CN103804455A

CN103804455A - 一种新型达玛烷型三萜皂苷类化合物的制备与应用

Info

Publication number: CN103804455A
Application number: CN201210458420.5A
Authority: CN
Inventors: 许旭东; 田瑜; 孙晓波; 孙桂波; 张家鑫
Original assignee: Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Current assignee: Institute of Medicinal Plant Development of CAMS and PUMC
Priority date: 2012-11-15
Filing date: 2012-11-15
Publication date: 2014-05-21

Abstract

本发明涉及具有下述结构式的新型达玛烷型三萜皂苷类化合物：

Description

一种新型达玛烷型三萜皂苷类化合物的制备与应用

技术领域

本发明涉及通过植物化学提取分离手段从五加科楤木属植物辽东楹木(Aralia elata Seem．)抗心肌缺血有效部位分离得到1个新达玛烷型三萜皂苷，在该有效部位抗心肌缺血活性、新化合物的结构、制备方法及其在制备心血管治疗药物中的应用等方面申请专利保护。

背景技术：

龙牙楤木(Aralia elata(Miq)Seem)，又名辽东楤木，系五加科楤木属植物，其性味辛苦，有小毒，药用部位主要是根皮、树皮及叶。具有补气安神、活血化瘀、强精滋肾、健胃利水、利尿消肿、除湿止痛的功效。主要分布在我国东J匕地区包括黑龙江东北部、南部，吉林中部以东和辽宁东北部等，蕴藏量极为丰富，仅延边地区就可达3000吨，除此之外，还有大量人工栽培。

我龙牙楤术的主要有效成分为皂苷类化合物，其含量很高，可达8％。现代药理学研究表明，三萜皂苷是辽东楤木抗心肌缺血的主要活性成分。而本课题组的前期研究发现，通过现代色谱技术分离制备了辽东楤木皂苷，通过研究发现了辽东楤木皂苷治疗冠心病、心绞痛的新用途，目前以龙牙楤木总皂苷为成分研制的楹木心脉通胶囊已获得药物临床研究批件(批件2003L01111)，并已完成临床观察。临床研究表明龙牙楹木总皂苷在抗心肌缺血及临床用于气虚血瘀所致冠心病心绞痛时单独使用，可明显改善患者的心电图，缓解冠心病、心绞痛的症状，且服用时间与疗效成正比相关，作用效果明显强于阳性药地奥心血康胶囊和诺迪康胶囊。因此，辽东楤木在治疗和／或预防心血管疾病方面具有良好的研究开发前景。

本发明所涉及的是从辽东橡木总皂苷中得到的1个新达玛烷型三萜皂苷及其在心肌保护方面的应用。

本发明的有益效果和意义在于：充分利用辽东楤木药用植物资源，深入研究开发，寻找具有独特化学结构，以期发现可用于临床的抗心肌缺血药物。

发明内容

本实验室利用现代分离技术和结构测定手段对五加科楤木属植物辽东楤木总皂苷进行化学成分研究过程中，从中分离得到1个新达玛烷型三萜皂苷。通过对该化合物进行体外抗心肌缺血的药效学研究试验，发现其具有明显的抗心肌缺血活性。迄今为止，以上研究成果尚未有专利或文献报道。

本发明还提供制备这个新化合物的方法。

本发明的技术方案据此包含以下步骤：

辽东楤木药材用70％乙醇回流提取3次，过滤，滤液经减压浓缩除去乙醇得到提取液。提取液经大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用20％乙醇洗脱，继续用80％乙醇洗脱，回收乙醇，减压干燥(80℃)，得到干浸膏，干浸膏加70％乙醇溶解，滤过，滤液经回收溶剂后减压干燥，粉碎，制得总皂苷。楤木总皂苷利用硅胶柱色谱进行粗分离，以氯仿一甲醇一水不同比例的混合溶剂进行梯度洗脱，其中氯仿：甲醇：水(8:2:0.2)洗脱所得流分经反相ODS柱色谱分离，甲醇-水(60％)洗脱，回收溶剂，经反相高压制备液相色谱以乙腈：水(34：66)制备，得到化合物1(8mg)。其核磁共振氢谱和碳谱数据见表1，化学结构见图1。

