CN103755507B - 一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于农产品辐射加工领域,也属于天然活性成分提取领域。一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法,其特征是包括如下步骤:1)将植物粉碎成40~60目,得到植物粉;植物粉中加入20-50倍重量的有机溶液,封口;2)辐照源常温低剂量辐照,控制吸收剂量1~6kGy;3)过滤,弃沉淀,得到总黄酮粗提液。本发明将常温低剂量辐照和溶剂提取同步进行,控制原料种类、辐照吸收剂量和料液比,促进植物粉末中黄酮类物质的解离溶出;与超声波法相比,本发明方法的黄酮得率提高2~6.5倍;与无溶剂辐照相比,本发明方法的最优辐照剂量降低至3~4kGy,黄酮得率提高0.9-2.5倍,黄酮提取速率提高3倍以上。本发明的方法能耗低、速度快,工艺简单、节约大量生产成本。
Description
技术领域
本发明属于农产品辐射加工领域,也属于天然活性成分提取领域,具体的涉及一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法。
背景技术
黄酮(flavone),是黄酮类化合物的总称,泛指两个具有酚羟基的苯环(A-与B-环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物,它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方起着重要的作用。黄酮类化合物种类繁多,其中又以黄酮醇类中的芦丁(芸香苷)、异黄酮类中的大豆素、黄烷类中的儿茶素及花青素为代表。黄酮类化合物具有良好的抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、降胆固醇、降血压、提高血管弹性、预防骨质疏松等作用。
目前,将辐照技术运用于植物活性物质提取,尤其将辐照和溶剂提取同步进行的研究,鲜见报导。从原理上讲,本发明方法的辐照和溶剂提取同时进行,高能射线是先作用于溶剂,使溶剂分解产生羟基自由基、氢自由基和水合电子,它们与物质中的有机成分发生连锁反应,从而降解或交联产生目标化合物。辐照溶液时,不光产生降解反应还可能产生交联反应,因此过程中原料种类、辐照剂量和料液比的控制就显得极为重要。
利用辐照技术辅助提取植物中活性物质,相关专利如公开号103275136A、101961357A,发明人都是采取辐照预处理植物原料后,再进行溶剂提取。该方法由于高能射线作用基质和原理不同与本发明方法有本质区别,此外该方法不仅操作繁琐耗时,且过程中需要较高能耗(即较高辐射剂量)。
发明内容
针对以上问题,本发明的目的是提供一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法,该方法将辐照与溶剂提取同步进行,控制辐照剂量和料液比,提高植物中黄酮类物质的得率,可以降低能耗、节省提取步骤和时间。
为了实现上述目的,本发明所采用的技术方案是:一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法,其特征是包括如下步骤:
1)将植物粉碎成40~60目,得到植物粉;植物粉中加入20-50倍重量的有机溶液(即有机溶液的重量是植物粉的重量的20-50倍,或者:植物粉:有机溶液=1g:20-50mL,位于容器中),封口(即密封);
2)辐照源常温低剂量辐照,控制吸收剂量1~6kGy(即低剂量辐照);
3)过滤,弃沉淀,得到总黄酮粗提液。
所述步骤1)中,所述植物为食源性植物、药源性植物、农业副产物等中的任意一种或多种按任意配比的混合。
所述食源性植物为水果、蔬菜、豆类、茶叶等中的任意一种或多种按任意配比的混合;所述药源性植物为中药材等;所述农业副产物为农业作物的秸秆、枝(茎)叶等中的任意一种或多种按任意配比的混合。
所述中药材为落花生茎叶、黄芩、葛根、陈皮、银杏叶等中的任意一种或多种按任意配比的混合;所述的农业作物为水稻、大麦、小麦、荞麦、玉米、高粱、大豆、芦蒿等中的任意一种或多种按任意配比的混合。
