CN1037492C - 大分子内质网的制备方法 - Google Patents

大分子内质网的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1037492C
CN1037492C CN90102410A CN90102410A CN1037492C CN 1037492 C CN1037492 C CN 1037492C CN 90102410 A CN90102410 A CN 90102410A CN 90102410 A CN90102410 A CN 90102410A CN 1037492 C CN1037492 C CN 1037492C
Authority
CN
China
Prior art keywords
endoplasmic reticulum
hemoglobin
solution
macromolecular
polymerization
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN90102410A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1047312A (zh
Inventor
长谷川悦雄
武岡真司
大野弘幸
西出宏之
土田英俊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
JAPAN OIL AND GREASE Ltd
Original Assignee
JAPAN OIL AND GREASE Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP2033256A external-priority patent/JPH03291216A/ja
Application filed by JAPAN OIL AND GREASE Ltd filed Critical JAPAN OIL AND GREASE Ltd
Publication of CN1047312A publication Critical patent/CN1047312A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1037492C publication Critical patent/CN1037492C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0026—Blood substitute; Oxygen transporting formulations; Plasma extender
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1273—Polymersomes; Liposomes with polymerisable or polymerised bilayer-forming substances

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及一种通过含有一种或多种可聚磷脂，胆甾醇和一种或多种可聚脂肪酸的混合物的聚合作用而得到的聚合物的大分子内质网。其中表面电荷被固定为阴性的大分子内质网可在工业领域或医药领域中用作药物，酶，血红蛋白等的载体。

