CN104032005A - 一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法 - Google Patents
一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104032005A CN104032005A CN201410259808.1A CN201410259808A CN104032005A CN 104032005 A CN104032005 A CN 104032005A CN 201410259808 A CN201410259808 A CN 201410259808A CN 104032005 A CN104032005 A CN 104032005A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preservatives
- concentration
- order
- checking
- pcr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种PCR测序中间产物的保存剂,保存剂包括乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原;保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L~0.05mol/L,糖原的浓度为3g/L~5g/L。本发明公开的保存剂提高PCR测序中间产物在保存后的上机测序成功率。
Description
技术领域
本发明涉及生物制剂的保存,具体涉及到一种PCR测序中间产物的保存剂以及使用该保存剂的保存方法。
背景技术
DNA是染色体的重要组成成分,是真核生物的遗传物质,含有物种个体的全部遗传信息,可用于构件基因组文库,分离所需要的基因,检测相关的分子标记等。现常使用PCR扩增仪对DNA进行扩增,使用Sanger测序法对其进行测序。
Sanger测序法是目前应用比较广泛的直接测序的技术方法,无论是大型医院,实验室,还小型的研究机构,都可能使用Sanger测序法进行检测或研究,此方法具有成本低、快速、准确等特点。 Sanger测序法进行测序步骤大概可以分为模板PCR,模板纯化,测序PCR,测序PCR产物纯化,上机等5个步骤,操作过程比较繁琐,耗时长。一般情况下,进行测序PCR后需要立即进行测序PCR产物纯化,然后上机测序,此过程一般不能暂时保存。因为放置时间过长后,测序效果急剧降低。测序时使用的凝胶一般都是进口试剂,比较昂贵。对于小型实验室或医院,测序的样本量不大,进行少数位点的测序则需要耗费很多凝胶,同时实验操作也非常不便于安排,几个样品也必须在短时之内完成上机。因此,需要制备一种保存剂,能够将测序PCR产物纯化后的中间产物进行暂时保存,并且使保存后的中间产物不影响上机测序的测序成功率。
为了解决现有技术中的上述不足,本发明提出了一种新的解决方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种PCR测序中间产物的保存剂,以及使用该保存剂保存PCR测序中间产物的方法。
为达上述目的,本发明所采用的技术方案是:提供一种PCR测序中间产物的保存剂,保存剂包括乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原;保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L ~0.05mol/L,糖原的浓度为3g/L~5g/L。
此外,本发明公开的使用保存剂保存PCR测序中间产物的方法,包括:
配置保存剂:取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原,加入溶剂配置成保存剂,保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L ~0.05mol/L,糖原的浓度为3g/L~5g/L;
保存中间产物:在PCR测序中间产物中加入保存剂混合均匀,然后将混合液低温保存。
本发明公开的保存剂能够显著提高PCR测序中间产物在保存后的上机测序成功率。
具体实施方式
实施例1
配置保存剂:取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原,加入溶剂混合均匀,调节pH,溶剂可以为水或者乙醇等。混合后的乙酸钠最终浓度为1mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L,糖原的浓度为3g/L。
PCR测序中间产物可以是使用Sanger测序法,在测序PCR步骤或者测序PCR产物纯化步骤后生成的产物。在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的保存剂,混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
实施例2
配置保存剂:取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原,加入溶剂混合均匀,调节pH,溶剂可以为水或者乙醇等。混合后的乙酸钠最终浓度为1.2mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.04mol/L,糖原的浓度为4g/L。
PCR测序中间产物可以是使用Sanger测序法,在测序PCR步骤或者测序PCR产物纯化步骤后生成的产物。在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的保存剂,混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
实施例3
配置保存剂:取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原,加入溶剂混合均匀,调节pH,溶剂可以为水或者乙醇等。混合后的乙酸钠最终浓度为1.5mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.05mol/L,糖原的浓度为5g/L。
PCR测序中间产物可以是使用Sanger测序法,在测序PCR步骤或者测序PCR产物纯化步骤后生成的产物。在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的保存剂,混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