所述步骤1)中,有机溶液为醇溶液,优选的,为乙醇溶液,浓度为60~90wt%。
所述步骤1)中,优选的,植物粉中加入30~40倍有机溶液,封口方式可为非真空封口或抽真空封口。
所述步骤2)中,辐照源为60Co-γ射线、x射线、电子束等中的任意一种,优选的,为60Co-γ射线。
所述步骤2)中,常温指0~40℃。
所述步骤2)中,优选的,控制吸收剂量范围为3~4kGy。
本发明的优点和积极效果是:本发明将常温低剂量辐照和溶剂提取同步进行,控制原料种类、辐照吸收剂量和料液比,促进植物粉末中黄酮类物质的解离溶出;与超声波法相比,本发明方法的黄酮得率提高2~6.5倍;与无溶剂辐照相比,本发明方法的最优辐照剂量降低至3~4kGy,黄酮得率提高0.9-2.5倍,黄酮提取速率提高3倍以上。本发明的方法能耗低、速度快,工艺简单、可为有辐照设备的企业节约大量生产成本。
附图说明
图1是本发明辐照剂量对落花生茎叶中总黄酮提取率的影响图。
具体实施方式
为研究是否可将辐照和溶剂提取同时进行,我们挑选了几个具有代表性的黄酮类物质进行测定,分别为落花生茎叶、蓝莓、茶叶、黄豆芽、大豆秸秆中的芦丁、花色苷、儿茶素及异黄酮,分述如下。实施例仅阐明本发明,不限制本发明的范围。
实施例1
辐照剂量对落花生茎叶中总黄酮提取率的影响
将落花生茎叶粉碎成40~60目,得到落花生茎叶粉末;称取2.00g落花生茎叶粉末24份置于包装袋中(对应24个包装袋),分别加入70wt%乙醇(乙醇溶液)100mL,用封口机封口,辐照源为60Co-γ射线,25℃辐照,吸收剂量控制为1-8kGy。辐照后过滤,取上清液待测(得到总黄酮粗提液)。
总黄酮以芦丁计,检测方法参照GBT20574-2006。配制芦丁标准品,4、8、12、16、20、24μg/mL,分别加三氯甲烷至5mL,加入溴甲酚绿缓冲液和0.2mol/LNaOH溶液各1mL,振摇1min,静置30min,取澄清的三氯甲烷液在415nm波长处进行测定。以浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,制作标准曲线。得标准曲线方程为y=0.0305x-0.0083,R2=0.9999。取待测液(上清液)1.0mL,加三氯甲烷至5mL,加溴甲酚绿缓冲液和0.2mol/LNaOH溶液各1mL,振摇1min,静置30min,取澄清的三氯甲烷液,以空白做参比,415nm处测其吸光度。得率(%)=上清液中芦丁含量×100%/样品质量,结果见表1。
表1不同辐照剂量下落花生茎叶中总黄酮(以芦丁计)得率
落花生茎叶有促睡眠作用,作为中草药,我们测定了辐照剂量对其中总黄酮含量的影响。结果(表1)显示,辐照和溶剂提取同时进行是可行并且高效的。此外,钴60辐照剂量对落花生茎叶中黄酮的提取率有明显影响,呈先上升后下降的趋势,其中辐照剂量为4kGy时落花生茎叶中总黄酮含量最高,为0.90wt%,是超声波法提取测得总黄酮含量的4.5倍。由于过高辐照剂量会导致黄酮物质分解,使其含量降低,因此辐照剂量控制在3~4kGy是比较合适的。
本发明辐照剂量对落花生茎叶中总黄酮提取率的影响见图1。
实施例2
辐照(加溶剂)对蓝莓中总黄酮提取率的影响
将蓝莓粉碎成40~60目,得到蓝莓粉末;称取2.00g蓝莓粉末3份置于包装袋中(对应3个包装袋),分别加入75wt%乙醇80mL,用封口机封口,辐照源为60Co-γ射线,30℃辐照,吸收剂量控制为3kGy,辐照后过滤,取上清液待测。对照组一(超声波法),称取2.00g蓝莓粉末3份,分别加入75%乙醇100mL,30℃超声(功率90w,频率40kHz)提取2h,取上清液待测。对照组二(无溶剂辐照法),称取2g蓝莓粉末置于包装袋中,30℃辐照3kGy剂量,然后加入75%乙醇100mL,震荡提取1h,过滤取上清液待测(得到总黄酮粗提液)。
总黄酮以花色苷计,采用PH示差法测定蓝莓汁中的花色苷含量。吸取1mL蓝莓汁于10mL容量瓶中,以pH4.5[1NNaAc:1NHCl:H2O=100:60:90(v/v)]和pH1.0[0.2NKCl:0.2NHCl=25:67(v/v)]的缓冲液定容,避光平衡2小时,在波长510nm下测定吸光值A,以蒸馏水为空白。花色苷含量计算如下:式中V—稀释体积(mL);n—稀释倍数;W—样品质量(g);A—吸光值。结果见表2。
