CN103808832A

CN103808832A - 一种电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法

Info

Publication number: CN103808832A
Application number: CN201410094993.3A
Authority: CN
Inventors: 韩书磊; 陈欢; 刘彤; 吴帅宾; 侯宏卫; 胡清源
Original assignee: National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Current assignee: National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Priority date: 2014-03-16
Filing date: 2014-03-16
Publication date: 2014-05-21

Abstract

本发明公开了一种电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法。该方法包括以下步骤：采用超声萃取法制备待测样品溶液，并配置具有5级浓度梯度的混合标准工作溶液，利用高效液相色谱仪配荧光检测器进行分析，采用外标法定量。结果表明：该方法前处理简单，操作简便，分析时间短，且灵敏度高，回收率及精密度好，适合电子烟烟液中酚类化合物含量的测定。

Description

一种电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法

技术领域

本发明涉及电子烟产品理化检验技术领域，具体涉及一种电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法。

背景技术

近年来，吸烟与健康的话题一直受到人们的广泛关注，吸烟有害健康已受到人们普遍认可。2005年，中国签署《烟草控制框架公约》，使控烟具有法律依据，2012年，中国政府发布《中国烟草控制规划（2012-2015年）》，提出创造无烟环境，实施公共场所全面禁烟。电子烟（electrical cigarette，e-cigarette）又名电子烟碱传送系统（electronic nicotine delivery systems，ENDS），是一种外表类似于卷烟的新型烟碱摄入方式。多年来，电子烟以“保健”，“戒烟”，“清肺”等为宣传口号，以网络为主要营销途径，在中国地区销量大增。但是，针对电子烟产品的成分测定，安全性评估等方面的研究还很少。

大部分电子烟烟弹含有烟草提取物，而酚类化合物由烟株体内的糖类，脂类及蛋白质代谢形成，是植物重要的次生物质之一。这些酚类物质中，苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间甲酚，对甲酚及邻甲酚都有一定的毒性，其在传统卷烟主流烟气中，被列入加拿大政府46种有害成分名单和WHO“烟草制品管制研究小组”建议的管制成分清单中。因此，准确测定电子烟烟液中酚类化合物的含量具有重要意义，但是，目前还没有相关研究报道。

发明内容

本发明的目的正是基于上述现有状况而提供的一种电子烟烟液中主要酚类化合物的高效液相色谱测定方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法，包括以下步骤：

1）待测样品溶液的制备

准确称取约1 g电子烟烟液于5 mL容量瓶中，再加入约4 mL萃取溶液，然后置于超声波清洗器上以80 W的功率超声5 min，冷却至室温后，以萃取溶液定容，萃取溶液为浓度1%的乙酸水溶液；

2）标准工作溶液的制备

制备具有浓度梯度的苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间、对甲酚及邻甲酚的1%乙酸水溶液作为混合标准工作溶液；

3）高效液相色谱分析

利用高效液相色谱仪配备荧光检测器对上述所制待测样品溶液和混合标准溶液进行分离检测，得到相关色谱图；

4）标准曲线绘制及结果计算

所述混合标准工作溶液的制备方法为（12.5~250.0 ng/mL）：1）混合标准储备溶液Ⅰ的制备（0.25 mg/mL）：分别准确称取25 mg苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间甲酚，对甲酚及邻甲酚于100 mL棕色容量瓶中，以萃取溶液溶解定容；2）混合标准储备溶液Ⅱ的制备（5 μg/mL）：准确移取2 mL混合标准储备溶液Ⅰ于100 mL棕色容量瓶中，以萃取溶液定容；3）混合标准工作溶液的制备（12.5~250.0 ng/mL）：分别准确量取25，50，100，200，500 μL混合标准储备溶液Ⅱ于10 mL容量瓶中，以萃取溶液定容。

液相色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Luna 5u C18(2) 100A，150 mm × 4.60 mm，5 μm；柱温：30℃；流动相：乙酸-乙腈-水（1+30+69）；流速：1 mL/min；进样体积：10 μL；等度洗脱：10 min；荧光检测器条件：

本发明提供了一种测定电子烟烟液中酚类化合物含量的高效液相色谱方法，具有以下技术优势：

1. 本发明首次提供了一种首次测定电子烟烟液中酚类化合物的高效液相色谱方法，实现了电子烟烟液中苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间甲酚，对甲酚及邻甲酚含量的快速测定，填补了相关领域的技术空白，为相关部门的产品质量监督检验工作提供了技术支持。

2. 由于电子烟烟液成分相对比较简单，所以本专利采取等度洗脱模式，简化了洗脱程序，相比标准方法（YC/T 255-2008），分析时间降低到10 min以内，分析方法更为高效。

3. 本专利所提供的方法，前处理简单，不需净化，操作简便，快速，检出限（LOD）为0.011~0.038 μg/g，3个加标水平的回收率在95.71%~103.86%之间，相对标准偏差（RSD）小于3.53%，这表明该方法灵敏度高，重复性及回收率好。

表1： 7种酚类化合物的检出限及回收率

附图说明

图1为混合标准工作溶液色谱图。

图2为典型样品色谱图。

图3为实施例1中对苯二酚的标准曲线图。

图4为实施例1中间苯二酚的标准曲线图。

图5为实施例1中邻苯二酚的标准曲线图。

图6为实施例1中苯酚的标准曲线图。

图7为实施例1中间、对甲酚的标准曲线图。

图8为实施例1中邻甲酚的标准曲线图。

图3-8中的横坐标为浓度（ng/mL），纵坐标为荧光响应的积分面积。

具体实施方式

本发明通过以下具体实施例作进一步描述，但不限制本发明。

实施例1：

1. 仪器、试剂及仪器工作条件

1）仪器

DIONEX Ultimate 3000高效液相色谱仪，配荧光检测器（Thermo SCIENTIFIC公司）；AE163电子天平（感量：0.0001 g，瑞士Mettler公司）；Milli-Q Integral超纯水系统（密理博公司）；超声波发生器（KQ-700DB型数控超声波清洗器）。

