CN103816166A - 一种兽用复方盐酸多西环素注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种兽用复方盐酸多西环素注射液及其制备方法。它是盐酸多西环素与氟尼烟酸组成的复方制剂。该方法包括将抗氧剂溶于注射用水，然后把其水溶液加到有机溶剂中，再加入盐酸多西环素和络合剂，调节pH，接着加入金属离子螯合剂和部分抗氧剂，再加入溶于适量有机溶剂的氟胺烟酸，混合均匀，过滤、充氮气、灭菌，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。本发明制备的复方盐酸多西环素注射液稳定性良好，质量可控，治疗效果优于单方盐酸多西环素注射液和氟尼辛葡甲胺注射液，且减少了给药次数，降低了劳动强度和动物的应激反应，提高了治疗效果和效率，在兽医临床上将有广阔的应用前景。

Description

一种兽用复方盐酸多西环素注射液及其制备方法

【技术领域】

本发明属于兽药技术领域。更具体地，本发明涉及一种兽用复方盐酸多西环素注射液，还涉及所述注射液的制备方法。

【背景技术】

复方盐酸多西环素注射液是广谱抗生素多西环素与解热镇痛药氟尼辛组成的复方制剂，具有杀菌消炎和解热镇痛的双重作用。

盐酸多西环素（DoxycyclineHydrochloride）为四环素类抗生素，别名盐酸脱氧土霉素、盐酸强力霉素，其体内体外抗菌活性强于同类药物土霉素和四环素。该药不仅对大多数革兰氏阳性菌与阴性菌有效，而且对螺旋体、放线菌、霉形体、衣原体、立克次体和某些原虫（如阿米巴原虫、球虫等）均有抑制作用，对四环素、土霉素的耐药菌也有效，适于治疗畜禽慢性呼吸道疾病、支原体病、大肠杆菌病、沙门氏菌病、巴氏杆菌病、附红细胞体病等。其注射和口服均吸收迅速，对组织渗透力强，体内分布广，生物利用度高，有效血液浓度维持时间长，毒性较低，在兽医临床上应用广泛。

氟尼辛（Flunixin），又名氟胺烟酸，属烟酸类衍生物；氟尼辛葡甲胺（FlunixinMeglumine），亦称为氟胺烟酸葡甲胺，是氟尼辛与葡甲胺的复合盐，水中溶解，有良好的药理作用，进入体内以氟尼辛（氟胺烟酸）发挥药效，已在美国和英国药典中收载。氟尼辛及氟尼辛葡甲胺于上世纪六、七十年代由美国先灵葆雅公司率先开发制备，并申请了专利。该药主要通过抑制环氧化酶、减少前列腺素等炎性介质的生成而发挥解热、抗炎和镇痛作用，是目前唯一的动物专用非甾体抗炎药，国外已广泛用于防治马、牛、犬、猫等动物疾病，国内常用于缓解猪各种疾病引起的发热、急性炎症及肌肉痛等，尤适于高热病的控制。该药可注射、内服，吸收迅速，生物利用度高，在猪体内维持时间较长，与抗生素联合能够明显改善临床症状，缩短疗程,提高疗效及增重率。国内外已单独或与抗生素联合用于控制各种感染引起的急性炎症及各综合症的辅助治疗。

随着我国畜牧业的快速发展，养殖量逐渐加大，细菌、病毒、支原体等感染性疾病不断发生，且常以混合感染伴随发热、疼痛等炎性症状出现，因此，在使用抗生素药物治疗的同时辅助消炎解热，可迅速缓解和控制临床症状，对急性动物疾病的疗程乃至预后起到至关重要的作用，并可达到标本兼治的目的。因此，具有这两种效能制剂的研发成为目标和热点。目前国外已有土霉素和氟尼辛葡甲胺的复方注射剂，用于牛感染发热的治疗，效果颇佳。因而使稳定性能和疗效均优于土霉素的同类药物-盐酸多西环素成为效仿与新型动物专用解热镇痛药联合的优选。

目前临床上对盐酸多西环素和氟尼辛葡甲胺需求量较大，两药联合治疗动物感染性急症的手段已普遍使用，并疗效显著。但市场上仅有这两种药物单独的片剂、粉剂和注射剂，由于品种的单一，造成在联合治疗中需分别给药或多次注射，并且剂量大，操作繁琐，使动物应激反应大，治疗效率低。因此，市场的需求使两药组合注射液的研制成为热点。但由于盐酸多西环素在水溶液中不稳定，与氟尼辛葡甲胺又存在溶解差异，长期以来一直未能解决两药配伍的稳定性问题，导致储存条件苛刻，保质期短，应用受限而造成研发上的难点。通过大量的试验和研究，本发明以体内发挥主药药效的氟胺烟酸替代氟尼辛葡甲胺与盐酸多西环素配伍，取得明显效果，显著提高了稳定性，解决了该种药物与盐酸多西环素配伍的不稳定问题，制备出安全、稳定、高效的注射剂，在临床治疗中发挥出优越的双重治疗效果，起到良好的增效作用。

