CN1037714A - 从中药牛膝中提取牛膝多糖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明是从中药牛膝中提取牛膝多糖的方法。 本方法以中药牛膝为原料，对其浸泡液用与水互溶的 有机溶剂进行二级分级沉淀后，再透析及冷冻干燥， 得到的粗牛膝多糖再进行一次醇类沉淀后，即得牛膝 多糖精制品。本发明提供的牛膝多糖具有分子量小， 有明显的增强机体免疫功能，保肝和抑制肿瘤等功 能，而且其制造工艺简单，原料来源广，生药中含量 高，产物的纯度高，毒性很低，小鼠一次注射LD50为 1534毫克/千克，口服20,000毫克/千克无死亡。

Description

本发明属于从中草药中提取多糖药物技术领域。
多糖在生命现象中参与细胞的各种活动，具有复杂的多方面功能，从而以多糖作为药物的研究及开发正在迅速发展。目前，从天然产物或发酵产物中分离、提取多糖，国内外均采用化学方法的手段，其方法一般都先将原料进行脱脂，然后根据多糖的特性用水、稀酸或稀碱进行抽提，提取液经浓缩后以醇类等有机溶剂使多糖沉淀析出，得多糖产物。在上述多糖的提取方法中存在着以下几点不足：1，对直接采取醇析或其它有机溶剂沉淀法所获得的多糖常伴有杂质蛋白质，而除去杂质蛋白质一则费时，需进一步精制，二则在除去蛋白质的同时，可能会使多糖发生降阶;2，从天然植物原料中提取得到的多糖，因常含有酚型化合物，如暴露在空气中进行提取，会得到颜色较深的产物，其用活性炭等吸附剂也难于使其脱色，而用氧化剂进行脱色，这也容易使多糖发生降阶。总之，上述方法制得的多糖产物往往含有较多的杂质，须进一步的精制提纯。
本发明的目的是提供以中药牛膝为原料，从中提取牛膝多糖的方法，得到的牛膝多糖产物纯度高，其提取方法具有工艺简单，原料来源广。
中药牛膝是我国的传统中药，入药为根，据医书记载具有“补肝肾，强筋骨，止腰膝酸麻”等功效。我们把从中药牛膝提取得到的一种多糖，称之为“牛膝多糖”。
本发明的从中药牛膝中提取牛膝多糖的方法为，将生药牛膝用水浸泡，其浸泡液可与水互溶的有机溶剂进行二级分级沉淀，有机溶剂与牛膝浸泡液的比例（体积比）为第一级0.8-2.5∶1，第二级为0.5-1.5∶1，将第二级沉淀物用水溶解后进行透析和冷冻干燥，得粗多糖产物或将生药牛膝用水浸泡，其浸泡液先进行透析及冷冻干燥，配成1-20%溶度的水溶液，再用与水互溶的有机溶剂进行二级分级沉淀，其有机溶剂加入量为（体积比）第一级是0.8-2.5倍，第二级为0.5-1.5倍，得第二级沉淀物即为粗牛膝多糖产物。用本发明方法生产所得的粗牛膝多糖产物可精制提纯，即将粗多糖产物配成5-30%溶度的水溶液，加入1-8倍体积比的低级醇进行沉淀，沉淀用水溶解后透析和冷冻干燥，得牛膝多糖精制品。
在上述方法中，所述的低级醇类为甲醇、乙醇、丙醇，所述的可与水互溶的有机溶剂为丙酮，二甲基亚砜，二甲基甲酰胺及低级醇类。
用本发明的方法获得的牛膝多糖，其外观为微黄色疏松状固体，用气相渗透法测得其数均分子量小于10000，比旋度为负值，不含氨基糖和糖醛酸，在红外光谱上有810厘米-1，870厘米-1的甘露糖的特征吸收峰，经纸层析、气相层析、毛细管色谱和质谱等化学和仪器分析结果表明，从中药牛膝中提取得到的牛膝多糖是由葡萄糖和甘露糖所组成，其克分子比为1.0∶0.66。
药理试验表明，牛膝多糖具有显著增强机体免疫的功能，包括体液免疫功能和T细胞中解的细胞免疫及吞噬细胞功能，同时还具有良好的保护肝脏作用和抑制肿瘤生长的作用。例如，将小鼠灌胃0.18%浓度的四氯化碳，油溶液剂量为10毫升/千克，引起小鼠肝损伤，然后注射牛膝多糖，其剂量为50毫克/千克，2天后该小鼠的GPT指标即由120±10单位降为正常，肝伤程度明显减轻。小鼠接种S-180肉瘤后次日开始注射牛膝多糖50毫克/千克，连续10天，第13-14天解剖，与对照组比较，抑瘤率为42-48%。
本发明提供的牛膝多糖具有分子量小，疗效好，不但注射有效，口服也有效，而且其制备工艺简单，原料来源广，生药中含量高，产物的纯度高，毒性很低，小鼠一次注射LD50为1534毫克/千克，口服20，000毫克/千克无死亡。
为了对本发明的进一步理解，以下实施例加以说明。
实例1粗牛膝多糖产物的制备。
取切成片的牛膝生药2000克，加蒸馏水10000毫升，浸泡48小时后，滤去残渣，得滤液6000毫升，室温离心除去不溶物得上清液（Ⅰ），在（Ⅰ）中加入12000毫升工业丙酮，有大量沉淀产生，离心取出沉淀得上清液（Ⅱ），在（Ⅱ）中再加入13000毫升工业丙酮，有大量白色沉淀产生，让沉淀自然沉降，放置过液，取出沉淀，用适量蒸馏水溶解，自来水流水透析72小时，然后离心除去不溶物，冷冻干燥，得微黄疏松状固体42克，为粗多糖产物。
实例2，粗牛膝多糖产物的制备。
将生药牛膝2000克切成片状，加水10000毫升，在室温浸泡48小时后滤去残渣，滤液用自来水流水透析48小时，离心除去不溶物，上清液冷冻干燥得黄色固体243克，然后取上述固体物120克，配制成10%浓度的水溶液1200毫升，加入2400毫升工业丙酮，有大量沉淀产生，离心除去沉淀物，在上清液中再加入2800毫升工业丙酮，有大量白色沉淀产生，离心取出沉淀，加适量蒸馏水溶解，流水透析48小时后冷冻干燥，得粗牛膝多糖产物18克。
实例3，粗牛膝多糖产物的精制。
将粗牛膝多糖用水溶解，配成13%的水溶液，再加入6倍体积量的无水乙醇，产生白色沉淀，离心取出沉淀，用水溶解后，进行流水透析，冷冻干燥，即得牛膝多糖精制品。

