CN103816197A - 一种抑制破骨细胞形成的红花提取物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种抑制破骨细胞形成的红花提取物及其提取方法。该提取方法为：将干燥的红花用乙醇回流提取，回收乙醇得浸膏，浸膏再用蒸馏水溶解后用有机溶剂萃取，萃取物再用乙醇溶解后回收溶剂即得具有抑制破骨细胞形成的红花提取物。本发明的红花提取物具有很好的抑制破骨细胞形成的作用，并来源与天然药物，副作用少，使用安全，且提取方法简单，易于工业化生产。

Description

一种抑制破骨细胞形成的红花提取物

技术领域

本发明涉及红花提取物,尤其是涉及抑制破骨细胞形成的红花提取物。 

背景技术

随着世界人口老龄化日趋明显，骨质疏松症的发病率逐年升高，由骨质疏松症所致的骨痛和骨折直接影响了中老年人的生存质量,已经成为严峻的社会问题。人体的骨骼通过不断的骨生成和骨吸收，一直在进行着改造，这种改造叫骨改造。在年轻时骨生成和骨吸收保持着良好的平衡，但随着年龄的增长，由于各种原因该平衡倾向于骨吸收，长时间持续该状态的话会使得骨组织变脆，导致发生骨质疏松症、骨折等各种骨疾病。在人体里，破骨细胞是有骨吸收的唯一细胞。研究表明，破骨细胞形成变得异常活跃时，将引发上述由于骨损失引起的骨质疏松症(osteoporosis)等各种骨疾病。因此，抑制破骨细胞的形成与骨吸收机能是一种非常有效的治疗骨质疏松症的方法。 

目前已开发出多种抑制破骨细胞形成的预防和治疗骨质疏松症的药物和方法，但由于具有价格高，长期服用引起多种副作用，因而使用上都有一定的局限性。比起合成新药，天然药物成分具有安全，价廉的优点。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于天然药物的，具有抑制破骨细胞形成的植物成分。 

为了实现本发明的目的，本发明采用以红花为天然药物资源，通过多种溶剂提取法和分离方法以及在提取、分离过程中紧密配合得到的提取物或组分对破骨细胞形成的作用的实验，最终得到具有显著破骨细胞抑制作用的红花提取物。 

具有抑制破骨细胞形成的红花提取物的提取方法为如下： 

①取干燥的红花,用乙醇回流提取1-3次,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,得乙醇浸膏； 

②将乙醇浸膏加入蒸馏水热溶,然后用有机溶剂萃取,减压回收溶剂,得浸膏I； 

③将浸膏I用2-10倍量的乙醇溶解,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙 醇,即得抑制破骨细胞形成的红花提取物。 

在本发明的优选技术方案中，在步骤①所述的乙醇为60-80%的乙醇溶液。 

在本发明的另一优选技术方案中，在步骤②所述的有机溶剂为含有1-6个碳原子的醇，烷或酯类。 

在本发明的再一优选技术方案中，在步骤③所述的乙醇为30-100%的乙醇溶液。 

红花为常用中草药，主要用于经闭、痛经、恶露不行、症瘕痞块、跌打损伤。古人常有於血在体内时，常加红花一小把:纱布包煮开可用一天两次泡脚,适用各种静脉曲张,末梢神经炎,血液循环。活血能经；祛瘀止痛，红花味辛、性温，归心、肝经。气香行散，入血分具有活血通经，祛瘀止痛的功效主治痛经，经闭，产后血晕，瘀滞腹痛，胸痹心痛，血积，跌打瘀肿，关节疼痛，中风瘫痪，斑疹紫暗。红花虽有上述多种功效，并配合其他中草药用于骨质疏松症的治疗，但尚没有红花提取物抑制破骨细胞形成的报告。 

本发明的红花提取物具有很好的抑制破骨细胞形成的作用，并来源与天然药物，副作用少，使用安全。 

本发明的红花提取物，提取方法简单，易于工业化生产。 

具体实施方式

下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。 

实施例1 

1.红花提取物的提取 

①取干燥的红花,用3倍70%乙醇回流提取2次,每次2个小时，合并提取液，冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,得乙醇浸膏； 

②将乙醇浸膏加入5倍量的蒸馏水热溶,然后用乙酸乙酯萃取,减压回收溶剂,得浸膏I； 

③将浸膏I用5倍量的80%乙醇溶解,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,即得抑制破骨细胞形成的红花提取物。 

2.红花提取物对破骨细胞形成的作用 

破骨细胞的形成体系：采用RAW264.7细胞在RANKL存在下，在α-MEM培养液中培养3-5天就可形成为多核的破骨细胞。形成的破骨细胞用抗酒石酸酸性 磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞，在显微镜下数3个以上细胞核的TRAP阳性多核细胞，作为破骨细胞形成的指标。 

所述RAW264.7为细胞小鼠单核/巨噬细胞株，在破骨细胞形成因子（RANKL）的存在下可以形成为有骨吸收能力的破骨细胞。 

将红花提取物溶于α-MEM培养液中，配制成一定浓度，然后加入到RAW264.7细胞的破骨细胞形成体系中，在5%二氧化碳和37℃的细胞培养箱中培养3天，得到的破骨细胞用TRAP染色发染色，并在显微镜下统计具有3个以上细胞核的TRAP阳性破骨细胞，结果见表1. 

表1.红花提取物对破骨细胞形成的影响 

表1的试验中：RAW264.7细胞以5×10³/well的浓度接种于96孔板，在RANKL浓度为10ng/mL的α-MEM培养液中培养3日。 

表中红花提取物的浓度为在细胞培养液中的最终浓度，每个浓度设3个孔，破骨细胞数为3个孔的平均数。 

表中对照组为在红花提取物浓度为10ug/mL时使用的溶剂，作为溶剂对照。 

表中抑制率为相对于对照组计算的红花提取物对破骨细胞形成的抑制率。 

表1的结果可知，红花提取物显著抑制破骨细胞的形成，随着浓度的增加其抑制率也增加。 

Claims (4)

1.一种抑制破骨细胞形成的红花提取物，其特征在于用如下方法提取得到:

①取干燥的红花,用乙醇回流提取1-3次,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,得乙醇浸膏；

②将乙醇浸膏加入蒸馏水热溶,然后用有机溶剂萃取,减压回收溶剂,得浸膏Ι；

③将浸膏Ι用2-10倍量的乙醇溶解,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,即得抑制破骨细胞形成的红花提取物。

2.根据权利要求1所述的红花提取物，其特征在于：在步骤①所述的乙醇为60-80%的乙醇溶液。

3.根据权利要求1所述的红花提取物，其特征在于：在步骤②所述的有机溶剂为含有1-6个碳原子的醇，烷或酯类。

4.根据权利要求1所述的红花提取物，其特征在于：在步骤③所述的乙醇为30-100%的乙醇溶液。