另外，目前市场上只有氟尼辛葡甲胺盐，因其水溶性优于氟胺烟酸而应用广泛，但作为发挥主要药理作用的氟胺烟酸（氟尼辛）现仅作为其葡甲胺盐制备的中间体而未开发，因此，开展氟胺烟酸的应用研究，可进一步拓展药物使用途径，利用其与盐的不同性质制备安全稳定的剂型，以达到良好的治疗目的。同时，可减少了合成步骤和成本，降低制剂原料的投入，方便生产和应用。

本发明合理使用氟胺烟酸与盐酸多西环素组合解决两药配伍问题，采用与金属离子络合等有效方法解决盐酸多西环素在水溶液中不稳定问题，选择适宜溶媒解决氟胺烟酸的溶解问题，其合理的处方和独特工艺，使得到的注射液稳定性明显提高，并质量可控，在临床应用上取得良好效果。

盐酸多西环素与氟胺烟酸联合用药组成的复方制剂未见报道。

研究开发多西环素和氟胺烟酸两药的复方注射液可为兽医临床提供一种疗效独特、使用方便、安全稳定、质量可控同时具有杀菌和抗炎双重作用的复方制剂，这对解决市场需求，降低生产成本，更好的防治动物疾病，提高治疗效果和效率，促进畜牧业的发展具有重要的作用和意义。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种兽用复方盐酸多西环素注射液。

本发明的另一个目的是提供所述兽用复方盐酸多西环素注射液的制备方法。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种兽用复方盐酸多西环素注射液。

所述的兽用复方盐酸多西环素注射液每100ml含有：

注射用水，它的量为使所述注射液总量达到100ml的量；

所述注射液的pH值3.0-5.0。

盐酸多西环素是目前市场上销售的抗生素，该药在水溶液中易氧化、降解，从而导致其水溶液变色并析出。为此，让镁离子化合物与多西环素进行络合反应生成络合物，以提高多西环素在所述注射液中的稳定性。

所述的镁离子化合物络合剂是MgCL₂·6H₂O或MgO。

根据本发明，以多西环素计的盐酸多西环素为2.5～20克时，如果镁离子化合物络合剂与其多西环素的摩尔比小于1.0：1，则会使多西环素络合不完全；如果镁离子化合物络合剂与其多西环素的摩尔比高于1.8：1，则会使药液碱性偏高，易氧化并影响其溶解，加大调节酸碱度的用量等，造成操作中的麻烦。

因此，镁离子化合物络合剂与其多西环素的摩尔比为1.0～1.8：1时较为适宜。

优选地，镁离子化合物络合剂与其多西环素的摩尔比为1.0～1.5：1。

氟胺烟酸具有良好的解热、镇痛与抗炎作用，它现在是生产氟尼辛葡甲胺的中间体，其生产工艺成熟，可以工业化规模制备。

氟胺烟酸与盐酸多西环素配伍的目的之一是解决注射液稳定性的问题，其二是在药效上达到增效作用，提高治疗效果和效率，达到标本兼治的目的。

为了有效地溶解多西环素与金属离子所形成的络合物和氟胺烟酸，在本发明的注射液中使用了有机溶剂作为制备介质。

所述的有机溶剂是一种或多种选自α-吡咯烷酮、丙二醇、二甲基乙酰胺、聚乙二醇₄₀₀、聚乙二醇₂₀₀或甘油甲缩醛的有机溶剂。

优选地，所述的有机溶剂是一种或多种选自α-吡咯烷酮、丙二醇、二甲基乙酰胺或聚乙二醇₂₀₀的有机溶剂。

根据本发明，如果有机溶剂的量小于50克，其它组分的量在所述的范围内时，则导致本发明注射液不稳定，易析出；如果有机溶剂的量大于80克，其它组分的量在所述的范围内时，则造成本发明注射液粘稠度增大，成本增加，不利于应用；因此，有机溶剂的量为50～80克较为适宜。优选地，有机溶剂的量是55～75克。

为了防止药物氧化，在每100ml本发明注射液中含有0.25～1.0克抗氧剂。

所述的抗氧剂选自甲醛合次硫酸氢钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠的抗氧剂。

优选地，所述的抗氧剂选自甲醛合次硫酸氢钠。

根据本发明，如果抗氧剂的量小于0.25克，其它组分的量在所述的范围内时，则其抗氧效果不足；如果抗氧剂的量大于1.0克，其它组分的量在所述的范围内时，则会对注射剂质量产生影响，如影响其安全性；因此，如果以多西环素计的盐酸多西环素为2.5～20克，氟胺烟酸为0.25～6克时，所述抗氧剂的量为0.25～1.0克是合适的。优选地，所述抗氧剂的量是0.3～0.8克。