Description

大分子内质网的制备方法
本发明涉及一种大分子内质网的制备方法。
有可能用本发明的大分子内质网作为工业领域或医药领域中的药物，酶，血红蛋白等的载体。
有许多有关试图通过将有用的物质如药物和酶装入小胶囊中而增强其有效性的报道。在起始的试验中，采用合成的大分子化合物如聚苯乙烯和尼龙作为膜材料。
然而，由于这些材料有毒并因其粒度大而引起血栓，所以不能使用。
最近，注意到使用由天然磷脂制成的细小的微囊体(内质网)作为毒性小的膜材料，特别是作为药物载体。可根据需要将微囊体的颗粒度调节到0.02μm至几μm。从而通过适当颗粒度的确定可避免血栓形成一类的问题。但是，因为内质网在体内理化性质不稳定并易于分解，所以存在其既不具有贮存稳定性也不保留在血液中的问题。
另外，在哺乳动物体内携带氧气的血红蛋白可用作携带、贮存或吸收氧气剂。特别是，它常被用作携带氧气的液体材料。在机体内，红血细胞中含有血红蛋白。与之相仿，报道了一种在由双层膜组成的内质网中含有血红蛋白水溶液的氧气携带者(Arbing frankMiller等人，日本专利公告60-26092号；C.AnthonyHunt，日本专利公告58-183625号；Suzuki等人，日本专利公告62-178521号)。所有含有血红蛋白的内质网都可被用作采用天然或合成不可聚脂质或脂质混合物制成的膜材料。如上所述，经广泛地检验这种内质网不但可用作血红蛋白水溶液的载体而且可用作医药用品的载体。由于这些内质网可由天然化合物制得，所以很安全。然而，这些内质网不能长时间保存，其理化性质不稳定并易于分解。特别是，问题在于它们不能保持在血液中。因此，对于如何使内质网稳定进行了认真研究。
例如，作为一种使内质网稳定的方法，报道了一种用可聚磷脂(有许多磷脂酰胆碱类型的衍生物)聚合脂质双分子膜的方法(H.Ringsdorf等人，Angewandte Chemie InternationalEdition English，vol.20，page305(1981)，及其它文献)。在这一方法中，试图通过聚合作用使膜具有物理稳定性。有一则报道，其中在血红蛋白水溶液包入由这些可聚磷脂之一(一种以二炔基作为可聚残基基团的磷脂酰胆碱衍生物)和胆甾醇得到的内质网中之后，使内质网聚合得到含有血红蛋白的大分子内质网(J.A.Hayward等人，PCT WO85/04326)。
然而，为使微囊体在活体内，特别是在血液中稳定，必须维持适当的脂质体的Z电势和保持表面电荷阴性，从而使微囊体与生物细胞和成分之间的相互作用降低至最小。为此，对于普通(非聚合)内质网和上述大分子内质网，已使用了带有负电荷的非聚合脂质，例如，不可聚脂肪酸，磷脂酸，联十六烷基磷酸，磷脂酰丝氨酸。但是在血液中，这些成分易于通过活体内的一个成分如高密度脂蛋白(HDL)从膜中提取，因此这些微囊体不够稳定。
本发明的目的在于提供一种制备在囊膜表面带有负电荷的稳定的大分子内质网的方法，特别是，其中参与聚合作用的负电成分通过共价键固定于膜上。
通过本发明制备的大分子内质网包括通过含有一种或多种可聚磷脂，胆甾醇和一种或多种可聚脂肪酸的混合物的聚合作用而得到的聚合物。
作为可聚磷脂，可以使用除常规磷脂胆碱以外的具有可聚基团的磷脂。当使用阴性可聚磷脂时，不必参与与带有负电荷的成分可聚脂肪酸的聚合反应。因此，本发明的重要性在于使用带有中性电荷和可聚基团的磷脂(通常为磷脂酰胆碱衍生物)。
作为可聚脂肪酸，可以使用任何具有可聚合性的化合物，优选具有12或更多个碳原子的脂肪酸。
考虑到囊裹血红蛋白的效率，可聚磷脂与可聚脂肪酸的克分子比为6∶1-2∶1较好，为5∶1-3∶1更好。可聚磷脂与胆甾醇的克分子比为1∶2-3∶2较好，为3∶4-4∶3更好。此外，考虑到血红蛋白的囊裹效率，应选择可聚磷脂和可聚脂肪酸与胆甾醇的组合。
例如由下式(I)或(II)表示的可聚磷脂和由下式(III)表示的可聚脂肪酸的组合。其中n为12.10，8或6的整数。
可用常规方法(G.Gregoriades.“Liposome Technology”vol.1，C.R.C.Press(1983)，etc.)生产包括可聚磷脂，可聚脂肪酸和胆甾醇的混合物的内质网。例如，向可聚磷脂，可聚脂肪酸和胆甾醇于苯的混合物的冻干粉末中加入水，缓冲剂，等渗生理盐水(pH5-9，最好为6-8)等。在惰性气体(氮气，氩气，一氧化碳等)条件下，温度低于0°-60℃，通过超声波(探测器类型或浴器类型的超声振荡器)处理混合物，得到内质网分散物。另外，向所述粉末混合物中，加入水，缓冲剂和等渗生理盐水并在5-37℃下，用voltex混合器处理混合物5-60分钟得到多层内质网(粒度：～10μm)。可将各种药物，酶，蛋白质等包入内质网中。
例如，可用下述方法将血红蛋白包入内质网中。众所周知，血红蛋白溶液可含有足够量的还原剂如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(还原型)，抗坏血酸等以防止高铁血红蛋白含量的增加和含有足够量的血红蛋白氧气结合亲合力调节剂如2，3-二磷酸甘油酸，肌醇六磷酸等以调节包囊血红蛋白的氧气亲合力。将浓血红蛋白水溶液(血红蛋白浓度为10-50wt％，最好为15-35wt％)加到所述脂质混合物中并在惰性气体(氮气，氩气或一氧化碳气)，5-37℃条件下，用Voltex混合器处理5-60分钟，得到多层内质网(粒度：～10μm)的溶液，其中包有血红蛋白。使包有血红蛋白的多层内质网溶液通过多孔聚碳酸酯膜(孔径：8，5，3，2，1，0.6，0.4μm等)，然后在适宜的超滤柱(例如，Pharmacia精细化学公司生产的SepharoseCL-4B)上通过凝胶渗透色谱或用超滤膜(例如，日本Asahi医药公司生产的AC-1760型空心纤维)(等渗生理盐水(pH7.4)作为介质)纯化该溶液，除去未包入多层内质网中的血红蛋白，同时，浓缩血红蛋白内质网溶液，得到所需内质网(粒度：0.1-0.6μm)分散物。
