CN104032005B - 一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种PCR测序中间产物的保存剂，保存剂包括乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原；保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L？~0.05mol/L，糖原的浓度为3g/L~5g/L。本发明公开的保存剂提高PCR测序中间产物在保存后的上机测序成功率。

Description

一种PCR测序中间产物的保存剂及保存方法
技术领域
本发明涉及生物制剂的保存，具体涉及到一种PCR测序中间产物的保存剂以及使用该保存剂的保存方法。
背景技术
DNA是染色体的重要组成成分，是真核生物的遗传物质，含有物种个体的全部遗传信息，可用于构件基因组文库，分离所需要的基因，检测相关的分子标记等。现常使用PCR扩增仪对DNA进行扩增，使用Sanger测序法对其进行测序。
Sanger测序法是目前应用比较广泛的直接测序的技术方法，无论是大型医院，实验室，还小型的研究机构，都可能使用Sanger测序法进行检测或研究，此方法具有成本低、快速、准确等特点。Sanger测序法进行测序步骤大概可以分为模板PCR，模板纯化，测序PCR，测序PCR产物纯化，上机等5个步骤，操作过程比较繁琐，耗时长。一般情况下，进行测序PCR后需要立即进行测序PCR产物纯化，然后上机测序，此过程一般不能暂时保存。因为放置时间过长后，测序效果急剧降低。测序时使用的凝胶一般都是进口试剂，比较昂贵。对于小型实验室或医院，测序的样本量不大，进行少数位点的测序则需要耗费很多凝胶，同时实验操作也非常不便于安排，几个样品也必须在短时之内完成上机。因此，需要制备一种保存剂，能够将测序PCR产物纯化后的中间产物进行暂时保存，并且使保存后的中间产物不影响上机测序的测序成功率。
为了解决现有技术中的上述不足，本发明提出了一种新的解决方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种PCR测序中间产物的保存剂，以及使用该保存剂保存PCR测序中间产物的方法。
为达上述目的，本发明所采用的技术方案是：提供一种PCR测序中间产物的保存剂，保存剂包括乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原；保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L~0.05mol/L，糖原的浓度为3g/L~5g/L。
此外，本发明公开的使用保存剂保存PCR测序中间产物的方法，包括：
配置保存剂：取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原，加入溶剂配置成保存剂，保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L~0.05mol/L，糖原的浓度为3g/L~5g/L；
保存中间产物：在PCR测序中间产物中加入保存剂混合均匀，然后将混合液低温保存。
本发明公开的保存剂能够显著提高PCR测序中间产物在保存后的上机测序成功率。
具体实施方式
实施例1
配置保存剂：取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原，加入溶剂混合均匀，调节pH，溶剂可以为水或者乙醇等。混合后的乙酸钠最终浓度为1mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L，糖原的浓度为3g/L。
PCR测序中间产物可以是使用Sanger测序法，在测序PCR步骤或者测序PCR产物纯化步骤后生成的产物。在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的保存剂，混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
实施例2
配置保存剂：取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原，加入溶剂混合均匀，调节pH，溶剂可以为水或者乙醇等。混合后的乙酸钠最终浓度为1.2mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.04mol/L，糖原的浓度为4g/L。
PCR测序中间产物可以是使用Sanger测序法，在测序PCR步骤或者测序PCR产物纯化步骤后生成的产物。在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的保存剂，混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
实施例3
配置保存剂：取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原，加入溶剂混合均匀，调节pH，溶剂可以为水或者乙醇等。混合后的乙酸钠最终浓度为1.5mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.05mol/L，糖原的浓度为5g/L。
PCR测序中间产物可以是使用Sanger测序法，在测序PCR步骤或者测序PCR产物纯化步骤后生成的产物。在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的保存剂，混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
对照组
在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的溶剂，混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
实验例
将实施例1、实施例2、实施例3和对照组的中间产物，分别在相同的条件下保存5天、5天、7天和2天；然后进行上机测序，检测四组的测序成功率。
其中，实施例1的测序成功率为96%；实施例2的测序成功率为98%；实施例3的测序成功率为94%；对照组的测序成功率小于50%。由此可见，加入了保存剂的实验组，在长时间保存情况下，任然具有较高的测序成功率，而没有加入保存剂的对照组，在较短的时间内测序成功率仍然较低，说明保存剂能够延长PCR测序中间产物的保存时间，增加上机测序的成功率。

Claims (6)

1.一种PCR测序中间产物的保存剂，其特征在于：所述保存剂包括乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原；保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L~0.05mol/L，糖原的浓度为3g/L~5g/L。
2.如权利要求1所述的保存剂，其特征在于：所述保存剂中乙酸钠的浓度为1.2mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.04mol/L，糖原的浓度为4g/L。
3.如权利要求1所述的保存剂，其特征在于：所述糖原为肝糖原。
4.一种PCR测序中间产物的保存方法，其特征在于：
配置保存剂：取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原，加入溶剂配置成保存剂，保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L~0.05mol/L，糖原的浓度为3g/L~5g/L；
保存中间产物：在PCR测序中间产物中加入保存剂混合均匀，然后将混合液低温保存。
5.如权利要求4所述的保存方法，其特征在于：所述保存剂中乙酸钠的浓度为1.2mol/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.04mol/L，糖原的浓度为4g/L。
6.如权利要求4所述的保存方法，其特征在于：所述PCR测序中间产物与保存剂的体积比为4:1。
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