表1化合物1的¹H-NMR(600MHz)和¹³C-NMR(150MHz)数据*

^*测试溶剂为氘代甲醇。

附图说明：

图1：化合物1的化学结构

图2：化合物1的体外心肌保护作用；

具体实施方式

下面实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：化合物1的制各

辽东楤木药材用70％乙醇回流提取3次，过滤，滤液经减压浓缩除去乙醇得到提取液。提取液经大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用20％乙醇洗脱，继续用80％乙醇洗脱，回收乙醇，减压干燥(80℃)，得到干浸膏，干浸膏加70％乙醇溶解，滤过，滤液经回收溶剂后减压干燥，粉碎，制得总皂苷。楤木总皂苷利用硅胶柱色谱进行粗分离，以氯仿-甲醇-水不同比例的混合溶剂进行梯度洗脱，其中氯仿：甲醇：水(8∶2∶O.2)洗脱所得流分经反相ODS柱色谱分离，甲醇-水(60％)洗脱，回收溶剂，经反相高压制备液相色谱以乙腈：水(34∶66)制备，得到化合物1(8mg)。

实施例2：化合物1的心肌保护活性

采用H9c2细胞系，建立H₂O₂心肌细胞损伤模型，观察化合物1对H₂O₂诱导的心肌细胞损伤的量效、时效关系，采用MTT法检测细胞活力，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)及超氧化物歧化酶(SOD)活力，H33342检测细胞凋亡。结果显示与正常对照组相比，模型组细胞存活率降低、细胞内LDH含量降低，漏出量增加、SOD活性降低、MDA含量升高、CAT活性降低(p＜0．001)；与模型组相比，预孵育6h后，化合物1各处理组(50、100ug／ml)细胞存活率明显增加(p＜0．001)，化合物1能非常明显降低LDH漏出量(p＜0．001)、明显增强SOD和CAT活力、降低MDA含量(p＜0．01)。以上结果提示化合物1对H₂O₂诱导的心肌细胞损伤有明显的保护。

实施例3：本发明药用植物提取物或有效部位硬胶囊剂的制备例

将实施例1或2所制得的化合物加入干淀粉1．1份作为填充剂，加入1-3％滑石粉作助流剂，混匀后用空心胶囊充填制得硬胶囊剂。

实施例4：本发明中的药用植物提取物或有效部位片剂的制备例

将实施例1或2所制得的化合物加入羟丙基纤维素1.1份做崩解剂，加入药用糊精0．4份作粘合剂，加入适量50-95％的乙醇做润滑剂，湿法制粒、干燥、整粒后加入1-3％的润滑剂混合均匀，压制成片剂。

实施例5：本发明中的药用植物提取物或有效部位分散片的制备例

将实施例1或2所制得的化合物和载体材料4份共同溶于50-95％的乙醇中，用喷雾干燥法干燥后，过筛，加入2．0份的微晶纤维素做崩解剂，加入适量微粉硅胶做助流剂，混合均匀后将粉末直接压制成片剂，即得分散片。

Claims

1.具有下式结构的达玛烷型三萜皂苷类化合物：

2.一种制备权利要求1的化合物的方法，包括下述步骤：

(1)醇-水系统提取辽东樬木药材；

(2)浓缩提取液，得到浸膏；

(3)将步骤(2)中所得的浸膏溶解于水中，经大孔吸附树脂柱色谱分离；

用蒸馏水先脱至无色，然后用乙醇和水体积比为1:9的溶剂洗脱至无色，然后用乙醇和水体积比为8:2的溶剂洗脱，洗脱液浓缩得到洗脱物。

(4)将步骤(3)中的洗脱物上样至硅胶色谱柱上，用氯仿:甲醇：水体积比为4:1;0.1的混合溶剂洗脱，对所得的流份进行浓缩，得到浓缩物。

(5)将步骤(4)中使用氯仿:甲醇：水体积比为4:1:0.1的混合溶剂洗脱下来的流份上样至凝胶柱，用甲醇洗脱，按照色带收集流份，得到细流份；

(6)将步骤(5)中使用甲醇洗脱下来的流份上样至高效液相色谱，用水：甲醇的体积比为1:1的混合溶剂进行洗脱，收集在液相色谱保留时间为22.0min的流份，浓缩得到该化合物。

3.根据权利要求2的方法，药材提取醇水系统中的醇包括乙醇、甲醇，其中醇的体积是水的2～4倍。

4.根据权利要求2的方法，还包括使用薄层色谱和／或高效液相色谱检验所得的各化合物。

5.根据权利要求2的方法，其中所述步骤(4)中所述的硅胶色谱柱为粒径50-74μm的硅胶色谱柱；和／或其中所述步骤(4)中所述的硅胶色谱柱为粒径10-40gm的硅胶色谱柱。

6.根据权利要求2的方法，其中所述步骤(7)中所述的凝胶色谱柱为Sephadex LH-20柱。

7.一种用于治疗心肌缺血的组合物，含有至少一种权利要求1的化合物。

8.权利要求1的化合物用于制备治疗心肌缺血的药物的用途。

9.根据权利要求7的用途，其中所述心肌缺血为缺血性心肌病、心肌梗塞造成的心肌损伤。