为了保证盐酸多西环素络合效果，往往使用稍许过量的络合剂，因此，在所述反应中多余的镁离子以及由其它试剂、溶剂或设备等带入的各种微量金属离子均会加速盐酸多西环素氧化变色，因此，将过量镁离子与其它微量金属离子螯合掩蔽起来是极其必要的。

为此，在本发明的注射液中使用了EDTA-2Na金属离子螯合剂。它为白色结晶性粉末，能溶于水，是钙、镁及其他金属离子的螯合剂和掩蔽剂。它是一种目前市场上销售的医药化工技术领域里普遍使用的产品。

在本发明的注射液中，EDTA-2Na金属离子螯合剂的量是100ml注射液为0.01-0.05克。

根据本发明，如果EDTA-2Na金属离子螯合剂的量小于0.01克，其它组分的量在所述的范围内时，则抗氧化效果不好；如果EDTA-2Na金属离子螯合剂的量高于0.05克，则会增加成本；因此，所述EDTA-2Na金属离子螯合剂的量为0.01～0.05克是合适的。

优选地，所述EDTA-2Na金属离子螯合剂的量为0.02～0.05克。

就本发明而言，pH值是保证产品稳定性的关键因素之一，络合物能否有效形成是注射液制备的关键之一。因此，控制络合反应的pH值和本发明产品的pH值是保证药物顺利络合、延缓药物氧化，提高稳定性的关键因素。在本发明中，使用pH调节剂将其反应液的pH值控制在3.0～6.0，优选地3.5～5.0。本发明产品pH值控制在3.0～5.0，优选地3.9～4.5。所述的pH调节剂是盐酸和/或乙醇胺。

由于盐酸多西环素易氧化变色，氧对注射液的稳定性影响很大，注射液中含氧量越高，稳定性越差，药液颜色越深，故本发明注射液中残氧量是控制产品质量的又一个关键指标。

在本发明注射液配制和灌装过程中需要在氮气保护下实施，严格地将产品中氧的含量控制在以所述注射液总体积计3%以下，优选地1%以下，这样可以有效地防止其注射液在生产、灭菌和储存过程中的氧化变色现象，从而有效地保证其注射液产品质量。

优选地，所述的兽用复方盐酸多西环素注射液所述的注射液每100ml含有：

注射用水，它的量为使所述注射液总量达到100ml的量；

所述注射液的pH值3.9-4.5。

本发明还涉及所述兽用复方盐酸多西环素注射液的制备方法。

所述制备方法的步骤如下：

A、将0.15～0.70克抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到45～60克有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度50～65℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入镁离子化合物络合剂与2.5～20克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.0～1.8：1；搅拌均匀；再用pH调节剂将其pH调节至3.0～6.0，直至得到一种呈黄色透明的反应体系；

C、将0.1～0.30抗氧剂与0.01～0.05克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的反应体系中，混匀，降温；

待所述反应体系的温度降低至35℃以下时，加入0.25～6.0克氟胺烟酸溶于5～20克有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸和/或乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至3.0～5.0，再用注射用水将所述反应体系总量达到100ml；

接着，采用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在以所述注射液体积计3%以下，然后采用蒸汽灭菌，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

根据本发明，所述的抗氧剂是一种或多种选自甲醛合次硫酸氢钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠的抗氧剂。

所述的镁离子化合物络合剂是MgCL₂·6H₂O或MgO。

在步骤A使用的有机溶剂是一种或多种选自α-吡咯烷酮、丙二醇、二甲基乙酰胺、聚乙二醇₄₀₀、聚乙二醇₂₀₀或甘油甲缩醛的有机溶剂。

在步骤C中溶解氟胺烟酸所使用的有机溶剂是α-吡咯烷酮或二甲基乙酰胺。

在所述制备方法中，所使用的抗氧剂、镁离子化合物络合剂、EDTA-2Na金属离子螯合剂、有机溶剂与pH调节剂等详细情况如前面所述，在此不再赘述。

本发明使用的有机滤膜为聚四氟乙烯、聚偏氟乙烯或脂肪族尼龙材料，它们具有广泛的化学相容性，耐适当浓度的酸碱，均是目前医药化工技术领域里普遍使用的市售产品。

本发明灭菌使用的设备是目前市场上销售的医药化工技术领域里普遍使用的产品，例如山东中泰医疗器械股份有限公司销售的产品。

本发明的注射液通常进行蒸汽灭菌15～30分钟。

采用本发明方法所得到兽用盐酸多西环素注射液的pH值为3.0～5.0。

本发明具有下述技术特点：

（1）处方组成

采用高效抗生素-多西环素与新型解热镇痛药-氟胺烟酸组合注射用药，在抗菌的同时消炎、解热镇痛，可迅速缓解动物急性感染性病症，缩短治愈期，达到标本兼治的目的。在制剂技术上，采用多西环素与金属离子化合物络合，解决其水溶液不稳定问题；采用适宜的溶媒解决氟胺烟酸的溶解问题，在相容的理化性质和均相溶液中达到两药稳定互溶的目的。其组方合理，安全稳定，治疗效果优于盐酸多西环素和氟尼辛葡甲胺单方制剂。本发明的处方组成未见报道。

