸
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[3-氰基-4-[18F]氟苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]丙酸
另一个优选的式II的化合物为
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-氰基-3-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[4-氰基-3-[18F]氟苯基]吡啶-3-基}丙酸
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
4-{3-[(3R)-3-({1-[3-(2-{2-[2-[18F]氟乙氧基]乙氧基}乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
另一个优选的式II的化合物为
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[3-(2-{2-[2-[18F]氟乙氧基]乙氧基}乙氧基)苯基]丙酸
本发明的第三方面涉及式III的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐或其络合物：
其中
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、F、CF3、CN、NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH=CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F或F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；优选氢或(C1-C4)烷基，更优选氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为(C1-C6)烷基；优选(C1-C4)烷基，更优选甲基、乙基或叔丁基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、CF3、CN、NO2；
R8选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
优选地，X为N。
更优选地，Y为18F。
优选地，Y为F。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R7为–O(CH2)n-F。
在优选的实施方案中，X为N并且R3为H并且R7为–O(CH2)n-18F。
式III的化合物是由通式和/或如上述所定义优选特征的组合定义的。
在第一个实施方案中，式III的化合物定义为式III-A单个对映体，参见表C中的结构。
在第二个实施方案中，式III的化合物定义为式III-A和式III-B的两个非对映异构体的混合物，参见表C中的结构。
如上所公开的优选特征并入本文的所有实施方案中。
表C：式III非对映异构体
式III-A的化合物和式III-B的化合物另外包含无机酸或有机酸或无机碱或有机碱的药物可接受的盐、水合物、络合物及其溶剂化物以及任选的药物可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂。
式III的化合物可以以两性离子存在。将化合物的所有形式，包括游离酸、游离碱和两性离子，都涵盖在本发明的范围内。本领域已知含有氨基和羧基的化合物常常以其两性离子形式的平衡存在。因此，本文中描述的含有例如氨基和羧基的任何化合物还包括其相应的两性离子。
优选的式III的化合物为实施例1
(3S)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例2
(3S)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例3
(3S)-3-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例4
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例5
(3S)-3-(5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例6
(3S)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例7
(3S)-3-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例8
(3S)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)吡啶]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例9
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例10
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例11
(3S)-3-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例12
(3R)-3-{5-[(3-氰基-4-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3S)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例13
(3S)-3-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例14
(3S)-3-(4-氰基-3-氟苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例15
(3S)-3-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例16
(3S)-3-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例17
(3S)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例19
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例20
(E/Z)(3S)-3-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙烯基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例38
(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例39
(3S)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例40
(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例41
(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例42
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例43
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例44
(3S)-3-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例45
(3S)-3-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例46
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例47
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
另一个优选的式III的化合物为实施例48
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
本发明的第四方面涉及制备式III的化合物的方法：起始使用式I的化合物，并且进行氟化反应以获得式II的化合物，并且将保护基团裂解；或者将式I的化合物与18F或F试剂或者18F或F结构单元反应并且将保护基团裂解以获得式III的化合物
其中
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、F、CF3、CN、NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH=CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F或F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；优选氢或(C1-C4)烷基，更优选氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为(C1-C6)烷基；优选(C1-C4)烷基，更优选甲基、乙基或叔丁基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、CF3、CN、NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、F、CF3、CN,和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH=CH-Q和-C≡C-Q；优选地R4选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH=CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢或(C1-C6)烷基；优选氢或(C1-C4)烷基，更优选氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为(C1-C6)烷基；优选(C1-C4)烷基，更优选甲基、乙基或叔丁基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基，优选地R11选自(4-甲氧基)苯基和2-噻吩基；
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；优选地W-选自CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R5选自H、CF3、CN,和NO2；
R6选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；优选地R6选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R3选自H、F、CF3、CN、NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH=CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F或F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；优选氢或(C1-C4)烷基，更优选氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为(C1-C6)烷基；优选(C1-C4)烷基，更优选甲基、乙基或叔丁基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；优选地R5选自H、CF3、CN、NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
并且m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
进一步，本发明的第四方面涉及式III的化合物的制备方法：起始使用式I的化合物，并且进行氟化反应以获得式II的化合物，并且将保护基团裂解；或者将式I的化合物与18F试剂或F试剂或者18F结构单元或F结构单元反应并且将保护基团裂解以获得式III的化合物
其中
R3为H、F、CF3、CN或NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z；-CH2-CH2-Z、-CH=CH-Z或-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y为18F或F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN或NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R4为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q、-CH2-CH2-Q、-CH=CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
W-Is CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R6为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R5意为CF3、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z；-CH2-CH2-Z、-CH=CH-Z或-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F或F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、CN或NO2。
在第一实施方案中，本发明涉及制备式III的化合物的方法，该方法包括以下步骤：
-将式I的化合物18F放射氟化，其中R4异于OH，或将式I的化合物进行18F放射氟化，其中R6异于OH，以获得式II的化合物，并且随后
-将式II的化合物的保护基团裂解以获得式III的化合物。
任选地该方法随后通过固相萃取或通过半制备级HPLC对式III的化合物进行纯化。优选的HPLC柱为反相柱，诸如ACE5μC18-HL(10x250mm)，Phenomenex Gemini5μC18110A(10x250mm)或Zorbax Bonus RP5μm C18-HL(9.4x250mm)。可以将缓冲液、酸、碱、水等等与诸如乙腈、甲醇、乙醇等的有机溶剂的混合液用作流动相。可以将从HPLC纯化过程中所收集的峰在固相萃取柱上、优选地通过C18分离柱上固定(trap)。可以将诸如乙腈、甲醇、乙醇等等的纯有机溶剂或水性缓冲液、酸、碱、水等或有机溶剂和所列举的水性溶液的混合液用于将纯化的F-18标记的产物从柱上洗脱。优选地，用纯的乙醇或其与水的混合液将F-18标记的产物洗脱。
通式I的化合物、通式II的化合物和通式III的化合物所公开的优选特征和实施方案并入本文。
18F氟化方法为本领域技术人员已知。例如，18F试剂可以为K18F，KH18F2，H18F，Rb18F，Cs18F，Na18F。
任选地，18F试剂包括螯合络合物，诸如穴醚(例如：4,7,13,16,21,24-六氧-1,10-二氮双环[8.8.8]二十六烷—)或冠醚(例如：18-冠-6醚)。
18F试剂还可以为18F-的四烃基铵盐或18F-的四烃基鏻盐，本领域技术人员已知，例如：四丁基[18F]氟化铵、四丁基[18F]氟化鏻。
优选地，18F试剂为Cs18F、K18F、KH18F2、四丁基[18F]氟化铵并且包含
可以用于该氟化反应的试剂、溶剂和条件都是常见的并且为本领域技术人员所熟知。参见例如J.Fluorine Chem.，27(1985):177-191；Coenen，Fluorine-18LabelingMethods：Features和Possibilities of Basic Reactions，(2006)，Schubiger P.A.，Friebe M.，Lehmann L.，(编)，PET-Chemistry-The Driving Force in Molecularimaging.Springer，Berlin Heidelberg，第15页至第50页)。优选地，本方法中使用的溶剂为DMF、DMSO、乙腈、DMA或其混合物，优选地溶剂为乙腈、DMSO。
通式I(其中R4或R6的意为OH，卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-))的烷基18F化合物的前体为例如卤化物或如甲磺酰氧基、(4-甲基苯基)磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、九氟丁基磺酰氧基、(4-溴苯基)磺酰氧基、(4-硝基苯基)磺酰氧基等的磺酸酯(式I中的R4或R6含有离去基团(LG))的烷基18F化合物的前体可以根据本领域已知的方法从相应的羟基化合物进行合成(J.March，Advanced或ganic Chemistry，第四版1992年，John Wiley&Sons，第352页)。
通式I(其中R4或R6意为OH)的烷基18F化合物的前体可以在碱性条件下与辅基(prosthetic group)耦合，该辅基含有F-18标记的且优良的离去基团如卤化物或像甲磺酰氧基、(4-甲基苯基)磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、九氟丁基磺酰、(4-溴苯基)磺酰氧基、(4-硝基苯基)磺酰氧基等的磺酸酯。可以根据本领域已知的方法进行本发明所描述的间接标记(参见：Schubiger P.A.，Friebe M.，Lehmann L.，(主编)，PET-Chemistry-The DrivingForce in Molecular imaging.Springer，Berlin Heidelberg，第15页至第50页)。
通式I(其中R4或R6意为卤素、-NO2,-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-))的烷基18F化合物的前体为例如卤化物、硝基化合物、三甲基铵化合物、芳基碘鎓化合物等等，可以通过本领域已知方法将其转化为相应的18F化合物(L.Cai，S.Lu，V.Pike，Eur.J.或g.Chem.2008，2853-2873)。可以通过本领域已知方法合成这些前体的起始材料(R.C.Larock，Comprehensiveor ganic Transformations，VCH Publishers1989)。
任选地，该方法随后通过固相萃取或通过半制备级HPLC对式III的化合物进行纯化。优选的HPLC柱为反相柱，诸如ACE5μC18-HL(10x250mm)，Phenomenex Gemini5μC18110A(10x250mm)或Zorbax Bonus RP5μm C18-HL(9.4x250mm)。可以将缓冲液、酸、碱、水等等与诸如乙腈、甲醇、乙醇等的有机溶剂的混合液用作流动相。可以将从HPLC纯化过程中所收集的峰在固相萃取柱上固定，优选地通过C18分离柱。可以将纯的诸如乙腈、甲醇、乙醇等的有机溶剂或水性缓冲液、酸、碱、水等或有机溶剂和所列举的水性溶液的混合液用于将纯化的F-18标记的产物从柱上洗脱。优选地，用纯乙醇或其与水的混合液将F-18标记的产物洗脱。
在第二实施方案中，本发明涉及制备式III的化合物的方法，该方法包括以下步骤：
-使其中R4为OH的式I的化合物与18F标记的结构单元反应，或使其中R6为OH的式I的化合物与18F标记的结构单元反应，并且随后
-将式II的化合物的保护基团裂解以获得式III的化合物。
任选地，该方法随后通过固相萃取或通过半制备级HPLC对式III的化合物进行纯化。优选的HPLC柱为反相柱，诸如ACE5μC18-HL(10x250mm)，Phenomenex Gemini5μC18110A(10x250mm)或Zorbax Bonus RP5μm C18-HL(9.4x250mm)。可以将缓冲液、酸、碱、水等与诸如乙腈、甲醇、乙醇等的有机溶剂的混合液用作流动相。可以将从HPLC纯化过程中所收集的峰在固相萃取柱上固定，优选地通过C18分离柱。可以将纯的诸如乙腈、甲醇、乙醇等的有机溶剂或水性缓冲液、酸、碱、水等或有机溶剂和所列举的水性溶液的混合液用于将纯化的F-18标记的产物从柱上洗脱。优选地，用纯的乙醇或其与水的混合液将F-18标记的产物洗脱。
在第三实施方案中，本发明涉及式III的化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
-使其中R4为OH的式I的化合物与包含离去基团LG的18F标记的结构单元反应，或使其中R6为OH的式I的化合物与包含离去基团LG的18F标记的结构单元反应，并且随后
-将所获得的式I的化合物进行18F放射标记，以获得式II的化合物，并且随后
-将保护基团裂解以获得式III的化合物。
任选地，该方法随后通过固相萃取或通过半制备级HPLC对式III的化合物进行纯化。优选的HPLC柱为反相柱，诸如ACE5μC18-HL(10x250mm)，Phenomenex Gemini5μC18110A(10x250mm)或Zorbax Bonus RP5μm C18-HL(9.4x250mm)。可以将缓冲液、酸、碱、水等与诸如乙腈、甲醇、乙醇等的有机溶剂的混合液用作流动相。可以将从HPLC纯化过程中所收集的峰在固相萃取柱上固定，优选地通过C18分离柱。可以将诸如乙腈、甲醇、乙醇等的纯的有机溶剂或水性缓冲液、酸、碱、水等或有机溶剂和所列举的水性溶液的混合液用于将纯化的F-18标记的产物从柱上洗脱。优选地，用纯的乙醇或其与水的混合液将F-18标记的产物洗脱。
本发明的第五方面涉及式III的化合物的制备方法(冷标准(cold standard))。
在第一实施方案中，本发明涉及式III的化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
-将式I的化合物氟化以获得式II的化合物，并且随后
-将式II的化合物的保护基团裂解以获得式III的化合物。
任选地，在该方法之后对式III的化合物进行纯化。适合的纯化方法为色谱方法(例如HPLC、快速色谱法)。
通式I的化合物、通式II的化合物和通式III的化合物所公开的优选特征和实施方案并入本文。
在第二实施方案中，本发明涉及式III的化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
-使其中R4为OH的式I的化合物与包含氟的结构单元反应，或使其中R6为OH的式I的化合物与包含氟的结构单元反应，并且随后
-将保护基团裂解以获得式III的化合物。
任选地，在该方法之后对式III的化合物进行纯化。适合的纯化方法为色谱方法(例如HPLC、快速色谱法)。
通式I的化合物和通式III的化合物所公开的优选特征和实施方案并入本文。
在第三实施方案中，本发明涉及式III的化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
-使其中R4为OH的式I的化合物与包含离去基团LG的18F标记的结构单元反应，或使其中R6为OH的式I的化合物与包含离去基团LG的18F标记的结构单元反应，并且随后
-将所获得的式I的化合物氟化，以获得式II的化合物，并且随后
-将保护基团裂解以获得式III的化合物。
任选地，在该方法之后对式III的化合物进行纯化。适合的纯化方法为色谱方法(例如HPLC、快速色谱法)。
本发明还涉及式III的化合物在制备治疗用药剂或药物中的用途。
本发明的第六方面涉及用于制备血栓成像用成像示踪剂或放射药物试剂的式III的18F标记化合物。成像试剂或放射药物试剂优选适于PET应用的成像试剂。
换言之，本发明涉及作为成像示踪剂或放射药物试剂的通式III的18F标记的化合物。
本发明涉及用于血栓成像的通式III的18F标记化合物。
本发明还涉及用于血栓成像或诊断的方法，该方法包括以下步骤：
-将有效量的式III的18F标记化合物向哺乳动物给药，
-获得该哺乳动物的图像并且
-评价该图像。
本发明还涉及成像方法，该方法包括将可检测量的式III的18F标记的化合物引入患者体内并且对所述患者成像的步骤。
本发明的另一个方面为如上描述的式III的化合物用于诊断患者中，具体地在诸如人的哺乳动物中的血栓的用途。
优选地，用正电子发射层析成像(PET)来进行本发明化合物在诊断中的用途。
本发明的另一个方面涉及血栓成像的方法。该方法包括a)将如上和本文中描述的包含可检测标记的化合物向哺乳动物给药，并且b)检测由血栓特别地吸收的所述化合物产生的信号。
本发明又一个方面涉及对于诸如心肌梗死、肺栓塞、中风和短暂性缺血发作的血栓栓塞疾病的患者的诊断方法。该方法包括a)将本发明的具有可检测标记的化合物向需要该诊断的人给药，用于如上和本文中描述的在人体内检测该化合物，并且b)测量来自由对人施用化合物所产生的可检测标记的信号，优选地通过正电子发射层析成像(PET)测量。
本发明又一个方面涉及对于患有诸如主动脉动脉瘤、慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CETPH)、心房颤动和冠状动脉血栓的危及生命疾病的患者的诊断方法。该方法包括a)将本发明的具有可检测标记的化合物向需要该诊断的人给药，如上和本文中描述地用于在人体内检测该化合物，并且b)测量来自由对人施用化合物所产生的可检测标记的信号，优选地通过正电子发射层析成像(PET)测量。
本发明的又一方面涉及对存在患心血管病风险的患者的诊断和健康监测的方法。该方法包括a)将本发明的具有可检测标记的化合物向需要该诊断的人给药，如上和本文中描述地用于在人体内检测该化合物，并且b)测量来自由对人施用化合物所产生的可检测标记的信号，优选地通过正电子发射层析成像(PET)测量。
血栓PET成像的诊断方法和用途涉及施用以下所列举的优选的化合物之一：
(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
包括如上描述的非对映异构体、其混合物，以及其适合的盐，以及药物可接受载体或稀释剂。
本发明的第七方面涉及包含一个小瓶或多个小瓶的试剂盒，该一个小瓶或多个小瓶包含以下组分
a)预定量的式I的化合物，或
b)预定量的19F标记的式III的化合物。
进一步，根据本发明该方面，试剂盒包括具有以上公开的化学通式的化合物连同可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂或其混合物。
优选地，所述试剂盒包括生理学上可接受的媒介物或载体和任选的佐剂和防腐剂，适于实施本文公开的反应和/或生成18F标记试剂的试剂。另外，所述试剂盒可以包括使用说明。
本发明第八方面涉及通式III化合物用于进行生物检测和色谱鉴别的用途。更优选地，该用途涉及19F标记的通式III的化合物。
19F标记的式III的化合物用作参考和/或测量试剂。
19F标记的式III化合物的如上文定义并且包含所有实施方案和优选的特征。
本发明的第九方面涉及包含以上各方面定义以及实施方案所包括的通式I化合物、通式II化合物和通式III化合物的组合物。
在第一实施方案中，本发明涉及包含18F标记的式III化合物和药物可接受的佐剂的组合物。该佐剂尤其包括载体、溶剂或稳定剂。
本领域技术人员熟知适合所需的药物配方、药物制剂或药物组合物的佐剂。
将本发明的化合物、药物组合物或组合以任何通常接受的本领域可行的给药模式进行给药。肠胃外给药可用于规避生物吸收步骤。优选静脉递送。
优选地，将本发明的组合物给药以便用于成像的活性化合物的剂量为每个患者3.7MBq(0.1mCi)至740MBq(20mCi)。
更优选地，使用的剂量为每个患者3.7MBq至400MBq。
优选地，该组合物包含以下公开的化合物之一：
(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
包括如上描述的非对映异构体、其混合物，以及其适合的盐，以及药物可接受载体或稀释剂。
在第二实施方案中，本发明涉及包含18F标记的式III化合物的组合物。该组合物可以用于分析目的。
优选地，该组合物包含以下公开的化合物之一：
(3S)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3R)-3-{5-[(3-氰基-4-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3S)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3R)-3-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(4-氰基-3-氟苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
(E/Z)(3S)-3-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙烯基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及适合的盐。
本发明的第三个实施方案涉及包含式I的化合物的组合物。该组合物可以用于制备18F标记的式III的化合物(放射药物)和19F标记的式III的化合物(冷标准)。
优选地，该组合物包含以下公开的化合物之一：
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-氰基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-溴-4-氰基苄基)氧基]-吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-5-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[2-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-联苯-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙炔基}吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
定义