表2不同提取方法蓝莓总黄酮(以花色苷计)的得率
实验结果(表2)显示,控制剂量为3kGy时,辐照法比超声波法更有效。与超声波法相比,辐照(加溶剂)可将蓝莓花色苷含量提高5倍;与无溶剂辐照相比,本发明辐照(加溶剂)法的花色苷含量是提高1.5倍以上。
实施例3
辐照(加溶剂)对茶叶中总黄酮提取率的影响
将茶叶粉碎成40~60目,得到茶叶粉;称取2g茶叶粉末置于包装袋中,加入80wt%乙醇100mL,用密封机封口。辐照源为60Co-γ射线,25℃辐照,吸收剂量控制为3kGy,辐照后过滤,取上清液待测。对照组一(超声波法),称取2.00g茶叶粉末,加入80%乙醇100mL,25℃超声(功率90w,频率40kHz)提取2h,取上清液待测。对照组二(无溶剂辐照法),称取2g茶叶粉末置于包装袋中,25℃辐照3kGy剂量,然后加入80%乙醇100mL,震荡提取1h,过滤取上清液待测(得到总黄酮粗提液)。
总黄酮以儿茶素计,得率=上清液中儿茶素含量×100%/样品质量,儿茶素检测方法参照GB/T8313-2008,结果见表3。
表3不同提取方法茶叶总黄酮(以儿茶素计)的得率
实验结果(表3)表明,控制剂量为3kGy时,辐照法依然比超声波法更有效。与超声波法相比,辐照(加溶剂)可将茶叶儿茶素含量提高2.2倍;与无溶剂辐照相比,本发明辐照(加溶剂)可将茶叶儿茶素含量提高近1倍。
实施例4
辐照(加溶剂)对黄豆芽中总黄酮提取率的影响
黄豆芽冻干后粉碎成40~60目,称取2g黄豆芽粉末置于包装袋中,加入80wt%甲醇100mL,用密封机封口。辐照源为60Co-γ射线,25℃辐照,吸收剂量控制为4kGy,辐照后过滤,取上清液待测。对照组一,取2g黄豆芽粉末,加80wt%甲醇100mL,超声萃取(功率90w,频率40kHz)2h,离心,取上清液待测。对照组二,称取2g黄豆芽粉末置于包装袋中,25℃辐照4kGy剂量,然后加入80wt%甲醇100mL,震荡提取1h,过滤取上清液待测。(得到总黄酮粗提液)
测定方法:配制染料木素标准品0.0005、0.001、0.002、0.003、0.004μg/mL,检测波长为259nm,测定吸光值A,得标准曲线y=0.817x+0.1126,R2=0.9930。将待则样品处理后按上述方法测定,并通过标曲计算总异黄酮含量,结果见表4。
表4不同提取方法黄豆芽总异黄酮(以染料木素计)的得率
根据表4结果,控制剂量为4kGy时,与超声波法相比,辐照(加溶剂)可将黄豆芽染料木素含量提高6.5倍;与无溶剂辐照相比,辐照(加溶剂)可将黄豆芽染料木素含量提高2.5倍。
实施例5
辐照(加溶剂)对黄豆芽中总黄酮提取率的影响
黄豆芽冻干后粉碎成40~60目,称取2g黄豆芽粉末置于包装袋中,加入90wt%甲醇40mL,用密封机封口。辐照源为60Co-γ射线,25℃辐照,吸收剂量控制为1kGy,辐照后过滤,取上清液待测(得到总黄酮粗提液)。对照组一,取2g黄豆芽粉末,加90wt%甲醇40mL,超声萃取(功率90w,频率40kHz)2h,离心,取上清液待测。对照组二,称取2g黄豆芽粉末置于包装袋中,25℃辐照1kGy剂量,然后加入90wt%甲醇40mL,震荡提取1h,过滤取上清液待测。
测定方法:配制染料木素标准品0.0005、0.001、0.002、0.003、0.004μg/mL,检测波长为259nm,测定吸光值A,得标准曲线y=0.817x+0.1126,R2=0.9930。将待则样品处理后按上述方法测定,并通过标曲计算总异黄酮含量,结果见表5。
表5不同提取方法黄豆芽总异黄酮(以染料木素计)的得率
根据表5结果,控制剂量为1kGy时,与超声波法相比,辐照(加溶剂)可将黄豆芽染料木素含量提高1倍;与无溶剂辐照相比,辐照(加溶剂)可将黄豆芽染料木素含量提高0.4倍。
实施例6
辐照(加溶剂)对黄豆芽中总黄酮提取率的影响