（2）抗氧剂的组成及制备工艺

本发明采用多西环素与金属离子络合的方法防止其药物氧化水解，还能够延长体内药物吸收，但镁离子在与多西环素络合的同时也能够加速其药物的氧化。本发明使用EDTA2Na作为金属离子螯合剂，可螯合镁等金属离子，防止其对药物的催化起到抗氧化作用，但同时它又参与多西环素的竞争，在一定程度上影响多西环素的络合，甚至会被大量镁离子消耗而失去应有的作用。为此，本发明采用在络合反应完成，即形成透明溶液后，再加入EDTA-2Na络合剩余的镁离子和其他微量金属离子，这样既达到络合反应完全，也防止其注射液被微量金属离子氧化，同时采用抗氧剂与EDTA-2Na组合二次加入抗氧剂的方法，有效地补充了络合反应中抗氧剂量的消耗，明显增加了抗氧化效果，随后待温度降至35℃以下，再加入氟胺烟酸，降低了该药被氧化的风险，从而在保证疗效的情况下提高了产品的稳定性。

（2）反应温度及络合pH值

多西环素与镁离子的络合物能否有效形成是注射液制备的关键之一。本发明络合反应温度控制在50～65℃（优选地55～60℃），络合pH值控制在3.0～6.0（优选地3.5～5.0），可保证多西环素顺利络合，待反应液温度降至35℃以下加入氟胺烟酸，防止因温度和pH过高造成的颜色加深等氧化现象。本发明所提出的具体温度和pH值范围的络合条件，在现有技术中未见具体相同报道。

（3）氟胺烟酸的应用

氟胺烟酸为环氧化酶抑制剂，具有明显的抗炎、解热和镇痛作用，并无成瘾性，是氟胺烟酸葡甲胺（氟尼辛葡甲胺）中发挥主要作用的物质。开拓氟胺烟酸的应用，可在制备上减少成盐步骤，简化生产工艺，降低成本，并可为市场增加新的供选择的药物产品，以满足制剂研究和生产的多种需求。试验表明，本处方以氟胺烟酸替代氟胺烟酸葡甲胺，取得明显效果，解决了产品不稳定问题，显著提高了产品质量，获得了稳定高效的复方注射液。

（4）残氧量控制

多西环素易氧化变色，氧对注射液的稳定性影响很大，注射药液中含氧量越高，稳定性越差，药液颜色越深，故产品中残氧量的控制为关键指标之一。在配制和灌装过程中充入氮气，将产品中氧的含量控制在3%以下，可有效地降低注射液在生产、灭菌和储存过程中的氧化变色现象。本发明提出的该项控制指标在同类专利中未见报道。

[有益效果]

本发明的有益效果是：提供了兽用复方盐酸多西环素注射液及其制备方法。开拓了氟胺烟酸的应用途径。

本发明制备的复方注射液稳定性良好的，质量可控，对感染伴发热动物的治疗减少了给药次数和使用量，提高了治疗效果和效率，在兽医临床上有广阔的应用前景。

【具体实施方式】

通过下述实施例将能够更好地理解本发明。

实施例1：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.15克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到45克α-吡咯烷酮有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度50℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgCL₂·6H₂O络合剂与2.5克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.3：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至3.0，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.1克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.01克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀，降温，待反应液温度降至35℃以下时，加入0.25克氟胺烟酸溶于5克α-吡咯烷酮有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至3.0，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例2：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A将0.2克甲醛合次硫酸氢钠和焦亚硫酸钠（重量比1：1）抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到50克α-吡咯烷酮与聚乙二醇₄₀₀（体积比7：3）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度55℃下往步骤A得到的混合液中依次加入MgCL₂·6H₂O络合剂与2.5克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.3：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至3.5，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.1克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.025克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀，降温，待反应液温度降至35℃以下时，加入0.5克氟胺烟酸溶于5克α-吡咯烷酮有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至3.5，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例3：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.3克甲醛合次硫酸氢钠和亚硫酸氢钠（重量比1:1）抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到55克α-吡咯烷酮和二甲基乙酰胺（体积比7：5）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度50℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与5克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.5：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至4.2，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.3克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.02克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀，降温，待反应液温度降至35℃以下时，加入0.5克氟胺烟酸溶于5克二甲基乙酰胺有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.0，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例4：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.2克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到60克甘油甲缩醛和聚乙二醇₄₀₀（体积比2：1）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度60℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgCL₂·6H₂O络合剂与5克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.7：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至4.8，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.15克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.025克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀，降温，待反应液温度降至35℃以下时，加入2克氟胺烟酸溶于20克α-吡咯烷酮有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至3.8，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例5：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

