CN103864942B - 中分子量羟乙基淀粉及其提纯方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种中分子量羟乙基淀粉的提纯方法，该方法包括：a）将通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液与C₁-C₃一元醇进行混合，使得中分子量羟乙基淀粉从水溶液中析出；以及b）将步骤a）所析出的中分子量羟乙基淀粉分离，以得到纯化的中分子量羟乙基淀粉。本发明还提供了一种由该方法得到的中分子量羟乙基淀粉。本发明的方法具有工业化价值，并能够提高产品内在质量。通过本发明方法进一步降低了成品细菌内毒素和乙二醇水平，并且经济节能环保、降低了能耗，适合工业化大生产的实际需要。

Description

中分子量羟乙基淀粉及其提纯方法

技术领域

本发明属于制药领域，具体而言，涉及一种中分子量羟乙基淀粉的提纯方法及由该方法得到的中分子量羟乙基淀粉。

背景技术

中分子量羟乙基淀粉是一种新型血容量扩充剂，其分子量分布为15000-400000道尔顿，重均分子量为110000-150000道尔顿，取代度范围0.36-0.45，取代方式9:1。以上三者的优化组合使其与706、明胶、低分子右旋糖苷等老一代产品相比，中分子羟乙基淀粉以其稳定的扩容效果、更低的副作用、更好的临床安全性得到广大临床麻醉、外科及ICU医生的青睐，显示了良好的应用前景。

例如，一种常规的中分子量羟乙基淀粉（Hydroxyethylstarch130/0.4，其中，130指重均分子量在130kDa左右，0.4指取代度在0.4左右）由不同分子量的羟乙基淀粉混合组成，这些分子量不同的羟乙基淀粉共同特征在于都具有下式I所示的官能团，而差别在于不同分子量的羟乙基淀粉的官能团的个数不同。

式I

在现有技术中，生产中分子量的羟乙基淀粉一般以玉米支链淀粉为起始物料；经过水解、醚化、吸附、超滤和喷雾干燥等步骤。例如，现有技术中的中分子量羟乙基淀粉的常规制备方法为：支链淀粉加入一定量纯化水、盐酸或者酶，在一定温度下进行水解，控制水解程度，当水解达到适当分子量时停止水解，用氢氧化钠作催化剂，使淀粉与环氧乙烷进行羟乙基化反应以进行醚化，之后用（例如）活性炭除去杂质及脱色，通过超滤膜将小分子量的羟乙基淀粉及盐等杂质除去，最后通过喷雾干燥制得中分子量的羟乙基淀粉成品。

但是，上述生产工艺存在以下较大缺陷：首先，超滤完成后的料液直接进行喷干（喷雾干燥），这个过程只是一个物理过程，不能进一步提高料液质量，减少料液中的细菌内毒素和乙二醇这两个对患者有较大影响的指标水平；其次，更为重要的是直接喷干法所需的设备设施和运行、维护、使用成本均较高，对于中小企业来讲，这种方法将导致得不偿失的后果。这是因为：首先，喷干所涉及的喷干系统所需的塔体、风系统、加热系统等设备设施一次性投入大，例如国产设备至少需要100-200万元人民币，如果采用进口设备至少需要100-200万欧元；其次，喷干的原理是采用料液与高温气体的瞬间接触发生的热量交换而达到干燥的效果，所以高温气体需通过加热系统加热到至少200℃以上，对于主要靠电加热的加热系统来讲，这样的温度其耗电量相当巨大，不利于节约能源和降低生产成本；再次，中分子量羟乙基淀粉属于淀粉类物质，所以每次喷干完成后，要立即对塔内壁进行清洗，但塔内部清洗劳动强度和工作量都很大，对于生产安全来讲，这也存在一定隐患。

而做为注射剂用原料，中分子量羟乙基淀粉的细菌内毒素指标是一个非常重要的质量指标，细菌内毒素指标不但要符合质量标准要求，并且出于用药安全的考虑，目前在中分子量羟乙基淀粉的细菌内毒素指标方面，其上限为50EU/g左右，而将其尽量地降低的趋势也越来越明显。

内毒素（Endotoxin，又称热原质pyrogen）和外毒素（Exotoxin）是细菌产生的两大类毒素物质。内毒素是革兰氏阴性菌在生长、分裂时释放或死亡时裂解出来的细胞壁外膜上的特有结构。内毒素是一种毒性极强的致炎和热原物质，是内毒素血症及感染性休克的主要致病介质，会诱发全身炎症反应综合症(sIRs)、多器官功能衰竭综合症(MODS)、脓毒症等导致各年龄组重要死亡的疾病；当机体内毒素浓度团值>0.005ng/ml时，可诱生内源性热原质如肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-1)、一氧化氮(NO)和β₂干扰素(TFN-β₂)等细胞因子的释放，从而刺激体温调节中枢导致机体发热，还可引起微血管栓塞、血压骤降、糖及脂肪代谢紊乱、骨髓坏死或导致血管内芽肿甚至血凝，造成致病过程中的“瀑布效应”。医院临床在使用药品注射剂时若含细菌内毒素>lEU/ml，则病人会产生寒战、发热、呕吐、肤色灰白、休克甚至死亡等热原反应，因此国家药典对注射品中细菌内毒素指标有着严格规定。

在现有的中分子量羟乙基淀粉的制备方法中，细菌内毒素的去除主要是通过在醚化步骤之后，用活性炭吸附和超滤法除去细菌内毒素。其中，活性炭吸附虽然在吸附细菌内毒素、降低药液中细菌内毒素含量上有较好效果，但吸附最终会达到一定的饱和吸附量（≤75%），并且如果为了满足吸附更多细菌内毒素的目的而采取多加入活性炭的做法还会造成主药成份的损失，影响收率，所以要使药液中的细菌内毒素降低到较低水平，该方法有其局限性。而超滤法虽然能够去除大量的细菌内毒素，但是对于中分子量羟乙基淀粉而言，由于该产品的分子量分布（15000-400000）和细菌内毒素分子量分布（几千到几十万）有较大部分重合，所以该方法对于除去药液中的细菌内毒素也显得极不合适。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种中分子量羟乙基淀粉的提纯方法及由该方法得到的中分子量羟乙基淀粉。

具体而言，本发明包括：

（1）一种中分子量羟乙基淀粉的提纯方法，该方法包括：

a）将通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液与C₁-C₃一元醇进行混合，使得所述中分子量羟乙基淀粉从所述的水溶液中析出；以及

b）将步骤a）所析出的中分子量羟乙基淀粉分离，以得到纯化的中分子量羟乙基淀粉。

（2）根据（1）所述的提纯方法，其中，所述的通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液的浓度为40-60重量%。

（3）根据（1）所述的提纯方法，其中，在步骤a）中，所述的C₁-C₃一元醇为甲醇、乙醇、丙醇中的一种或几种，优选为乙醇。

（4）根据（1）-（3）中任意一项所述的提纯方法，其中，在步骤a）中，所述的C₁-C₃一元醇与所述的中分子量羟乙基淀粉的水溶液的重量比为(1.2-2):1，优选为1.5:1。

（5）根据（1）-（3）中任意一项所述的提纯方法，其中，在步骤a）中，将所述的中分子量羟乙基淀粉的水溶液与所述的C₁-C₃一元醇在20-40℃的温度下搅拌，以进行所述的混合；其中搅拌速度优选为200-500r/分钟。

（6）根据（1）-（3）中任意一项所述的提纯方法，其中，步骤b）还包括：将分离得到的中分子量羟乙基淀粉进行干燥，从而得到中分子量羟乙基淀粉成品。

（7）根据（6）所述的提纯方法，其中，所述干燥包括减压干燥，干燥温度优选为55-65℃。

（8）根据（1）-（3）中任意一项所述的提纯方法，其中所述分离包括：离心分离并收集固相。

（9）一种根据（1）-（8）中任意一项所述的提纯方法得到的纯化的中分子量羟乙基淀粉，其中，所述的中分子量羟乙基淀粉中的细菌内毒素的含量小于1.5EU/g，和/或乙二醇的含量小于0.030重量%。

（10）根据（9）所述的纯化的中分子量羟乙基淀粉，其中，所述的中分子量羟乙基淀粉中的乙二醇的含量小于0.025重量%。

本发明提供的方法具有如下优点和积极效果：

1.由于中分子量羟乙基淀粉是注射用原料药，故成品细菌内毒素和乙二醇指标不应该局限于满足药典规定要求，为了用药安全，两项指标应越低越好，而本发明方法就能达到进一步降低成品中细菌内毒素和乙二醇含量的目的，使成品中所含细菌内毒素和乙二醇水平较未使用该法前进一步降低，提高了产品内在质量。

2.本发明的方法易于操作，设备设施投入不大，能耗较低，提高了生产效率，且无污染，无职业危害。

3.本发明方法中所用的醇可以回收，达到循环利用的效果。

4.本发明的方法所得的产品收率稳定，并能达到已知的喷雾干燥的水平；并且本发明的方法所得的产品质量稳定，方法便捷易于实施，适合工业化大生产。

因此，综上所述，本发明提供的提纯中分子量羟乙基淀粉的方法是一种具有工业化价值和提高产品内在质量的新方法，既能提高产品质量，进一步降低成品细菌内毒素和乙二醇水平，又经济节能环保、降低了能耗，适合工业化大生产的实际需要。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

在本文中，“中分子量羟乙基淀粉”是指重均分子量为110000-150000道尔顿，取代度为0.36-0.45的羟乙基淀粉。

在本文中，“细菌内毒素”包括这样一种异质多聚体，其本质是脂多糖（lipopolysaeeharide，LpS），包括类脂A(lipidA)、核心多糖、O-特异性抗原多糖(O-antigen)三个组成部分。其中类脂A由磷酸葡糖胺双糖主链和与之共价结合的10-18碳的长链脂肪酸组成，即同时含有疏水性的中心及亲水性的边沿，是一种双性分子，又是酸碱两性分子。不同种属的细菌，均具有基本一致的类脂A骨架，是内毒素中最为保守的部分。并且类脂A具有完整内毒素的特性，是LPS的活性中心，对人体健康的危害也最大。核心多糖由连接O-特异性链的外核部分和连接类脂A的内核部分组成。外核部分主要由己糖和庚糖组成，具有较高的糖异源性，某些革兰氏阴性菌核心组分的不同多发生在该结构部分中的己糖分子上。而内核部分则相对稳定，主要由KDO（2-酮基-3-脱氧-D.甘露醇型-辛酮糖酸）和庚糖构成。O-特异性链是由4~40个重复齐聚糖单元组成，每个齐聚糖单元由3-8个单糖分子构成。O-特异性链具有菌体特异性，有些内毒素不存在O-特异性链，这并不影响和损害它的生物活性。O-特异性链的结构是内毒素分子中最易发生变化的部分，如：它的单糖分子可被乙酞化糖基化，也可变换重复单元的数目。不同菌种的O-特异链不同，因此它的抗原具有菌种的特异性。细胞外膜上内毒素种类的活跃改变起到自我保护的作用，可以适应周围环境的改变。在通常的pH条件下，内毒素分子中的糖残基被部分磷酸化(pK₁=l.3，pK₂=8.2，pI=3.1)，磷酸根基团和KDO携带大量负电荷，因此内毒素分子一般在溶液中显示负电性。

在本文中，“支链淀粉”（amylopectin）又称胶淀粉，分子相对较大，一般由几千个葡萄糖残基组成，支链淀粉中葡萄糖分子之间除以α-1,4-糖苷键相连外，还有以α-1,6-糖苷键相连的，所以带有分支，约20个葡萄糖单位就有一个分支。可用于本发明的支链淀粉包括玉米支链淀粉，优选糯玉米支链淀粉。

在本文中，“正离子水”也可称为消炎离子水。水在电离时会产生水合离子，这种水称为离子水，分为正离子水和负离子水，本发明所述的正离子水即是指上述离子水中的正离子水。正离子水可以这样制备得到：通过正负电极，在电场作用下将水分子团打散、变小、重新排列，使其中一部分水的氧化还原电位（ORP）呈正电位，另一部分水ORP呈负电位，最后通过膜分离技术得到正离子水（酸性电解水）和负离子水（碱性电解水）。

在本文中，“中分子量羟乙基淀粉制备工艺”是指以支链淀粉（如玉米支链淀粉）为起始物料，经过水解、醚化、吸附、超滤和干燥等步骤得到中分子量羟乙基淀粉的过程：

其中，水解支链淀粉一般采用酸水解或酶水解，本发明优选酸水解；通常，酸为盐酸，水解温度为92-95℃，采用黏度法检测水解进程；其中，醚化一般采用环氧乙烷或氯乙醇作为醚化剂，本发明优选环氧乙烷；醚化一般在碱性条件下进行（pH为12-14），醚化温度为20-24℃，醚化时间为4-6h；

其中，吸附一般采用活性炭为吸附剂，活性炭因本身颗粒大小不同，其吸附效果也不同，本发明优选目数为250-320目的针用型活性炭为吸附剂进行吸附；吸附一般在酸性条件下进行（pH为3-6）；

其中，超滤是用超滤膜为过滤介质精制料液，超滤膜的选择由产品分子量决定，本发明出于提高产品质量和稳定收率，优选了标的为10万和30万截留分子量的超滤膜为过滤介质进行超滤；

其中，干燥一般采用减压干燥，常压干燥，冷冻干燥，喷雾干燥等；本发明优选减压干燥，其干燥条件优选为温度55-65℃，压力≤-0.080MPa。

针对现有技术中存在的上述问题，本发明人进行了大量的实验和生产过程监控，结果发现：通过中分子量羟乙基淀粉不溶于C₁-C₃一元醇，C₁-C₃一元醇和水任意互溶，以及细菌内毒素和乙二醇都与水相溶的原理，采用醇析的方法把超滤料液中残留的细菌内毒素和乙二醇带进C₁-C₃一元醇和水组成的混合体系中，能够进一步降低料液中细菌内毒素和乙二醇的水平，同时可避免使用喷雾干燥的工艺过程，大大减少了设备设施的一次性投入，节约了人力物力财力。

本发明人在研究中注意到，与其它多糖类物质不同，中分子量羟乙基淀粉是以支链淀粉为原料而制备而得，再加上在其葡萄糖单元上取代上了羟乙基，因此中分子量羟乙基淀粉不仅在分子量数量级上与其它多糖类物质不同，而且在分子量分布上也不同，其中中分子量羟乙基淀粉的分子量分布是较宽的（15000-400000道尔顿），从而中分子量羟乙基淀粉在醇析特性上与其它多糖类物质有较大区别。因此本发明人对本发明方法中的醇析工艺进一步进行了大量试验筛选。

本发明人进一步发现，如果在醇析前对超滤后的料液浓缩至一定浓度，再进行醇析，其醇析所用的醇的量和醇析效果均能够进一步优化；此外，醇析按照特定的量加完醇后，便可分离（如离心分离），并进行下步干燥（如真空减压干燥），能够简化工艺。

具体而言，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种中分子量羟乙基淀粉的提纯方法，该方法包括：

a）将通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液与C₁-C₃一元醇进行混合，使得所述中分子量羟乙基淀粉从所述的水溶液中析出；以及

b）将步骤a）所析出的中分子量羟乙基淀粉分离，以得到纯化的中分子量羟乙基淀粉。

优选的是，所述的通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液的浓度为40-60重量%。

其中，通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液可为中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤中得到的超滤液。其中，可将所述的超滤液进行浓缩，以使得中分子量羟乙基淀粉在所述的超滤液中的浓度为40-60重量%。优选的是，在步骤a）中，所述的C₁-C₃一元醇为甲醇、乙醇、丙醇中的一种或几种，优选为乙醇。

优选的是，在步骤a）中，所述的C₁-C₃一元醇与所述的中分子量羟乙基淀粉的水溶液的重量比为(1.2-2):1，优选为1.5:1。如果该重量比过低可能会导致中分子量羟乙基淀粉不能完全析出，影响收率；如果该重量比过高会导致醇的浪费，增加生产成本。

优选的是，在步骤a）中，将所述的含有中分子量羟乙基淀粉的水溶液与所述的C₁-C₃一元醇在20-40℃的温度下搅拌，以进行所述的混合；其中搅拌速度优选为200-500r/分钟。中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤中得到的超滤液在经过浓缩后，其浓度增大，会有较高粘度，为了提高析出固体的质量，搅拌的转速最好在200~500r/min范围内。如果搅拌速度过低可能会导致中分子量羟乙基淀粉在析出时包裹成团，不利于除去杂质；如果搅拌速度过高会导致能耗增加，增加生产成本。

优选的是，步骤b）还包括：将分离得到的中分子量羟乙基淀粉进行干燥，从而得到中分子量羟乙基淀粉成品。所述干燥包括（但不限于）：减压干燥、常压干燥（干燥温度范围一般是100～105℃）、冷冻干燥（干燥温度范围一般是-80～-70℃）。更优选的是减压干燥，干燥温度为55-65℃，压力优选为≤-0.080MPa。优选的是，所述干燥不为喷雾干燥。

优选的是，步骤b）中的所述分离包括：离心分离并收集固相。离心分离可采用本领域常用的离心机进行分离，离心速度可为2000-3000r/min。

本发明还提供了一种上述的方法提纯得到的中分子量羟乙基淀粉，其中，所述的中分子量羟乙基淀粉中的细菌内毒素的含量小于1.5EU/g，和/或乙二醇的含量小于0.030重量%。

优选的是，所述的中分子量羟乙基淀粉中的乙二醇的含量小于0.025重量%。

本发明的一种具体实施方案可以是：

本发明的中分子量羟乙基淀粉的提纯方法可包含在以下中分子量羟乙基淀粉的制备方法中，其中，所述的中分子量羟乙基淀粉的制备方法包括以下步骤：

1）支链淀粉预处理和水解：用正离子水洗脱的方法预处理支链淀粉；然后以纯化水为溶剂，在加热搅拌的情况下溶解淀粉，然后再加入无机酸进行水解反应；

2）羟乙基醚化：将步骤1）所得产物中加入碱性催化剂和醚化剂，在真空保护下，进行醚化反应；

3）中和脱色：将步骤2）所得产物中加无机酸中和，再加入活性炭，进行脱色澄清；

4）超滤：将步骤3）所得产物过超滤膜进行超滤；

5）浓缩：将步骤4）所得产物进行浓缩；

6）醇析：将步骤5）所得产物中加入无水乙醇，同时搅拌，得到中分子量羟乙基淀粉混悬液；

7）分离：将步骤6）所得产物分离，得到中分子量羟乙基淀粉潮晶；

8）干燥：将步骤7）所得产物干燥，得中分子量羟乙基淀粉成品。

优选的是：上述步骤1）用正离子水洗脱支链淀粉的方法所用的水为正离子水，其在混合体系中的重量比为正离子水:支链淀粉为(2-8):1，优选为5:1；预处理后的支链淀粉用离心机分离后不用干燥直接转移至水解设备中进行水解；水为溶剂时，水为纯化水，其在混合体系中重量比为70-90%；加热温度为92-95℃；加入的无机酸为浓盐酸（如分析纯浓盐酸），浓度为36-38重量%，其在混合体系中的重量比为0.1%-1%；在有搅拌的情况进行。由于支链淀粉中含有大量的细菌内毒素，为了在源头把这些内毒素去除掉，本发明人通过研究发现，细菌内毒素带有负电荷，正离子水带有负电荷，正负相吸能够除去支链淀粉中的细菌内毒素，以提高最终成品质量。

优选的是：上述步骤2）羟乙基醚化加入的碱性催化剂为浓度为10%-20%（重量%）的氢氧化钠溶液，其在混合体系中重量比为20%-30%；醚化剂为环氧乙烷，其在混合体系中重量比为4%-5%；醚化的时间为4-6h，反应温度为20-24℃；醚化时进行真空保护，并在持续搅拌的条件下进行。

优选的是：上述步骤3）中和脱色加入的无机酸为浓盐酸（如分析纯浓盐酸），浓度为36%-38%，其在混合体系中的重量比为4%-8%；最终料液的pH为3.00-6.00；加入活性炭为目数为250-320目的针用型活性炭，其在混合体系中的重量比为0.8%-1.2%；脱色装置采用不锈钢暗流式板框过滤装置，滤液澄清达到2010年药典附录IXB《澄清度检查法》的0.5级号以下；在有搅拌的情况进行。

优选的是：上述步骤4）超滤的膜的选择为采用30万截留相对分子质量（KD）的滤膜除去剩余的细菌内毒素，然后再采用10万截留相对分子质量（KD）的超滤膜对最终分子量进行筛选，完成料液精制。

优选的是：上述步骤5）浓缩后的料液浓度在40%-60%（重量%）；在真空保护下减压浓缩；优选地，减压浓缩的条件为：压力≤0.080MPa，温度为75-85℃。

优选的是：上述步骤6）醇析所用的醇为乙醇（如无水乙醇），其与浓缩后的料液的重量比为1.2:1~2.0:1；醇析温度为常温，并持续保持搅拌。

优选的是：上述步骤7）分离的装置为离心机甩干分离；滤液可收集至乙醇回收釜内，蒸馏回收。

优选的是：上述步骤8）干燥采用真空减压干燥，温度为55-65℃。

此外，本发明人通过研究发现：只要待预处理过程中的离心机内没有滤液流出，即可停止离心，转移出滤饼至水解罐内进行下部水解反应和后续工艺过程，这样生产出来的中分子量羟乙基淀粉质量稳定，并且细菌内毒素含量相当低，达到业内领先水平。

为了更好的理解本发明，以下通过例子进一步解释或说明本发明内容，但这些例子不应被理解为对本发明保护范围的限制。

在以下例子中，支链淀粉为玉米支链淀粉，可得自河南成果化工有限公司；767针用活性炭可得自上海针用活性炭厂；环氧乙烷可得自四川成都化工股份有限公司；正离子水可通过将自来水经砂芯过滤和活性炭过滤后通过电解离子水机（可得自玉环昶坤机械设备有限公司，型号为618-B）制备得到，但不限于此，还可以使用其它方法制备得到的正离子水或商购的正离子水；气相色谱仪为得自安捷伦科技有限公司的气相色谱仪（GC-2010）；N,N-二甲基甲酰胺可得自MerckKGaA公司。

实施例1

（1）支链淀粉预处理

在调配桶内加入正离子水500L和支链淀粉100kg，开启搅拌和保温使两者混合均匀，然后离心分离，滤饼为处理后支链淀粉。

（2）水解

在水解罐中加入纯化水500L和盐酸溶液（36.5重量%）5L，开启搅拌，再加入步骤（1）得到的预处理后支链淀粉，搅拌均匀后，开启蒸汽加热保温，温度为92-95℃，用黏度法控制水解进程，当水解达到工艺规定要求，停止水解。

（3）醚化

先将固体氢氧化钠16Kg溶解于200L纯化水中配成溶液，将步骤（2）得到的酸水解物料搅拌冷却至25℃，将NaOH溶液均匀加入酸水解物料中，密闭醚化罐，抽真空，维持罐内温度20-24℃，通入环氧乙烷40Kg，反应4小时，醚化结束，并在室温下放置8小时。

（4）中和脱色

以10kg767针用活性炭为吸附剂，经板框压滤，将醚化料液中杂质和少部分细菌内毒素除去。

（5）超滤

采用30万截留相对分子质量（KD）的滤膜将剩余细菌内毒素除去后，再采用10万截留相对分子质量（KD）的超滤膜对最终分子量进行筛选，完成料液精制。

（6）减压浓缩

将精制的超滤料液进行减压浓缩，减压至压力为≤0.080MPa，温度为78℃，减压浓缩直至浓度达到45重量%。

（7）醇析

在浓缩后的料液中一边搅拌一边加入无水乙醇（在30℃的温度下搅拌，搅拌速度为400r/分钟），无水乙醇和浓缩后的料液的重量比为1.5:1，使中分子量羟乙基淀粉在混合体系中析出。

（8）离心分离

用离心机对已析出的中分子量羟乙基淀粉进行分离，离心转速为2000-3000r/min。

（9）减压干燥

在减压至压力为≤0.080MPa、温度为55℃的条件下，对分离出的中分子量羟乙基淀粉的进行干燥，得中分子量羟乙基淀粉成品。

实施例2

与实施例1相似，不同之处在于支链淀粉经水解后其水解液的分子量分布不同，并且精制的超滤料液进行减压浓缩至浓度为48重量%，且醇析时所用无水乙醇与浓缩后料液的重量比为2:1。

实施例3

与实施例1相似，不同之处在于支链淀粉经水解后其水解液的分子量分布不同，并且精制的超滤料液进行减压浓缩至浓度为50重量%，且醇析时所用无水乙醇与浓缩后料液的重量比为1.2:1。

比较例1-6

与实施例1相似，不同之处在于支链淀粉经水解后其水解液的分子量分布不同，并且超滤完成后采取直接喷雾干燥的方法得到成品。其中所用喷雾干燥系统可得自重庆方强干燥设备有限公司，型号为LPG-100。

说明：无论是实施例还是比较例，由于水解程度是用黏度法控制水解进程以决定成品分子量，并且由于支链淀粉本身为天然产物，批与批之间存在区别，所以，即使控制参数无区别，也会造成成品分子量不同。

试验例1

1.中分子量羟乙基淀粉成品的细菌内毒素检测是通过以下方法检测的：中国药典（2010年）附录XIE细菌内毒素检查法之动态浊度法。

2中分子量羟乙基淀粉成品的乙二醇检测方法

2.1仪器

气相色谱仪：带FID检测器

分析天平：感量为0.01mg

容量瓶：100ml50mlA级

注射器：50μl10μl

2.2色谱条件

色谱柱：DB-WAX毛细管柱规格：30m×0.32mm×0.25μm

检测器：FID

柱温：60℃以10℃/分钟的速度升温至150℃，在150℃保持1分钟。

检测器温度：250℃进样口温度：220℃

进样量：1μl载气：氮气

载气流速：2.2ml/分钟分流比：5：1

分析时间：10分钟

2.3色谱柱的平衡

色谱柱应在200℃下平衡1小时，然后将柱温设置为60℃直至出现稳定的基线（此过程约需3分钟），每次进样完毕后，均需在60℃下平衡色谱柱至稳定的基线后方可进样。所有样品进样完成后，应将柱温升至200℃，保持1小时后方可降温关机。

2.4试剂和溶液

乙二醇AR级

N,N-二甲基甲酰胺AR级

空白液：水

标准溶液：在温度为4℃以下，精密称取环氧乙烷0.015-0.030g，置于50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成储备液。分别准确量取乙二醇3μl，N,N-二甲基甲酰胺(作为内标物)5μl，准确称量后，置于同一100ml容量瓶中，加水振摇使其溶解，再精密加入1ml环氧乙烷储备液，加水稀释至刻度，摇匀。