以下术语描述了本发明化合物的化学骨架的通用结构元素和具体结构元素，以及附于其上的官能团和取代基。它们结合的方式可以使结构符合化学化合价规则并且具有适合的化学稳定性，即化合物足够稳定以经受从反应混合物中分离至可用程度的纯化，以及用于它们的预期用途，诸如药物组合物的配制。
处于本发明的目的，除非特别说明，术语具有以下意义：
术语“胺基保护基团”，在文中单独使用或将其作为另一个基团的一部分使用时，其为本领域技术人员已知或显而易见的，其选自但不限于氨基甲酸酯、酰胺、酰亚胺、N-烷基胺、N-芳基胺、亚胺、烯胺、硼烷、N-P的保护基团、N-亚磺酰、N-磺酰基和N-甲硅烷基的保护基团，以及选自但不限于Greene and Wuts的教科书《Protecting groups in OrganicSynthesis》，第三版，第494页至第653页中描述的保护基团，这里以引用的方式并入。“胺基保护基团”优选苯甲氧甲酰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)、叔丁氧羰基(BOC)、9-芴基甲氧基羰基(FMOC)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、3,4-二甲氧基苄基(DMPM)、对甲氧基苯基(PMP)、三苯基甲基(Trityl)、甲氧基苯基二苯基甲基(MMT)，或受保护的氨基为1,3-二氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基(邻苯二甲酰亚胺)或叠氮基。
术语“羧基保护基团”，在本文中单独使用或将其作为另一个基团的一部分使用时，为本领域技术人员已知或显而易见的，其选自但不限于酯、酰胺和酰肼的保护基团，以及选自但不限于Greene和Wuts的教科书《Protecting groups in Organic Synthesis》，第三版，第369页至第453页中描述的保护基团，这里以引用的方式并入。“羧基保护基团”优选甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、烯丙基、苄基、4-甲氧基苄基或4-甲氧基苯基。
术语“烷基”，单独或将其作为另一个基团的一部分时，是指具有1个至6个碳原子的直链或支链烷基基团，诸如，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基。
术语“卤素”表示氟、氯和溴。
术语“离去基团”，在文中单独使用或将其作为另一个基团的一部分使用时，为本领域技术人员已知或显而易见的，并且意味着通过亲核试剂从化学物质上可分离的原子或一组原子。给出的实例为例如在P.Stang等人Synthesis(1982)，第85页至第125页的表2中(第86页表2中最后一行需要修正，用“n-C4F9S(O)2-O-全氟丁基”代替“n-C4H9S(O)2-O-全氟丁基”)；Carey and Sundberg，Organische Synthese，(1995)，第279页至第281页，表5.8；或Netscher，Recent Res.Dev.Org.Chem.，2003，7，71-83，方案1、2、10和15和其它。(Coenen，Fluorine-18Labeling Methods：Features和Possibilities of BasicReactions，(2006)，Schubiger P.A.，Friebe M.，Lehmann L.，(编)，PET-Chemistry-TheDriving Force in Molecular imaging.Springer，Berlin Heidelberg，第15页至第50页，明确地：第25页的方案4，第28页的方案5，第30页的表4和第33页的图7)。
优选地，“离去基团”为氟、氯、溴、碘，或包括但不限于甲磺酰氧基、(4-甲基苯基)磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基、九氟丁基磺酰氧基、(4-溴苯基)磺酰氧基、(4-硝基苯基)磺酰氧基、(2-硝基苯基)磺酰氧基、(4-异丙基苯基)磺酰氧基、(2,4,6-三异丙基苯基)磺酰氧基、(2,4,6-三甲基苯基)磺酰氧基、(4-叔丁基苯基)磺酰氧基、(4-甲氧基苯基)磺酰氧基的磺酸酯离去基团。
术语“18F结构单元”，在文中单独使用或将其作为另一个基团的一部分使用时，为本领域技术人员已知或显而易见的，其选自通过辅基用于18F氟化的间接方法的基团。这意味着最初18F标记的化合物还含有适合该辅基与第二分子耦合的官能团。该官能团可以为包括但不限于卤素离去基团或磺酸酯离去基团的离去基团。给出的实例为例如Block等人的J.Label.Compd.Radiopharm.(1988)，第201页至第216页中的18F氟烷基化反应和Block等人的J.Label.Compd.Radiopharm.(1988)，第185页至第200页中的18F氟烷基化反应。该官能团还可以为另一个亲电部分如醛用于例如与第二分子通过还原胺化耦合(Wilson等人J.Label.Compd.Radiopharm.(1990)，p.1189-1199)。或者官能团还可以为亲电部分例如用作氟酰胺化的胺基诸如Shia等人Biochem.(1989),第4801页至第4806页。
优选地从辅基上取下的“18F结构单元”用作18F氟烷基化的基团如n-[18F]氟-1-芳基磺酸盐，如n-[18F]氟烷氧基烷基-1-芳基磺酸酯和n-[18F]氟烷基-1-卤化物。更优选地“18F结构单元”为溴-[18F]氟甲烷、1-溴-2-[18F]氟乙烷、1-溴-2-[18F]氟丙烷、2-[18F]氟乙基甲磺酸酯、2-[18F]氟乙基4-甲基苯磺酸、2-[18F]氟乙基4-硝基苯磺酸酯、2-[18F]氟丙基甲磺酸酯、2-[18F]氟丙基4-甲基苯磺酸、2-[18F]氟丙基4-硝基苯磺酸、2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙基甲磺酸酯、2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]-乙基-4-甲基苯磺酸酯和2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙基4-硝基苯磺酸酯。
如果本发明的化合物没有任何其它手性中心或其它形式的异构中心的定义，那么本文旨在涵盖该立体异构体的所有形式，包括E-异构体和Z-异构体和非对映异构体。含有手性中心的化合物可以作为非对映异构体混合物使用，或者作为非对映异构体富集的混合物使用，或者可以使用已知技术分离这些异构体混合物并且可以单独使用单个立体异构体。如果化合物可能存在互变异构形式，那么无论是以平衡状态存在还是以一种形式占优存在，各个互变异构形式均涵盖于本发明中。
本发明化合物的适合的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。
本发明化合物的药物可接受的盐还包括常用的碱，如，举例来说并优选地，碱金属盐(例如钠盐和钾盐)，碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和铵盐，衍生自氨或具有1至16个碳原子的有机胺、诸如举例来说并优选地，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因(procaine)、二苄胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。
术语“血栓”描述了所有种类的血凝块(静脉血栓和动脉血栓)。术语“血栓”还包括如“血栓性沉淀”或“血栓形成位点”的任何术语。血栓通常是由在止血中或在如血栓性疾病等不同原因引起的病理性血液凝固步骤中引起的。本研究涵盖了在血管树某处阻塞的所有包含血小板的血栓以及循环血栓(栓塞)。
文中使用的术语“纯化”的目的为去除过量的诸如18F-氟的副产物并且浓缩和固定反应产物。通过本领域技术人员已知的适合放射示踪剂的任何方法进行纯化，例如色谱法、HPLC、固相萃取柱(cartidge)或固相萃取柱(column)。
一般合成法
通常文献中记载了该化合物的合成：
1)J.Med.Chem.1999，42，5254-5265
2)Organic Progress Research&Development2003，7，866-872
在实验部分详细描述了对该方法的改进和改善。流程1中示例了式I的化合物的主要合成路径。
流程1
立体化学
从流程1中概述的合成法中获得的式I的化合物为两种非对映异构体的化合物。在合成最后通过HPLC进行分离。可以实现通往保护的3-氨基-3-芳基丙酸(流程2至流程4)的立体选择(实施例4、5、8、25和27)。通常，可以获得β-氨基酸合成的立体选择法(M.Liu，M.P.Sibi，Tetrahedron200258，7991-8035或E.Juaristi，V.Soloshonok Eds.ofEnantioselective Synthesis of Beta-Amino Acids，second edition，Wiley-interscience，ISBN0-471-46738-3)。
流程2
WO2010/038081第143页描述了(E)-3-(5-溴-吡啶-3-基)丙烯酸叔丁酯的合成。在J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，2002，1858-1868中描述了为了合成(S)-3-氨基-3-吡啶-3-基)丙酸叔丁酯而完成的(S)-3-氨基-3-(5-溴-吡啶-3-基)-丙酸叔丁基酯的制备。这个化合物特有的旋光度[α]D为-17.6°，而所获得的溴衍生物的[α]D为-18.8°。使用纯的对映异构中间体合成的最终产物给出了活性非对映异构体，其中对映异构体过量53%(流程2)。
在第二种方式(方案流程3)中，3-吡啶基腈可以转变为芳烯胺，其立体选择地被还原为对映异构富集的3-氨基-3-芳基丙酸叔丁基酯(Yi Hsiao等人J.Am.Chem.Soc.2004，126,，9918-9919)。通过活性酯将酯与哌啶片段(fragment)耦合。保护基团的进一步标准转变或钯催化的转变诸如Suzuki反应或Sonogashira反应提供了示例性化合物。
流程3
在第三种方式(流程4)中，将混合的丙二酸二酯与在手性硫脲催化剂存在下衍生自相应N-BOC氨基砜(Y.Yamaoka等人，Synthesis2007，16，2571-2575)的原位生成的BOC亚胺通过立体选择性Mannich反应进行耦合(J.Song等人，Org.Lett.2007，9，603-606)。包括取代的单丙二酸酯的脱羧的保护基团的进一步标准转变或钯催化的转变产生示例性化合物。
流程4
放射化学
根据以下概述的三种一般合成过程中的一种获得含有F-18标记的式II的化合物和式III的化合物。
通过直接标记一般合成烷基F-18化合物
用填有[18O]水的银靶(1mL)回旋加速器质子轰击进行18O(p,n)18F反应来生产[18F]氟化物。使水性[18F]氟化物通过固相萃取柱(例如QMA-树脂柱，Waters，Sep Pak Light QMA专利号：WAT023525)。随后用(4,7,13,16,21,24-六氧-1,10-二氮双环[8.8.8]二十六烷)和碳酸钾(在0.5ml水中含1.0mg)的混合物将所捕获的[18F]氟化物从柱上洗脱。或者将碳酸铯(在0.5ml水中含2.3mg)用作碱。将该18F氟化物(高达10GBq)溶液在110-120℃的氮气流下共沸干燥20-30分钟。在这段时间中将3x1ml的乙腈加入并且蒸发。干燥后将前体溶液(在200-300μL乙腈中含2-4mg)加入。将反应容器在100-110℃下加热10-20分钟以有效地标记。通过HPLC对反应混合物粗品进行分析。通过共同注入反应混合物和通式II的F-19冷标准来确认产物峰。
根据通式II的F-18中间体的保护基团来进行一步水解或两步水解。通式II的甲酯化合物的情况下，将0.5M NaOH(100μl)加入反应混合物中并且在25℃下搅拌5-10分钟后，将1M HCL(200μl)加入并且在100-110℃下连续搅拌5-15分钟。通式II的叔丁酯的情况下，将1M HCl(150-400μL)加入反应混合物中并且在100-110℃下连续搅拌5-15分钟。
完全水解后将反应混合物任选地用1M NaOH中和或用水(4mL)直接稀释并且将其转移至半制备级HPLC进行纯化。将所收集的产物峰用水稀释(15-40ml)并且固定在C18分离柱上。将纯的F-18标记的产物用纯的乙醇(1-2ml)从柱上洗脱。在80-90℃下乙醇完全蒸发后将最终F-18产物溶于水(100-300μl)中。
通过直接标记一般合成芳基F-18化合物
用填有[18O]水的银靶(1mL)回旋加速器质子轰击进行18O(p,n)18F反应来生产[18F]氟化物。使水性[18F]氟化物通过固相萃取柱(例如QMA-树脂柱，Waters，Sep Pak Light QMA专利号：WAT023525)。随后用(在1.5ml乙腈中含10.4mg)和碳酸氢钾(在0.5ml水中含2.8mg)的混合物将所固定的[18F]氟化物从萃取柱上洗脱。将该18F氟化物(高达5GBq)溶液在110-120℃的氮气流下共沸干燥20-30分钟。在这段时间中将3x1ml的乙腈加入并且蒸发。干燥后将前体溶液(在DMSOμL乙腈中含1-2mg)加入。将反应容器在150-160℃加热10-15分钟以有效地标记。通过HPLC对反应混合物粗品进行分析。通过共同注入反应混合物和通式II的F-19冷标准来确认产物峰。将通式II的F-18中间体进行两步水解。将0.5MNaOH(100μl)加入反应混合物中并且在25℃下搅拌5-10分钟后，将1M HCl(200μl)加入并且在70-80℃下连续搅拌5-15分钟。
完全水解后将反应混合物任选地用1M NaOH中和或用水(4mL)直接稀释并且将其转移至半制备级HPLC进行纯化。将所收集的产物峰用水稀释(15-40ml)并且固定在C18分离柱上。将纯的F-18标记的产物用纯的乙醇(1-2ml)从柱上洗脱。在80-90℃下乙醇完全蒸发后将最终F-18产物溶于水(100-300μl)中。
用通式18F-O(CH2)n-LG、18F-(OCH2CH2)m-LG的辅基间接标记一般合成烷基F18化合物，其中LG表示用于耦合的适合的离去基团
用填有[18O]水的银靶(1mL)回旋加速器质子轰击进行18O(p,n)18F反应来生产[18F]氟化物。使水性[18F]氟化物通过固相萃取柱(例如QMA-树脂柱，Waters，Sep Pak Light QMA专利号：WAT023525)。随后用(在1.5ml乙腈中含5.27mg)和碳酸钾(在0.5ml水中含1.0mg)的混合物将所固定的[18F]氟化物从萃取柱上洗脱。将该18F氟化物(高达5GBq)溶液在110-120℃的氮气流下共沸干燥20-30分钟。在这段时间中将3x1ml的乙腈加入并且蒸发。干燥后将前体辅基(10mg)的DMF或邻二氯苯(500μL)溶液加入。将反应容器在100-130℃加热10-15分钟以有效地标记。将所得的通式18F-O(CH2)n-LG或18F-(OCH2CH2)m-LG的辅基或通过在缓慢氮气流下蒸馏纯化(在100-110℃下15-25分钟)(例如对2-[18F]氟乙基溴)或通过用水(4mL)稀释后用半制备级HPLC进行纯化(例如甲苯-4-磺酸2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙基酯)。在通过半制备级HPLC进行纯化的情况下，将所收集的产物峰用水稀释(15-20ml)并且固定在C18分离柱上。将纯的F-18标记的产物用乙腈(1-2ml)从柱上洗脱。将乙腈在90-100℃下蒸发。
将与该辅基待耦合的前体(2.5mg)溶于DMF(100-300μl)中并且将2M的NaOH(20μl)加入用于去质子化。将该化合物加入含有辅基18F-O(CH2)n-LG或18F-(OCH2CH2)m-LG的小瓶中。在100-110℃下加热20-25分钟后，将重新冷却的反应混合物用1-2M NaOH(100μl)进行处理。在将2-4M的HCl(200μl)加入之前，将溶液在搅拌10-15分钟。将混合物在100-110℃下加热10分钟。
完全水解后将反应混合物任选地用1M NaOH中和或用水(4mL)直接稀释并且将其转移至半制备级HPLC进行纯化。将所收集的产物峰用水稀释(15-40ml)并且固定在C18分离柱上。将纯的F-18标记的产物用纯的乙醇(1-2ml)从柱上洗脱。在80-90℃下乙醇完全蒸发后将最终F-18产物溶于水(100-300μl)中。
附图说明
图1：
亲合性测定：在第一步中，将从人血小板中纯化得到的人GPIIb/IIIa固定在96孔实心板上。48小时后将板清洗并且将未特异性结合的位点用封闭。2.在随后的步骤中，将该板和与浓度增加的新型小分子化合物(抑制剂，19F)混合的氚标记的已知的GPIIb/IIIa结合剂(3H)同时培养。抑制剂的亲合性越高，氚化的已知GPIIb/IIIa结合剂(3H)的结合部分越少。用微孔板闪烁计数器测量未被抑制剂取代的氚化化合物(3H)的部分。
图2：
图示出了血液与凝块的比对应所考察化合物的IC50值。每个点都用相应的实施例数字标注。血液与凝块的比随亲合性的增加而下降。
图3：
实施例41中所描述的化合物在小鼠体内的生物分布。化合物从血液中迅速消失并且通过肾脏和肝脏快速排泄。注射15分钟后，在整个身体的其余部分几乎没有背景信号。
图4：
实施例40中所描述的化合物在食蟹猕猴体内的血液动力学。
从注射前不久至注射60分钟后连续进行PET-成像。在注射后3、10、30和60分钟时抽取静脉血标本并且在伽玛计数器(自动伽玛计数器Wizard23，Perkin Elmer)中测量并且表示为cpm/mg的血。另外，在整个成像过程中用PET成像测量了化合物的血液浓度并且以%ID/g表示。如已经在小鼠体内示出的，化合物从血液中迅速消失。
图5：
食蟹猕猴体内动脉血栓的PET成像：图示出了在粗糙的聚乙烯导管(PE50)的表面上生成的动脉血栓(箭头2)。在第一个15分钟内在靠近心脏的降主动脉(箭头1)内已经可以看到血栓(左图)。在高达60分钟内没有信号丢失(右图)。化合物从血液中迅速消失并且15分钟后在邻近的组织和器官中没有背景信号。
图6：
食蟹猕猴体内动脉血栓的PET成像：图示出了在聚乙烯导管(PE50)的表面上生成的动脉血栓(箭头2)，该聚乙烯导管的表面的两部分被粗糙化并且这两部分中间留有间隔。血栓之间没有可见的信号证明了化合物仅与血栓结合并且不与聚合物导管结合。在第一个15分钟内在靠近心脏的降主动脉(箭头1)内已经可以看到血栓(左图)。在高达60分钟内没有信号丢失(右图)。化合物从血液中迅速消失并且15分钟后在邻近的组织或器官中没有背景信号。
图7：
从猴子2体内去除动脉血栓：图示出了聚乙烯导管(PE50，外径1mm)，该聚乙烯导管的表面的两部分(1/3)被粗糙化并且这两部分中间留有间隔(2)。血栓仅在导管表面的粗糙部分生成并且非常薄(接近1/10mm[箭头1]或甚至更薄[箭头3])。这表明了可以检测在体内任何位置的甚至于最微小的血栓。
图8：
用减少的每只动物15MBq的示踪剂剂量对食蟹猕猴体内的动脉血栓和静脉血栓PET成像。该图示出了在聚乙烯导管(PE50)的粗糙的表面上生成的几个动脉血栓(箭头3)和几个静脉血栓(箭头4)，该聚乙烯导管的表面的几部分被粗糙化并且这其间留有间隔。可以在第一个15分钟内看到所有血栓。然而，15分钟后由于背景信号很低所以对比度好很多。去除血栓导管，另一个动脉血栓在图像中出现，随后发现这个血栓在右颈动脉上并且极有可能是在准备时血管损伤导致的。在前15分钟内仅可见心脏(左图，箭头1)，直至60分钟肝脏(右图，箭头5)仍可见。
实验部分
缩写
将实施例通过以下分析方法进行分析和表征以确定特征保留时间和质谱：
方法1：UPLC(ACN-HCOOH)：
仪器：Waters Acquity UPLC-MS SQD3001；柱：Acquity UPLC BEHC181.750x2.1mm；洗脱剂A：水+0.1%甲酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-1.6分钟1-99%B，1.6-2.0分钟99%B；流速：0.8ml/分钟；温度：60℃；进样：2μl；DAD扫描：210-400nm；ELSD
方法2：UPLC(ACN-NH3)：
仪器：Waters Acquity UPLC-MS SQD3001；柱：Acquity UPLC BEHC181.750x2.1mm；洗脱剂A：水+0.2%氨水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-1.6分钟1-99%B，1.6-2.0分钟99%B；流速：0.8ml/分钟；温度：60℃；进样：2μl；DAD扫描：210-400nm；ELSD
实施例
实施例1
(3S)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例1a
3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(3-羟基苯基)丙酸甲酯
将3-氨基-3-(3-羟基苯基)丙酸甲酯(2.78g，14.2mmol)的THF(70mL)溶液和三乙胺(3mL，21.3mmol)加入二碳酸二叔丁酯的THF(70mL)溶液并且将混合物搅拌72小时。将饱和的氯化铵溶液加入并且用二氯甲烷萃取混合物。用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥并且在真空中干燥。将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯占己烷的0至30%)纯化以获得3.24g的3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(3-羟基苯基)丙酸甲酯。
1H-NMR(400MHz，DMSOd6)：δ=1.35(s，9H)，2.56-2.75(m，2H)，3.55(s，3H)，4.81(m，1H)，6.60(ddd，1H)，6.69(m，2H)，7.08(dd，1H)，7.42(d，1H)，9.37(s，1H)ppm。
实施例1b
3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基)丙酸甲酯
将碳酸铯(9.84g，30mmol)和1-氟-2-碘乙烷(5g，30mmol)加入3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(3-羟基苯基)丙酸甲酯(4.46g，20mmol)的THF(70mL)溶液并且将混合物搅拌9小时。过滤后将滤液真空浓缩以获得5g的3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基)丙酸甲酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ=1.43(br.s，9H)，2.83(m，2H)，3.63(s，3H)，4.23(ddd，2H)，4.76(ddd，2H)，5.08(br.，1H)，5.48(br.，1H)，6.82(dd，1H)，6.88(s，1H)，6.91(d，1H)，7.26(t，1H)ppm。
实施例1c
3-氨基-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸甲酯
将三氟乙酸(5.64mL，73mmol)加入3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基)丙酸甲酯(5.0g，20mmol)的二氯甲烷溶液中。室温下搅拌24小时后，另加入三氟乙酸(1.13mL)并且连续搅拌20小时。将混合物减压浓缩并且将残留物通过硅胶色谱法(在二氯甲烷中0至40%的甲醇)纯化以获得4.9g的3-氨基-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸甲酯。
1H-NMR(300MHz，DMSOd6)：δ=2.86-3.12(m，2H)，4.13-4.24(m，1H)，4.24-4.34(m，1H)，4.52-4.75(m，2H)，4.75-4.95(m，1H)，7.00(dd，1H)，7.06(d，1H)，7.12(d，1H)，7.28-7.42(m，1H)，8.44(br.s.，2H)ppm。
实施例1d
4-{3-[(3R)-3-({(1-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-羧酸(105mg，286μmol，Bioorg.Med.Chem.13(2005)4343-4352，化合物10)悬浮于2mL的N,N-二甲基甲酰胺中并且冷却至0℃。将HATU(117mg，308μmol)，3-氨基-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸甲酯(53mg，220μmol)在3.4mL的N,N-二甲基甲酰胺的溶液和N-乙基二异丙基胺(0.11ml，660μmol)加入。将混合物在0℃下搅拌5分钟并且在室温搅拌24小时。加入水并且将混合物用二氯甲烷萃取，用饱和氯化钠洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过氨基柱色谱法Flash-NH2，乙酸乙酯占二氯甲烷的0至100%)纯化以获得88mg的4-{3-[(3R)-3-({(1-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt=1.22/1.23分钟
MS(ES+)：m/e=592.44(M+H+)
实施例1e
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-({(1-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(67mg，102μmol)溶解在甲醇(12.4mL)并且加入八水合氢氧化钡(2.2g，7.1mmol)。将混合物在室温下搅拌一小时并且随后用盐水和乙醚将其稀释。将混合物用1M的盐酸酸化并且进行相分离。浓缩有机相以提供70mg的3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.12/1.14分钟
MS(ES+)：m/e=578.3(M+H+)
1H-NMR(500MHz，DMSOd6，80℃)：δ=0.82-1.05(m，2H)，1.05-1.51(m，6H)，1.40(s，9H)，1.56-1.70(m，4H)，2.29-2.41(m，3H)，2.58-2.80(m，5H)，3.20(br.，3H)，3.91(d，2H)，4.25(ddd，2H)，4.73(ddd，2H)，5.19(m，1H)，6.85(m，1H)，6.94(m，2H)，7.23(td，1H)，8.15(d，1H)ppm。
实施例1f
(3S)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4M盐酸的二氧六环(0.23ml，900μmol)溶液加入3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[3-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸的二氧六环(65mg，90μmol)溶液，并且室温下搅拌3小时。将溶液减压浓缩并且将残留物通过制备柱HPLC下纯化以获得8.7mg的(3S)-3-[5-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18YMC-ODS AQ10μm170x25mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.25分钟10%B，0.25-10分钟10-50%B
流速： 60mL/分钟
温度： RT
检测： 261nm
Rt.： 4.84-5.73分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.76分钟
MS(ES+)：m/e=478.29(M+H+)
1H-NMR(500MHz，DMSOd6，80℃)：δ=1.20-1.70(m，8H)，1.80(m，2H)，2.17(br.1H)，2.25-2.50(m，4H)，2.60-2.71(m，3H)，3.05-3.25(m，3H)，3.72(br.，3H)，4.23(ddd，2H)，4.73(ddd，2H)，5.10(m，1H)，6.80(m，1H)，6.91(m，2H)，7.21(t，1H)，8.28(br.，1H)ppm。
实施例2
(3S)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例2a
3-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯
将5.298g(29.24mmol)市售的3-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸悬浮于136ml甲醇中，将混合物冷却至0℃并且将3.20ml(43.86mmol)亚硫酰氯缓慢加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且浓缩。将残留物用饱和碳酸氢钠处理并且用二氯甲烷和二氯甲烷/2-丙醇8:2萃取。将有机相浓缩以获得5.09g(80%)的3-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.45分钟
MS(ES+)：m/e=179.07(M+H+-NH3)
MS(ES-)：m/e=240.30(M+HCOO-)
实施例2b
4-[3-((3R)-3-{[1-(4-羟基-苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基)-3-氧代丙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将490.75mg(1.33mmol)(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-羧酸(Bioorg.Med.Chem.13(2005)4343-4352，化合物10)悬浮于8ml N,N-二甲基甲酰胺中并且冷却至0℃。将0.545g(1.43mmol)HATU，200.0mg(1.0mmol)3-氨基-3-(4-羟基-苯基)丙酸甲酯的12mL N,N-二甲基甲酰胺的溶液，并且将0.53mL(3.07mmol)N-乙基二异丙基胺加入。将混合物在0℃下搅拌5分钟并且在室温搅拌24小时。加入20ml水并且将混合物用二氯甲烷萃取，用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用28g碱性硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10-80/20)色谱纯化提供465mg(83%)的4-{3-[(3R)-3-({[1-(4-羟基苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基)-3-氧代丙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.11分钟