此外，将等渗生理盐水加到所述冻干脂质混合物中，在惰性气体(氮气，氩气等)，0-60℃条件下，用超声波处理所得溶液，制备含有单层内质网(粒度：20-60μm)的分散物。将浓血红蛋白溶液加到分散物中之后，经冰冻和融化(-78℃至室温)处理该溶液，得到内质网中包有血红蛋白水溶液的溶液。使所得溶液通过多孔聚碳酸酯膜(孔径：8，5，3，2，1，0.6，0.4μm等)之后，用适宜的超滤膜(例如，日本Asahi医药公司生产的AC-1760型空心纤维)(用等渗生理盐水(pH 7.4)作为介质)洗涤该溶液，除去未包入内质网的血红蛋白，同时，浓缩血红蛋白内质网溶液，得到所需血红蛋白内质网溶液(粒度：0.1-0.6μm)分散物。
为了通过内质网的聚合作用制备大分子内质网，可通过在惰性气体(氮气，氩气或一氧化碳气)条件下紫外线或γ射线的辐射，或通过加入适宜的引发剂进行聚合。当包含在内质网中的物质(药物，酶，蛋白质等)对热不稳定时，应有效地使用低温引发剂。例如，可在偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐存在下，于低温(～10℃)下，经可见光的辐射得到一种聚合物。此外，可在低温下，采用NHSO3/K2S2O8氧化还原引发剂得到一种聚合物。任何聚合方法都可在本发明范围内不受限制地使用。可通过紫外光谱特征吸收带强度减弱(例如对于化合物(I)，(II)和(III)在255nm处)证实聚合作用的进行。使内质网聚合之后，或在加入适当的基团清除剂(半胱氨酸(盐酸盐)，巯基乙醇，二硫苏糖醇等)之后，用适当的超滤柱(例如，Pharmacia精细化学公司生产的Sepharose CL-4B)或超滤膜(例如，Asahi医药公司生产的AC-1760型空心纤维)纯化所得聚合物溶液，然后，浓缩纯化的溶液，可得到大分子内质网分散物或包有血红蛋白的大分子内质网分散物。
本发明的优点如下。
由于可通过可聚脂肪酸和可聚中性磷脂在有或没有胆甾醇的情况下聚合制备本发明的大分子内质网，所以微囊体性能是稳定的并且预计由于其基于脂肪酸的负电荷的受控Z电势的影响会使与生物细胞或各成分之间的相互作用减弱，脂肪酸以共价键与聚合的双层膜结合。内含物(血红蛋白等)进入微囊体的效率也因作为膜成分的可聚脂肪酸的存在而增加。
下面的实例对本发明进行更具体的描述，但对其实施并非面面具到。
实例1
将2.05g(2.6mmol)1，2-双(十八碳-反式，2-反式，4-二烯酰基)-Sn-甘油基-3-胆碱磷酸(式(I)中n＝12的化合物)，0.15g(0.5mmol)十八碳-反式，2-反式，4-二烯酸(式(III)中n＝12的化合物)和0.81g(2.1mmol)胆甾醇溶于40ml苯，将所得的溶液冷冻干燥。向得到的粉末中加入60ml 5mM Tris缓冲液(pH7.4，含有0.9％(重量)氯化钠)，氮气下伴随冷却用超生波(60W，15分钟)处理该混合物。将得到的单层内质网水悬液装入石英玻璃容器。转换为氮气氛后，将容器密封。向悬浮液中加入3.1ml 50mM偶氮双(2-二氨基丙烷)二盐酸盐水溶液作为光敏聚合的引发剂并将其冷却至8℃。用高压水银灯(UVL-100，日本RiKo Kagaku Sangyo产品)以可见光(其中用滤光片滤除了低于360nm的短波光)照射混合物以分解引发剂，可聚合的脂肪酸发生聚合反应。12小时后，聚合率为50％(用Shimadzu UV-2000分光光度计通过二烯基团250nm吸收谱带随时间变化的吸收度测定的)。聚合物溶液在Sepharose CL-4B上用凝胶渗透层析(介质：5mM Tris缓冲液(pH7.4，含有0.9wt％氯化钠))以除去低分子量化合物，得到含有大分子内质网的水分散液。用CoulterN4 D(Coulter Electronics Co.)光散射测定的内质网的粒径大约为30nm。加入表面活性剂(Triton X-100)，比较大分子内质网和非聚合内质网的稳定性。加入3mM表面活性剂(TritonX-100)，非聚合内质网受到完全破坏，而加入12mM表面活性剂(Triton X-100)没有破坏大分子内质网，它仍然保持稳定。
实例2
将0.782g(1.0mmol)1，2-双(十八碳-反式，2-反式，4-二烯酰基)-Sn-甘油基-3-胆碱磷酸(式(I)中n＝12的化合物)，0.080g(0.28mmol)十八碳-反式，2-反式，4-二烯酸(式(III)中n＝12的化合物)和0.386g(1.0mmol)胆甾醇溶于30ml苯，得到的溶液冷冻干燥。向所得粉末中加入20ml 5mM Tris缓冲液(pH7.4，含有0.9wt％氯化钠)，混合物在室温(20-25℃)下氮气氛中用Voltex混合器处理10分钟，得到多层内质网溶液。然后用挤压器(Lipex Biomembranes Inc.)使溶液通过多孔聚碳酸酯膜(孔径：1.0，0.6，0.4，0.2μm)，得到含有粒径为180nm的内质网的水分散液。将10ml该水分散液装入玻璃容器，较换为氮气氛后，将容器密封。于5℃冷却该容器，然后加入0.07ml 5％(重)亚硫酸氢钠水溶液和0.17ml 5％(重)过硫酸钾。混合物反应6小时(聚合率：43％)，得到含有大分子内质网的水分散液。该分散液在Sepharose CL-4B上经凝胶渗透层析(介质：5mM Tris缓冲液(pH7.4，含有9％(重)氯化钠))，以除去低分子量化合物，得到含有大分子内质网(粒径：180nm)的水分散液。