Claims (2)

1、一种从中药牛膝中提取牛膝多糖的方法，其特征在于将生药牛膝用水浸泡，其浸泡液用与水互溶的有机溶剂进行二级分级沉淀，有机溶剂与牛膝浸泡液的比例(体积比)为第一级0.8-2.5∶1，第二级为0.5-1.5∶1，将第二级沉淀物再用水溶解后进行透析和冷冻干燥，得粗多糖产物或将生药牛膝用水浸泡其浸泡液先进行透析及冷冻干燥，配成1-20%浓度的水溶液，再由可与水互溶的有机溶剂进行二级分级沉淀，其有机溶剂加入量为(体积比)第一级是0.8-2.5倍，第二级为0.5-1.5倍，得第二级沉淀物即为粗多糖产物，将粗多糖产物配成5-30%浓度的水溶液，加入1-8倍体积比的低级醇进行沉淀，沉淀用水溶解后透析和冷冻干燥，得牛膝多糖精制品。
2、如权利要求1所述的制备方法中，其特征在于所述的低级醇为甲醇，乙醇，丙醇，所述的可与水互溶的有机溶剂为丙酮，二甲基亚砜，二甲基甲酰胺及低级醇类。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN104804107A (zh) * 2015-04-24 2015-07-29 成都中医药大学 一种波棱瓜子多糖提取方法,该提取方法得到的波棱瓜子多糖提取物及用途

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