A、将0.4克甲醛合次硫酸氢钠和亚硫酸氢钠（重量比1：1）抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到60克α-吡咯烷酮和聚乙二醇₂₀₀（体积比1：1）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度58℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与10克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.8：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至6.0，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.2克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.03克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀，降温，待反应液温度降至35℃以下时，加入1克氟胺烟酸溶于15克α-吡咯烷酮有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至5.0，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例6：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.3克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到60克α-吡咯烷酮和二甲基乙酰胺（体积比7：5）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度55℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与10克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.5：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至5.5，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.3克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.02克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀，降温，待反应液温度降至35℃以下时，加入2克氟胺烟酸溶于8克二甲基乙酰胺有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.0，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例7：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.4克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到60克α-吡咯烷酮和二甲基乙酰胺（体积比1：1）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度50℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与10克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.02：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至4.1，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.2克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.03克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀，降温，待反应液温度降至35℃以下时，加入4克氟胺烟酸溶于10克二甲基乙酰胺有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.0，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例8：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.63克甲醛合次硫酸氢钠和亚硫酸氢钠（重量比4：2.3）抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到60克甘油甲缩醛和聚乙二醇₂₀₀（体积比1：2）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度65℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与20克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.4：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至5.7，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.27克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.04克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀后，待反应液温度降至35℃以下时，加入2克氟胺烟酸溶于13克二甲基乙酰胺有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.5，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌15分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例9：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.6克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到60克α-吡咯烷酮和丙二醇（体积比1：1）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度60℃下往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与20克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.4：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至5.0，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.4克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.04克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀后，待反应液温度降至35℃以下时，加入2.5克氟胺烟酸溶于14克α-吡咯烷酮有机溶剂中的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.1，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌30分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例10：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.3克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到60克α-吡咯烷酮和二甲基乙酰胺（体积比1：1）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度50℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与20克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至3.8，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.2克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.03克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀后，待反应液温度降至35℃以下时，加入4克氟胺烟酸溶于10克二甲基乙酰胺有机溶剂中的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.03，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌30分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例11：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.5克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到53克α-吡咯烷酮和二甲基乙酰胺（体积比3.3：2）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度50℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与20克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至3.8，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.3克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.05克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀后，待反应液温度降至35℃以下时，加入5克氟胺烟酸溶于20克二甲基乙酰胺有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.0，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌30分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

实施例12：制备兽用复方盐酸多西环素注射液

该实施例的实施步骤如下：

A、将0.7克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到53克α-吡咯烷酮和丙二醇（体积比3.3：2）混合有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度56℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入MgO络合剂与20克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.5：1；搅拌均匀；再使用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH调节至4.3，直至得到一种黄色透明液体；

C、将0.3克甲醛合次硫酸氢钠抗氧剂与0.05克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的透明液体中，混匀后，待反应液温度降至35℃以下时，加入6克氟胺烟酸溶于18克二甲基乙酰胺有机溶剂中的溶液，混匀，用盐酸与乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至4.2，再用注射用水将其总量补充到100mL；接着，使用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在3%以下，然后用流通蒸汽灭菌30分钟，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

试验实施例1：稳定性试验比较

盐酸多西环素分别与氟尼辛葡甲胺和氟尼辛（氟胺烟酸）组合，以两药氟尼辛有效成分的同等用量制备注射液。将两种组合制备的样品同时在不同条件下的各时间点进行稳定性试验比较，根据试验结果筛选处方。

试验样品：

以实施例6同等有效成分量制备盐酸多西环素+氟尼辛葡甲胺的复方盐酸多西环素注射液（称为复方注射液1）；

实施例6制备的盐酸多西环素+氟尼辛复方盐酸多西环素注射液（称为复方注射液2）；

检测方法：HPLC法；参照《兽药国家标准汇编》（第三册）和《兽药质量标准汇编》（2006-2011年）。

试验条件：（1）样品至40±2℃条件下放置6个月，若不稳定，下调温度，在30±2℃条件下放置考察6个月；（2）20-25℃条件下考察12个月；（3）

4±2℃低温条件下考察12个月。

考察指标：色泽外观、含量。

表1两种注射液的稳定性比较

注：Doxy:多西环素；FluMeg:氟尼辛葡甲胺；Flunixin:氟胺烟酸

上述试验结果清楚地表明，注射液1在温度40℃的条件下放置5天即有沉淀析出，温度降至30℃考察，放至第10天出现沉淀，说明注射液1对热极不稳定。在温度20-25℃的室温条件下放置6个月，色泽加深，放置一年出现沉淀。在低温条件（4℃）下放至12个月变色明显，多西环素含量下降超过显著变化5%的限定范围。而在上述相同规定条件的考察期内，注射液2测定指标均未发生明显变化，含量稳定，测试数据变化均在3%以内，表明注射液2稳定性良好。