实例3
将1.173g(1.50mmol)1，3-双(十八碳-反式，2-反式，4-二烯酰基)-rac-甘油基-2-胆碱磷酸(式(II)中n＝12的化合物)，0.180g(0.64mmol)十八碳-反式，2-反式，4-二烯酸(式(III)中n＝12的化合物)和0.579g(1.50mmol)胆甾醇用实例1相同的步骤处理，得到大分子内质网(粒径：35nm)。
实例4
将2.346g(3.0mmol)1，2-双(十八碳-反式，2-反式，4-二烯酰基)-Sn-甘油基-3-胆碱磷酸(式(I)中n＝12的化合物)，0.240g(0.85mmol)十八碳-反式，2-反式，4-二烯酸(式(III)中n＝12的化合物)和1.158g(3.0mmol)胆甾醇溶于40ml苯，得到的溶液冷冻干燥。向所得粉末中加入25ml 5mM Tris缓冲液(pH7.4，含有0.9％(重)氯化钠)，混合物在氮气下伴随水冷用超声波(60W，20分钟)处理，得到单层内质网水分散液。向20ml该溶液中，加入40ml 35％(重)人血红蛋白水溶液，冷冻(-78℃)，然后融化(室温)两次。使溶液通过多孔聚碳酸酯膜(孔径：8，5，3，2，1，0.6μm等)。在Sepharose CL-4B上用凝胶渗透层析该溶液，在氮气氛下除去未包裹的血红蛋白，得到血红蛋白内质网(粒度：0.5μm)。将10ml含有内质网的溶液装入石英玻璃容器中。转换为氮气氛后，密封容器并使之冷却至8℃。向该溶液中，加入0.3ml 50mM偶氮二(2-二氨基丙烷)二盐酸盐水溶液(作为光敏聚合反应的引发剂)。用高压水银灯(日本Riko KagakuSangyo生产的UVL-100)以其中用一滤光片滤除了小于360nm的短波光的可见光照射该溶液以使可聚脂质聚合。10小时后，聚合率为26％(其通过在255nm处吸收度随时间的变化测得)。聚合物溶液在Sepharose CL-4B上，以5mM Tris缓冲液(pH7.4，含有0.9wt％氯化钠)为介质，用凝胶渗透色谱法处理以除去低分子量化合物，得到所需含有大分子内质网(粒度：0.5μm)的水分散液。包裹血红蛋白的效率(包入内质网的血红蛋白量与原料血红蛋白量之比(％)为15％。未观察到血红蛋白的变性，这一点是从可见吸收光谱判断出来的。通过加入表面活性剂(TritonX-100)比较大分子内质网和未聚合内质网的稳定性。加入3mM表面活性剂(TritonX-100)未聚合的内质网被完全破坏，而大分子内质网在加入10mM表面活性剂(Triton X-100)后未受到破坏，仍保持稳定。血红蛋白于4℃和37℃贮存6天后，其漏失量小于2％。
实例5
将1.845g(2.36mmol)1，2-二(十八碳-反式，2-反式，4-二烯基)-Sn-甘油基-3-磷酸胆碱(式(I)中n＝12的化合物)，0.135g(0.48mmol)十八碳-反式，2-方式，4-二烯酸(式(III)中n＝12的化合物)和0.729g(1.89mmol)胆甾醇溶于30ml苯中并将所得溶液冻干。向所得粉末中，加入50m1 35％人血红蛋白水溶液，在室温(20-25℃)，氮气氛下，用Voltex混合器处理混合物10分钟，得到多层内质网溶液。然后，使该溶液流经多孔聚碳酸酯膜(孔径：8，5，3，2，1，0.6μm等)以除去未包裹的血红蛋白，得到含内质网的水分散液。将20ml分散液装入玻璃容器。转换为氮气氛后，密封容器。使容器冷却至5℃，然后加入0.05ml 5wt％亚硫酸氢钠水溶液和0.12ml 5wt％过硫酸钾水溶液。混合物反应4小时(聚合率：30％)后得到含大分子内质网的水分散液。用凝胶过滤柱(填充剂：Sepharose CL-4B，介质：5mM Tris缓冲液(pH7.4，含0.9wt％氯化钠))处理分散液以除去低分子量化合物，得到所需含大分子内质网(粒度：0.4μm)的水分散液。包裹血红蛋白的效率(包入内质网的血红蛋白量与原料血红蛋白量之比(％))为29％。通过测定可见吸收光谱未观察到血红蛋白的变性。加入表面活性剂(Triton X-100)比较大分子内质网和未聚合内质网的稳定性。加入3mM表面活性剂(Triton X-100)未聚合内质网被完全破坏，而加入10mM表面活性剂(Triton X-100)大分子内质网未受到破坏，仍保持稳定。大分子内质网于4℃和37℃贮存6天后，血红蛋白漏失量小于2％。
实施6
按与实例5相同的方法处理1.880g(2.40mmol)1，3-二(十八碳-反式，2-反式，4-二烯酰基)-rac-甘油基-2-磷酸胆碱(式(II)中n＝12的化合物)，0.192g(0.69mmol)十八碳-反式，2-反式，4-二烯酸(式(III)中n＝12的化合物)和0.794g(2.06mmol)胆甾醇，得到大分子内质网(粒度：0.6μm)。包裹血红蛋白的效率为20％。
实例7