对照组
在PCR测序中间产物中加入PCR测序中间产物体积四分之一的溶剂,混合均匀后置于零下20℃条件下进行保存。
实验例
将实施例1、实施例2、实施例3和对照组的中间产物,分别在相同的条件下保存5天、5天、7天和2天;然后进行上机测序,检测四组的测序成功率。
其中,实施例1的测序成功率为96%;实施例2的测序成功率为98%;实施例3的测序成功率为94%;对照组的测序成功率小于50%。由此可见,加入了保存剂的实验组,在长时间保存情况下,任然具有较高的测序成功率,而没有加入保存剂的对照组,在较短的时间内测序成功率仍然较低,说明保存剂能够延长PCR测序中间产物的保存时间,增加上机测序的成功率。
Claims (6)
1.一种PCR测序中间产物的保存剂,其特征在于:所述保存剂包括乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原;保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L ~0.05mol/L,糖原的浓度为3g/L~5g/L。
2.如权利要求1所述的保存剂,其特征在于:所述保存剂中乙酸钠的浓度为1.2mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.04mol/L,糖原的浓度为4g/L。
3.如权利要求1所述的保存剂,其特征在于:所述糖原为肝糖原。
4.一种PCR测序中间产物的保存方法,其特征在于:
配置保存剂:取乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠和糖原,加入溶剂配置成保存剂,保存剂中乙酸钠的浓度为1mol/L~1.5mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.03mol/L ~0.05mol/L,糖原的浓度为3g/L~5g/L;
保存中间产物:在PCR测序中间产物中加入保存剂混合均匀,然后将混合液低温保存。
5.如权利要求4所述的保存方法,其特征在于:所述保存剂中乙酸钠的浓度为1.2mol/L,乙二胺四乙酸二钠的浓度为0.04mol/L,糖原的浓度为4g/L。
6.如权利要求4所述的保存方法,其特征在于:所述PCR测序中间产物与保存剂的体积比为4:1。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410259808.1A CN104032005B (zh) | 2014-06-12 | 2014-06-12 | 一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410259808.1A CN104032005B (zh) | 2014-06-12 | 2014-06-12 | 一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104032005A true CN104032005A (zh) | 2014-09-10 |
CN104032005B CN104032005B (zh) | 2015-11-25 |
Family
ID=51462999
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410259808.1A Active CN104032005B (zh) | 2014-06-12 | 2014-06-12 | 一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104032005B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106636452A (zh) * | 2017-03-08 | 2017-05-10 | 海南出入境检验检疫局热带植物隔离检疫中心 | 进境植物检疫性有害生物八点楔天牛的快速鉴定方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006029908A1 (en) * | 2004-09-17 | 2006-03-23 | Centelion | Stable liquid formulations of plasmid dna |
CN101575441A (zh) * | 2008-05-07 | 2009-11-11 | 上海优你生物科技有限公司 | 核酸分子长期保存的方法和实施这种长期保存的包装 |
WO2010143762A1 (ko) * | 2009-06-12 | 2010-12-16 | (주)바이오니아 | 리보핵산 분해효소 활성억제용 화합물 및 이를 포함하는 핵산 보관용 용기 |
CN102115743A (zh) * | 2010-12-21 | 2011-07-06 | 天津医科大学总医院 | 一种从石蜡包埋组织中提取高质量rna的新方法和试剂盒 |
CN102154265A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-08-17 | 百奥迈科生物技术有限公司 | 从乳化组合物中提纯核酸的方法及其应用 |
CN102559654A (zh) * | 2010-12-17 | 2012-07-11 | 上海元基融生物科技有限公司 | Dna保存溶剂及其保存方法 |
CN102643793A (zh) * | 2011-02-18 | 2012-08-22 | 中国科学院上海应用物理研究所 | 一种稳定双链dna的方法及双链dna稳定剂 |
-
2014
- 2014-06-12 CN CN201410259808.1A patent/CN104032005B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006029908A1 (en) * | 2004-09-17 | 2006-03-23 | Centelion | Stable liquid formulations of plasmid dna |
CN101575441A (zh) * | 2008-05-07 | 2009-11-11 | 上海优你生物科技有限公司 | 核酸分子长期保存的方法和实施这种长期保存的包装 |
WO2010143762A1 (ko) * | 2009-06-12 | 2010-12-16 | (주)바이오니아 | 리보핵산 분해효소 활성억제용 화합물 및 이를 포함하는 핵산 보관용 용기 |
