CN103792309A - 酸性橙ⅱ标准检测样品的制备方法 - Google Patents
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Abstract
酸性橙Ⅱ标准检测样品的制备方法，涉及一种标准检测样品的制备方法，所述方法包括酸性橙Ⅱ的合成与纯化：在三口反应瓶内加水盐酸，均匀加入对氨基苯磺酸钠溶液和亚硝酸钠溶液混合物，保持酸过量，得到悬浮体的重氮液；在另一三口反应瓶内加水、2-萘酚，搅拌下加入液碱，升温使之溶解后加冰冷却，加盐，快速加入重氮盐全量的一半，再加盐，然后将另一半重氮盐均匀加完，并调整pH值再加盐，继续搅拌至重氮盐消失为偶合终点，压滤，滤饼烘干得产品；该方法制得纯度高、含量准确、均匀性和稳定性均符合要求的标准样品，解决我国检测用标准品依赖进口，为我国食品安全检验检测提供全面实物标准保障，为我国各级政府食品安全监控提供了技术支撑。
Description
技术领域
本发明涉及一种标准检验样品的制备方法，特别是涉及一种酸性橙Ⅱ标准检测样品的制备方法。
背景技术
标准样品是具足够均匀的一种或多种化学的、物理的、生物学的、工程技术的或感官的等性能特征，经技术鉴定，并附有说明有关性能数据证书的一批样品。是以其性质与供试样品进行比较的质量均一的实物样品，并且有适合使用目的的纯度。
酸性橙Ⅱ又名金橙Ⅱ、二号橙、桔黄橙或酸性金黄Ⅱ，俗名金黄粉，化学名为2-萘酚偶氮对苯磺酸钠，是一种酸碱指示剂。医学上用于组织切片染色，在纺织上用作着色剂。酸性橙Ⅱ属非食用色素，食品中不允许加入。但是由于酸性橙Ⅱ色泽鲜艳、着色稳定、价廉等特点，一些不法商贩为了牟取暴利将其用于食品生产与加工，严重危害了消费者身体健康。
因此，及时准确判断食品中是否存在这三种非食用色素，建立快速、准确的食品中非食用色素酸性橙Ⅱ的测定方法是非常必要的。而进行定量方法的开发就需要高纯度的标准品，采用标准样品，才能保证检测结果在国际交往中的准确性、可比性、可溯源性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种酸性橙Ⅱ标准检测样品的制备方法，该方法制得纯度高、含量准确、均匀性和稳定性均符合要求的标准样品，解决我国检测用标准品依赖进口，为我国食品安全检验检测提供全面实物标准保障，为我国各级政府食品安全监控提供了技术支撑。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
酸性橙Ⅱ标准检测样品的制备方法，所述方法包括酸性橙Ⅱ的合成与纯化：在三口反应瓶内加水盐酸，均匀加入对氨基苯磺酸钠溶液和亚硝酸钠溶液混合物，保持酸过量，得到悬浮体的重氮液；在另一三口反应瓶内加水、2-萘酚，搅拌下加入液碱，升温使之溶解后加冰冷却，加盐，快速加入重氮盐全量的一半，再加盐，然后将另一半重氮盐均匀加完，并调整pH值再加盐，继续搅拌至重氮盐消失为偶合终点，压滤，滤饼烘干得产品；粗品经过重结晶分离后，采用薄层色谱进行分离，甲醇与三氯甲烷比列为1：16时；样品进行硅胶柱净化，甲醇与三氯甲烷混合液梯度洗脱，洗脱液氮吹后干燥的纯品取粗品与硅胶搅拌均匀后，装柱后依次用石油醚润洗、二氯甲烷洗涤后，用二氯甲烷/甲醇洗脱目的物，洗脱液在避光条件下挥干待测；在三口反应瓶内加水10 mL和36%的盐酸2.50 g，控制反应温度为10-15℃，于10 min左右均匀加入15%的对氨基苯磺酸钠溶液2.0 g和30%的亚硝酸钠溶液10 mL的混合物，于10-15℃，保持酸过量，亚硝酸微过量的条件下搅拌0.5 h，得到悬浮体的重氮液；在另一三口反应瓶内加水5 mL，2-萘酚1.62 g，搅拌下加入30%的液碱1.63 g，升温到45-50℃，使之溶解后加冰冷却到8℃，加盐0.5 g，快速加入重氮盐全量的一半，再加盐1.0 g，然后将另一半重氮盐在1 h内均匀加完，并调整pH值为1左右搅拌1 h，再加盐2 g，继续搅拌至重氮盐消失为偶合终，1 h，压滤，滤饼于100-105℃烘干，得产品10 g。
所述的酸性橙Ⅱ标准检测样品的制备方法，所述酸性橙Ⅱ的合成与纯化：粗品经过重结晶分离后，采用薄层色谱进行分离，甲醇与三氯甲烷比列为1：16时，在薄层上主产物与其他杂质得到很好的分离；样品进行硅胶柱净化，甲醇与三氯甲烷混合液梯度洗脱，洗脱液氮吹后干燥的纯品。取1.2 g粗品与25 g硅胶100-140目搅拌均匀后，装柱后依次用100 mL石油醚润洗、200 mL二氯甲烷洗涤后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇16:1洗脱目的物，洗脱液在避光条件下挥干待测。
附图说明
图1为本发明酸性橙Ⅱ标准样品的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合附图所示实施例，对本发明作进一步详述。
实施例1：