在-10ml Erlenmeyer烧瓶中，装入300mg脂质(1，2-二(十八碳-反式，2-反式，4-二烯酰基)甘油基-3-磷酸胆碱/胆甾醇/十八碳-2，4-二烯酸，克分子比为7∶7∶2)在苯中冻干而得到的混合物，6ml通过溶解等分子量的血红蛋白和六磷酸肌醇和5mM NADH而得到的纯化血红蛋白水溶液(17g/dl，高铁血红蛋白含量为2.6％，通入一氧化碳3分钟(以可见吸收光谱的特征吸收谱带(λmax：419，439和569nm)证实一氧化碳复合物的产生))，和少量玻璃珠，于4℃水化15分钟。然后，用Voltex混合器处理水合物15分钟。用孔径为8，5，3，2，1，0.6和0.4μm的聚碳酸酯膜依次处理该溶液。使5ml样品通过0.4μm膜(SepharoseCL-4B柱，瑞典Pharmacia化学公司产品，缓冲剂为HC1-Tris(5mM，pH7.4)，柱尺寸：半径3cm，高15cm)，分离出包有血红蛋白的内质网组分和无血红蛋白的组分。血红蛋白包入内质网的效率为29％，血红蛋白与脂质的重量比为1.5mg/mg，平均粒度为309.3±71.5nm，高铁血红蛋白含量为3.0％。
将所述血红蛋白内质网溶液4ml装入5ml棕色小瓶中，用橡皮塞密封瓶口。在室温下将氩气通入溶液20分钟，将一氧化碳通入3分钟。
在一冰镇Dewar容器内使小瓶内的所述内质网进行γ射线聚合。γ射线辐射量为0.73Mrad。通过检测紫外吸收光谱中二烯基吸收度的降低(244-255nm)证实聚合反应的进行。聚合率为85％。
在冰水浴中冷却含有聚合内质网的溶液，用60W白光照射1小时，向溶液中通入氧气，使之转化为相应的氧复合物(氧合血红蛋白；λmax：415，541和576nm)。通过测定可见吸收光谱证实一氧化碳的脱除。聚合后的平均粒度为294.3±59.3nm，该值与聚合前的平均粒度几乎相同。
通过可见吸收光谱测定氧分压对血红蛋白的依赖性并按常规方法于37℃，在5mM Tris缓冲液(pH7.4)中，用hemox分析仪(美国TCS医药产品公司)测定氧解离曲线。结果，包入聚合内质网冲血红蛋白的氧亲合力(P50：使血红蛋白氧合50％所需的氧分压)为40mmHg，希尔系数为1.65，在肺与外周组织之间携带氧气效率为38％。此外，按照常规方法，通过激光闪光光解测定(用日本Unisoku公司的USP-500型仪器)，发现所述脱氧血红蛋白在37℃，5mM Tris缓冲液(pH7.4)中，氧分压为149mmHg，迅速与氧气键合(在10毫秒内完成氧再结合)。
结论为包入由这些实例所合成的聚合内质网中的血红蛋白具有与红血细胞内的血红蛋白相同的氧气携带能力。
参考实例1
按照实例5研究了各种脂肪酸对血红蛋白容纳效率的影响(然后，制备和分析了聚合反应之前未聚合的内质网)。
结果示于下表中。比较用作负电荷成分的可聚脂肪酸(十八碳二烯酸)与其它不可聚脂肪酸，发现前者比后者的血红蛋白容纳效率高且血红蛋白(Hb)与脂质之比也高。表脂肪酸   碳原子数   烯键数  Hb 容纳效率   Hb/脂质豆蔻酸    14        0          14          1.6棕榈酸    16        0          21          1.7硬脂酸    18        0          20          1.4油酸      18        1(顺式)    23          1.5亚油酸    18        2(顺式)    17          1.8十八碳二烯酸    18        2(反式)    20          1.9(ODA)
可聚磷脂/胆甾醇/脂肪酸的克分子比＝7/7/2，血红蛋白浓度＝17wt％，脂质浓度＝5wt％。
此外，当未使用脂肪酸时，血红蛋白容纳效率低(小于10％)。因此，加入脂肪酸作为膜成分显然是有效的。
参考实例2
超滤浓缩按实例7的方法制得的包有血红蛋白的聚合内质网溶液(使用可除去分子量为20,000或更低的化合物的超滤膜)，得到血红蛋白浓度为10g/dl的浓溶液。测定所得溶液的物理性质。结果示于下表中。通过本发明的实例制得的血红蛋白内质网溶液的性质显然与人血的性质相同。
表
物理性质测定结果pH              转动粘度        渗透压      胶体渗透压
          (mpa.s，37℃)1)  (mOsm)      (mmHg)2)7.4           8.4(7.5)          320         1.0(35)
          7.5(18.75)
          6.8(37.5)
          6.1(75)
          5.6(156)
1)括号内的值为剪切速率(S-1)。
2)括号内的值是通过将3wt％的葡聚糖(分子量为3.9×104)加入内质网溶液中而校正的。
参考实例3
研究了在实例7中得到的包有血红蛋白的聚合内质网的稳定性。
于4℃将溶液贮存下暗处3个月之后，颗粒的平均粒度未改变。此外，未发现血红蛋白的漏失(用Sepharose CL-4B凝胶渗透色谱法测定了漏失量)。
于-80℃冰冻后，在室温下使溶液融化，未发现血红蛋白从内质网中泄漏出来。颗粒度未改变。另外，对于未聚合的内质网，大约30％包含的血红蛋白泄漏出来。当将20wt％表面活性剂(Tritoo X-100)加到内质网中时，聚合内质网是稳定的，无血红蛋白从内质网中泄漏出来。
结果发现，按实例7的方法合成的聚合内质网物理性质是稳定的并有可能长时间保存。
参考实例4
作为测定在实例7中所得的包有血红蛋白的聚合内质网的表面电荷的方法，测定了Z电势(仪器：Pen Kem公司制造的501Z型激光器)。所述内质网的电势为-17.1mv，该值与红血细胞的电势几乎相同。