结论：注射液2优于注射液1，即本发明采用盐酸多西环素+氟胺烟酸组合制备的注射液稳定性明显优于盐酸多西环素+氟尼辛葡甲胺组合。

试验实施例2：pH值的影响

试验样品：

A、按照实施例7方法（不加氟胺烟酸）制备单一盐酸多西环素注射液；

B、按照实施例7方法（不加盐酸多西环素和络合剂）制备单一氟尼辛注射液；

在pH2.2～8.0范围内，将试验样品A和B的pH调节至不同的设定值，然后分别灌装，在温度60℃的条件下放置10天，测定其药物含量，并与在0天测定数据进行比较，确定相应的pH值范围。

试验结果：

试验样品A在pH3.0以下和pH6.0以上含量和色泽等指标变化较大；样品B在考察的pH范围内色泽变化不大，含量在pH3.0～pH6.0范围内变化差别最小，综合考虑，由两者稳定pH范围可以确定，该注射液pH范围应该控制在3.0～5.0之间。

试验实施例3：抗氧剂比较试验

按照实施例11方式配制不同抗氧剂与EDTA组合的复方盐酸多西环素注射液，灌装在10ml棕色西林瓶中。共配制6个样品，分成三个试验组。每个试验组分别由单一抗氧剂和抗氧剂+EDTA-2Na组合两个样品组成，两个样品中抗氧剂的量相同，各试验组之间EDTA-2Na的量相同，其中，试验组1单独抗氧剂的用量是试验组2抗氧剂用量的二分之一。将每组样品分别于温度60℃和40℃条件下考察10天和6个月，以色泽变化作为氧化指标进行判断。试验结果见表2。

表2：抗氧剂及组合比较试验结果

表2结果清楚地表明：在抗氧剂用量相同的情况下，抗氧剂与EDTA组合试验组的抗氧化效果明显优于单一抗氧剂的效果。

试验实施例4：残氧量的影响

试验样品：按照实施例9～11的方法制备复方盐酸多西环素注射液，使用石家庄三元药玻有限公司生产的10～100mL棕色西林瓶包装。

残氧量分析：使用希仕代仪器贸易有限公司生产的GSM氧气气体分析仪按照其说明书进行测定。

试验方法及条件：

灌装前后不充氮与灌装前后充氮；以手工控制充氮时间长短以得到不同残氧量数值。在100℃条件下灭菌30分钟，以色泽变化为考察指标，观察抗氧化效果。

试验结果：对于未充氮气与残氧量在5%以上的样品，灭菌后均有明显变色或色泽加深现象，而残氧量在3%以下的样品变化较小或几乎不变色，因此，产品中残氧量控制在3%以下为宜。

试验实施例5：高温试验与加速试验

试验样品：

试验样品1：实施例7制备的复方盐酸多西环素注射液。

试验样品2：实施例11制备的复方盐酸多西环素注射液。

检测方法：同试验实施例1。

试验方法1（高温试验）：将试验样品置于温度60℃的恒温条件下考察10天，分别于0、5、10天取样，检测下列各项指标：色泽（无明显变化）、澄明度（符合兽药典注射剂澄明度有关规定）、pH值（规定在3.0-5.0之间）、药物含量（要求未发生显著变化，即含量测定中变化不超过5%）。

试验结果：见表3

表3：复方盐酸多西环素注射液高温试验结果

表3的结果表明：本发明的两个复方盐酸多西环素注射液样品在60℃条件下考察10天各项指标符合规定，多西环素的含量在第10天测定与0天样品比较略有下降，但无明显差异，符合限度要求。

试验方法2（加速试验）:将样品置37±2℃、相对湿度55±5%条件下考察6个月，分别于0、1、2、3、6个月取样，检测下列各项指标：色泽、澄明度、pH值与药物含量，其指标规定和要求同试验方法1。