MS(ES+)：m/e=546.31(M+H+)
MS(ES-)：m/e=590.23(M+HCOO-)
实施例2c
4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将150mg(0.28mmol)4-{3-[(1R)-3-({[(1S)-1-[5-(羟基)吡啶-3-基]4-甲氧基-2-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在3ml四氢呋喃中。将179mg(0.55mmol)碳酸铯和91mg(0.52mmol)1-碘-2-氟乙烷加入。将混合物在室温下搅拌60小时并且过滤。将滤液浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)色谱纯化提供90mg(50%)的4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯和40mg的起始材料。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.24-1.25分钟
MS(ES+)：m/e=592.31(M+H+)
MS(ES-)：m/e=590.29(M-H)，636.26(M+HCOO-)
实施例2d
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸
将96mg(0.16mmol)4-{3-[(4R)-3-({1-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在20ml甲醇中。将512mg(1.62mmol)八水合氢氧化钡加入。将混合物在室温下搅拌70小时并且用20ml水稀释。将混合物用1N盐酸酸化至pH值=4并且用2x40ml二氯甲烷萃取。浓缩有机相以提供93mg(99%)的3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.14-1.16分钟
MS(ES+)：m/e=578.30(M+H+)
MS(ES-)：m/e=576.30(M-H)，622.16(M+HCOO-)
实施例2e
(3S)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将93mg(0.16mmol)3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[4-(2-氟乙氧基)苯基]丙酸溶解在3.3ml二氧六环中。将0.4ml(1.6mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌48小时并且随后浓缩以提供131mg，其由HPLC进行纯化：
部分12包含所需要的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.65分钟
MS(ES+)：m/e=478.37(M+H+)
MS(ES-)：m/e=476.43(M-H)
实施例3
(3S)-3-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例3a
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例25e，800mg，1.36mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(52mL)中。将碳酸铯(1.1g，3.4mmol)和2-氟乙基甲苯磺酸酯(445mg，2.04mmol)加入。将混合物在室温下搅拌3.5小时，将另外的碳酸铯(70mg，0.21mmol)和2-氟乙基甲苯磺酸酯(28mg，0.13mmol)加入并且室温下持续搅拌2.5小时并在5℃下搅拌17小时。通过加入饱和氯化铵水溶液结束混合物的反应并且用乙醚和乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%，随后二氧六环占乙酸乙酯的0至50%)纯化以获得670mg的4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.24分钟
MS(ES+)：m/e=633.5(M+H+)
实施例3b
(3S)-3-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(660mg,1.06mmol)的甲酸(12mL)溶液加热30分钟至60℃并且加热10分钟至100℃。将溶液减压浓缩并且将残留物通过制备级HPLC纯化以获得311mg的(3S)-3-[5-(2-氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18YMC-ODS AQ10μm200x51mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-1分钟1%B，1-10分钟1-25%B
流速： 240mL/分钟
温度： RT
检测： 277nm
Rt.： 5.21-7.05分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.50分钟
MS(ES+)：m/e=479.4(M+H+)
1H-NMR(400MHz，DMSOd6)：δ=1.13-1.29(m，2H)，1.35-1.77(m，7H)，1.88(d，1H)，2.00(m，1H)，2.21-2.43(m，4H)，2.50-2.78(m，3H)，2.96-3.11(m，1H)，3.15(d，1H)，3.28(d，1H)，3.64(br.，4H)，4.30(ddd，2H)，4.75(ddd，2H)，5.09(m，1H)，7.27(s，1H)，8.10(s，1H)，8.16(s，1H)，8.53(d，1H)ppm。
实施例4
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例4a
{[3-(苄氧基)苯基](苯基磺酰基)甲基}氨基甲酸叔丁酯
向3-(苄氧基)苯甲醛(5g，23.6mmol)和苯亚磺酸钠盐(3.9g，23.6mmol)的THF(23mL)溶液中加入水(51.5mL)、氨基甲酸叔丁酯(2.76g，23.6mmol)和甲酸(2.66mL，70mmol)。将混合物搅拌4天并且过滤。将沉淀用水洗涤并且在含有9%二氯甲烷的己烷中捣碎。过滤后将固体真空干燥以获得7.24g的{[3-(苄氧基)苯基](苯基磺酰基)甲基}氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ=1.27(s，9H)，5.07(s，2H)，5.73(d，1H)，5.90(d，1H)，6.94-7.14(m，3H)，7.30-7.49(m，6H)，7.55(t，2H)，7.65(t，1H)，7.92(d，2H)ppm。
实施例4b
2-{(S)-[3-(苄氧基)苯基][(叔丁氧羰基)氨基]甲基}丙二酸叔丁甲酯
将{[3-(苄氧基)苯基](苯基磺酰基)甲基}氨基甲酸叔丁酯(3.0g，5.93mmol)悬浮于甲苯(21.6mL)和水(16mL)的混合液中。在0℃下，将丙二酸叔丁甲酯(1.2mL，7.1mmol)、碳酸铯(1.94g，5.9mmol)和1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]-3-[(1R，2R)-(-)-2-(二甲基氨基)环己基]硫脲(246mg，0.59mmol)加入并且将混合物在0℃下搅拌72小时。在-20℃下储存72小时后，将混合物用水和乙酸乙酯稀释，过滤后将水相和油相分离并且将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用硫酸钠干燥并且浓缩。将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯占己烷的0至35%)纯化以获得2.17g的对映异构体富集的2-{(S)-[3-(苄氧基)苯基][(叔丁氧羰基)氨基]甲基}丙二酸叔丁甲酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ=1.20(s，4.5H)，1.36(s，9H)，1.41(s，4.5H)，3.04(br.，3H)，3.47(s，1.5H)，3.66(s，1.5H)，3.88(m，1H)，5.09(s，2H)，5.06-5.11(m，1H)，6.85-6.93(m，2H)，7.02(m，1H)，7.21(m，1H)，7.28-7.46(m，5H)ppm。
实施例4c
2-[(S)-[3-(苄氧基)苯基]({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)甲基]丙二酸叔丁甲酯
向2-{(S)-[3-(苄氧基)苯基][(叔丁氧羰基)氨基]甲基}丙二酸叔丁甲酯(600mg，1.24mmol)中加入0℃的冷甲酸(13.8mL)并且将溶液在5℃下储存20小时。将冰加入并且通过加入随行碳酸氢钠溶液将pH调至8。将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用水性碳酸氢钠溶液和盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。减压浓缩以获得390mg的粗2-{(S)-氨基[3-(苄氧基)苯基]甲基}丙二酸叔丁甲酯。将(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-羧酸(447mg，1.21mmol,)悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(14mL)中并且冷却至0℃。将HATU(646mg，1.7mmol)、粗2-{(S)-氨基[3-(苄氧基)苯基]甲基}丙二酸叔丁甲酯(780mg，1.21mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(14mL)溶液和N-乙基二异丙基胺(350μL，3.64mmol)加入。将混合物在0℃下搅拌2小时。将冰水和饱和氯化铵溶液加入，将混合物用乙酸乙酯萃取并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过氨基柱色谱法(Flash-NH2，乙酸乙酯占己烷的0至100%)纯化以获得700mg的[(S)-[3-(苄氧基)苯基]({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)甲基]丙二酸叔丁甲酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.53分钟
MS(ES+)：m/e=736.68(M+H+)
MS(ES-)：m/e=780.82(M+HCOO-)
实施例4d
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-(苄氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-[(S)-[3-(苄氧基)苯基]({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)甲基]丙二酸叔丁甲酯(700mg，0.95mmol)溶解在甲酸(5.4mL)中并且在室温下储存5天。将混合物减压浓缩以获得640g粗(3S)-3-[3-(苄氧基)苯基]-2-(甲氧基羰基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸。将甲酯的THF(65mL)溶液和三乙胺(2.5mL，18mmol)加热至60℃并持续4小时。减压浓缩后将残留物通过制备级HPLC纯化以获得147mg的(3S)-3-[3-(苄氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸甲酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟1%B，0.5-10分钟1-60%B
流速： 65mL/分钟
温度： RT
检测： 277nm
Rt.： 7.09-7.40分钟
向游离的哌啶的二氯甲烷溶液(1.5mL)和三乙胺(0.11mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(90μL，0.38mmol)并且将混合物搅拌2小时以获得159mg的4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-(苄氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.41分钟
MS(ES+)：m/e=636.59(M+H+)
MS(ES-)：m/e=680.44(M+HCOO-)
实施例4e
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-羟基苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-(苄氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(650mg，1.02mmol)溶解在乙酸乙酯(45mL)和甲醇(7.4mL)中并且加入钯碳(palladium on charcoal)(65mg，10%)。将混合物在氢气氛下摇动16小时，通过硅藻土过滤并且用甲醇洗涤。将滤液浓缩并且通过硅胶色谱法(甲醇占乙酸乙酯的0%至25%)纯化以获得422mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-[3-(羟基苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，DMSOd6，80℃)：δ=1.01(m，2H)，1.26-1.53(m，4H)，1.41(s，9H)，1.65(m，4H)，1.83(m，1H)，2.23-2.38(m，3H)，2.65-2.76(m，5H)，3.57(s，3H)，3.92(m，3H)，5.19(q，1H)，6.64(d，1H)，6.72(m，2H)，7.09(t，1H)，8.05(d，1H)，9.04(br.，1H)ppm
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.14分钟
MS(ES+)：m/e=546.53(M+H+)
MS(ES-)：m/e=590.43(M+HCOO-)
实施例4f
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(26mg，50μmol)的DMF(6.6mL)溶液中在室温下边搅拌边加入碳酸铯(38.8mg，120μmol)和2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸(22mg，70μmol)。5小时后，将甲苯加入并且将混合物真空浓缩。将DMF游离残留物通过制备级硅胶薄层色谱(二氯甲烷占乙酸乙酯的30%至25%)纯化以获得21mg4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，DMSOd6，80℃)：δ=1.02(m，2H)，1.25-1.51(m，5H)，1.41(s，9H)，1.55-1.70(m，4H)，1.82(m，1H)，2.26-2.38(m，3H)，2.73-2.81(m，4H)，3.40(m，1H)，3.56-3.65(m，5H)，3.58(s，3H)，3.69-3.74(m，1H)，3.74-3.81(m，2H)，3.91(br.，2H)，4.06-4.14(m，2H)4.50(ddd，2H)，5.21(q，1H)，6.82(dd，1H)，6.85-6.96(m，2H)，7.21(t，1H)，8.08(d，1H)ppm。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.26分钟
MS(ES+)：m/e=680.54(M+H+)
MS(ES-)：m/e=724.50(M+HCOO-)
实施例4g
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(20.3mg，27μmol)溶解在叔丁醇(0.77mL)和甲醇(0.76mL)中并且将八水合氢氧化钡(42mg，0.13mmol)加入。室温下搅拌60分钟后，将溶剂在(0.76mL)在0℃下通过高真空蒸发去除。将残留物溶解在水(1mL)中并且甲酸(2mL)酸化。18小时后在5℃下将另外的甲酸(2mL)加入。3小时后，在室温下将溶剂减压浓缩并且将残留物通过制备柱HPLC纯化以获得8.4mg的(3S)-3-(3-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟15%B，0.5-10分钟15-70%B
流速： 65mL/分钟
温度： RT
检测： 285nm
Rt.： 3.48-4.19分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.69分钟
MS(ES+)：m/e=566.41(M+H+)
MS(ES-)：m/e=564.37(M-H)
实施例5
(3S)-3-[5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例5a
{[5-(苄氧基)吡啶-3-基](苯基磺酰基)甲基}氨基甲酸叔丁酯
向5-(苄氧基)吡啶-3-甲醛(3.61g，16.9mmol，Harrowven，D.C.等人Tetrahedron，2001，57，第4447页至第4454页)和苯亚磺酸钠盐(2.7g，16.6mmol)的THF(16.3mL)溶液中加入水(36.3mL)、氨基甲酸叔丁酯(1.94g，16.6mmol)和甲酸(1.9mL，49mmol)。将混合物搅拌4天并且过滤。将滤液另外搅拌2天并且再次过滤。将形成的沉淀用水洗涤并且在含有9%二氯甲烷的己烷中捣碎。过滤后将固体真空干燥以获得3.17g的{[5-(苄氧基)吡啶-3-基](苯基磺酰基)甲基}氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ=1.27(s，9H)，5.13(s，2H)，5.83(d，1H)，5.97(d，1H)，7.32-7.50(m，6H)，7.53-7.63(m，2H)，7.68(t，1H)，7.93(d，2H)，8.27(s，1H)，8.44(d，1H)ppm。
实施例5b
2-{(S)-[5-(苄氧基)吡啶-3-基][(叔丁氧羰基)氨基]甲基}丙二酸叔丁甲酯
将{[5-(苄氧基)吡啶-3-基](苯基磺酰基)甲基}氨基甲酸叔丁酯(2.2g，4.84mmol)悬浮于甲苯(16.5mL)和水(13mL)的混合液中。在0℃下，将丙二酸叔丁甲酯(1.0mL，5.8mmol)、碳酸铯(1.58g，4.84mmol)和1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]-3-[(1R,2R)-(-)-2-(二甲基氨基)环己基]硫脲(200mg，0.48mmol)加入并且将混合物在0℃下搅拌48小时。在5℃下储存72小时后，将混合物用水和乙酸乙酯稀释，将水相和油相分离并且将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用硫酸钠干燥并且浓缩。将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯占己烷的0至60%的)纯化以获得1.54g的对映异构体富集的2-{(S)-[5-(苄氧基)吡啶-3-基][(叔丁氧羰基)氨基]甲基}丙二酸叔丁甲酯。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ=1.36(s，4.5H)，1.43(s，9H)，1.48(s，4.5H)，3.65(s，1.5H)，3.76-3.87(m，1H)，3.77(s，1.5H)，5.10(s，2H)，5.48(br.，1H)，6.27(br.，1H)，7.26(s，1H)，7.35-7.44(m，5H)，8.21(d，1H)，8.28(s，1H)ppm。
实施例5c
4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-羧酸(1.91g，5.18mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(13.5mL)中加入N-羟基琥珀酰亚胺(0.60g，5.18mmol)和1,3-二环己基碳二亚胺(1.18g，5.7mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时而形成沉淀物。随后将混合物冷却至0℃，过滤并且将固体用乙醚洗涤。将滤液和乙醚洗涤液合并并且浓缩以获得2.61g的4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.13分钟
MS(ES+)：m/e=466.31(M+H+)
实施例5d
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向2-{(S)-[5-(苄氧基)吡啶-3-基][(叔丁氧羰基)氨基]甲基}丙二酸叔丁甲酯的二氧六环(15mL)溶液中加入4M盐酸的二氧六环(11.2mL，45mmol)溶液并且搅拌20小时。将混合物用二氧六环和甲苯稀释并且减压浓缩。用甲苯和二氯甲烷重复稀释和浓缩的过程以获得1.64g的粗2-[(S)-氨基-(5-苄基氧基)吡啶-3-基)甲基]丙二酸单甲酯。将单甲酯在DMF(18mL)和4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.0g，5.15mmol)和三乙胺(1.94mL，13.9mmol)的二氯甲烷(18mL)溶液中冷却至0℃。将混合物在0℃下搅拌21小时并且随后加热至60℃并持续一小时。冷却至室温后，将饱和氯化铵水溶液加入。将水相和有机相分离并且用乙醚和乙酸乙酯萃取水相。将合并的萃取液用硫酸钠干燥并且真空浓缩。将残留物通过硅胶色谱法(甲醇占乙酸乙酯的0%至15%)纯化以获得1.4g的4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.25分钟
MS(ES+)：m/e=637.6(M+H+)
MS(ES-)：m/e=681.5(M+HCOO-)
实施例5e
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(羟基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(650mg，1.02mmol)溶解在乙酸乙酯(45mL)和甲醇(7.4mL)中并且将钯碳(65mg，10%)加入。将混合物在氢气氛下摇动16小时，通过硅藻土过滤并且用甲醇洗涤。将滤液浓缩并且通过硅胶色谱法(甲醇占乙酸乙酯的0%至25%)纯化以获得422mg的4-{3-[(5R)-3-{[(1S)-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，DMSOd6，80℃)：δ=1.00(m，2H)，1.26-1.55(m，4H)，1.40(s，9H)，1.65(m，4H)，1.83(m，1H)，2.17-2.40(m，3H)，2.63-2.74(m，2H)，2.75-2.90(m，3H)，3.58(s，3H)，3.90(m，3H)，5.19(m，1H)，7.08(d，1H)，7.94-8.07(m，2H)，8.16(d，1H)，9.57(br.，1H)ppm。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.95分钟
MS(ES+)：m/e=547.4(M+H+)
实施例5f
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
在4-{3-[(5R)-3-{[(1S)-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(30mg，60μmol)的DMF(7.6mL)溶液中在室温下边搅拌边加入碳酸铯(44.7mg，140μmol)和2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙基4-甲基苯磺酸(25mg，80μmol)。5小时后，将甲苯加入并且将混合物真空浓缩。将DMF游离残留物通过制备级硅胶薄层色谱(乙酸乙酯)纯化以获得16.7mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，MeOD)：δ=1.00-1.19(m，2H)，1.40-1.60(m，5H)，1.45(s，9H)，1.73(m，4H)，1.94(m，1H)，2.27-2.54(m，3H)，2.73(br.,2H)，2.91(m，3H)，3.66(s，3H)，3.64-3.72(m，7H)，3.87(m，2H)，4.06(br.，3H)，4.23(m，2H)，4.50(ddd，2H)，5.36(t，1H)，7.41(dd，1H)，8.17(d，1H)，8.13(d，1H)ppm
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.10分钟
MS(ES+)：m/e=681.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=725.5(M+HCOO-)
实施例5g
(3S)-3-[5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(16.5mg，22μmol)溶解在叔丁醇(0.62mL)和甲醇(0.6mL)中并且将八水合氢氧化钡(34mg，315μmol)加入。室温下搅拌45分钟后，将溶剂在(0.76mL)下通过高真空蒸发去除。将残留物溶解在水(0.3mL)中并且甲酸(0.9mL)酸化。在5℃下18小时后，将溶剂在0℃下通过高真空蒸馏去除并且将残留物通过制备柱HPLC纯化以获得1.6mg的(3R)-3-[5-{2-[2-(2-氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}吡啶-3-基]-3-[({(3S)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟5%B，0.5-6分钟5-40%B
流速： 150mL/分钟
温度： RT
检测： 285nm
Rt： 2.36-2.45分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.55分钟
MS(ES+)：m/e=567.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=565.4(M-H)
实施例6
(3S)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例6a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向400.0mg(0.66mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8c)的16ml甲苯中加入15.17mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、108.6mg(0.79mmol)的(3-羟基苯基)硼酸的4.0ml乙醇溶液和118.3mg(2.04mmol)氟化钾的4.0ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌26小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供236mg(58%)的4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt=1.10分钟
MS(ES+)：m/e=624.70(M+H+)
MS(ES-)：m/e=621.46(M-H)，667.57(M+HCOO-)
实施例6b
4-{3-[(3R)-3-{[1-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将128mg(0.21mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在2.25ml四氢呋喃中。将134mg(0.41mmol)碳酸铯和68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷加入。将混合物在室温下搅拌70小时。将68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌48小时。将68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌70小时。将68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌24小时。将68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷、2ml四氢呋喃和134mg(0.41mmol)碳酸铯加入并且将混合物在室温下搅拌24小时。将68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌24小时。将68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌24小时。将68mg(0.39mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌70小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供100mg(65%)4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.20分钟