Claims (5)

1.一种制备大分子内质网的方法，包括将一种或多种可聚磷脂，胆甾醇和一种或多种可聚脂肪酸混合，然后聚合该混合物。
2.权利要求1制备大分子内质网的方法，其中在混合物聚合前还加入血红蛋白水溶液。
3.权利要求1或2制备大分子内质网的方法，其中可聚磷脂与可聚脂肪酸的克分子比为5∶1-3∶1。
4.权利要求1或2制备大分子内质网的方法，其中可聚磷脂为下式(I)或(II)表示的化合物，可聚脂肪酸为下式(III)表示的化合物：
其中n为6，8，10或12的整数。
5.权利要求3制备大分子内质网的方法，其中可聚磷脂为下式(I)或(II)表示的化合物，可聚脂肪酸为下式(III)表示的化合物：其中n为6，8，10或12的整数。
CN90102410A 1989-04-27 1990-04-27 大分子内质网的制备方法 Expired - Fee Related CN1037492C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP11068289 1989-04-27
JP110682/89 1989-04-27
JP33256/90 1990-02-14
JP2033256A JPH03291216A (ja) 1989-04-27 1990-02-14 高分子小胞体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1047312A CN1047312A (zh) 1990-11-28
CN1037492C true CN1037492C (zh) 1998-02-25