试验结果：见表4

表4：复方盐酸多西环素注射液加速试验结果

表4结果表明，两个试验样品加速试验6个月，各项指标均无明显差异,符合规定。加速试验结果提示，氟胺烟酸与盐酸多西环素组合的复方注射液稳定性良好，有效期预示2年。

试验方法3：将试验样品置于室温条件下，分别于0、3、6、9、12、18、24个月抽查测定，目前试验样品1考察至24个月，试验样品2考察至14个月，经测试各项指标均无明显差异，表明稳定性良好，与加速试验预示结果吻合。

试验实施例6：体外抑菌影响试验

按处方规格称取相应盐酸多西环素、氟胺烟酸和氟尼辛葡甲胺对照品制成组合及单独样品，与配制的同量复方（实施例9、实施例11）及单方注射液（配制样品见表5）一并对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌进行体外抑菌试验，考察氟胺烟酸对盐酸多西环素抗菌作用的影响。

表5试验样品及配制量

试验操作按CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）微量肉汤稀释法进行。采用96孔灭菌聚苯乙烯板。抑菌试验的细菌菌悬液浓度为5×10⁵CFU/mL。倍比稀释药物浓度范围：多西环素为0.01-2000μg/ml，氟胺烟酸0.002-500μg/ml，氟尼辛葡甲胺(以氟胺烟酸计)0.002-500μg/ml。结果判断以小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。结果:E、I组单独多西环素及其注射液对金葡菌、大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌的最小抑菌浓度（MIC）值分别为0.63、0.97、15.6、0.1μg/mL，C、D以两个比例组合的多西环素与氟尼辛葡甲胺组对这四种菌的MIC值均与上相同，而多西环素与氟胺烟酸以两个比例组合的A、B组对金葡菌、大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌的MIC分别为0.63、0.97、15.6、0.01μg/mL，对猪链球菌的抑菌效果更优。G、H组与其结果基本相同。F、J氟尼辛葡甲胺及其注射液组对这四种菌的MIC值为500μg/mL或大于500μg/mL。

试验结果表明：盐酸多西环素与氟胺烟酸或氟尼辛葡甲胺组合的抑菌效果明显优于单独氟尼辛葡甲胺。氟胺烟酸+多西环素和氟尼辛葡甲胺盐+多西环素两个组合的抑菌效果基本相同，均不影响多西环素的药效。处方中氟胺烟酸替代氟尼辛葡甲胺可行。

试验实施例7：临床药效试验

试验1解热效果试验

试验方法：选取正常饲养过程中出现的自然感染引起发热的病猪，平均体重约35kg左右，随机分成A、B、C、D、E五组，每组6只，A组以每公斤体重10mg的一次量肌注复方盐酸多西环素注射液（实施例10制备），B组以每公斤体重10mg的一次量肌注单方盐酸多西环素注射液（以实施例10处方制备，不加氟胺烟酸），C组以50Kg体重2mL（每公斤体重2mg）的一次量肌注氟尼辛葡甲胺注射液（规格：5%；自制），一天1次，连用3天，D组为阴性对照组，发病不给药，E组为健康对照组，不发病不给药。

体温变化情况观察：给药后分别于0、4、8、12、24、36、48、72、120、144小时测定直肠温度，记录每组每头猪的体温，计算体温平均值，考察解热治疗效果。见表6。

表6：试验猪平均体温变化情况

结果：从表6看出，由盐酸多西环素+氟胺烟酸组成的复方注射液退热作用最好最快，单独使用盐酸多西环素注射液治疗退热效果低于加氟胺烟酸的复方注射液，而单独使用氟尼辛葡甲胺注射液退热幅度均低于前两种注射液，并且在第五天猪体温出现反复，说明炎症未消除，不能完全康复。不给药的阴性对照组体温持续走高，病情加重。不发病的健康对照组体温正常。表明：多西环素+氟胺烟酸组合解热效果分别优于盐酸多西环素和氟尼辛葡甲胺单方注射液，使用复方盐酸多西环素注射液能够及时快速减轻患畜的发热症状。

试验2治疗效果试验猪场选取自然感染伴发热诊断为猪流感伴呼吸道感染的病例，其症状为体温上升39.9-42.0℃，咳嗽、气喘、皮肤潮红、哆嗦、不食、无精神。随机分为A、B、C、D、E、F、G五组，A组（实施例10制备）15头，为复方盐酸多西环素注射液高剂量组。B组和C组（实施例7制备）分别28头和10头为复方盐酸多西环素注射液中、低剂量组。D组21头，为单方盐酸多西环素注射液（以实施例7处方制备，不加氟胺烟酸）药物对照治疗组。E组15头，为氟尼辛葡甲胺注射液（自制）药物对照治疗组，均以表7所示剂量给药，连用3天。F组10头为阴性对照组，发病不给药。G组10头为健康对照组，不发病不给药。

