CN103816211A - 一种抑制破骨细胞形成的葛根提取物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种抑制破骨细胞形成的葛根提取物及其提取方法。该提取方法为：将干燥的葛根用乙醇回流提取，回收乙醇得浸膏，浸膏再用蒸馏水溶解后用有机溶剂萃取，萃取物再用乙醇溶解后回收溶剂即得具有抑制破骨细胞形成的葛根提取物。本发明的葛根提取物具有很好的抑制破骨细胞形成的作用，并来源与天然药物，副作用少，使用安全，且提取方法简单，易于工业化生产。

Description

一种抑制破骨细胞形成的葛根提取物

技术领域

本发明涉及葛根提取物,尤其是涉及抑制破骨细胞形成的葛根提取物。

背景技术

随着世界人口老龄化日趋明显，骨质疏松症的发病率逐年升高，由骨质疏松症所致的骨痛和骨折直接影响了中老年人的生存质量,已经成为严峻的社会问题。人体的骨骼通过不断的骨生成和骨吸收，一直在进行着改造，这种改造叫骨改造。在年轻时骨生成和骨吸收保持着良好的平衡，但随着年龄的增长，由于各种原因该平衡倾向于骨吸收，长时间持续该状态的话会使得骨组织变脆，导致发生骨质疏松症、骨折等各种骨疾病。在人体里，破骨细胞是有骨吸收的唯一细胞。研究表明，破骨细胞形成变得异常活跃时，将引发上述由于骨损失引起的骨质疏松症(osteoporosis)等各种骨疾病。因此，抑制破骨细胞的形成与骨吸收机能是一种非常有效的治疗骨质疏松症的方法。

目前已开发出多种抑制破骨细胞形成的预防和治疗骨质疏松症的药物和方法，但由于具有价格高，长期服用引起多种副作用，因而使用上都有一定的局限性。比起合成新药，天然药物成分具有安全，价廉的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于天然药物的，具有抑制破骨细胞形成的植物成分。

为了实现本发明的目的，本发明采用以葛根为天然药物资源，通过多种溶剂提取法和分离方法以及在提取、分离过程中紧密配合得到的提取物或组分对破骨细胞形成的作用的实验，最终得到具有显著破骨细胞抑制作用的葛根提取物。

具有抑制破骨细胞形成的葛根提取物的提取方法为如下：

①取干燥的葛根,粉碎成1-10mm的小块，备用；

②将粉碎的葛根用乙醇回流提取1-3次,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,得乙醇浸膏；

③将乙醇浸膏加入蒸馏水热溶,然后用有机溶剂萃取,减压回收溶剂,得浸膏Ⅰ；

④将浸膏Ⅰ用2-10倍量的乙醇溶解,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,即得抑制破骨细胞形成的葛根提取物。

本发明的优选技术方案中，在步骤①所述的乙醇为60-80%的乙醇溶液。

本发明的另一优选技术方案中，在步骤②所述的有机溶剂为含有1-6个碳原子的醇，烷或酯类。

本发明的再一优选技术方案中，萃取所用有机溶剂为一种或两种以上有机溶剂的混合物。

本发明的优选技术方案中，在步骤③所述的乙醇为30-100%的乙醇溶液。

所述有机溶剂萃取，可以采用按溶剂极性小到大的顺序依次萃取的方法，或者用一种溶剂萃取的方法或者两种以上的混合溶剂萃取的方法。

葛根为豆科植物野葛的根，是中国南方一些省区的一种常食蔬菜，其味甘凉可口，具有清热、降火、排毒诸功效。葛根中富含多达13种异黄酮类物质，包括葛根素、葛雌素、葛根素木糖甙、大豆黄酮等，葛根素对高血压、高血脂、高血糖和心脑血管疾病有疗效。葛根水煎剂、醇浸膏、总黄酮和葛根素均有明显的扩张冠状血管的作用，能使冠血流量增加，血管阻力降低，葛根总黄酮和葛根素能减慢心率，降低心脏总外周阻力，减少心肌耗氧量；提高心肌工作效率