Family

ID=26371932

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN90102410A Expired - Fee Related CN1037492C (zh) 1989-04-27 1990-04-27 大分子内质网的制备方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US5160740A (zh)
EP (1) EP0395382B1 (zh)
CN (1) CN1037492C (zh)
CA (1) CA2015291C (zh)
DE (1) DE69006896T2 (zh)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04283207A (ja) * 1991-03-13 1992-10-08 Kao Corp ベシクル及び重合体ベシクル
WO1993009176A2 (en) * 1991-10-29 1993-05-13 Clover Consolidated, Limited Crosslinkable polysaccharides, polycations and lipids useful for encapsulation and drug release
EP0615747B1 (en) * 1993-03-18 1999-09-29 Terumo Kabushiki Kaisha Hemoglobin-encapsulating liposome and method for making the same
DE4312970A1 (de) * 1993-04-21 1994-10-27 Juergen Dr Schrezenmeir Mikrokapsel sowie Verfahren und Vorrichtung zu ihrer Herstellung
WO1995003035A1 (en) * 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery
US6004534A (en) * 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
US5674528A (en) * 1994-06-15 1997-10-07 Terumo Kabushiki Kaisha Hemoglobin-encapsulated liposome
JP3532692B2 (ja) * 1995-04-03 2004-05-31 日本油脂株式会社 ホスホリルコリン基含有重合体水性溶液および製造方法
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US6187335B1 (en) 1997-12-31 2001-02-13 Orasomal Technologies, Inc. Polymerizable fatty acids, phospholipids and polymerized liposomes therefrom
EP1460992B1 (en) * 2001-12-03 2009-03-11 Dor Biopharma, Inc. Stabilized reverse micelle compositions and uses thereof
US20060210549A1 (en) * 2004-09-10 2006-09-21 Srivastava Devendra K Controlled release liposomes and methods of use
US20080094573A1 (en) * 2006-04-04 2008-04-24 Vermette Patrick Surface-modified materials, such as contact lenses, methods and kits for their preparation, and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0186211A1 (en) * 1984-12-28 1986-07-02 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Polymerizable liposome-forming lipid, method for production thereof, and use thereof
EP0251229A1 (en) * 1986-06-27 1988-01-07 Terumo Kabushiki Kaisha Polymerizable beta-glycerophospholipid and method for production thereof
JPH1180245A (ja) * 1997-06-24 1999-03-26 Basf Ag プロピレンポリマー

