CN103901155A - 一种治疗胃病的中药组合物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗胃病的中药组合物的质量控制方法，特别涉及一种由组分按重量比为延胡索150-160份、甘草80-100份、赤芍70-80份、厚朴50-60份、蒲公英50-60份、大黄40-50份、香附30-40份、鸡内金15-20份组成的中药组合物的质量检测方法，包括鉴别和含量测定项目。本发明的中药组合物中甘草和蒲公英的鉴别方法，斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，可作为本中药组合物的质量控制方法；延胡索的含量测定方法，精密度高，测量结果准确，可有效的控制产品的质量，从而确保其临床疗效。

Description

一种治疗胃病的中药组合物的检测方法

技术领域

本发明涉及一种治疗胃病的中药组合物的检测方法，属于药物检测的技术领域。

背景技术

本发明涉及的治疗胃病的中药组合物是由下述重量配比的组分组成：延胡索150-160份、甘草80-100份、赤芍70-80份、厚朴50-60份、蒲公英50-60份、大黄40-50份、香附30-40份、鸡内金15-20份；按照制药领域常规方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服剂型。由于中药材因产地或收获季节的不同，其有效成分的含量存在较大差异，为更好的控制本药物的质量，稳定药物的疗效，需要对该中药组合物的质量指标和质量检测方法进行研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种由组分按重量比为延胡索150-160份、甘草80-100份、赤芍70-80份、厚朴50-60份、蒲公英50-60份、大黄40-50份、香附30-40份、鸡内金15-20份组成的中药组合物的检测方法，具体而言，是提供该中药组合物中延胡索的含量测定方法和蒲公英、甘草的鉴别方法。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

该中药组合物中含延胡索以其有效成分延胡索乙素为指标加以控制，含量测定方法包括如下步骤：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-磷酸盐缓冲溶液（65:35）为流动相；检测波长为280nm；理论塔板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000。

对照品溶液制备：取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。

供试品溶液制备：取本中药组合物2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液5ml，振摇使均匀湿润，放置30分钟，精密加入三氯甲烷50ml称重，振摇，回流提取4小时，放冷，称重，用三氯甲烷补充损失的重量，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣加三氯甲烷-无水乙醇（1:1）溶解，定容至5ml，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，以外标法计算，即得。

本中药组合物每克含延胡索以延胡索乙素（C₂₁H₂₅NO₄）计，不得少于15ug。

蒲公英的鉴别方法为：取本发明中药组合物2g，加入5%甲酸的甲醇溶液20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取蒲公英对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。

甘草的鉴别方法为：取本发明中药组合物2g，加乙醇30ml，加热回流2小时，冷却至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加水约20ml使溶解，以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，再以正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇约2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水(30:2:2:4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

本发明的有益效果在于：

（1）本发明的中药组合物中甘草和蒲公英的鉴别方法，斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，可作为本中药组合物的质量控制方法。

（2）本发明的中药组合物中延胡索的含量测定方法，精密度高，测量结果准确，可有效的控制产品的质量，从而确保其临床疗效。

附图说明

图1为本发明实施例2制备的对照品溶液液相色谱图；

图2为本发明实施例2制备的供试品溶液液相色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1：

本发明中药组合物制剂的制备方法为：

按处方比例称取上述8味药，将延胡索、赤芍、厚朴、大黄、鸡内金5味药，粉碎，过60目筛；将甘草和蒲公英两味药，加入8倍量（mL/g）的水煎煮2小时，滤过，药渣再加入6倍量（mL/g）的水，同上煎煮2小时，合并两次水煎煮液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35℃（50℃测）的稠膏；香附中加入8倍量（mL/g）的水，蒸馏提取挥发油5～6小时（以挥发油的提取量不再明显增加为止），分出挥发油，用β-环糊精包结，置45～50℃干燥，粉碎，置阴凉干燥处备用；将粉碎后的药粉、水提的浸膏与挥发油的包结物混合，按常规方法制成胶囊剂或片剂等剂型。

实施例2：

1.检测仪器与试剂

（1）检测仪器：

液相色谱仪，Waters e2695，色谱柱，C18柱，紫外检测器；

（2）试剂：

甲醇：色谱纯；

其余化学试剂均为分析纯；

标准物质：延胡索乙素对照品、蒲公英对照药材和甘草对照药材均购自中国药品生物制品检定研究院。

2.检测方法

（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-磷酸盐缓冲溶液（65:35）为流动相，磷酸盐缓冲溶液的制备方法为取磷酸氢二钾2.54g，磷酸二氢钾0.96g，加水至100ml；检测波长为280nm；理论塔板数按延胡索乙素峰计算为3070。