酸性橙Ⅱ的合成与纯化：在三口反应瓶内加水10 mL和36%的盐酸2.50 g，控制反应温度为10-15℃，于10 min左右均匀加入15%的对氨基苯磺酸钠溶液2.0 g和30%的亚硝酸钠溶液10 mL的混合物，于10-15℃，保持酸过量，亚硝酸微过量的条件下搅拌0.5 h，得到悬浮体的重氮液。
在另一三口反应瓶内加水5 mL，2-萘酚1.62 g，搅拌下加入30%的液碱1.63 g，升温到45-50℃，使之溶解后加冰冷却到8℃，加盐0.5 g，快速加入重氮盐全量的一半，再加盐1.0 g，然后将另一半重氮盐在1 h内均匀加完，并调整pH值为1左右搅拌1 h，再加盐2 g，继续搅拌至重氮盐消失为偶合终点(约1 h)。压滤，滤饼于100-105℃烘干，得产品约10 g。
粗品经过重结晶分离后，采用薄层色谱进行分离，甲醇与三氯甲烷比列为1：16时，在薄层上主产物与其他杂质得到很好的分离；样品进行硅胶柱净化，甲醇与三氯甲烷混合液梯度洗脱，洗脱液氮吹后干燥的纯品。取1.2 g粗品与25 g硅胶（100-140目）搅拌均匀后，装柱后依次用100 mL石油醚润洗、200 mL二氯甲烷洗涤后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇（16:1）洗脱目的物，洗脱液在避光条件下挥干待测。
将上述制得酸性橙Ⅱ标准品，用棕色瓶进行分装，编号后置于室温、通风密封保存即可。
进行纯度检查及含量测定：
薄层色谱纯查， HPLC 纯度检查：在酸性橙Ⅱ标准样品的制备中，选择HPLC峰面积归一法进行含量测定。
所用仪器及条件：高效液相色谱仪（岛津LC-20A），配二极管阵列检测器或可变波长紫外检测器；色谱柱： C18（250 mm×4.6mm, 5 μm）或相当者。
操作条件：酸性橙Ⅱ：流动相：甲醇/（20 mM）醋酸铵=60/40；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃；检测波长：480 nm；进样量：10 μL。定量测定：测试液配置：准确称取1.0 g的样品，经50 mL乙醇溶解，水稀释定容后，配制成10 mg/L的样液，在上述液相色谱法条件下进行面积归一法定量。色谱条件应保证试样中所有杂质能够与待测物分离，并且酸性橙Ⅱ的保留时间合适。进样测定，计算试样中酸性橙Ⅱ的纯度。在所选择的色谱条件下，酸性橙Ⅱ的保留时间为6.41 min。
仪器与设备：高效液相色谱仪（日本岛津公司LC-20A），紫外-可见分光光度仪（日本岛津公司），液质质联用仪（美国AB公司），INOVA-600核磁共振仪（Varian公司）。
材料与试剂：浓盐酸、苯胺、亚硝酸钠、尿素、间苯二胺、对氨基苯磺酸钠、2-萘酚、氯化钠、乙二醇、4,4一二甲氨基二苯甲烷、硫磺、氯化氨、分析纯95%乙醇、分析纯甲醇（上海安谱科学仪器有限公司）。液相用甲醇（色谱纯，TEDIA COMPANY ）；水为去离子水。
Claims (2)
1.酸性橙Ⅱ标准检测样品的制备方法，其特征在于，所述方法包括酸性橙Ⅱ的合成与纯化：在三口反应瓶内加水盐酸，均匀加入对氨基苯磺酸钠溶液和亚硝酸钠溶液混合物，保持酸过量，得到悬浮体的重氮液；在另一三口反应瓶内加水、2-萘酚，搅拌下加入液碱，升温使之溶解后加冰冷却，加盐，快速加入重氮盐全量的一半，再加盐，然后将另一半重氮盐均匀加完，并调整pH值再加盐，继续搅拌至重氮盐消失为偶合终点，压滤，滤饼烘干得产品；粗品经过重结晶分离后，采用薄层色谱进行分离，甲醇与三氯甲烷比列为1：16时；样品进行硅胶柱净化，甲醇与三氯甲烷混合液梯度洗脱，洗脱液氮吹后干燥的纯品取粗品与硅胶搅拌均匀后，装柱后依次用石油醚润洗、二氯甲烷洗涤后，用二氯甲烷/甲醇洗脱目的物，洗脱液在避光条件下挥干待测；在三口反应瓶内加水10 mL和36%的盐酸2.50 g，控制反应温度为10-15℃，于10 min左右均匀加入15%的对氨基苯磺酸钠溶液2.0 g和30%的亚硝酸钠溶液10 mL的混合物，于10-15℃，保持酸过量，亚硝酸微过量的条件下搅拌0.5 h，得到悬浮体的重氮液；在另一三口反应瓶内加水5 mL，2-萘酚1.62 g，搅拌下加入30%的液碱1.63 g，升温到45-50℃，使之溶解后加冰冷却到8℃，加盐0.5 g，快速加入重氮盐全量的一半，再加盐1.0 g，然后将另一半重氮盐在1 h内均匀加完，并调整pH值为1左右搅拌1 h，再加盐2 g，继续搅拌至重氮盐消失为偶合终，1 h，压滤，滤饼于100-105℃烘干，得产品10 g。
2.根据权利要求1所述的酸性橙Ⅱ标准检测样品的制备方法，其特征在于，所述酸性橙Ⅱ的合成与纯化：粗品经过重结晶分离后，采用薄层色谱进行分离，甲醇与三氯甲烷比列为1：16时，在薄层上主产物与其他杂质得到很好的分离；样品进行硅胶柱净化，甲醇与三氯甲烷混合液梯度洗脱，洗脱液氮吹后干燥的纯品；取1.2 g粗品与25 g硅胶100-140目搅拌均匀后，装柱后依次用100 mL石油醚润洗、200 mL二氯甲烷洗涤后，用200 mL的二氯甲烷/甲醇16:1洗脱目的物，洗脱液在避光条件下挥干待测。
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