MS(ES+)：m/e=669.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=713.5(M+HCOO-)
实施例6c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸
将95mg(0.14mmol)的4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在17ml甲醇中。将448mg(1.42mmol)八水合氢氧化钡加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且随后将其浓缩以提供3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.12分钟
MS(ES+)：m/e=655.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=653.6(M-H)
实施例6d
(3S)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-{[((3R)-1-[3-(哌啶-4-基丙酰基)哌啶-3-羰基]氨基}丙酸
将实施例9c所获得的含有93mg(0.14mmol)4-{3-[(R)-3-(2-羧基-1-{5-[3-(2-氟-乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-乙基氨基甲酰基)-哌啶-1-基]-3-氧代-丙基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯的混合物溶解在8.7ml二氧六环中。将1.07ml(4.26mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌20小时。将0.178ml(0.71mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌24小时。将8.0ml二氧六环和0.178ml(0.71mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌72小时并且随后浓缩。在残留物中加入少量的水和饱和碳酸氢钠溶液以获得pH=6。将混合物浓缩并且用乙酸乙酯/乙醇9:1萃取。将有机溶液过滤、合并以及浓缩以提供55mg所得物，将其通过HPLC纯化：
馏分13包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.95分钟
MS(ES+)：m/e=555.12(M+H+)
MS(ES-)：m/e=553.17(M-H)
实施例7
(3S)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例7a
4-{3-[(4R)-3-({1-[5-(3-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向300.0mg(0.49mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8c)的12ml甲苯中加入11.4mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、81.5mg(0.59mmol)的(4-羟基苯基)硼酸的3.0ml乙醇溶液和88.7mg(1.53mmol)氟化钾的3.0ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌4小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供218mg(71%)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.02分钟
MS(ES+)：m/e=624.8(M+H+)
MS(ES-)：m/e=621.5(M-H)，667.6(M+HCOO-)
实施例7b
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将120mg(0.19mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在2.11ml四氢呋喃中。将126mg(0.39mmol)碳酸铯和64mg(0.37mmol)1-碘-2-氟乙烷加入。将混合物在室温下搅拌70小时。将64mg(0.37mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌48小时。将64mg(0.37mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌70小时。将64mg(0.37mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌24小时。将64mg(0.37mmol)1-碘-2-氟乙烷、2ml四氢呋喃和126mg(0.39mmol)碳酸铯加入并且将混合物在室温下搅拌24小时。将64mg(0.37mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌24小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)色谱纯化提供84mg(62%)4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.16分钟
MS(ES+)：m/e=669.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=713.5(M+HCOO-)
实施例7c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸
将76mg(0.11mmol)4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在14ml甲醇中。将358.5mg(1.14mmol)八水合氢氧化钡加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且随后将其浓缩以提供3-({[(3R)-1-{4-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[3-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.08分钟
MS(ES+)：m/e=655.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=653.5(M-H)
实施例7d
(3S)-3-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将实施例7c中获得含有74mg(0.11mmol)3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[4-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸的混合物溶解在6.9ml二氧六环中。将0.85ml(3.39mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌48小时。将0.141ml(0.56mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌24小时并且随后浓缩。在残留物中加入少量的水和饱和碳酸氢钠溶液以获得pH=6。将混合物浓缩并且用乙酸乙酯/乙醇9:1萃取。将有机溶液过滤、合并以及浓缩以提供49mg所得物，将其通过HPLC纯化：
馏分12包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.89分钟
MS(ES+)：m/e=555.11(M+H+)
MS(ES-)：m/e=553.16(M-H)
实施例8
(3S)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例8a
3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸
将9.50g(51.07mmol)5-溴吡啶-3-醛悬浮于22ml乙醇中。将5.31g(51.07mmol)丙酸和8.27g(107.25mmol)醋酸铵加入。将混合物回流4小时并且在冷却至室温后过滤。将残留物用冷乙醇洗涤并且在45℃下真空干燥以提供8.69g(69%)的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：=3.03(dd，2H)，4.71(br.，1H)，8.24(t，1H)，8.68(d，1H)，8.75(d，1H)ppm。
实施例8b
3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯
将9.54g(38.93mmol)的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸悬浮于158ml甲醇中，将混合物冷却至0℃。将4.26ml(58.39mmol)亚硫酰氯缓慢加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且浓缩。将残留物用饱和碳酸氢钠溶液处理并且用二氯甲烷萃取。将有机部分用硫酸钠干燥并且浓缩。用硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-50/50)色谱纯化提供5.84g(52%)的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸甲酯。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=0.74分钟
MS(ES+)：m/e=261.2(M+H+)
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：=2.68(dd，2H)，3.71(br.，1H)，4.48(t，1H)，8.53(d，1H)，8.59(d，1H)ppm，8.59(d，1H)ppm。
实施例8c
4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-氟吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将3.324g(9.02mmol)(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-羧酸(Bioorg.Med.Chem.13(2005)4343-4352，化合物10)悬浮于52ml N,N-二甲基甲酰胺中并且冷却至0℃。将3.694g(9.71mmol)HATU，1.798g(6.94mmol)3-氨基-3-(5-吡啶-3-基)丙酸甲酯的78ml N,N-二甲基甲酰胺的溶液，并且将3.56ml(20.82mmol)N-乙基二异丙基胺加入。将混合物在0℃下搅拌5分钟并且在室温搅拌24小时。将160ml水加入并且将混合物用280ml二氯甲烷萃取。用水洗涤有机相，用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用55g碱性硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-97/3-94/6)色谱纯化提供4395mg(104%)4-{3-[(3R)-3-({[1-(5-羟基苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基)-3-氧代丙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.18分钟
MS(ES+)：m/e=511.3(M+H+-BOC)
MS(ES-)：m/e=609.5(M-H)
实施例8d
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向400.0mg(0.66mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的16ml甲苯溶液中加入15.17mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、108.6mg(0.79mmol)的(3-羟基苯基)硼酸的4.0ml乙醇溶液和118.3mg(2.04mmol)氟化钾的4.0ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌20小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供240mg(59%)的4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.02分钟
MS(ES+)：m/e=624.58(M+H+)
MS(ES-)：m/e=621.55(M-H)，667.57(M+HCOO-)
实施例8e
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将124mg(0.20mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在2.2ml四氢呋喃中。将130mg(0.40mmol)碳酸铯和66mg(0.38mmol)1-碘-2-氟乙烷加入。将混合物在室温下搅拌90小时。将66mg(0.38mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌20小时。将66mg(0.38mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌60小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)色谱纯化提供80mg(54%)4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.18分钟
MS(ES+)：m/e=669.57(M+H+)
MS(ES-)：m/e=667.57(M-H)，713.62(M+HCOO-)
实施例8f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸
将73mg(0.11mmol)4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在13ml甲醇中。将344mg(1.09mmol)八水合氢氧化钡加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且随后将其浓缩以提供3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.09分钟
MS(ES+)：m/e=655.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=653.5(M-H)，622.16(M+HCOO-)
实施例8g
(3S)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将实施例8f中获得含有71mg(0.11mmol)3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-{5-[2-(2-氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}丙酸的混合物溶解在6.6ml二氧六环中。将0.81ml(3.25mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌20小时。将0.136ml(0.54mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌24小时。将6.0ml二氧六环和0.136ml(0.54mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌24小时并且随后浓缩。在残留物中加入少量的水和饱和碳酸氢钠溶液以获得pH=6。将混合物浓缩并且用乙酸乙酯/乙醇9:1萃取。将有机溶液过滤、合并以及浓缩以提供76mg所得物，将其通过HPLC纯化：
馏分13包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.88分钟
MS(ES+)：m/e=555.08(M+H+)
MS(ES-)：m/e=553.18(M-H)
实施例9
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例9a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向300.0mg(0.49mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8c)的12ml甲苯溶液中加入11.4mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、97.4mg(0.59mmol)的(3-羟基苯基)硼酸的3.0ml乙醇溶液和88.7mg(1.53mmol)氟化钾的3.0ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌3小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供206mg(58%)的4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.23分钟
MS(ES+)：m/e=652.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=648.5(M-H)，694.5(M+HCOO-)
实施例9b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]丙酸
将100mg(0.15mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在5ml四氢呋喃中并且用2.5ml0.1N氢氧化钠溶液处理。将混合物搅拌15分钟并浓缩以提供97mg(99%)所得物。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.13分钟
MS(ES+)：m/e=636.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=634.5(M-H)
实施例9c
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将实施例9b中获得含有97mg(0.15mmol)3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-(3-氰基-4-氟苯基)吡啶-3-基]丙酸的混合物溶解在9.6ml二氧六环中。将0.39ml(1.57mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且随后浓缩。在残留物中加入少量的水和饱和碳酸氢钠溶液以获得pH=6。将混合物浓缩并且用二氯甲烷/2-丙醇8:2萃取。将有机溶液过滤、合并以及浓缩以提供44mg所得物，将其通过HPLC纯化：
馏分12包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.95分钟
MS(ES+)：m/e=536.11(M+H+)
MS(ES-)：m/e=534.11(M-H)
实施例10
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例10a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向300.0mg(0.49mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8c)的12ml甲苯溶液中加入11.4mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、97.4mg(0.59mmol)的(4-氰基-3-氟苯基)硼酸的3.0ml乙醇溶液和57.2mg(0.98mmol)氟化钾的3.0ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌10小时，在60℃下搅拌20小时，用水稀释并且用乙酸乙酯以及碳酸氢钠溶液萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供157mg(44%)4-{3-[(4R)-3-({1-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.23分钟
MS(ES+)：m/e=652.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=648.5(M-H)，694.6(M+HCOO-)
实施例10b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]丙酸
将220mg(0.34mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在11ml四氢呋喃中并且用4.1ml0.1N氢氧化钠溶液处理。将混合物搅拌15分钟并浓缩以提供215mg(100%)所得物。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.14分钟
MS(ES+)：m/e=638.2(M+H+)
MS(ES-)：m/e=634.5(M-H)
实施例10c
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
将实施例10b中获得含有215mg(0.34mmol)3-({[(3R)-1-{4-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-(4-氰基-3-氟苯基)吡啶-3-基]丙酸的混合物溶解在20.6ml二氧六环中。将0.85ml(3.4mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且随后浓缩。在残留物中加入少量的水和饱和碳酸氢钠溶液以获得pH=6。将混合物浓缩并且用二氯甲烷/2-丙醇8:2萃取。将有机溶液过滤、合并以及浓缩以提供205mg，将203mg所得物通过HPLC纯化：
馏分12包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.79分钟
MS(ES+)：m/e=536.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=534.4(M-H)，680.4(M+HCOO-)
实施例11
(3S)-3-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例11a
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向300.0mg(0.49mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8c)的12ml甲苯中加入11.4mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、109.2mg(0.59mmol)的(4-氟-3-硝基苯基)硼酸的3.0ml乙醇溶液和88.7mg(1.53mmol)氟化钾的3.0ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌9小时，在60℃下搅拌20小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供147mg(40%)的4-{3-[(4R)-3-({1-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.23分钟
MS(ES+)：m/e=670.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=668.5(M-H)，714.6(M+HCOO-)
实施例11b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]丙酸
将225mg(0.34mmol)的4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在11ml四氢呋喃中并且用4.0ml0.1N氢氧化钠溶液处理。将混合物搅拌15分钟并浓缩以提供220mg(100%)所得物。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.15分钟
MS(ES+)：m/e=656.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=654.5(M-H)
实施例11c
(3S)-3-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将实施例11b中获得含有220mg(0.34mmol)3-({[(3R)-1-{4-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-(4-氟-3-硝基苯基)吡啶-3-基]丙酸的混合物溶解在20.5ml二氧六环中。将0.84ml(3.4mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且随后浓缩。在残留物中加入少量的水和饱和碳酸氢钠溶液以获得pH=6。将混合物浓缩并且用二氯甲烷/2-丙醇8:2萃取。将有机溶液过滤、合并以及浓缩以提供213mg，将211mg所得物通过HPLC纯化：
馏分12包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.78分钟
MS(ES+)：m/e=556.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=554.4(M-H)
实施例12
(3R)-3-{5-[(3-氰基-4-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3S)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例12a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-氰基-3-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
聚合物键合的三苯基膦(30mg)和4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例5e，30mg，60μmol)在二氯甲烷中搅拌30分钟。将2-氟-5-(羟甲基)苄腈(26mg，0.17mmol)的THF溶液加入并且将混合物冷却至0℃。将偶氮二甲基二异丙酯(Dipropan-2-yl diazene-1,2-dicarboxylate)(20μL，0.11mmol)加入，将混合物室温下搅拌3小时并且随后在5℃下储存16小时。过滤后将滤液减压浓缩并且将残留物通过制备级硅胶薄层色谱(乙酸乙酯100%)纯化以获得3.2mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-氰基4-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.24分钟
MS(ES+)：m/e=680.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=724.5(M+HCOO-)。
实施例12b
(3R)-3-{5-[(3-氰基-4-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3S)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-氰基4-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.2mg，10μmol)溶解在叔丁醇(0.15mL)和甲醇(0.13mL)中并且将八水合氢氧化钡(7.4mg，20μmol)加入。室温下搅拌45分钟后，将溶剂在0℃下通过高真空蒸发去除。将残留物溶解在水(0.3mL)中并且甲酸(0.9mL)酸化。在室温下3小时后，将溶剂在0℃下通过高真空蒸馏去除并且将残留物通过制备柱HPLC纯化以获得0.8mg的(3R)-3-{5-[(3-氰基4-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3S)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟5%B，0.5-6分钟5-40%B，
流速： 150mL/分钟
温度： RT
检测： 284nm
Rt.： 368-4.04分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.70分钟
MS(ES+)：m/e=567.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=565.3(M-H).
实施例13
(3R)-3-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例13a
4-{3-[(4R)-3-{[(1S)-1-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例5e，200mg，0.37mmol)的DMF(5mL)溶液中加入边搅拌边加入氢化钠(60%，9.6mg，0.24mmol)，并且将混合物冷却至0℃。将4-(溴甲基)-2-氟苄腈(70.5mg，0.33mmol)的DMF(3mL)溶液加入并且将混合物温热至室温。一小时后将水、盐水和乙酸乙酯加入。将水相和有机相分离并且用乙醚和乙酸乙酯萃取水相。将合并的萃取液用硫酸钠干燥并且真空浓缩。将残留物用制备级HPLC纯化以获得10mg4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]-吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟30%B，0.5-7分钟30-70%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 280nm
Rt.： 4.61-5.04分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.22分钟
MS(ES+)：m/e=680.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=678.6(M-H)，724.5(M+HCOO-)。
实施例13b
(3S)-3-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(4R)-3-{[(1S)-1-(5-(4-氰基-3-氟苄基氧基)吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(10mg，15μmol)溶解在叔丁醇(0.6mL)和甲醇(0.6mL)中并且将八水合氢氧化钡(23mg，74μmol)加入。室温下搅拌45分钟后，将溶剂在0℃下通过高真空蒸发去除。将残留物用甲酸(1mL)酸化。在5℃下18小时后，将溶剂在0℃下通过高真空蒸馏去除并且将残留物通过制备柱HPLC纯化以获得4mg的(3R)-3-{5-[(4-氰基-3-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-[({(3S)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟10%B，0.5-7分钟10-50%B
流速： 150mL/分钟
温度： RT
检测： 280nm
Rt.： 2.87-3.15分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.71分钟
MS(ES+)：m/e=566.4(M+H+)
实施例14
(3S)-3-(4-氰基-3-氟苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例14a
3-氨基-3-(4-氰基-3-氟苯基)丙酸
将500mg(3.35mmol)2-氟-4-甲酰基苄腈悬浮于2ml乙醇中。将349mg(3.35mmol)丙酸和0.54g(7.04mmol)醋酸铵加入。将混合物回流6小时并且在冷却后过滤。将残留物用乙醇洗涤并且真空干燥以提供360mg(52%)的3-氨基-3-(4-氰基-3-氟苯基)丙酸。
实施例14b
3-氨基-3-(4-氰基-3-氟苯基)丙酸甲酯
将436mg(2.09mmol)3-氨基-3-(4-氰基-3-氟苯基)丙酸悬浮于8.5ml甲醇中，并且将混合物冷却至0℃。将0.23ml(3.14mmol)亚硫酰氯缓慢加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且浓缩。将残留物用饱和碳酸氢钠溶液处理并且用二氯甲烷萃取。将有机部分用硫酸钠干燥并且浓缩。用硅胶色谱(二氯甲烷/乙醇100/0-97/3-94/6)纯化提供245mg(47%)的3-氨基-3-(4-氰基-3-氟苯基)丙酸甲酯。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=0.77分钟
MS(ES+)：m/e=222.74(M+H+)
实施例14c
(3S)-3-(4-氰基-3-氟苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
其制备与实施例2b-实施例2e类似从实施例17b起始以提供254mg用HPLC纯化的获得物。
馏分23包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.63分钟
MS(ES+)：m/e=459.1(M+H+)
MS(ES-)：m/e=457.3(M-H)
实施例15
(3S)-3-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例15a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
在4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例27c，100mg，150μmol)的脱气溶液，碘化铜(3.5mg，20μmol)、四(三苯膦)合钯(0)(17.7mg，20μmol)、{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}(三甲基)硅烷(73mg，310μmol)的1,2-二甲氧基乙烷(0.9mL)和正丁基胺(0.23mL)溶液中将1M四正丁基氟化铵的THF(200μL)溶液以15分钟以上在80℃下加入。再在20分钟后在80℃下将混合物(36mg，mmol)加入，用水将混合物稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。将残留物用制备级HPLC纯化以获得43mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟65%B，0.5-7分钟65-85%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 273nm
Rt.： 2.50-2.98分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.43分钟
MS(ES+)：m/e=735.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=779.7(M+HCOO-)
实施例15b
(3S)-3-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯在甲酸中加热至将溶液真空浓缩并且将残留物用制备级HPLC纯化以获得(3S)-3-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟20%B，0.5-7分钟20-40%B
流速： 95mL/分钟
温度： RT
检测： 271nm
Rt.： 2.78-4.62分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.83分钟
MS(ES+)：m/e=579.3(M+H+)
实施例16
(3S)-3-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例16a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例27c，100mg，15mmol)的脱气溶液，碘化铜(4.4mg，23μmol)、四(三苯膦)合钯(0)(18mg，15μmol)的DMF(0.4mL)和正丁基胺(0.23mL)溶液中将1-乙炔基-3-(2-氟乙氧基)苯(50mg，0.31mmol)的DMF(0.6mL)溶液以60分钟以上在100℃下加入。再在20分钟后将残留物用DMSO稀释并且用制备级HPLC纯化以获得90mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟65%B，0.5-7分钟65-70%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 277nm
Rt.： 2.95-3.50分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.45分钟
MS(ES+)：m/e=735.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=779.5(M+HCOO-)
实施例16b
(3S)-3-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯在甲酸(1.5mL)中加热至将溶液真空浓缩并且将残留物用制备级HPLC纯化以获得9.6mg的(3S)-3-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟10%B，0.5-7分钟10-50%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 271nm
Rt.： 4.09-4.38分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.91分钟
MS(ES+)：m/e=579.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=577.4(M-H)
实施例17
(3S)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例17a
3-氨基-3-(3-溴-5-氟苯基)丙酸
将4.72g(23.25mmol)3-溴-5-氟苯甲醛悬浮于10ml乙醇中。将2.42g(23.25mmol)丙酸和3.76g(48.82mmol)醋酸铵加入。将混合物回流5小时并且在冷却至室温后过滤。将残留物用冷乙醇洗涤并且在30℃下真空干燥以提供880mg(13%)3-氨基-3-(3-溴-5-氟苯基)丙酸。将滤液浓缩并且用乙醇结晶以提供706mg(12%)3-氨基-3-(3-溴-5-氟苯基)丙酸。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.58分钟
MS(ES+)：m/e=264.1(M+H+)
MS(ES-)：m/e=262.1(M-H)
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6):=2.43(d，2H)，4.25(t，1H)，7.31(d，1H)，7.43(dt，1H)，7.50(s，1H)ppm。
实施例17b
3-氨基-3-(3-溴-5-氟苯基)丙酸甲酯
将1.59g(6.05mmol)3-氨基-3-(3-溴-5-氟苯基)丙酸悬浮于24.5ml甲醇中，并且将混合物冷却至0℃。将0.66ml(9.08mmol)亚硫酰氯缓慢加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且浓缩。将残留物用饱和碳酸氢钠溶液处理并且用二氯甲烷萃取。将有机部分用硫酸钠干燥并且浓缩。用10g硅胶色谱(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)纯化提供1.55g(93%)的3-氨基-3-(3-溴-5-氟苯基)丙酸甲酯。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=1.02分钟
MS(ES+)：m/e=278.1(M+H+)
1H-NMR(300MHz，CHLOROFORM-d)：=2.55-2.71(m，2H)，3.70(s，3H)，4.40(dd，1H)，7.06(d，1H)，7.15(d，1H)，7.33(s，1H)ppm。
实施例17c
4-{3-[(3R)-3-{[(1-(3-溴-5-氟苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将587.2mg(2.13mmol)3-氨基-3-(3-溴-5-氟苯基)丙酸甲酯溶解在8.2ml的N,N-二甲基甲酰胺中并且将混合物冷却至0℃。在该溶液中加入1100mg(2.36mmol)4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例5c)和0.89ml(6.38mmol)三乙胺的8.2ml二氯甲烷溶液。将混合物在6℃下保持20小时。将饱和的氯化铵溶液加入并且用二氯甲烷萃取混合物。浆有机层用硫酸钠干燥并且真空浓缩以提供1.66g(125%)纯度为80%的4-{3-[(3R)-3-{[(1-(3-溴-5-氟苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-5-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.35分钟
MS(ES+)：m/e=628.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=626.4(M-H)，672.4(M+HCOO-)
实施例17d
4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-氟-4’-羟基联苯-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向558.0mg(0.71mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(3-溴-5-氟苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-5-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的17.4ml甲苯溶液中加入16.5mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、117.9mg(0.85mmol)的(4-羟基苯基)硼酸的4.3ml乙醇溶液和82.8mg(1.43mmol)氟化钾的4.4ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌4小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供417mg(92%)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-氟-4’-羟基联苯-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.24分钟
MS(ES+)：m/e=640.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=638.5(M-H)，684.5(M+HCOO-)
实施例17e
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将234mg(0.37mmol)4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-氟-4’-羟基联苯-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在4.0ml四氢呋喃中。将238mg(0.73mmol)碳酸铯和120.9mg(0.70mmol)1-碘-2-氟乙烷加入。将混合物在室温下搅拌20小时。将120.9mg(0.70mmol)1-碘-2-氟乙烷加入并且将混合物在室温下搅拌70小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)色谱纯化提供225mg(90%)的4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.38分钟
MS(ES+)：m/e=686.2(M+H+)
MS(ES-)：m/e=730.5(M+HCOO-)
实施例17f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]丙酸
将220mg(0.32mmol)的4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4-(2-氟乙氧基)-联苯-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯溶解在10.4ml四氢呋喃中。将3.85ml(0.39mmol)0.1N氢氧化钠溶液加入。将混合物在室温下搅拌20小时，用水和少量1N氢氧化钠溶液稀释并且用乙酸乙酯萃取。将水相层用10%水性柠檬酸溶液调pH值至pH=4.5并且用二氯甲烷和二氯甲烷/2-丙醇8/2萃取。将有机层用硫酸钠干燥并且真空浓缩以提供150mg(70%)的3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯基-3-基]丙酸。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.32分钟
MS(ES+)：m/e=672.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=670.4(M-H)
实施例17g
(3S)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将148mg(0.22mmol)的3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[5-氟-4’-(2-氟乙氧基)联苯-3-基]丙酸悬浮于13.4mL二氧六环中。将0.55ml(2.20mmol)4N盐酸加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且随后浓缩以提供150mg的所得物，将其由HPLC进行纯化：
馏分12包含所需的异构体。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.12分钟
MS(ES+)：m/e=572.19(M+H+)
MS(ES-)：m/e=570.16(M-H)
实施例18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例18a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(20mg，30μmol)在乙酸乙酯(0.8mL)和甲醇(013mL)中在室温氢气气氛中并在钯炭(10%，19mg)存在下搅拌4.45小时。将悬浮液用硅藻土过滤，用甲醇彻底洗涤。将溶液减压浓缩并且用制备级HPLC纯化以获得13.9mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm125x30mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟40%B，0.5-7分钟40-80%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 271nm
Rt.： 3.48-4.35分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.31分钟
MS(ES+)：m/e=739.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=783.4(M+HCOO-)
实施例18b
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(12.5mg，20μmol)在甲酸中加热至将溶液真空浓缩并且将残留物用制备级HPLC纯化以获得9.2mg的(3S)-3-(5-{[4-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟10%B，0.5-7分钟10-40%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 269nm
Rt.： 2.31-3.41分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.69分钟
MS(ES+)：m/e=583.5(M+H+)
实施例19
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
实施例19a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙炔基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(30mg，40μmol)在乙酸乙酯(1.2mL)和甲醇(0.2mL)中在室温氢气气氛和钯炭(10%，3mg)存在室温下搅拌2.5小时。将悬浮液用硅藻土过滤，用甲醇彻底洗涤。将溶液减压浓缩并且用制备级HPLC纯化以获得21.9mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}-吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm125x30mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟40%B，0.5-7分钟40-80%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 271nm
Rt.： 3.48-4.35分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.31分钟
MS(ES+)：m/e=739.5(M+H+)
并且将2.4mg的(E/Z)4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙烯基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.38分钟
MS(ES+)：m/e=737.5(M+H+)
实施例19b
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(20mg，30μmol)在甲酸中加热至将溶液真空浓缩并且将残留物用制备级HPLC纯化以获得12mg的(3S)-3-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟10%B，0.5-7分钟10-40%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 269nm
Rt.： 2.27-3.48分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.69分钟
MS(ES+)：m/e=583.3(M+H+)
实施例20
(E/Z)(3S)-3-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙烯基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙基}-吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.4mg，3.2μmol)在甲酸中加热至将溶液正空浓缩以获得1.6mg的(E/Z)(3S)-3-(5-{2-[3-(2-氟乙氧基)苯基]乙烯基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=0.75/0.77分钟
MS(ES+)：m/e=581.5(M+H+)
实施例21
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例4e，80mg，0.15mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中。将碳酸铯(120mg，0.37mmol)和乙二醇双-对-甲苯磺酸盐(81mg，0.22mmol)加入。将混合物在室温下搅拌2小时，通过加入饱和氯化铵水溶液停止反应并且用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过制备级硅胶薄层色谱(乙酸乙酯在二氯甲烷中60%)纯化以获得67mg的4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-3-甲氧基-1-[3-(2-{[(4-甲基苯)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.39分钟
MS(ES+)：m/e=744.60(M+H+)
MS(ES-)：m/e=788.52(M+HCOO-)
实施例22
4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将100mg(0.18mmol)4-{3-[(3R)-3-({[1-(4-羟基苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例2b)溶解在7ml N,N-二甲基甲酰胺中。将179mg(0.55mmol)碳酸铯和102mg(0.28mmol)双对甲苯磺酸乙二酯加入。将混合物在室温下搅拌48小时并且浓缩。将其余的用饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯取出。将水相用3x20ml的乙酸乙酯萃取。将萃取物用硫酸钠干燥并且浓缩以获得195mg所获得物。用5g硅胶色谱(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5)纯化提供了95mg(63%)的4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.37-1.38分钟
MS(ES+)：m/e=744.37(M+H+)
MS(ES-)：m/e=788.34(M+HCOO-)
实施例23
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例23a
(S)-3-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸叔丁酯
将1.00g(5.52mmol)市售3-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸悬浮于20ml乙酸叔丁酯中，将混合物冷却至15℃。将0.90ml(11.10mmol)高氯酸缓慢加入并且将混合物在20℃下搅拌1.5小时。将溶液用饱和碳酸氢钠溶液萃取。用碳酸钠将水性层的pH值调至8并且用乙酸乙酯浓缩。将有机溶液合并，用硫酸钠干燥并且浓缩以获得1.0g(60%)的外消旋的3-氨基-3-(4-羟基-苯基)-丙酸叔丁酯。通过HPLC将对映异构体分离。
馏分12包含所需的异构体。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=0.81分钟
MS(ES+)：m/e=239.18(M+H+)
MS(ES-)：m/e=236.18(M-H)，282.18(M+HCOO-)
旋光度(P2000旋光仪，CHCl3)：[α]D=-13.6°+/-0.11°
文献值：[α]D=-8.5°(Tetrahedron：Asymmetry18(2007)1554-1566，3.6.72Compound(S)-46)
实施例23b
4-{3-[(R)-3-[(S)-2-叔丁氧基羰基-1-(4-羟基-苯基)-乙基氨基甲酰基]-哌啶-1-基}-3-氧代丙基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将214.0mg(0.90mmol)(S)-3-氨基-3-(4-羟基-苯基)-丙酸叔丁酯溶解在3.5ml的N,N-二甲基甲酰胺中并且冷却至0℃。在该溶液中加入466.4mg(1.00mmol)4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例5c)和0.38ml(2.71mmol)三乙胺的3.5ml二氯甲烷溶液。将混合物在6℃下保持20小时。将饱和的氯化铵溶液加入并且用二氯甲烷萃取混合物。将有机层用硫酸钠干燥并且真空浓缩以获得820mg所获得物。用5g硅胶色谱(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)纯化提供539mg(102%)的4-{3-[(R)-3-[(S)-2-叔丁氧基羰基-1-(4-羟基-苯基)-乙基氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.24分钟
MS(ES+)：m/e=588.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=586.6(M-H)，632.6(M+HCOO-)
实施例23c
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将270.0mg(0.46mmol)4-{3-[(R)-3--[(S)-2-叔丁氧基羰基-1-(4-羟基苯基)-乙基氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯溶于17.7ml N,N-二甲基甲酰胺中。将449mg(1.38mmol)碳酸铯和255.3mg(0.69mmol)双对甲苯磺酸乙二酯加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且浓缩。将其余的用饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯取出。将水相用3x20ml的乙酸乙酯萃取。将萃取液用硫酸钠干燥并且浓缩。用10g硅胶色谱(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)纯化提供了227mg(63%)的4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，进一步通过HPLC将其纯化。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=1.48分钟
MS(ES+)：m/e=787.8(M+H+)
MS(ES-)：m/e=784.6(M-H)，830.6(M+HCOO-)
实施例24
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(苄氧基)羟基吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例5e，200mg，0.37mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(25.3mL)中。将碳酸铯(298mg，0.92mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(203mg，0.55mmol)加入。将混合物在室温下搅拌2小时并且在5℃下储存17小时。将混合物通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应并且用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过制备级硅胶薄层色谱(乙酸乙酯100%)纯化以获得109mg的4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=1.26分钟
MS(ES+)：m/e=745.6(M+H+)
MS(ES-)：m/e=789.5(M+HCOO-)
实施例25
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例25a
5-(苄氧基)吡啶-3-甲腈
将3-(苄氧基)-5-溴吡啶(5.38g，20.4mmol，Harrowven等人Tetrahedron，2001，57，4447–4454)的DMF(33mL)溶液与氰化铜(2.9g，32.6mmol)一起在160℃下搅拌7小时。将饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯加入并且将所形成的悬浮液在50℃下搅拌15分钟。过滤后将液相分离。在50℃下将过滤物在10%DMF的乙酸乙酯(500mL)溶液和饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)中捣碎并且进行过滤和相分离。将用饱和碳酸氢钠水溶液和10%DMF的乙酸乙酯溶液处理沉淀的操作重复两次并且将合并的有机相用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯占己烷的0至65%)纯化以获得3.13g的5-(苄氧基)吡啶-3-甲腈。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ=5.16(s，2H)，7.35-7.55(m，6H)，8.50(d，1H)，8.58(d，1H)ppm。
实施例25b
3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸叔丁酯
将二异丙基胺(12.8mL，91mmol)在0℃下加入3M的乙基溴化镁的乙醚(15mL，45mmol)溶液并且而外加入乙醚(40mL)。一小时后在0℃下将乙酸叔丁酯加入并且连续搅拌30分钟。将5-(苄氧基)吡啶-3-甲腈(2.9g，13.8mmol)的乙醚溶液在0℃下加入。2.5小时后，在0℃下将在饱和氯化铵水溶液加入。将水相和有机相分离并且用乙醚萃取水相。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯在己烷中0至45%)纯化以获得1.95g的3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸叔丁酯。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ=1.53(s，9H)，4.89(s，1H)，5.14(s，2H)，7.33-7.48(m，6H)，8.42(m，2H)ppm。
实施例25c
(3S)-3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙酸叔丁酯
向(1,5-环辛二烯)氯铑(I)二聚体(29mg，60μmol)和(R)-(-)-1-[(S)-2-二-叔丁基膦基)二茂铁基]乙基二-(4-三氟甲基苯基)膦(81mg，120μmol)中氩气气氛下加入2,2,2-三氟乙醇(4mL)，并且将溶液搅拌40分钟。向在高压容器中的3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸叔丁酯(1.95g5.97mmol)的脱气的2,2,2-三氟乙醇(10mL)的溶液中加入铑催化剂溶液并且将溶液在50℃、10巴的氢气压下搅拌22小时。在2,2,2-三氟乙醇中重复加入同样制备的铑催化剂并且在50℃、10巴的氢气压下连续搅拌额外的16小时。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯在己烷中12至100%随后甲醇在乙酸乙酯中0至15%)纯化以获得1.16g的对映体富集的(3S)-3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ=1.43(s，9H)，2.59(d，2H)，4.42(t，1H)，5.12(s，2H)，7.32-7.50(m，6H)，8.23(s，1H)，8.29(m，1H)ppm。
旋光度(P2000旋光仪，CHCl3)：[α]D=-15.5°(c=1.0g/100mL CHCl3)
实施例25d
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]-3-叔丁氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向(3S)-3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙酸叔丁酯(1.15g，3.5mmol)的DMF(13.4mL)的溶液中在0℃下加入4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯和三乙胺(1.46mL，10.5mmol)的二氯甲烷(13.5mL)溶液。3小时后将混合物通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应，相分离并且将水相用乙醚萃取。将有机萃取物用硫酸钠干燥，减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%，随后二氧六环占乙酸乙酯的0至20%)纯化以获得1.76g的4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]-3-叔丁氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1H-NMR(300MHz，DMSOd6)：δ=0.79-1.08(m，3H)，1.38(s，9H)，1.35(s，9H)，1.49-1.75(m，9H)，2.29(m，3H)，2.59-2.77(m，5H)，2.89-3.13(m，1H)，3.68-3.83(m，1H)，3.83-3.97(m，2H)，5.07-5.27(m，1H)，5.17(s，2H)，7.28-7.51(m，6H)，8.12(br.s，1H)，8.24(br.s，1H)，8.39-8.55(m，1H).