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0032622B1 (en) * 1979-12-20 1985-08-14 Dennis Chapman Polymerisable phospholipids and polymers thereof, methods for their preparation, methods for their use in coating substrates and forming liposomes and the resulting coated substrates and liposome compositions
US4933114A (en) * 1980-08-11 1990-06-12 Eastman Kodak Company Polyacetylenic lipids, radiation-sensitive compositions, photographic elements and processes relating to same
US4485045A (en) * 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
GB2140806B (en) * 1983-05-28 1987-10-28 Sekimoto Hiroshi Stabilisation of unsaturated fatty acids, fish oils or fish
US4560599A (en) * 1984-02-13 1985-12-24 Marquette University Assembling multilayers of polymerizable surfactant on a surface of a solid material
US4990291A (en) * 1986-04-15 1991-02-05 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Method of making lipid tubules by a cooling process
US4877501A (en) * 1987-02-06 1989-10-31 Schnur Joel M Process for fabrication of lipid microstructures
US5004566A (en) * 1987-02-06 1991-04-02 Geo-Centers, Inc. Process for fabrication of lipid microstructures from dry organic solvent
JPH01180245A (ja) * 1988-01-12 1989-07-18 Terumo Corp リポソーム
US5061484A (en) * 1988-03-11 1991-10-29 Alpha Therapeutic Corporation Perfluorochemical emulsion with stabilized vesicles

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0186211A1 (en) * 1984-12-28 1986-07-02 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Polymerizable liposome-forming lipid, method for production thereof, and use thereof
EP0251229A1 (en) * 1986-06-27 1988-01-07 Terumo Kabushiki Kaisha Polymerizable beta-glycerophospholipid and method for production thereof
JPH1180245A (ja) * 1997-06-24 1999-03-26 Basf Ag プロピレンポリマー

Also Published As

Publication number Publication date
EP0395382A3 (en) 1991-10-30
CA2015291C (en) 1996-04-30
US5160740A (en) 1992-11-03
EP0395382A2 (en) 1990-10-31
EP0395382B1 (en) 1994-03-02
DE69006896D1 (de) 1994-04-07
CN1047312A (zh) 1990-11-28
DE69006896T2 (de) 1994-08-18
CA2015291A1 (en) 1990-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1037492C (zh) 大分子内质网的制备方法
EP0161759B1 (en) Polymeric liposomes as stable gas carriers
US5789376A (en) Transfusions with stabilized hemoglobin covalently bound to a nitroxide or polymers thereof
JPH0720857B2 (ja) リポソームおよびその製法
JPS58183625A (ja) 酸素運搬システム
US5061484A (en) Perfluorochemical emulsion with stabilized vesicles
EP1427394B1 (en) Process for accelerating recovery from trauma by using apoptosis-mimicking synthetic or natural entities
CN113855813A (zh) 一种基于芬顿反应与aie效应的ros响应海洋岩藻多糖纳米载体制备方法及应用
US6864094B2 (en) Method of preserving oxygen infusions
JP3037994B2 (ja) リポソーム表面への蛋白質吸着抑制剤
Tsuchida Synthesis and characterization of artificial red cell (ARC)
CN110876719A (zh) 一种维生素k1注射剂及其制备方法
WO2013047263A1 (ja) ヘモグロビン含有リポソーム及びその製法
JPH04265151A (ja) リポソーム調製物
Tsuchida et al. Liposome/heme as a totally synthetic oxygen carrier
EP0417104A1 (en) Perfluorochemical emulsion with stabilized vesicles
CN100336829C (zh) 羧甲基淀粉钠制剂、制造方法及其应用
JP3572428B2 (ja) 重合リポソームの製造方法
JP3128630B2 (ja) 粉末状脂質小胞体製剤の製造方法
JPS63232841A (ja) 再構成重合化小胞体の製造方法
Aikawa et al. Lyoprotective Effect of Alkyl Sulfobetaines for Freeze-drying 1, 2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Liposomes
JPH0474116A (ja) リポソーム
CN1175808C (zh) 全反式维甲酸纳米悬浮液的制备方法
CN115737812A (zh) 近红外光敏剂纳米制剂的制备方法及应用
JP3575037B2 (ja) 反応性小胞体および形成剤

Legal Events

Date Code Title Description
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C06 Publication
PB01 Publication
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C15 Extension of patent right duration from 15 to 20 years for appl. with date before 31.12.1992 and still valid on 11.12.2001 (patent law change 1993)
OR01 Other related matters
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee