CN103822958A - 用于dna琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液及其制备方法，包括作为容剂的水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：35-37%V/V丙三醇、28-32mM乙二胺四乙酸二钠、3-5%W/V十二烷基硫酸钠、0.005-0.01%W/V溴酚蓝、0.01-0.05%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄；该上样缓冲液是一种经过改良的五色六倍浓缩的上样缓冲液，对DNA片段的观察无干扰，在可见光条件下可对整个电泳进程进行观测，防止小片段DNA在电泳中丢失。
Description
技术领域
本发明涉及一种上样缓冲液，特别是一种用于DNA分析的琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液及其制备方法。
背景技术
琼脂糖凝胶电泳作为一种重要的分子生物学技术，已被广泛应用于不同生物分子（DNA、RNA等）的分离。DNA片段的分析等试验大多都基于电泳技术。在DNA片段分离过程中，需要将样本与上样缓冲液按一定比例混合，继而将混合样本置于琼脂糖凝胶的点样孔内，最终通过电泳使不同片段长度的DNA分子分离以实现对特定DNA片段的分离和检测。在这一分离过程中，上样缓冲液的作用主要具有：使样本呈色，加样操作更加方便；在可见光下可观察到指示带，便于观测电泳的进程。
常规配方以溴酚蓝和二甲苯青FF作为指示剂的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液中，由于溴酚蓝的电泳位置与200-500bp的DNA电泳条带位置相近，在EB染色观察这一范围DNA片段时，溴酚蓝对这些DNA片段的观察有很强的的干扰，特别是当这些小片段的量比较少时，溴酚蓝甚至会把小片段DNA的信号全部遮盖掉。
为了避免这一情况的发生，因此需要一种改良的上样缓冲液，能够完全消除染料对小片段DNA观察时的干扰，同时能够便于观察电泳进程，防止小片段DNA片段的丢失。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是提供一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液及其制备方法，可以完全消除染料对小片段DNA观察时的干扰。此外，本发明所提供的上样缓冲液条带较常规上样缓冲液具有更多的指示剂条带，其中柠檬黄在电泳中条带始终位于电泳最前端，更有利于观察电泳进程，防止小片段DNA片段的丢失。
本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的去离子水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
35-37%V/V丙三醇、28-32mM乙二胺四乙酸二钠、3-5%W/V十二烷基硫酸钠、0.01-0.05%W/V溴酚蓝、0.01-0.05%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄；
进一步，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄。
进一步，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.12%W/V二甲酚橙和0.15%W/V柠檬黄。
进一步，所述上样缓冲液的pH值为7-8.5；
进一步，用盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值。
本发明还公开一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液的制备方法，包括以下步骤：
按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量溶剂中后加入丙三醇混合均匀，最后调整溶液的pH值，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
本发明的有益效果是：本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，本发明所提供的上样缓冲液，pH为7-8.5，溶剂是水，溶质包括四种指示剂（二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF）、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠和十二烷基硫酸钠；通过添加二甲酚橙和柠檬黄两种指示剂，并重新调整溴酚蓝的比例，配制一种经过改良的五色六倍浓缩的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，这一缓冲液可完全消除染料对小片段DNA观察时的干扰。此外，本发明所提供的上样缓冲液条带较常规上样缓冲液具有更多的指示剂条带，其中柠檬黄在电泳中条带始终位于电泳最前端，更有利于观察电泳进程，防止小片段DNA片段的丢失。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。
图1为本发明的实施例1效果示意图；
图2为本发明的实施例2效果示意图；
图3为本发明的实施例3效果示意图。
具体实施方式
本实施例的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的去离子水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
35-37%V/V丙三醇、28-32mM乙二胺四乙酸二钠、3-5%W/V十二烷基硫酸钠、0.01-0.05%W/V溴酚蓝、0.01-0.05%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄。
本实施例中，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄；为优选浓度配比。
本实施例中，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.12%W/V二甲酚橙和0.15%W/V柠檬黄；为最佳浓度配比。
本实施例中，所述上样缓冲液的pH值为7-8.5。
本实施例中，用盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值。
本实施例还公开一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液的制备方法，包括以下步骤：
按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入丙三醇混合均匀，最后调整溶液的pH值，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
下面通过具体实施例对本发明做进一步的阐述。
实施例1：
按二甲酚橙0.05%（W/V），柠檬黄0.15%（W/V），溴酚蓝0.035%（W/V），二甲苯青FF0.02%（W/V），丙三醇36%（V/V），乙二胺四乙酸二钠30mM，十二烷基硫酸钠4%（W/V）的比例量取各溶质溶于适量去离子水中，充分溶解后加入36毫升丙三醇后混匀，再使用去离子水定容至100毫升，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为7-8.5，即制备出本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
在PCR产物中添加六分之一体积的本发明的上样缓冲液，将混合所得溶液直接用于琼脂糖凝胶电泳（凝胶浓度为1%，电泳缓冲液为1X TAE缓冲液），在5V/cm的电场强度下进行30分钟电泳，在可见光下各指示剂条带明晰，稳定性和重复性较好，如图1所示。
实施例2：
按二甲酚橙0.12%（W/V），柠檬黄0.15%（W/V），溴酚蓝0.035%（W/V），二甲苯青FF0.02%（W/V），丙三醇36%（V/V），乙二胺四乙酸二钠30mM，十二烷基硫酸钠4%（W/V）的比例量取各溶质溶于适量去离子水中，充分溶解后加入36毫升丙三醇后混匀，再使用去离子水定容至100毫升，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为7-8.5，即制备出本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
在PCR产物中添加六分之一体积的本发明的上样缓冲液，将混合所得溶液直接用于琼脂糖凝胶电泳（凝胶浓度为1%，电泳缓冲液为1X TAE缓冲液），在5V/cm的电场强度下进行30分钟电泳，在可见光下各指示剂条带明晰，稳定性和重复性较好，如图2所示。
实施例3：
按二甲酚橙0.18%（W/V），柠檬黄0.15%（W/V），溴酚蓝0.035%（W/V），二甲苯青FF0.02%（W/V），丙三醇36%（V/V），乙二胺四乙酸二钠30mM，十二烷基硫酸钠4%（W/V）的比例量取各溶质溶于适量去离子水中，充分溶解后加入36毫升丙三醇后混匀，再使用去离子水定容至100毫升，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为7-8.5，即制备出本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
在PCR产物中添加六分之一体积的本发明的上样缓冲液，将混合所得溶液直接用于琼脂糖凝胶电泳（凝胶浓度为1%，电泳缓冲液为1X TAE缓冲液），在5V/cm的电场强度下进行30分钟电泳，在可见光下各指示剂条带明晰，稳定性和重复性较好，如图3所示。
实施例4
用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
35%V/V丙三醇、28mM乙二胺四乙酸二钠、3%W/V十二烷基硫酸钠、0.01%W/V溴酚蓝、0.01%W/V二甲苯青FF、0.05%W/V二甲酚橙和0.1%W/V柠檬黄。
其制备方法为按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入丙三醇混合均匀，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为7，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
实施例5
各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
37%V/V丙三醇、32mM乙二胺四乙酸二钠、5%W/V十二烷基硫酸钠、0.05%W/V溴酚蓝、0.05%W/V二甲苯青FF、0.18%W/V二甲酚橙和0.25%W/V柠檬黄。
其制备方法为按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入丙三醇混合均匀，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为8.5，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
实施例6
本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
36%V/V丙三醇、32mM乙二胺四乙酸二钠、3%W/V十二烷基硫酸钠、0.01%W/V溴酚蓝、0.01%W/V二甲苯青FF、0.18%W/V二甲酚橙和0.1%W/V柠檬黄。
其制备方法为按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入丙三醇混合均匀，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为8，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
实施例4、5、6制得的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液的性质与前述实施例的上样缓冲液性质相似，此处不再赘述。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (6)
1.一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，其特征在于：包括作为溶剂的去离子水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
35-37%V/V丙三醇、28-32mM乙二胺四乙酸二钠、3-5%W/V十二烷基硫酸钠、0.01-0.05%W/V溴酚蓝、0.01-0.05%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄。
2.根据权利要求1所述的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，其特征在于：各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄。
3.根据权利要求2所述的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，其特征在于：各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：
36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.12%W/V二甲酚橙和0.15%W/V柠檬黄。
4.根据权利要求1至3任一所述的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，其特征在于：所述上样缓冲液的pH值为7-8.5。
5.根据权利要求4所述的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，其特征在于：用盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值。
6.一种权利要求1所述的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量的溶剂中后加入丙三醇混合均匀，最后调整溶液的pH值，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4321120A (en) * | 1980-03-19 | 1982-03-23 | Nardi Ronald V | Process for detecting proteins specific to hypertension in mammals |
| US5846531A (en) * | 1990-03-21 | 1998-12-08 | University Of Maryland | Marine mela gene |
| CN1552863A (zh) * | 2003-12-18 | 2004-12-08 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一类茶树捕光叶绿素a/b蛋白复合体表达序列标签及其生物芯片 |
| CN101933920A (zh) * | 2010-07-30 | 2011-01-05 | 昆明医学院 | 3,15-二羰基赤霉酸甲酯在逆转肿瘤多药耐药中的用途 |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4321120A (en) * | 1980-03-19 | 1982-03-23 | Nardi Ronald V | Process for detecting proteins specific to hypertension in mammals |
| US5846531A (en) * | 1990-03-21 | 1998-12-08 | University Of Maryland | Marine mela gene |
| CN1552863A (zh) * | 2003-12-18 | 2004-12-08 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一类茶树捕光叶绿素a/b蛋白复合体表达序列标签及其生物芯片 |
| CN101933920A (zh) * | 2010-07-30 | 2011-01-05 | 昆明医学院 | 3,15-二羰基赤霉酸甲酯在逆转肿瘤多药耐药中的用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 周迎春等: "生脉散、越鞠丸、失笑散加减后中药复方干预心肌梗死大鼠心室肌血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量及血管紧张素II 1型受体mRNA表达的变化", 《中国临床康复》, vol. 10, no. 23, 20 June 2006 (2006-06-20), pages 81 - 83 * |
| 邱冬梅等: "扩增片断长度多态性(AFLP)荧光标记和银染技术的比较分析", 《生命科学研究》, vol. 10, no. 3, 31 August 2006 (2006-08-31), pages 17 - 21 * |
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