实施例25e
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]-3-叔丁氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.69g，2.49mmol)在乙酸乙酯(73mL)和甲醇(12mL)中在室温、氢气气氛和钯炭(10%，170mg)存在下搅拌20小时。将悬浮液用硅藻土过滤，用甲醇彻底洗涤。将滤液减压浓缩并且将残留物通过硅胶色谱(甲醇占乙酸乙酯的0%至25%)纯化以获得1.37g的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，DMSOd6，80℃)：δ=0.85-1.09(m，2H)，1.36(s，9H)，1.41(s，9H)，1.30-1.47(m，5H)，1.55-1.72(m，4H)，1.77-1.89(m，1H)，2.29(m，3H)，2.59-2.77(m，5H)，2.89-3.13(m，1H)，3.83-3.97(m，3H),5.03-5.25(m，1H)，7.09(t，1H)，7.88-8.09(m，2H)，8.14(d，1H)，9.55(br.，1H)ppm。
实施例25f
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.34mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(39mL)中。将碳酸铯(277mg，0.85mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(188mg，0.51mmol)加入。将混合物在室温下搅拌4小时，重复加入碳酸铯(277mg，0.85mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(188mg，0.51mmol)并且在5℃下连续搅拌17小时。将混合物通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应并且用乙醚和乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%随后二氧六环占乙酸乙酯的0至60%)纯化以获得207mg的4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-NH2)：Rt.=1.37分钟
MS(ES+)：m/e=787.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=785.5(M-H)，831.5(M+HCOO-)
实施例26
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将82.0mg(0.13mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例7a)溶解在5.1mlN,N-二甲基甲酰胺中。将129mg(0.40mmol)碳酸铯和73.2mg(0.20mmol)双对甲苯磺酸乙二酯加入。将混合物在室温下搅拌20小时并且浓缩。将其余的用饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯取出。将水相用3x20ml的乙酸乙酯萃取。将萃取液用硫酸钠干燥并且浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)色谱纯化提供64mg(59%)的4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.30分钟
MS(ES+)：m/e=821.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=819.6(M-H)，865.5(M+HCOO-)
实施例27
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例27a
3-氨基-3-[5-溴吡啶-3-基]丙-2-烯酸叔丁酯
将二异丙基胺(9.2mL，65mmol)在0℃下加入3M的乙基溴化镁的乙醚(10.9mL，32.7mmol)溶液并且额外加入乙醚(20mL)。一小时后在0℃下将乙酸叔丁酯(4.3mL，32.7mmol)加入并且连续搅拌30分钟。将5-溴吡啶-3-甲腈(2.0g，10.9mmol)的乙醚(42mL)溶液在0℃下加入。2.5小时后，在0℃下将在饱和氯化铵水溶液加入。将水相和有机相分离并且用乙醚萃取水相。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯占己烷的0至60%)纯化以获得1.12g的3-氨基-3-[5-溴吡啶-3-基]丙-2-烯酸叔丁酯。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ=1.44(s，9H)，4.77(s，1H)，7.15(br.，2H)，8.22(t，1H)，8.75(d，1H)，8.76(d，1H)ppm。
实施例27b
(3S)-3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸叔丁酯
在氯(1,5-环辛二烯)铑(I)二聚体(39mg，80μmol)和(R)-(-)-1-[(S)-2-二-叔丁基膦基)二茂铁基]乙基二-(4-三氟甲基苯基)膦(108mg，160μmol)中氩气气氛下加入2,2,2-三氟乙醇(5.8mL)，并且将溶液搅拌40分钟。向在高压容器中的3-氨基-3-[5-溴吡啶-3-基]丙-2-烯酸叔丁酯(1.59g5.32mmol)的脱气的2,2,2-三氟乙醇(11.6mL)的溶液中加入铑催化剂溶液并且将溶液在50℃、11巴的氢气压下搅拌22小时。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯在己烷中12至100%随后甲醇在乙酸乙酯中0至15%)纯化以获得1.16g的对映体富集的(3S)-3-氨基-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙酸叔丁酯。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ=1.43(s，9H)，2.59(d，2H)，4.42(t，1H)，7.92(t，1H)，8.58(d，1H)，8.53(d，1H)ppm。
α=-17.6°(c=1.0g/100mL，CHCl3)
实施例27c
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-溴吡啶-3-基]-3-叔丁氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向(3S)-3-氨基-3-[5-溴吡啶-3-基]丙酸叔丁酯(1.33g，4.42mmol)的DMF(17mL)的溶液中在0℃下加入4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁(实施例25c2.54g，4.91mmol)和三乙胺(1.85mL，13.2mmol)的二氯甲烷(17mL)溶液。3小时后将混合物通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应，相分离并且将水相用乙醚萃取。将有机萃取物用硫酸钠干燥，减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的12至100%，随后二氧六环占乙酸乙酯的0至15%)纯化以获得2.1g的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.35分钟
MS(ES+)：m/e=651.4/653.4(M+H+)
实施例27d
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[4-羟基苯基)吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-溴吡啶-3-基]-3-叔丁氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，307μmol)的甲苯(7.5mL)溶液中加入四(三苯膦)合钯(0)(14mg，0.01mmol)、(4-羟基苯基)硼酸(55mg，399μmol)的乙醇溶液和氟化钾(55mg，0.61mmol)的水(1.87mL)溶液。将混合物在100℃下搅拌4小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的12至100%，随后二氧六环占乙酸乙酯的0至15%)纯化以获得156mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[4-羟基苯基)吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.17分钟
MS(ES+)：m/e=665.5(M+H+)
MS(ES-)：m/e=663.5(M-H)，709.5(M+HCOO-)
实施例27e
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(4R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[4-羟基苯基)吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.15mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(17.4mL)中。将碳酸铯(122mg，0.38mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(84mg，0.23mmol)加入。将混合物在室温下搅拌4小时，重复加入碳酸铯(122mg，0.38mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(84mg，0.23mmol)并且在5℃下连续搅拌17小时。将混合物通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应并且用乙醚和乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%随后二氧六环占乙酸乙酯的0至60%)纯化以获得85mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=1.44分钟
MS(ES+)：m/e=863.6(M+H+)
MS(ES-)：m/e=861.5(M-H).
实施例28
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-氰基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向100.0mg(0.16mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8c)的4ml甲苯溶液中加入3.8mg的四(三苯膦)合钯(0)、35.7mg(0.20mmol)的(4-氯-3-氰基苯基)硼酸的1.0ml乙醇溶液和29.6mg(0.51mmol)氟化钾的1.0ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌6小时，用水和饱和碳酸氢钠溶液稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供44mg(36%)的4-{3-[(4R)-3-({1-[5-(4-氯-3-氰基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.27分钟
MS(ES+)：m/e=668.6(M+H+)
MS(ES-)：m/e=664.5(M-H)，710.5(M+HCOO-)
实施例29
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-溴-4-氰基苄基)氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.18mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氢化钠(8mg，60%0.2mmol)。将溶液冷却至并且搅拌过程中加入2-溴-4-(溴甲基)苄腈(55mg，0.2mmol)。将混合物温热至室温并且通过在45分钟后加入水合物乙酸乙酯结束反应。将水相和有机相分离并且用乙酸乙酯萃取水相。将合并的有机萃取物减压浓缩并且将残留物用制备级HPLC纯化以获得46mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-溴-4-氰基苄基)氧基]-吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm30x125mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟30%B，0.5-7分钟30-70%B
流速： 120mL/分钟
温度： RT
检测： 276nm
Rt.： 5.31-5.70分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.27分钟
MS(ES+)：m/e=740.3/742.3(M+H+)
实施例30
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将98.0mg(0.16mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例6a)溶解在6.1mlN,N-二甲基甲酰胺中。将154mg(0.47mmol)碳酸铯和87.4mg(0.24mmol)双对甲苯磺酸乙二酯加入。将混合物在室温下搅拌68小时并且浓缩。将其余的用饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯取出。将水相用3x20ml的乙酸乙酯萃取。将萃取液用硫酸钠干燥并且浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)色谱纯化提供70mg(49%)4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-5-[4-(2-{[(3-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.33分钟
MS(ES+)：m/e=821.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=865.5(M+HCOO-)
实施例31
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[2-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将108.0mg(0.17mmol)4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8d)溶解在6.7ml N,N-二甲基甲酰胺中。将170mg(0.52mmol)碳酸铯和96.4mg(0.26mmol)双对甲苯磺酸乙二酯加入。将混合物在室温下搅拌68小时并且浓缩。将其余的用饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯溶解。将水相用3x20ml的乙酸乙酯萃取。将萃取液用硫酸钠干燥并且浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-90/10)色谱纯化提供了55mg(37%)的4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-5-[2-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.30分钟
MS(ES+)：m/e=821.3(M+H+)
MS(ES-)：m/e=865.5(M+HCOO-)
实施例32
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
在171.5mg(0.28mmol)的4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例8c)的7ml甲苯中加入6.5mg(0.01mmol)的四(三苯膦)合钯(0)、68.0mg(0.34mmol)的(4-氯-3-硝基苯基)硼酸的1.7ml乙醇溶液和50.7mg(0.87mmol)氟化钾的1.7ml水溶液。将混合物在100℃下搅拌60小时，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5-90/10)色谱纯化提供100mg(47%)的4-{3-[(4R)-3-({1-[5-(4-氯-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.30分钟
MS(ES+)：m/e=686.2(M+H+)
MS(ES-)：m/e=730.4(M+HCOO-)
实施例33
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-联苯-3-基]-3-氧代丙基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将178.0mg(0.28mmol)4-(3-{(R)-3-[1-(5-氟-4’-羟基联苯-3-基)-2-甲氧基羰基乙基氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例17d)溶解在10.7mlN,N-二甲基甲酰胺中。将272mg(0.84mmol)碳酸铯和154.6mg(0.42mmol)双对甲苯磺酸乙二酯加入。将混合物在室温下搅拌70小时并且浓缩。将其余的用饱和氯化铵溶液和乙酸乙酯溶解(take up)。将水相用3x20ml的乙酸乙酯萃取。将萃取液用硫酸钠干燥并且浓缩。用10g硅胶(二氯甲烷/乙醇100/0-95/5)色谱纯化提供167mg所获得物，并且将其进一步通过HPLC纯化以获得27mg(11%)的4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)联苯-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.47分钟
MS(ES+)：m/e=838.4(M+H+)
MS(ES-)：m/e=882.4(M+HCOO-)
实施例34
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例34a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.61mol)的脱气溶液、碘化铜(14mg，70μmol)、四(三苯膦)合钯(0)(71mg，60μmol)和4-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]苯酚(234mg，1.23mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(3.5mL)和正丁基胺(0.91mL)溶液中在80℃下加入四正丁基氟化铵的THF(800μL，0.8mmol)1M溶液60分钟以上。再在10分钟后在80℃下将混合物用水将混合物稀释并且冷却至室温后用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥并且真空浓缩。将残留物用制备级HPLC纯化以获得338mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18YMC-ODS AQ10μm51x200mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-1分钟65%B，1-10分钟65-85%B，
流速： 150mL/分钟
温度： RT
检测： 276nm
Rt.： 7.36-8.67分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.31分钟
MS(ES+)：m/e=689.5(M+H+)
实施例34b
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg，0.09mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中。将碳酸铯(71mg，0.22mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(ethane-1,2-diyl bis(4-methylbenzenesulfonate)(48mg，0.13mmol)加入。将混合物在室温下搅拌25小时，在4小时和6小时后搅拌的同时重复加入碳酸铯(71mg，0.22mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(48mg，0.13mmol)。将混合物通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应并且用乙醚和乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%随后二氧六环占乙酸乙酯的0至50%)纯化以获得48mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.51分钟
MS(ES+)：m/e=887.7(M+H+)
实施例35
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例35a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例27c，300mg，0.46mmol)的脱气溶液、碘化铜(13mg，70μmol)、四(三苯膦)合钯(0)(53mg，50μmol)的DMF(1.5mL)和正丁基胺(0.68mL)溶液中在100℃下加入3-乙炔基苯酚(103mg，0.88mmol)的DMF(1.0mL)溶液35分钟以上。再在5分钟后在100℃下将残留物用DMSO稀释并且用制备级HPLC纯化以获得289mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙炔基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18YMC-ODS AQ10μm51x200mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-1分钟65%B，65-10分钟1-85%B
流速： 240mL/分钟
温度： RT
检测： 276nm
Rt.： 7.86-9.09分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.33分钟
MS(ES+)：m/e=689.6(M+H+)
实施例35b
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(40mg，0.06mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(6.7mL)中。将碳酸铯(47mg，0.15mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(32mg，0.09mmol)加入。将混合物在室温下搅拌4小时并且在5℃下储存72小时。重复加入碳酸铯(47mg，0.15mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(32mg，0.09mmol)并且将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应并且用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%随后二氧六环占乙酸乙酯的0至50%)纯化以获得24mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.50分钟
MS(ES+)：m/e=887.5(M+H+)
实施例36
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例36a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[2-(4-羟基苯基)乙基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(4-羟基苯基)乙炔基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(190mg，0.28mmol)在乙酸乙酯(8.1mL)和甲醇(1.34mL)中在室温、氢气气氛和钯炭(10%，19mg)存在室温下搅拌4.45小时。将悬浮液用硅藻土过滤，用甲醇彻底洗涤。将溶液减压浓缩并且用制备级HPLC纯化以获得89mg的4-{3-[(4R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[2-(4-羟基苯基)乙基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18YMC-ODS AQ10μm51x200mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-1分钟40%B，40-10分钟1-80%B
流速： 240mL/分钟
温度： RT
检测： 276nm
Rt.： 4.40-4.74分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.18分钟
MS(ES+)：m/e=693.6(M+H+)
实施例36b
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(4-羟基苯基)乙基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(67mg，0.10mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(9.7mL)中。将碳酸铯(79mg，0.24mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(54mg，0.15mmol)加入。将混合物在室温下搅拌4小时，通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应并且用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%随后二氧六环占乙酸乙酯的0至60%)纯化以获得64mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-NH3)：Rt.=1.48分钟
MS(ES+)：m/e=891.6(M+H+)
实施例37
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例37a
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙炔基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.29mmol)在乙酸乙酯(8.1mL)和甲醇(1.4mL)中在室温、氢气气氛和钯炭(10%，20mg)存在室温下搅拌7小时，同时在4小时后重复加入钯炭(10%，20mg)。将悬浮液用硅藻土过滤，用甲醇彻底洗涤。将溶液减压浓缩并且将残留物用制备级HPLC纯化以获得125mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[2-(3-羟基苯基)乙基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
色谱柱： C18Chromatorex10μm125x30mm
溶剂： A=H2O+0.1%HCOOH
B=乙腈
梯度： 0-0.5分钟45%B，0.5-6分钟45-70%B
流速： 150mL/分钟
温度： RT
检测： 228nm
Rt.： 1.52-2.49分钟
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.19分钟
MS(ES+)：m/e=693.5(M+H+)
实施例37b
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(67mg，0.10mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(9.7mL)中。将碳酸铯(79mg，0.24mmol)和双对甲苯磺酸乙二酯(54mg，0.15mmol)加入。将混合物在室温下搅拌4小时，通过加入饱和氯化铵水溶液结束反应并且用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液用盐水洗涤并且用硫酸钠干燥。将溶液减压浓缩并且将残留物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯占己烷的20至100%随后二氧六环占乙酸乙酯的0至50%)纯化以获得49mg的4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]-乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯。
UPLC(ACN-HCOOH)：Rt.=1.43分钟
MS(ES+)：m/e=891.5(M+H+)
实施例38
(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过直接标记的放射合成
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5M K2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mLWheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯非对映异构体的混合物(实施例21，2.0mg，2.69μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]KF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热10分钟后，将容器冷却并且将0.5M NaOH(100μL)加入。在加入1M HCl(200μL)之前在25℃下连续搅拌10分钟。随后将重新密封的小瓶在100℃下再加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(Zorbax Bonus RP5μm C18-HL(9.4x250mm)，17/83/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：18.3-19.5分钟；(3R)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：12.8-14.0分钟)。将所收集的馏分用20mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.5mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(300μl)中以得到73MBq至297MBq的(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：14±5.4%d.c.；合成时间：116±9.6min)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例1)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，梯度：7分钟内从5%B至40%B)。
通过间接标记的放射合成：
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml K2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。将500μL的邻二氯苯(o-DCB)加入干燥的[18F]KF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热2分钟后，将容器冷却并且将4-硝基-苯磺酸2-溴-乙酯(10mg，32.24μmol)加入。将重新密封的小瓶在130℃下再加热10分钟。将反应混合物再次冷却并且将两个具有管的针插入进聚四氟乙烯膜密封的反应瓶。一根管与氮气流量调节器相连并且另一个管与装有400μL DMF的第二小瓶相连。使用连续的小流量的氮气通过反应混合物，将该混合物在100℃下再加热20分钟，同时将该氮气流引导至该第二小瓶，在该第二小瓶中氮气流通过400μL DMF持续鼓泡。随着加热和氮气流小瓶1中的2-[18F]氟-1-溴乙烷被连续驱入小瓶2中。20分钟后停止蒸馏，因为小瓶2中检测不到放射活性物的增加。
在单独的小瓶中，将4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例4e，2.50mg，4.58μmol)溶解在100μL DMF中。随后将2M NaOH溶液(20μL，40.0μmol)加入并且静置1分钟后在25℃下将该混合物加入含有2-[18F]氟-1-溴乙烷的400μL DMSO溶液的小瓶2中。将密封的小瓶2在100℃下加热25分钟。冷却后将额外的100μL2M NaOH加入反应混合物中并且在25℃下连续搅拌15分钟。用200μL4M HCl将溶液酸化并且在100℃下在该密封的小瓶中加热10分钟。将反应混合物用4M NaOH中和，用3mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(Zorbax BonusRP5μm C18-HL(9.4x250mm)，17/83/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：13.4-14.7分钟；(3R)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：8.6-9.7分钟)。将所收集的馏分用20mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.5mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(100μl)中以得到10MBq至15MBq的(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：3±1.7%d.c.；合成时间：195±14.3min)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例1)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，梯度：7分钟内从5%B至40%B)。
实施例39
(3S)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯非对映异构体的混合物(实施例22，2.0mg，2.69μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]KF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热10分钟后，将容器冷却并且将0.5M NaOH(100μL)加入。在加入1M HCl(200μL)之前在25℃下连续搅拌10分钟。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(Zorbax Bonus RP5μm C18-HL(9.4x250mm)，19/81/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：10.3-12.4分钟；(3R)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：8.3-10.3分钟)。将所收集的馏分用20mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.5mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(300μl)中并且无菌过滤以得到115MBq至151MBq的(3S)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：11±4.0%d.c.；合成时间：108±10.5min)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例2)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，梯度：7分钟内从5%B至50%B)。