（2）对照品溶液制备：取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100ug的溶液，即得；

（3）线性关系考察：分别精密吸取上述对照品溶液1、2、3、4、5ml，置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下进行测定，分别进样10ul，测定峰面积，以峰面积与进样量进行线性回归，得回归方程为：Y=22354X-9623.9，相关系数r=0.9997，即延胡索乙素在10ug-50ug的范围内线性关系良好。

表1进样量与峰面积

延胡索乙素（ug）	10	20	30	40	50
						峰面积	12423	35152	57263	81169	101185

（4）精密度实验：精密吸取对照品溶液，重复进样6次，每次10ul，延胡索乙素峰面积的变异系数RSD=0.27%。

表2精密度实验结果

次数	1	2	3	4	5	6	RSD
								峰面积	314432	313258	313995	314182	312208	314245	0.27%

（5）供试品溶液的制备：取本中药组合物2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液5ml，振摇使均匀湿润，放置30分钟，精密加入三氯甲烷50ml称重，振摇，回流提取4小时，放冷，称重，用三氯甲烷补充损失的重量，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣加三氯甲烷-无水乙醇（1:1）溶解，定容至5ml，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

（6）稳定性试验：取同批供试品溶液，按上述色谱条件，分别在1、2、4、8、12、24小时，测定峰面积积分值，结果表明，样品在24小时内基本稳定。

表3稳定性试验结果

时间	1	2	4	8	12	24	RSD
								峰面积	46164	47073	47729	46852	47245	46701	1.12%

(7)重复性试验:取同一批的样品,取样5份,制成供试品溶液，按上述色谱条件，分别测

定峰面积积分值，按照外标法，计算样品溶液中延胡索乙素的含量，其计算公式为：

含量（%）=（f×C_标×A_样）/（A_标×W_样）

其中，C_标为标准品重量，A_样为样品的峰面积，A_标为标准品的峰面积，W_样为样品质量，f为稀释倍数。

（8）加样回收率试验：取已知延胡索乙素含量的本发明的中药组合物6份，每份约1.0g，精密称定，分别置于100ml具塞锥形瓶中，分别精密加入浓度为20ug/ml的对照品溶液1ml，按照供试品溶液的制备方法进行样品溶液制备，按上述色谱条件，分别测定峰面积积分值，按照外标法，计算样品溶液中延胡索乙素的含量，并分别计算回收率，即得。

表4加样回收率试验结果

实施例3：

1.蒲公英的鉴别：

（1）供试品溶液的制备：取本发明中药组合物2g，加入5%甲酸的甲醇溶液20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；

（2）对照药材溶液的制备：另取蒲公英对照药材2g，同法制成对照药材溶液；

（3）阴性对照溶液的制备：取缺少蒲公英的的本发明中药组合物2g，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液；

（4）试验方法：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液3μl、阴性对照溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果表明：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，故将其作为本发明中药组合物中蒲公英的鉴别方法。

2.甘草的鉴别：

（1）供试品溶液的制备：取本发明中药组合物2g，加乙醇30ml，加热回流2小时，冷却至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加水约20ml使溶解，以水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，再以正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇约2ml使溶解，作为供试品溶液；

（2）对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；

（3）阴性对照溶液的制备：取缺少甘草的的本发明中药组合物2g，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液；

（4）试验方法：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水(30:2:2:4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。

结果表明：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，故将其作为本发明中药组合物中甘草的鉴别方法。

上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。

Claims (1)

1.一种治疗胃病的中药组合物的检测方法,所述中药组合物由按重量份为延胡索150-160份、甘草80-100份、赤芍70-80份、厚朴50-60份、蒲公英50-60份、大黄40-50份、香附30-40份、鸡内金15-20份的组分组成，其特征在于，所述检测方法包括鉴别和含量测定项目，其中，鉴别是对组合物中甘草和蒲公英的薄层色谱鉴别，具体为：

（1）蒲公英的鉴别方法为：取本发明中药组合物2g，加入5%甲酸的甲醇溶液20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取蒲公英对照药材2g，同法制成对照药材溶液；吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:4:1的苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下在365nm波长处检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点；

（2）甘草的鉴别方法为：取本发明中药组合物2g，加乙醇30ml，加热回流2小时，冷却至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加水约20ml使溶解，以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，再以正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加无水乙醇约2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为30:2:2:4的乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

含量测定是采用高效液相色谱法测定组合物中延胡索所含延胡索乙素的量，具体为：

（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为65:35的甲醇-磷酸盐缓冲溶液为流动相，检测波长为280nm，理论塔板数按延胡索乙素峰计算不低于3000；

（2）对照品溶液制备：取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得；

（3）供试品溶液制备：取本中药组合物2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液5ml，振摇使均匀湿润，放置30分钟，精密加入三氯甲烷50ml称重，振摇，回流提取4小时，放冷，称重，用三氯甲烷补充损失的重量，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液25ml，蒸干，残渣加体积比为1:1的三氯甲烷-无水乙醇溶解，定容至5ml，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，以外标法计算，即得。

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