疗效判定指标：治愈标准为用药2-3天试验猪体温恢复正常，咳嗽、喘、哆嗦等病症消失，食欲、精神状态恢复正常，一周内不发热，无病症反复。有效标准为用药三天后试验猪体温下降，咳嗽、喘、哆嗦等病症减轻，食欲、精神状态好转或基本恢复。无效标准为用药后无明显好转，甚至死亡或一周内病症反复，即体温又出现升高，发病或病症加重等现象。试验结果见表7。

表7：治疗效果试验

注：Doxy:多西环素；Flu:氟胺烟酸

结果复方盐酸多西环素注射液使用高、中剂量治疗效果最佳。统计学分析x²检验（参考文献：《生物检定统计方法》周海钧，申蕴如人民卫生出版社，1983年），以3天之内治愈和未治愈数为指标，中剂量给药的复方盐酸多西环素注射液治疗组（B组）与同剂量给药的对照药物盐酸多西环素注射液治疗组（D组）以及对照药物氟尼辛葡甲胺注射液治疗组（E组）比较均差异显著（P<0.05）。以在规定治疗期有效和无效数为指标，复方盐酸多西环素注射液治疗组（B组）与盐酸多西环素注射液治疗组（D组）和氟尼辛葡甲胺注射液治疗组（E组）比较均差异极显著（P<0.01），表明盐酸多西环素加氟胺烟酸能明显提高治愈率和有效率，具有缩短疗程，增强疗效，防止继发感染的作用，其治疗效果优于盐酸多西环素和氟尼辛葡甲胺的单方注射液。

结论：由盐酸多西环素和氟胺烟酸组成的复方盐酸多西环素注射液临床使用效果优于单方盐酸多西环素注射液和氟尼辛葡甲胺注射液，其两药组合显示出抗菌同时辅以解热消炎的明显效果，起到显著的增效作用。

Claims (10)

1.一种兽用复方盐酸多西环素注射液，其特征在于所述的注射液每100ml含有：

注射用水，它的量为使所述注射液总量达到100ml的量；

所述注射液的pH值3.0-5.0。

2.根据权利要求1所述的兽用复方盐酸多西环素注射液，其特征在于所述的注射液每100ml含有：

注射用水，它的量为使所述注射液总量达到100ml的量；

所述注射液的pH值3.9-4.5。

3.根据权利要求1或2所述的注射液，其特征在于所述的抗氧剂是一种或多种选自甲醛合次硫酸氢钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠的抗氧剂。

4.根据权利要求1或2所述的注射液，其特征在于所述的镁离子化合物络合剂是MgCL₂·6H₂O或MgO。

5.根据权利要求1或2所述的注射液，其特征在于所述的有机溶剂是一种或多种选自α-吡咯烷酮、丙二醇、二甲基乙酰胺、聚乙二醇₄₀₀、聚乙二醇₂₀₀或甘油甲缩醛的有机溶剂。

6.根据权利要求1或2所述的注射液，其特征在于所述的pH调节剂是盐酸和/或乙醇胺。

7.一种权利要求1或2所述注射液的制备方法，其特征在于所述制备方法的步骤如下：

A、将0.15～0.70克抗氧剂溶于注射用水，得到一种水溶液，再把所述的水溶液加到45～60克有机溶剂中，混合均匀得到一种混合液；

B、在温度50～65℃下，往步骤A得到的混合液中依次加入镁离子化合物络合剂与2.5～20克以多西环素计的盐酸多西环素，所述络合剂与多西环素的摩尔比为1.0～1.8：1；搅拌均匀；再用pH调节剂将其pH调节至3.0～6.0，直至得到一种呈黄色透明的反应体系；

C、将0.1～0.30克抗氧剂与0.01～0.05克EDTA-2Na金属离子螯合剂溶于注射用水，再把得到的溶液加到步骤B的反应体系中，混匀，降温；

待所述反应体系的温度降低至35℃以下时，加入0.25～6.0克氟胺烟酸溶于5～20克有机溶剂的溶液，混匀，用盐酸和/或乙醇胺pH调节剂将其pH值调节至3.0～5.0，再用注射用水将所述反应体系总量达到100ml；

接着，采用有机滤膜过滤，收集滤液，充氮气分装，将其残氧量控制在以所述注射液体积计3%以下，然后采用蒸汽灭菌，得到所述的兽用复方盐酸多西环素注射液。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述的抗氧剂是一种或多种选自甲醛合次硫酸氢钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠的抗氧剂。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述的镁离子化合物络合剂是MgCL₂·6H₂O或MgO。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于在步骤A使用的有机溶剂是一种或多种选自α-吡咯烷酮、丙二醇、二甲基乙酰胺、聚乙二醇₄₀₀、聚乙二醇₂₀₀或甘油甲缩醛的有机溶剂；在步骤C中溶解氟胺烟酸所使用的有机溶剂是α-吡咯烷酮和二甲基乙酰胺。