2）试剂

苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间甲酚，对甲酚及邻甲酚，均为标准品；乙酸（超纯级，美国TEDIA公司）；超纯水。

3）液相色谱条件

色谱柱：Phenomenex Luna 5u C18(2) 100A，150 mm × 4.60 mm，5 μm；柱温：30℃；流动相：乙酸-乙腈-水（1+30+69）；流速：1 mL/min；进样体积：10 μL；等度洗脱：10 min；荧光检测器条件：

序号	时间/min	激发波长/nm	发射波长/nm
				1	0	284	332
2	1.50	275	315
				3	1.75	277	319
4	3.00	272	309
				5	4.00	273	323
6	10.00	284	332

2. 标准工作溶液的配制

1) 萃取溶液的制备。移取5 mL乙酸于500 mL棕色容量瓶中，以超纯水稀释定容。

2) 混合标准工作溶液的制备（12.5~250.0 ng/mL）。a）混合标准储备溶液Ⅰ的制备（0.25 mg/mL）：分别准确称取25 mg苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间甲酚，对甲酚及邻甲酚于100 mL棕色容量瓶中，以萃取溶液溶解定容；b）混合标准储备溶液Ⅱ的制备（5 μg/mL）：准确移取2 mL混合标准储备溶液Ⅰ于100 mL棕色容量瓶中，以萃取溶液定容；c）混合标准工作溶液的制备（12.5~250.0 ng/mL）：分别准确量取25，50，100，200，500 μL混合标准储备溶液Ⅱ于10 mL容量瓶中，以萃取溶液定容。

3. 标准工作曲线的确定

对标准工作溶液进行高效液相色谱测定，做出每个标准溶液中苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间、对甲酚及邻甲酚的浓度与峰面积比的标准曲线并计算得出回归方程，标准曲线应为线性关系，相关系数R²应不小于0.999。

4. 样品前处理及检测结果的确定

1) 样品前处理：准确称取约1 g电子烟烟液于5 mL容量瓶中，再加入约4 mL萃取溶液，然后置于超声波清洗器上以80 W的功率超声5 min，冷却至室温后，以萃取溶液定容。

2) 按照仪器测试条件测定样品，每个样品重复测定2次。每进行20次样品测定后，应加入一个中等浓度的工作标准溶液，如果测到的值与原值相差超过5%，则应重新进行整个标准曲线的制作。

3) 样品中目标物含量以如下公式所示：

Figure 2014100949933100002DEST_PATH_IMAGE006

式中：

X_i——电子烟烟液中目标化合物浓度，单位为微克每克（μg/g）；

C_i——提取液中目标化合物浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

C₀——空白实验中目标化合物浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V——提取液定容体积，单位为毫升（mL）；

m——电子烟烟液质量，单位为毫克（mg）。

以2次平行测定的平均值为最终测定结果，精确至0.01 μg/g，平行测量结果其相对平均偏差应小于10%。

根据前面所述的一种同时测定电子烟烟液中苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间、对甲酚及邻甲酚含量的高效液相色谱方法，选择一种电子烟烟液A，测得其中苯酚及间、对甲酚的含量分别为0.65 μg/g和0.11 μg/g，其他酚类化合物未检出。

实施例2

根据实施例1所述的高效液相色谱方法，选择一种电子烟烟液B，测得其中苯酚的含量为0.74 μg/g，其他酚类化合物未检出。

实施例3

根据实施例1所述的高效液相色谱方法，选择一种电子烟烟液C，测得其中邻苯二酚及苯酚的含量分别为0.81 μg/g和1.34 μg/g，其他酚类化合物未检出。

实施例4

根据实施例1所述的高效液相色谱方法，选择一种电子烟烟液D，测得其中邻苯二酚的含量为1.23 μg/g，其他酚类化合物未检出。

Claims

1.一种电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）待测样品溶液的制备

2）标准工作溶液的制备

3）高效液相色谱分析

4）标准曲线绘制及结果计算。

2.根据权利要求书1所述的电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法，其特征在于，混合标准工作溶液的制备方法为：1）混合标准储备溶液Ⅰ的制备：分别准确称取25 mg苯酚，对苯二酚，间苯二酚，邻苯二酚，间甲酚，对甲酚及邻甲酚于100 mL棕色容量瓶中，以萃取溶液溶解定容；2）混合标准储备溶液Ⅱ的制备：准确移取2 mL混合标准储备溶液Ⅰ于100 mL棕色容量瓶中，以萃取溶液定容；3）混合标准工作溶液的制备：分别准确量取25，50，100，200，500 μL混合标准储备溶液Ⅱ于10 mL容量瓶中，以萃取溶液定容。

3.根据权利要求书1所述的电子烟烟液中主要酚类化合物的测定方法，其特征在于，液相色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Luna 5u C18(2) 100A，150 mm × 4.60 mm，5 μm；柱温：30℃；流动相：乙酸-乙腈-水（1+30+69）；流速：1 mL/min；进样体积：10 μL；等度洗脱：10 min；荧光检测器条件：

序号时间/min 激发波长/nm 发射波长/nm 1 0 284 332 2 1.50 275 315 3 1.75 277 319 4 3.00 272 309 5 4.00 273 323 6 10.00 284 332