CN102559654A (zh) * | 2010-12-17 | 2012-07-11 | 上海元基融生物科技有限公司 | Dna保存溶剂及其保存方法 |
CN102115743A (zh) * | 2010-12-21 | 2011-07-06 | 天津医科大学总医院 | 一种从石蜡包埋组织中提取高质量rna的新方法和试剂盒 |
CN102154265A (zh) * | 2011-01-31 | 2011-08-17 | 百奥迈科生物技术有限公司 | 从乳化组合物中提纯核酸的方法及其应用 |
CN102643793A (zh) * | 2011-02-18 | 2012-08-22 | 中国科学院上海应用物理研究所 | 一种稳定双链dna的方法及双链dna稳定剂 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104032005B (zh) | 2015-11-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Roume et al. | A biomolecular isolation framework for eco-systems biology | |
CN103789202A (zh) | 常温保存核酸的采集容器 | |
SG10201807112XA (en) | Analysis of nucleic acids associated with single cells using nucleic acid barcodes | |
CN102146112B (zh) | 从福尔马林固定石蜡包埋组织中提取脱氧核糖核酸的方法 | |
WO2007024798A3 (en) | Apparatus, system, and method using immiscible-fluid-discrete-volumes | |
RU2013111745A (ru) | Раствор для экстракции рнк | |
Xu | Next-generation sequencing | |
CN105506129A (zh) | 一种rna类样本保存稀释液及其制备 | |
Salehi et al. | RNA preservation and stabilization | |
Shahzad et al. | Proteomics analysis reveals that Warburg effect along with modification in lipid metabolism improves in vitro embryo development under low oxygen | |
La et al. | Differential expression of circular RNAs in polytocous and monotocous uterus during the reproductive cycle of sheep | |
Dong et al. | Selection and validation of reference genes for quantitative real-time PCR analysis of development and tissue-dependent flower color formation in Cymbidium lowianum | |
CN104032005B (zh) | 一种pcr测序中间产物的保存剂及保存方法 | |
CN103881978B (zh) | 一种rna保存液、包含该保存液的试剂盒及其应用 | |
CN105255855A (zh) | 在固体表面保存核酸的方法及其保存液 | |
CN103436526B (zh) | 一种免提取直接扩增极微量样品dna条形码的方法及试剂盒 | |
CN102586230A (zh) | 基于pcr的玉米半粒种子dna快速提取方法 | |
Müller et al. | 13C-labeled artificial root exudates are immediately respired in a peat mesocosm study | |
CN104054695B (zh) | 生物组织低温保护剂及制备、使用方法 | |
Bernstein et al. | Design, construction, and characterization methodologies for synthetic microbial consortia | |
CN1288956A (zh) | 聚合酶链式反应混合液的保存方法 | |
Wan et al. | Achieving high throughput sequencing of a cDNA library utilizing an alternative protocol for the bench top next-generation sequencing system | |
CN104031053B (zh) | 大批量蓝藻样品中叶绿素的提取方法 | |
CN103898091B (zh) | 用于野外采样提取植物基因组dna、蛋白质的组织固定方法 | |
Wilkinson et al. | Innovative technology to stabilize DNA at room temperature in tissue and cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230724 Address after: No. 1239, Middle Section of Yizhou Avenue, Chengdu High tech Zone, China (Sichuan) Pilot Free Trade Zone, Chengdu City, Sichuan Province, 610094 Patentee after: CHENGDU QINGKE BIO-TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: No. 5-E-3, Building A, Building 1, Incubation Park, No. 1480 Tianfu Avenue North Section, High tech Zone, Chengdu, Sichuan, 610041 Patentee before: CHENGDU ZHONGCHUANG QINGKE MEDICAL DIAGNOSIS TEST CENTER CO.,LTD. |