实施例40
(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的标记：
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯非对映异构体的混合物(实施例24，2.0mg，2.68μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]KF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热10分钟后，将容器冷却并且将0.5M NaOH(100μL)加入。在加入1M HCl(200μL)之前在25℃下连续搅拌10分钟。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(Phenomenex Gemini5μmC18110A(S/N：337148-3；10.0x250mm),10/90/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：15.1-17.0分钟；(3R)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：8.0-8.4分钟)。将所收集的馏分用40mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Plus C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.5mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(300μl)中以得到113MBq至168MBq的(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：8.7±1.5%d.c.；合成时间：132±15.4min)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例3)共注射到分析用HPLC上(柱：Phenomenex Gemini，C18RP，50x4.6mm，3μ，1.5ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱12%B)。
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的标记：
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小的阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mLWheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例24，2.0mg，2.68μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]KF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热10分钟后，将容器冷却并且将0.5MNaOH(100μL)加入。在加入1M HCl(200μL)之前在25℃下连续搅拌10分钟。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(Phenomenex Gemini5μm C18110A(S/N：337148-3；10.0x250mm),10/90/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：15.4-18.4分钟)。将所收集的馏分用40mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Plus C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.5mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(300μl)中以得到127MBq至435MBq的(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：19.5±4.6%d.c.；合成时间：117±10分钟)。放射化学纯度大于99%并且比活度在38GBq/μmol至107GBq/μmol之间。确定F-18标记的产物通过与将其与F-19冷标准物(实施例3)共注射到分析用HPLC上(柱：Phenomenex Gemini，C18RP，50x4.6mm，3μ，1.5ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱12%B)。
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的标记：
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的2.28mg Cs2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例25，4.0mg，5.08μmol)的无水乙腈(400μL)溶液加入干燥的[18F]CsF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热20分钟后，将容器冷却并且将1M HCl(400μL)加入。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热12分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(Phenomenex Gemini5μm C18110A(S/N：337148-3；9x250mm),10/91/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：11.0-17.2分钟)。将所收集的馏分用40mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Plus C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.0mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(300μl)中以得到154MBq至1351MBq的(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：21.3±5.9%d.c.；合成时间：126±20分钟)。放射化学纯度大于99%并且比活度在28.5GBq/μmol至61.2GBq/μmol之间。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例3)共注射到分析用HPLC上(柱：Phenomenex Gemini，C18RP，50x4.6mm，3μ，1.5ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱12%B)。
实施例41
(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的标记方法：
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mLWheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的非对映异构体的混合物(实施例26，2.0mg，2.44μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]KF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热10分钟后，将容器冷却并且将0.5M NaOH(100μL)加入。在加入1M HCl(200μL)之前在25℃下连续搅拌10分钟。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，梯度(20分钟)：20/80/0.1-35/65/0.1乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：15.5-16.8分钟；(3R)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：13.2-15.4分钟)。将所收集的馏分用40mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Plus C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.5mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(300μl)中以得到65MBq至163MBq的(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：9.0±1.0%d.c.；合成时间：128±10.0min)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例7)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱15%B)。
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的标记方法：
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的2.28mg Cs2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基}吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例27，2.0mg，2.31μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]CsF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热15分钟后，将容器冷却并且将1M HCl(150μL)加入。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用1M NaOH(150μL)中和并且用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，21/79/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：13.0分钟)。将所收集的馏分用30mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Plus C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.0mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(300μl)中以得到226MBq的(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：11%d.c.；合成时间：113分钟)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例7)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱15%B)。
实施例42
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(100μL水中的2.8mg Cs2CO3和1.9mL MeCN中的10.4mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-[3-((R)-3-{1-[5-(4-氯-3-氰基苯基)-吡啶-3-基]-2-甲氧基羰基-乙基氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯的非对映异构体的混合物(2.0mg，3.00μmol)的无水DMSO(300μL)溶液加入干燥的[18F]KHF2–K222。在160℃下将密封的小瓶加热10分钟后，将容器冷却并且将0.5M NaOH(100μL)加入。在加入1M HCl(200μL)之前在25℃下连续搅拌5分钟。随后将密封的小瓶再次在70℃下加热5分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，梯度(20分钟)：20/80/0.1-30/70/0.1乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：12.0-11.8分钟；(3R)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：10.0-10.5分钟)。将所收集的馏分用30mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用0.7mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(200μl)中以得到12MBq至111MBq的(3S)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：4.0±1.0%d.c.；合成时间：125±19.8分钟)。放射化学纯度大于99%。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例9)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱15%B)。
实施例43
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(100μL水中的2.8mg Cs2CO3和1.9mL MeCN中的10.4mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-氰基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的非对映异构体的混合物(实施例28，1.0mg，1.87μmol)的无水DMSO(300μL)溶液加入干燥的[18F]KHF2–K222。在160℃下将密封的小瓶加热15分钟后，将容器冷却并且将0.5MNaOH(100μL)加入。在加入1M HCl(200μL)之前在25℃下连续搅拌10分钟。随后将密封的小瓶再次在70℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，梯度(20分钟)：20/80/0.1-30/70/0.1乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：11.5-12.2分钟；(3R)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：9.9-10.8分钟)。将所收集的馏分用15mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.0mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(100μl)中以得到7MBq至38MBq的(3S)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：2.4±1.0%d.c.；合成时间：111±10.6分钟)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例10)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱15%B)。
实施例44
(3S)-3-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的2.28mg Cs2CO3和1.5ml MeCN中的5.25mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例34，2.0mg，2.25μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]CsF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热15分钟后，将容器冷却并且将1M HCl(150μL)加入。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用1M NaOH(150μL)中和并且用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，28/72/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：17.8分钟)。将所收集的馏分用15mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.0mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(100μl)中以得到44MBq的(3S)-3-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：5.0%d.c.；合成时间：139分钟)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例15)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱20%B)。
实施例45
(3S)-3-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(500μL水中的2.28mg Cs2CO3和1.5mL MeCN中的5.25mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例35，2.0mg，2.25μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]CsF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热15分钟后，将容器冷却并且将1M HCl(150μL)加入。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，31/69/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：14.9分钟)。将所收集的馏分用15mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用0.5mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(100μl)中以得到63MBq的(3S)-3-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：5.0%d.c.；合成时间：115分钟)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例16)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱23%B)。
实施例46
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mLWheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例36，3.0mg，3.37μmol)的无水乙腈(300μL)溶液加入干燥的[18F]KF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热15分钟后，将容器冷却并且将1M HCl(150μL)加入。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(Phenomenex Synergi Hydro-RP4μm(250x10mm)，18/82/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：17.8分钟)。将所收集的馏分用15mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.0mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(100μl)中无菌过滤以得到52MBq的(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：5.5%d.c.；合成时间：145分钟)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例7)共注射到分析用HPLC上(柱：Phenomenex Synergi Hydro，C18RP，50x4.6mm，4μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱18%B)。
实施例47
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的2.28mg Cs2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mL Wheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。随后将4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例37，2.5mg，2.81μmol)的无水乙腈(200μL)溶液加入干燥的[18F]CsF–K222。在100℃下将密封的小瓶加热10分钟后，将容器冷却并且将1M HCl(150μL)加入。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热8分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，25/75/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：13.2分钟)。将所收集的馏分用15mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.0mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(200μl)中以得到290MBq的(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：19.1%d.c.；合成时间：88分钟)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例19)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，梯度：7分钟内从5%B至50%B)。
实施例48
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸
通过用RDS111回旋加速器的11MeV质子束轰击98%[18O]富集的水靶进行18O(p,n)18F核反应从而制备[18F]氟化物。将[18F]氟化物的水溶液捕捉在小阴离子交换Sep-PakTMPlus QMA柱上(Waters)(用5ml0.5MK2CO3溶液和10ml水预平衡)。将放射活性物用混合溶液(0.5ml水中的1.0mg K2CO3和1.5ml MeCN中的5.27mg K222)从QMA柱上洗脱至5mLWheaton锥形小瓶中。在110℃和氮气流下蒸发溶液。用每次1.0mL的乙腈重复共沸干燥三次。将双对苯磺酸三乙二醇酯(10mg，21.81μmol)的无水乙腈(500μL)溶液加入干燥的[18F]KF–K222中。随后将密封的小瓶再次在100℃下加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μm C18HL(10.0x250mm)，50/50/0.1-乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，甲苯-4-磺酸2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙基酯的保留时间：12.5分钟)。将所收集的馏分用20mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Light C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用1.0mL乙腈洗脱。跟着在缓慢的氮气流下将乙腈完全蒸发以得到纯的甲苯-4-磺酸2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙基酯(570MBq)辅基。
在单独的小瓶中，将4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(实施例4e，2.50mg，4.58μmol)溶解在300μL DMF中。随后将2M NaOH溶液(20μL，40.0μmol)加入并且静置1分钟后在25℃下将该混合物加入含有甲苯-4-磺酸2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙基酯的小瓶1中。将密封的小瓶2在100℃下加热20分钟。冷却后将额外的100μL1M NaOH加入反应混合物中并且在25℃下连续搅拌10分钟。用200μL2M HCl将溶液酸化并且在100℃下在该密封的小瓶中加热10分钟。冷却后将反应混合物用4mL水稀释并且将其加到半制备级HPLC上(ACE5μmC18HL(10.0x250mm)，梯度(20分钟)：15/85/0.1-50/50/0.1乙腈/水/三氟乙酸(体积比)，4mL/分钟，(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：28.3分钟；(3R)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸的保留时间：29.0分钟)。将所收集的馏分用20mL水稀释并且将其加到预平衡的Sep-PakTM Plus C18柱(用5ml乙醇和10ml水预平衡)。将柱用5mL水洗涤并且随后将活性物用2.0mL乙醇洗脱。在90℃和氮气流下将乙醇完全蒸发后，将最终的示踪剂溶于水(100μl)中以得到34MBq的(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸(放射化学产率：4.5%d.c.；合成时间：172分钟)。放射化学纯度大于99%。确定F-18标记的产物通过将其与F-19冷标准物(实施例4)共注射到分析用HPLC上(柱：ACE，C18RP，50x4.6mm，3μ，2ml/分钟(Agilent)，溶剂A：H2O+0.1%TFA，溶剂B：MeCN+0.1%TFA，7分钟内等度洗脱20%B)。
参照化合物
(3S)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]-3{6-[3H]吡啶-3-基}丙酸
将(3S)-3-(6-溴吡啶-3-基)-3-{[(3R)-1-(3-哌啶-4-基-丙酰基)哌啶-3-羰基]氨基}丙酸(1.85mg，3.73μmol)溶解在DMF(500μL)和Et3N(25μL)的混合物中。向该溶液中加入钯炭(20%)(6.45mg)并且将混合物与氚歧管相连接以用氚气体氚化过夜。随后将反应混合物在歧管中低温静态蒸发三次。将所获得的粗产物用半制备级HPLC(Kromasil100C85μm(250x4.6mm)，洗脱剂：35mM氨水/甲醇，流速：1mL/分钟)纯化。所收集的馏分含有2061MBq的(3S)-3-{5-3H-吡啶-3-基}-3-{[(R)-1-(3-哌啶-4-基-丙酰基)哌啶-3-羰基]氨基}丙酸(辐射化学产率：12.6%；辐射化学纯度98%；比活度：7.81Ci/mmol)。
实施例49
GPIIb/IIIa拮抗剂对人GPIIb/IIIa受体的亲合性
所用的GPIIb/IIIa分析的整个过程如图1中的流程所示。
纯化的人糖蛋白IIb/IIIa(20mM Tris-HCl，0.1M NaCl，0.1%Triton X-100，1mMCaCl2，0.05%NaN3，50%甘油，pH7.4)购自Enzyme Research Laboratories公司(South Bend，IN)。将GPIIb/IIIa受体在具有0.01%牛血清蛋白(牛血清的白蛋白-冻干粉，≥96%，Sigma)的磷酸缓冲盐(具有钙和镁的Dulbecco's磷酸缓冲盐(D-PBS(+))，Invitrogen)溶液中稀释。
将GPIIb/IIIa受体在96孔实心板(immuno Plate MaxiSorpTM，Nunc，Roskilde，Denmark)上在277K至280K下并且以每孔0.1μg至每孔1μg的浓度至少固定48小时(每孔100μL，48小时至最多96小时)。作为阴性对照，将板上的一排(n=8)仅用2%牛血清蛋白(每孔200μL，白蛋白牛血清-冻干粉，≥96%，Sigma，在D-PBS(+)中稀释)培养。
用洗涤缓冲液(每孔230μL，Dulbecco's磷酸缓冲盐溶液(D-PBS(-))不含钙和镁，Invitrogen)洗涤三次之后通过将该板用含有2%牛血清蛋白(牛血清白蛋白-冻干粉，≥96%，Sigma)的特殊封闭溶液(blocking solution)(每孔200μL，Carl Roth GmbH Co KG，Karlsruhe)在室温下培养1小时将残余的暴露的塑料结合位点和非特异性结合位点封闭。
用洗涤缓冲液冲洗三次后将50μL的氚代参照化合物(60nM，3H标记的化合物)和50μL的新型化合物(抑制剂，19F)同时加入各个孔并且在室温下培养1小时。研究了各个新型抑制剂的几种浓度(0.1、1、2、5、10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000和20000nM)。对抑制剂的各个浓度进行了四重(fourfold)测定。在表1中总结了所测试的抑制剂的结果。
在不加入抑制剂(n=8)的情况下，测到了氚代参照化合物的最大值。为排除3H-对照化合物的非特异结合，使用没有糖蛋白受体的孔作为阴性对照(n=12，同样地不用GPIIb/IIIa受体进行处理)。
一小时后，将板用磷酸缓冲盐溶液(每孔200μL，Dulbecco's磷酸缓冲盐溶液(D-PBS(+))，invitrogen)洗涤三次。之后，将140μL的液体闪烁液(scintillationcocktail)(MicroScintTM40aqueous，Perkin Elmer)加入各个孔中。15分钟后，在室温下将板用微孔板闪烁计数器(TopCount NXT v2.13，Perkin Elmer，Packard仪器公司)测量。
图1示出了GPIIb/IIIa分析的流程图。在第一步中，将从人血小板中纯化得到的人糖蛋白IIb/IIIa固定在96孔实心板上。在至少48小时后将板清洗并且将未特异性结合的位点用封闭。在随后的步骤中，将该板用氚代参照化合物和新型小分子化合物(抑制剂)同时培养。抑制剂的亲合性越高，参照物的结合部分(bound fraction)越少。用微孔板闪烁计数器测量未被抑制剂取代的氚化参照化合物的馏分。
在表1中总结了结果。
表1：化合物对人GPIIb/IIIa受体的结合亲合性。
抑制剂的亲合性越高，氚标记的参照物的结合部分越少。通过该分析，识别了活性非对映异构体并且可以测定亲合性(IC50值)。以上描述的研究表明式I的化合物对作为血栓成像的造影剂是有用的。实施例50中描述了IC50值和实际血栓累积之间的良好的相关性。
实施例50
体外表征
与人血栓的结合：
在与“Wakhloo，A.K.等人，Thrombus and stroke2008，in vitro models57-66”中所描述的体外血流模型相似的体外血流模型中进一步研究了化合物与血栓的结合，并且根据血栓的发展对模型进行了改进。简略地，开口的手工制备试管套组被用于形成血栓，该试管套组由如下组成：聚乙烯试管(Tygon R-1000，专利号AAU00007：I.D.3.2mm，O.D.6.4mm，圣戈班高功能塑料北美(Saint Gobain Performance Plastics North America))、中间试管(infusion set，B.Braun，Melsungen，德国)、开口的储存器(10mL Combitip，Eppendorf)以及含有粗糙的线的线圈(鱼线：Okuma UltraMax whitefish，直径：0.14mm，长度：5cm；砂纸：CAMi Grit designation：600，CP918a，VSM)的由聚乙烯试管制成的室(INTRAMEDIC Polyethylene Tubing，ClayAdams，PE160，长度：6.5cm)。中间试管和血栓室通过修剪的尖端(epTIPS，200μL，Eppendorff，德国/汉堡)连接。储存室和血栓室通过钳子固定并且竖立。使用蠕动泵(Minipuls3，Gilson，美国/米德尔顿)来泵送周围血液，从而将通过超声多普勒测量(Vevo770高分辨率体内显微成像系统，VisualSonics，加拿大/多伦多，安大略省；扫描头：RMV704，40MHz)监测的血栓室中部的流速调整至每分钟70-90cm。整个试管套组的体积为7.5或15mL。
每次实验都用10mL柠檬酸管(Sarstedt S-Monovette02.1067.001，10mL，柠檬酸3.13%)从志愿者体内取新鲜血液并且立即将其导入37℃下的培养箱的转动设备(具有旋转和转动设备的HeraeusminiTherm CTT，转动速率：每分钟19转，Heraeus instrumentsGmbH，德国/哈瑙)。需要从转动设备中取出两个管子并且将其中15mL液体转移至20mL注射器中(B.Braun，德国/梅尔松根)并且在蠕动泵开始之前将其轻轻地与0.75mLCaCl2溶液混合并且将注射器中的全部内含物通过细胞过滤器(BD FalconTM细胞株，40μm，BD，Franklin Lakes，美国/新泽西州)转移至试管套组的储存器中。7分钟后将1MBq或0.5MBq(15mL或7.5mL)的化合物通过移液管加入储存器中，因此用移液管的尖端轻轻地将内含物混合。将血液留下来再循环3分钟。随后，停止泵送，取出等分的血液试样并且将血栓和粗糙的线从血栓室中取出之后称重并且在伽玛计数器(自动伽玛计数器Wizard23，Perkin Elmer)中测量。随后，将血栓和线在纤溶酶溶液(人血浆中的纤溶酶，SigmaAldrich，贮液：500μg纤溶酶在500μL150μM Tris缓冲液(pH7.8)中，0.9%的20μL贮液的230μL盐水溶液)中培养。最终，测得了化合物在血液和血栓中的活性以及两者之间的比例(cpm/重量[mg])。在表2中总结了所研究化合物的结果。
表2：体外凝块与血液的比例以及相应IC50值
*在将体外血栓模型中描述的18F-标记的化合物注射3分钟后体外凝块与血液的比例±平均值的标准偏差(SEM)。
为了验证化合物的特异性，进行了竞争性实验，将冷化合物与热化合物一同加入到储存器中。冷化合物的最终血浆浓度为2.8μM。在表3中总结了结果。
表3：竞争性实验
*在将体外血栓模型中描述的18F-标记的化合物注射3分钟后值±平均值的标准偏差(SEM)。
竞争性实验示出了可以通过加入冷化合物替代示踪物积累并且验证了结合是特异性的。
表2和表3中示出的化合物对血栓的强特异性结合(体外凝块与血液的比例)与之前确定的IC50值(图2和实施例49)有很好的相关性。化合物在血栓中累积量或凝块与血液的比例随着亲合性的增高而提高。