供试液：准确称取约1g样品于100ml容量瓶中，加入己准确称量的5μlN,N-二甲基甲酰胺（作为内标物），用水稀释至刻度，混匀。

2.5系统适应性试验

进空白样确认无干扰峰。取标准溶液连续进样5次，计算5次进样N,N-二甲基甲酰胺与乙二醇峰面积之比的RSD，应不超过5.0%；

2.6测定方法

精密量取供试液1ul，注入气相色谱仪，记录色谱图，平行进样两次。按公式计算供试品中残留乙二醇的含量。

2.7计算公式

A、校正因子f

$f=\frac{\mathrm{As}}{A_R}\×\frac{C_R}{C_S}$

其中：As/A_R——标准液5次进样N,N-二甲基甲酰胺峰与乙二醇峰面积之比的平均值；

C_R——乙二醇的浓度，g/100ml；

Cs——N,N-二甲基甲酰胺的浓度，g/100ml；

f——乙二醇峰的校正因子。

B、含量

其中：Ax——供试液中乙二醇的峰面积；

As——供试液中N,N-二甲基甲酰胺峰面积；

Cs——供试液中N,N-二甲基甲酰胺的浓度，g/100ml；

Cx——样品浓度，g/100ml；

f——乙二醇峰的校正因子。

C、相对标准偏差RSD

$\mathrm{RSD}=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{(X_i-\stackrel{\‾}{X})}^2}{n-1}}\×\frac{1}{\stackrel{\‾}{X}}\×100\%$

X_i——单次进样的峰面积；

RSD——相对标准偏差；

——5次平行进样的平均值。

3.收率的计算方法为：

收率＝成品重量÷支链淀粉重量×100%

4.结果

表1实施例1-3和比较例1-6的结果数据

上述实验证明，采用本发明制备中分子量羟乙基淀粉的方法不但能够提高产品内在质量，且收率无明显变化。并且由本发明的实施例可以看出，在醇析过程中，相对于料液的重量，醇优选是过量的；出于成本和质量的综合考虑，料液与醇的重量比为1.5:1是较好的。

Claims (10)

1.一种中分子量羟乙基淀粉的提纯方法，该方法包括：

a)将通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液与C₁-C₃一元醇进行混合，使得所述中分子量羟乙基淀粉从所述的水溶液中析出；以及

b)将步骤a)所析出的中分子量羟乙基淀粉分离，以得到纯化的中分子量羟乙基淀粉，并将分离得到的中分子量羟乙基淀粉进行干燥，从而得到中分子量羟乙基淀粉成品，其中所述干燥为减压干燥，干燥温度为55-65℃。

2.根据权利要求1所述的提纯方法，其中，所述的通过中分子量羟乙基淀粉制备工艺的超滤步骤得到的中分子量羟乙基淀粉的水溶液的浓度为40-60重量％。

3.根据权利要求1所述的提纯方法，其中，在步骤a)中，所述的C₁-C₃一元醇为甲醇、乙醇、丙醇中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的提纯方法，其中，在步骤a)中，所述的C₁-C₃一元醇为乙醇。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的提纯方法，其中，在步骤a)中，所述的C₁-C₃一元醇与所述的中分子量羟乙基淀粉的水溶液的重量比为(1.2-2):1。

6.根据权利要求1-4中任意一项所述的提纯方法，其中，在步骤a)中，所述的C₁-C₃一元醇与所述的中分子量羟乙基淀粉的水溶液的重量比为1.5:1。

7.根据权利要求1-4中任意一项所述的提纯方法，其中，在步骤a)中，将所述的中分子量羟乙基淀粉的水溶液与所述的C₁-C₃一元醇在20-40℃的温度下搅拌，以进行所述的混合；其中搅拌速度为200-500r/分钟。

8.根据权利要求1-4中任意一项所述的提纯方法，其中所述分离包括：离心分离并收集固相。

9.一种根据权利要求1-8中任意一项所述的提纯方法得到的中分子量羟乙基淀粉成品，其中，所述的中分子量羟乙基淀粉成品中的细菌内毒素的含量小于1.5EU/g，和/或乙二醇的含量小于0.030重量％。

10.根据权利要求9所述的中分子量羟乙基淀粉成品，其中，所述的中分子量羟乙基淀粉成品中的乙二醇的含量小于0.025重量％。