葛根虽有上述多种功效和有效成分，并配合其他中草药用于骨质疏松症的治疗，但尚没有明确葛根中具有抗骨质疏松症的有效成分。本发明用多种溶剂提取方法，得到抑制破骨细胞形成葛根提取物。抑制破骨细胞是治疗骨质疏松症的有效途径。

本发明的葛根提取物具有很好的抑制破骨细胞形成的作用，并来源于天然药物，副作用少，使用安全。

本发明的葛根提取物，提取方法简单，易于工业化生产。

具体实施方式

下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1

1.葛根提取物的提取

①取干燥的葛根,粉碎成1-10mm的小块，备用；

②将粉碎好的葛根,用3倍70%乙醇回流提取2次,每次1.5个小时，合并提取液，冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,得乙醇浸膏；

③将乙醇浸膏加入5倍量的蒸馏水热溶,然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；

④将乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得浸膏Ⅰ；

⑤将浸膏Ⅰ用5倍量的90%乙醇溶解,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,即得抑制破骨细胞形成的葛根提取物。

2.葛根提取物对破骨细胞形成的作用

破骨细胞的形成体系：采用RAW264.7细胞在RANKL存在下，在α-MEM培养液中培养3-5天就可形成为多核的破骨细胞。形成的破骨细胞用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞，在显微镜下数3个以上细胞核的TRAP阳性多核细胞，作为破骨细胞形成的指标。

所述RAW264.7为细胞小鼠单核/巨噬细胞株，在破骨细胞形成因子（RANKL）的存在下可以形成为有骨吸收能力的破骨细胞。

将葛根提取物溶于α-MEM培养液中，配制成一定浓度，然后加入到RAW264.7细胞的破骨细胞形成体系中，在5%二氧化碳和37℃的细胞培养箱中培养3天，得到的破骨细胞用TRAP染色发染色，并在显微镜下统计具有3个以上细胞核的TRAP阳性破骨细胞，结果见表1.

表1.葛根提取物对破骨细胞形成的影响

表1的试验中：RAW264.7细胞以5×10³/well的浓度接种于96孔板，在RANKL浓度为10ng/ml的α-MEM培养液中培养3日。

表中葛根提取物的浓度为在细胞培养液中的最终浓度，每个浓度设3个孔，破骨细胞数为3个孔的平均数。

表中对照组为在葛根提取物浓度为10ug/ml时使用的溶剂，作为溶剂对照。

表中抑制率为相对于对照组计算的葛根提取物对破骨细胞形成的抑制率。

表1的结果可知，葛根提取物显著抑制破骨细胞的形成，随着浓度的增加其抑制率也增加。

Claims (5)

1.一种抑制破骨细胞形成的葛根提取物，其特征在于用如下方法提取得到:

①取干燥的葛根,粉碎成1-10mm的小块，备用；

②将粉碎的葛根用乙醇回流提取1-3次,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,得乙醇浸膏；

③将乙醇浸膏加入蒸馏水热溶,然后用有机溶剂萃取,减压回收溶剂,得浸膏Ⅰ；

④将浸膏Ⅰ用2-10倍量的乙醇溶解,冷藏过夜,过滤,滤液减压回收乙醇,即得抑制破骨细胞形成的葛根提取物。

2.根据权利要求1所述的葛根提取物，其特征在于：在步骤①所述的乙醇为60-80%的乙醇溶液。

3.根据权利要求1所述的葛根提取物，其特征在于：在步骤②所述的有机溶剂为含有1-6个碳原子的醇，烷或酯类。

4.根据权利要求1所述的葛根提取物，其特征在于：萃取所用有机溶剂为一种或两种以上有机溶剂的混合物。

5.根据权利要求1所述的葛根提取物，其特征在于：在步骤③所述的乙醇为30-100%的乙醇溶液。