黄豆芽冻干后粉碎成40~60目,称取2g黄豆芽粉末置于包装袋中,加入60wt%甲醇60mL,用密封机封口。辐照源为x射线,25℃辐照,吸收剂量控制为3kGy,辐照后过滤,取上清液待测(得到总黄酮粗提液)。对照组一,取2g黄豆芽粉末,加60wt%甲醇60mL,超声萃取(功率90w,频率40kHz)2h,离心,取上清液待测。对照组二,称取2g黄豆芽粉末置于包装袋中,25℃辐照3kGy剂量,然后加入60wt%甲醇60mL,震荡提取1h,过滤取上清液待测。
测定方法:配制染料木素标准品0.0005、0.001、0.002、0.003、0.004μg/mL,检测波长为259nm,测定吸光值A,得标准曲线y=0.817x+0.1126,R2=0.9930。将待则样品处理后按上述方法测定,并通过标曲计算总异黄酮含量,结果见表6。
表6不同提取方法黄豆芽总异黄酮(以染料木素计)的得率
根据表6结果,控制剂量为3kGy时,与超声波法相比,辐照(加溶剂)可将黄豆芽染料木素含量提高4.9倍;与无溶剂辐照相比,辐照(加溶剂)可将黄豆芽染料木素含量提高2倍。
实施例7
辐照(加溶剂)对农业副产物(大豆秸秆)中总黄酮提取率的影响
将农业副产物(大豆秸秆)粉碎成40-60目,称取2g秸秆粉末置于包装袋中,加入70wt%甲醇60mL,用密封机封口。辐照源为电子束,25℃辐照,吸收剂量控制为3kGy,辐照后过滤,取上清液待测(得到总黄酮粗提液)。对照组一,取2g大豆秸秆粉末,加70wt%甲醇60mL,超声萃取(功率90w,频率40kHz)2h,离心,取上清液待测。对照组二,称取2g大豆秸秆粉末置于包装袋中,25℃辐照3kGy剂量,然后加入70wt%甲醇60mL,震荡提取1h,过滤取上清液待测。
测定方法:配制染料木素标准品0.0005、0.001、0.002、0.003、0.004μg/mL,检测波长为259nm,测定吸光值A,得标准曲线y=0.817x+0.1126,R2=0.9930。将待则样品处理后按上述方法测定,并通过标曲计算总异黄酮含量,结果见表7。
表7不同提取方法大豆秸秆总异黄酮(以染料木素计)的得率
根据表7结果,控制剂量为3kGy时,与超声波法相比,辐照(加溶剂)可将大豆秸秆染料木素含量提高3倍;与无溶剂辐照相比,辐照(加溶剂)可将大豆秸秆染料木素含量提高1.2倍。
本发明所列举的各原料,以及本发明各原料的上下限、区间取值,以及工艺参数(如温度、时间等)的上下限、区间取值都能实现本发明,在此不一一列举实施例。
Claims (4)
1.一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法,其特征是包括如下步骤:
1)将植物粉碎成40~60目,得到植物粉;植物粉中加入20-50倍重量的有机溶液,封口;
所述植物为食源性植物、药源性植物、农业副产物中的任意一种或多种按任意配比的混合;
所述食源性植物为水果、蔬菜、豆类、茶叶中的任意一种或多种按任意配比的混合;所述药源性植物为中药材;所述农业副产物为农业作物的秸秆、枝叶、茎叶中的任意一种或多种按任意配比的混合;
所述中药材为落花生茎叶、黄芩、葛根、陈皮、银杏叶中的任意一种或多种按任意配比的混合;所述的农业作物为水稻、大麦、小麦、荞麦、玉米、高粱、大豆、芦蒿中的任意一种或多种按任意配比的混合;
有机溶液为醇溶液;
2)辐照源常温低剂量辐照,辐照源为60Co-γ射线、x射线、电子束中的任意一种,控制吸收剂量范围为3~4kGy;
3)过滤,弃沉淀,得到总黄酮粗提液。
2.根据权利要求1所述的一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法,其特征在于:醇溶液为乙醇溶液,浓度为60~90wt%。
3.根据权利要求1所述的一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法,其特征在于:所述步骤1)中,植物粉中加入30-40倍有机溶液。
4.根据权利要求1所述的一种常温低剂量辐照提取植物中总黄酮的方法,其特征在于:所述步骤2)中,常温指0~40℃。
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