实施例51
血浆蛋白结合
通过96孔HT板的平衡透析进行了化合物与血浆蛋白结合的测定。在缓冲液(50mM磷酸缓冲液)和10%血浆中制备测试化合物的溶液(0.3μM和3μM)。组装96孔HT透析板(Teflon)以便通过半透纤维素膜(再生纤维素，MWCO12-14K)将各个孔分为两个室。将磷酸缓冲溶液(150μL)加入膜的一侧中并且将血浆溶液(150μL)加入另一侧中。将化合物加入血浆溶液侧并且在37℃下培养。化合物的未结合部分可以通过膜并且可以在两侧达到平衡(6-8h，37℃)。用LC-MS分析两侧溶液中的各个化合物(无血浆和含血浆)。将各个化合物的溶液用缓冲液或血浆稀释以达到用于分析的相同基质(10%血浆)并且加入甲醇将其沉淀。未结合部分(Fu)被计算为无血浆溶液中和含有血浆溶液中该化合物的平衡浓度的商数。
表4中总结了结果。已经研究了人和猴子的血浆蛋白结合的程度。实施例未明显示出与血浆蛋白的显著结合，在所有研究的类别中未结合部分超过10%。
表4：浓度为0.3μM和3μM的人和猴子血浆中的血浆蛋白结合
实施例# 物种 类别 浓度(μM) Fu(Mari)%
1 人 白人 3 90
1 人 白人 0.3 91
1 猴子 食蟹猕猴 3 93
1 猴子 食蟹猕猴 0.3 99
3 人 白人 3 100
3 人 白人 0.3 96
3 猴子 食蟹猕猴 3 100
3 猴子 食蟹猕猴 0.3 100
7 人 白人 3 54
7 人 白人 0.3 50
7 猴子 食蟹猕猴 3 58
7 猴子 食蟹猕猴 0.3 54
实施例52
肝微粒体中体外代谢稳定性
将人肝微粒体悬浮液(蛋白含量0.5mg/mL)用于研究代谢稳定性。培养浓度为0.3μM。孔培养体积为3.03mL，其中将2.4mL的磷酸缓冲液(7.4pH)中的微粒体悬浮液活化通过加入0.6mL的NADPH再生系统(辅助因子混合物：1.2mg NADP、3IU葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、14.6mg葡萄糖-6-磷酸和4.9mg MgCl2的磷酸盐缓冲液，pH7.4)。加入30μL测试化合物后开始分析。将化合物溶解在有机溶剂中并且用相同肝微粒体稀释以保持有机含量低于推荐的浓度(二甲亚砜DMSO<0.2%且甲醇<1%)。将悬浮液在37℃下连续搅拌培养60分钟(TEC控制振荡器RS485，300UpM)。在不同的时间点(2、8、16、30、45和60分钟)取出等分试样并且将其与冷甲醇混合。将样品在-20℃下冷冻过夜。将溶液在3000g下离心15分钟。将澄清的上清液(100μL)用于测试浓度。用具有LCMS/MS检测器的Agilent1200HPLC系统进行分析。
使用不同类别的肝微粒体研究了所研究的化合物对相I氧化代谢降解的易感性(susceptibility)。发现化合物1和化合物3在人、猴子和大鼠中的代谢稳定性非常高。对于所有研究的类别，回收率几乎为100%。由体外清除(Clint)向体内清除的外推(extrapolation)表明在人、小鼠、大鼠和猴中的代谢清除非常低。
表5：在人、猴子和大鼠中体外代谢稳定性
实施例# 物种 类别 性别 CL血液(L/h/kg)
1 人 白人 混合 0.0001
1 猴子 食蟹猕猴 雌性 0.0001
1 大鼠 Wistar 雄性 0.0001
3 人 白人 混合 0.0001
3 猴子 食蟹猕猴 雌性 0.0001
3 大鼠 Wistar 雄性 0.0001
3 小鼠 NMRi 雌性 0.0001
实施例53
小鼠体内药代动力学
确定了实施例41中所描述的化合物在裸小鼠体内的生物分布。
简要地，各个小鼠接受185KBq的化合物。在不同的时间点(注射后1分钟、3分钟、10分钟、30分钟和120分钟，每组3只小鼠)将动物处死并且将相关的器官或其等分试样去除、称重以及最终在伽玛计数器(自动伽玛计数器Wizard23，Perkin Elmer)中测量。
化合物从血液中迅速消失并且在血管壁中没有增强。化合物迅速通过肾脏和肝脏排出体外并且注射(p.i.)15分钟后，在整个身体的其余部分几乎没有背景信号(图3)。
实施例54
食蟹猕猴体内的血液清除
确定了在食蟹猕猴体内实施例40中所描述的化合物的血液清除。将雌性食蟹猕猴用0.12mL/肌内每千克体重的赛拉嗪(拜耳医药保健(Bayer HealthCare)，勒沃库森，德国)，和0.12mL/肌内每千克体重的氯胺酮(Pfizer(辉瑞))的混合物麻醉。将猴子放置在PET扫描仪(Inveon PET/CT，西门子医疗(Siemens Medical)，埃尔兰根)中并且将25MBq的化合物静脉注射，从注射前不久至注射后60分钟连续进行PET成像。在注射后3、10、30和60分钟时抽取静脉血标本并且在伽玛计数器(自动伽玛计数器Wizard23，Perkin Elmer)中测量。并且，在整个成像过程中通过PET成像测量了化合物的血液浓度(图4)。
发现实施例40中描述的化合物迅速从血液中清除。在任何其它组织中只有边缘信号可见。大脑中完全没有成像。
结果与小鼠体内药代动力学研究的结果有很好的相关性并且再次突出了化合物的有利的药代动力学特性。此外，结果表明在健康内皮处也没有任何其它结构(例如整联蛋白(integrines))的交叉反应。
实施例55
食蟹猕猴体内血栓成像
用食蟹猕猴(雌性，2.8-3.2kg)在PET研究中研究了实施例40中描述的化合物的血栓成像能力。
猴子1：
将第一只猴子用0.12mL/肌内每千克体重的赛拉嗪(拜耳医药保健(Bayer HealthCare)，勒沃库森，德国)，和0.12mL/肌内每千克体重的氯胺酮(Pfizer(辉瑞))的混合物麻醉，并且另外通过肌内注射6μg/kg丁丙诺啡(Buprenorphine)镇痛。研究的同时，如果需要将小剂量的氯胺酮肌内注射。手术暴露左颈总动脉，并且将事先用砂纸(指定600-CAMI钢砂)打磨粗糙的聚乙烯管(INTRAMEDIC聚乙烯管，Clay Adams，PE50)插入血管中，将其推进到降主动脉并且将其留在血管中30分钟以便在管的粗糙表面上产生血栓。同时，将猴子置于PET扫描仪(Siemens Medical)，埃尔兰根)中。随后，通过静脉注射使猴子接受25KBq的化合物并且从注射前不久至注射后60分钟进行PET扫描。
图像显示了在降主动脉内部沿着管的粗糙部分的明亮的信号(图5)，而在管周围的任何组织中仅有稀疏的信号。令人惊讶地，将粗糙管从动物体内去除后，可以观察到在管的粗糙部分仅覆盖有非常薄的一层血栓。该层的厚度远小于1mm(参见图7中猴子2体内去除的血栓)并且还远小于接近1mm的图像分辨率。这还意味着可以在体内观察到甚至最轻微的血栓(甚至其尺寸远小于成像仪器的分辨率)这是由于化合物在血栓的血小板上的大量积累。
实验的最后，小心地将管从血管中去除随后将其称重并且在伽玛计数器(自动伽玛计数器Wizard23，Perkin Elmer)中测量。随后，将血栓和管在纤溶酶溶液(人血浆中的纤溶酶，Sigma Aldrich，纤溶酶贮液：500μg纤溶酶在500μL150μM Tris缓冲液(pH7.8)中，0.9%的20μL纤溶酶贮液的230μL盐水溶液)中培养48小时以将血小板与管分离并且以确定血栓净重。最终，测得了化合物在血液这血栓中的活性及其之间的比例(cpm/重量[mg])。
猴子2：
用相同的化合物在另一只猴子体内重复实验，使用不同血栓形成管：仅将该管的两段短的部分粗糙化，在两部分中间留有间隔。除此之外，包括体内凝块与血液比例的确定的实验设计如上对猴子1的实验中所描述的。
不同于第一只猴子的血栓，现在发现在PET图像上示出了两个单独的中间有间隔的强的信号(图6)。将血栓管从血管中去除后，可以发现在管的粗糙部分的两个单独的血栓(图7)，证明了该信号仅原子血栓而非单从管中产生。如已从猴子1的实验中得知的，这两个血栓也非常薄(图7)。
猴子3，剂量减少及静脉血栓
用相同的化合物在另一只猴子体内重复实验，但是将示踪剂剂量降低为每只动物15MBq：除了动脉导管之外，该动物还接受了也由PE50导管制成并且如上所述的中间有间隔的几个部分被粗糙化的静脉导管。将该导管插入左股静脉并推进到上部腔静脉。将两个导管留在血管中30分钟随后将化合物静脉注射。从注射前不久至注射60分钟后进行PET-成像。
如在其它猴子中一样，所有动脉血栓和静脉血栓在图像中示出了明亮的信号(图8)。如前，血液和其它组织中血栓周围的的大部分信号在几分钟内消失。
体外凝块与血液的比例:
从以上描述的猴子实验中的5个血栓确定体外凝块与血液的比例。成像后将如上已描述的血栓从血管中去除，将其称重并且与从动物体内取出的血液样品一同在伽玛计数器(自动伽玛计数器Wizard23，Perkin Elmer)中测量。将血栓在纤溶酶溶液(人血浆中的纤溶酶，Sigma Aldrich，纤溶酶贮液：500μg纤溶酶在500μL Tris缓冲液(150μM，pH7.8)中，0.9%的20μL纤溶酶贮液的230μL盐水溶液)中培养以及将血栓从导管中去除后，计算血栓净重并且计算血栓(凝块)和血液中的化合物浓度及其比例。体内凝块与血液比例令人惊讶地高(126+/-52，表6)并且显著地高于最接近现有技术(US2007/0189970A1)中描述的比例。
表6：体内凝块与血液的比例(食蟹猕猴):
表6示出了血栓(凝块)和血液中的化合物浓度以及从以上描述的猴子成像实验中的5个血栓确定的体内凝块与血液的比例。发现体内凝块与血液比例令人惊讶地高，并且显著高于最接近现有技术(US2007/0189970A1)中示出的比例。
总结：
实施例40中描述的化合物甚至在猴子体内最轻的静脉血栓和动脉血栓中示出了令人惊讶的高的累积。在任一所研究的猴子体内的任何周围组织或器官中几乎没有背景信号。在长时间内化合物几乎完全保留在血栓内(示出60分钟)。与本最接近现有技术(US2007/0189970A1)相比，文中描述的实验所给出的剂量几乎低50倍并且同时体内凝块与血液的比显著更高。

Claims (28)

1.式III的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐：
其中
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z，-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；
R10为(C1-C6)烷基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
2.如权利要求1所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R3为H、F、CF3、CN或NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z；-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z或-C≡C-Z；
X为CH或N；
Y为18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN或NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3。
3.如权利要求1或权利要求2所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R3为H；
R7为-O(CH2)n-Y；
X为N；
Y为18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN或NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3。
4.式III的化合物：
(3S)-3-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-{5-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-[5-(4-氰基-3-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸，
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[18F]氟乙氧基)乙氧基]乙氧基}苯基)-3-[({(3R)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}-羰基)氨基]丙酸。
5.制备式III的化合物的方法：起始使用式I的化合物，并且进行氟化反应以获得式II的化合物，并且将保护基团裂解；或者将式I的化合物与18F试剂或者18F结构单元反应并且将保护基团裂解以获得式III的化合物
其中
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；
R10为(C1-C6)烷基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢或(C1-C6)烷基；
R10为(C1-C6)烷基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基；
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；
R10为(C1-C6)烷基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
6.如权利要求5所述的制备式III的化合物的方法：起始使用式I的化合物，并且进行氟化反应以获得式II的化合物，并且将保护基团裂解；或者将式I的化合物与18F试剂或者18F结构单元反应并且将保护基团裂解以获得式III的化合物
其中
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢或(C1-C4)烷基；
R10为(C1-C4)烷基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢或(C1-C4)烷基；
R10为(C1-C4)烷基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基；
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢或(C1-C4)烷基；
R10为(C1-C4)烷基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
7.如权利要求5所述的制备式III的化合物的方法：起始使用式I的化合物，并且进行氟化反应以获得式II的化合物，并且将保护基团裂解；或者将式I的化合物与18F试剂或者18F结构单元反应并且将保护基团裂解以获得式III的化合物
其中
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为甲基、乙基或叔丁基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为甲基、乙基或叔丁基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基；
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为甲基、乙基或叔丁基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
8.如权利要求5所述的制备式III的化合物的方法：起始使用式I的化合物，并且进行氟化反应以获得式II的化合物，并且将保护基团裂解；或者将式I的化合物与18F试剂或者18F结构单元反应并且将保护基团裂解以获得式III的化合物
其中
R3选自H、F、CF3、CN、NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、CN、NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q、-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
W-选自CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、CN、NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、CN、NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3。
9.如权利要求5所述的制备式III的化合物的方法：起始使用式I的化合物，并且进行氟化反应以获得式II的化合物，并且将保护基团裂解；或者将式I的化合物与18F试剂或者18F结构单元反应并且将保护基团裂解以获得式III的化合物
其中
R3为H、F、CF3、CN或NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z；-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z或-C≡C-Z；
X为CH或N；
Y为18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN或NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R4为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q、-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X为CH或N；
LG为离去基团；
W-为CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R6为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R5意为CF3、CN或NO2；
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z或-C≡C-Z；
X为CH或N；
Y为18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、CN或NO2。
10.式I的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐：
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢或(C1-C6)烷基；；
R10为(C1-C6)烷基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基；
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
11.如权利要求10所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢或(C1-C4)烷基；
R10为(C1-C4)烷基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基，
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
12.如权利要求10所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
R9为氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为甲基、乙基或叔丁基；
R11选自苯基、(4-甲基)苯基、(4-甲氧基)苯基、2-呋喃基和2-噻吩基；
W-选自CF3(S(O)2O-、碘阴离子、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)、-I+R11(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素、-NO2、-N+(Me)3(W-)或-I+R11(W-)，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
13.如权利要求10所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3选自H、F、CF3、CN和NO2；
R4选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X选自CH或N；
LG为离去基团；
W-选自CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5选自H、CF3、CN和NO2；
R6选自OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3。
14.如权利要求10所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体及其混合物，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R4为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X为CH或N；
LG为离去基团；
W-为CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R6为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R5意为CF3、CN或NO2。
15.如权利要求10至权利要求14中任一项所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体及其混合物，
其中
R1为氢或选自叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧基羰基(FMOC)的胺基保护基团；
R2为氢或选自甲基、乙基、丙基、叔丁基、苄基和对甲氧基苄基的羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R4为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG、-(OCH2CH2)m-LG、Q、-OCH2-Q；-CH2-CH2-Q、-CH＝CH-Q和-C≡C-Q；
X为CH或N；
LG为选自甲磺酰氧基和(4-甲基苯基)磺酰氧基的离去基团；
W-为CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R6为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R5意为CF3、CN或NO2。
16.如权利要求10至权利要求14中任一项所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体及其混合物，
其中
R1为叔丁氧羰基(BOC)；
R2为甲基或叔丁基；
其中R1和R2中至少一个不为H；
R3为H；
R4为-O(CH2)n-LG；
X为N；
LG为甲磺酰氧基和(4-甲基苯基)磺酰氧基；
W-为CF3(S(O)2O-、溴阴离子和CF3C(O)O-；
Q为如下基团
其中*表示Q的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R6为OH、卤素、-N+(Me)3(W-)、-O(CH2)n-LG和-(OCH2CH2)m-LG；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R4意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R6意为卤素或-N+(Me)3(W-)，则R5意为CF3、CN或NO2。
17.式I的化合物：
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({3-甲氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-甲氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-氰基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-溴-4-氰基苄基)氧基]-吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]-吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[3-甲氧基-1-{5-[2-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-氯-3-硝基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-氟-4’-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)-联苯-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}-乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基}氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-甲基苯基)磺酰基]氧基}乙氧基)苯基]乙基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({[1-(4-羟基苯基)-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-1-[3-羟基苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(羟基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-氟-4’-羟基联苯-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(4-羟基苯基)-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-羟基吡啶-3-基)-3-氧代丙基]-氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(4-羟基苯基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-(3-{(3R)-3-[(3-叔丁氧基-1-{5-[(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-{5-[(3-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-(3-{(3R)-3-[(3-叔丁氧基-1-{5-[2-(4-羟基苯基)乙基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-(3-{(3R)-3-[(3-叔丁氧基-1-{5-[2-(3-羟基苯基)乙基]吡啶-3-基}-3-氧代丙基}-氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。
18.式II的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐：
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢或(C1-C6)烷基；
R10为(C1-C6)烷基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
19.如权利要求18所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢或(C1-C4)烷基；
R10为(C1-C4)烷基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
20.如权利要求18所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
R9为氢、甲基、乙基或叔丁基；
R10为甲基、乙基或叔丁基；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN和NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、COR9、COOR10、SOR10、SO2R10、CN或NO2。
21.如权利要求18所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体、其混合物以及任何药物可接受的盐，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3选自H、F、CF3、CN、NO2；
R7为选自Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z、-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z和-C≡C-Z；
X选自CH或N；
Y选自18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5选自H、CF3、CN、NO2；
R8为选自Y、-O(CH2)n-Y和-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3。
22.如权利要求18所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体及其混合物，
其中
R1为氢或胺基保护基团；
R2为氢或羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z；-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z或-C≡C-Z；
X为CH或N；
Y为18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、CN或NO2。
23.如权利要求18至权利要求22中任一项所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体及其混合物
其中
R1为氢或选自叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧基羰基(FMOC)的胺基保护基团；
R2为氢或选自甲基、乙基、丙基、叔丁基、苄基和对甲氧基苄基的羧基保护基团；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3为H、F、CF3、CN和NO2；
R7为Y、-O(CH2)n-Y、-(OCH2CH2)m-Y、Z、-OCH2-Z；-CH2-CH2-Z、-CH＝CH-Z或-C≡C-Z；
X为N；
Y为18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、CN或NO2。
24.如权利要求18至权利要求22中任一项所述的化合物，包括顺反异构体和非对映异构体及其混合物：
其中
R1为叔丁氧羰基(BOC)；
R2为甲基或叔丁基；
其中R1和R2中至少一个不为氢；
R3为H；
R7为-O(CH2)n-Y；
X为N；
Y为18F；
Z为如下基团
其中*表示Z的相连原子；
R5为H、CF3、CN和NO2；
R8为Y、-O(CH2)n-Y或-(OCH2CH2)m-Y；
n为1-3；
以及m为2-3；
条件为如果R7意为Y，则R3意为CF3、CN或NO2以及
条件为如果R8意为Y，则R5意为CF3、CN或NO2。
25.式II的化合物：
4-{3-[(3R)-{[(1S)-1-{3-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
(3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]-羰基}氨基)-3-[-3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]丙酸，
4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}-氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}丙酸，
4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-叔丁氧基-1-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({[(1S)-1-[5-(2-[18F]氟乙氧基)吡啶-3-基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
(3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-{5-[2-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}丙酸，
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]-羰基}氨基)-3-{5-[2-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}丙酸，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}吡啶-3-基)-3-甲氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
(3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]-羰基}氨基)-3-(5-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}吡啶-3-基)丙酸，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{4-[2-[18F]氟乙氧基]苯基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[3-氰基-4-[18F]氟苯基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-[5-(3-氰基-4-[18F]氟苯基)吡啶-3-基]丙酸，
4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-氰基-3-[18F]氟乙氧基]吡啶-3-基}-3-甲氧基-3-氧代丙基)氨基甲酰基]哌啶-1-基}-3-氧代丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}氨基)-3-{5-[4-氰基-3-[18F]氟苯基]吡啶-3-基}丙酸，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-(5-{[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[4-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)-3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-叔丁氧基-1-({[3-(2-[18F]氟乙氧基)苯基]乙炔基}吡啶-3-基)3-氧代丙基]氨基甲酰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
4-{3-[(3R)-3-({1-[3-(2-{2-[2-[18F]氟乙氧基]乙氧基}乙氧基)苯基]-3-甲氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯，
3-({[(3R)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基]丙酰基}哌啶-3-基]羰基}-氨基)-3-[3-(2-{2-[2-[18F]氟乙氧基]乙氧基}乙氧基)苯基]丙酸。
26.权利要求1-4中任一项所述的式III的化合物或其混合物在制备诊断试剂中的用途。
27.权利要求1-4中任一项所述的式III的化合物或其混合物在制备用于血栓成像的试剂中的用途。
28.试剂盒，其包含密封瓶，所述密封瓶含有预设量的如权利要求10至权利要求17中任一项权利要求所述的式I的化合物，其非对映异构体及上述的混合物，以及其无机碱或有机碱和无机酸或有机酸的适合的盐。
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