CN103728449A - 一种检测氟苯尼考和甲砜霉素的试纸及方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测氟苯尼考和甲砜霉素的试纸及方法。试纸包括微孔试剂和试纸条，所述微孔试剂中冻干有胶体金标记的甲砜霉素药物特异性抗体，所述甲砜霉素药物特异性抗体可为甲砜霉素药物单克隆抗体或甲砜霉素药物多克隆抗体；所述试纸条由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜、底板，依次连接组成，所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体。用本发明试纸检测氟苯尼考和甲砜霉素的方法，简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

Description

一种检测氟苯尼考和甲砜霉素的试纸及方法

技术领域

本发明涉及一种检测氟苯尼考和甲砜霉素的试纸及方法。 

背景技术

氟苯尼考、甲砜霉素与氯霉素均属于氯霉素类药物，其中甲砜霉素是氟苯尼考的衍生物，它们的抗菌作用与氯霉素相似。由于氯霉素药物存在严重副作用，国际上相继禁止或严格限制使用氯霉素。氟苯尼考与甲砜霉素均具有较高抗菌活性，现有替代氯霉素的趋势，主要用于治疗鱼、猪、牛及家禽的细菌性疾病，已在养殖业中大规模使用。但是，氟苯尼考和甲砜霉素在畜禽生产上的大量应用也导致其在畜禽产品中残留，危害公众健康。欧盟（EEC）96/23指令中规定，甲砜霉素MRL值为50μg/kg，氟苯尼考MRL值为50~2000μg/kg，我国规定甲砜霉素在各种动物组织中的MRL值为50μg/kg，氟苯尼考标志残留物为氟苯尼考胺，它在肌肉中MRL值为1000μg/kg。 

动物组织中氯霉素类药物的残留检测主要为理化检测法、免疫分析法。理化检测方法有气相色谱法、气相色谱一质谱法等，理化检测方法精确度高，但其存在检测成本高，检测设备复杂，对检测人员的要求较高，检测耗时长等缺点；目前常用的免疫学分析法，主要为酶联免疫检测法，其需要的检测费用还是较高，不适合企业低成本的检测需要。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测氟苯尼考和甲砜霉素的试纸。 

本发明所提供的试纸包括微孔试剂和试纸条，微孔试剂具有微孔塞，试纸条包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂中冻干有甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物；甲砜霉素药物特异性抗体可为甲砜霉素药物单克隆抗体或甲砜霉素药物多克隆抗体；反应膜上包被有检测区和质控区；当甲砜霉素特异性抗体为甲砜霉素药物单克隆抗体时，检测区包被有甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗鼠抗抗体；当甲砜霉素药物特异性抗体为甲砜霉素药物多克隆抗体时，检测区包被甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗兔抗抗体。 

所述保护膜粘贴在样品吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线。 

所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一侧，所述质控区位于远离有MAX标记线的保护膜的一侧。 

所述甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由甲砜霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白，兔血清白蛋白；所述甲砜霉素半抗原是由甲砜霉素与溴乙酸叔丁酯反应后脱脂得到的。 

所述甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物中的甲砜霉素药物特异性抗体是以甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。 

优选所述甲砜霉素单克隆抗体为由保藏号为CGMCC No. 6067的甲砜霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株D-4-1分泌的抗体。 

以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体；以羊作为免疫动物，以兔源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗兔抗抗体。 

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜。 

本发明的另一个目的是提供了一种制备上述试纸的方法，其包括步骤： 

1）制备冻干有甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂； 

2）制备具有包被甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜； 

3）将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸条； 

4）将1）和3）制备好的冻干有甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸条组装。 

具体的说，步骤包括： 

1）将甲砜霉素半抗原与载体蛋白偶联，形成甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物； 

2）用甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌甲砜霉素药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株或用甲砜霉素半抗原-载体蛋白免疫兔，得到甲砜霉素药物多克隆抗体； 

3）提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体； 

4）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金； 

5）将制备的甲砜霉素药物特异性抗体加入到制备的胶体金中，得到甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物； 

6）将甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中后，将微孔试剂加上微孔塞； 

7）将样品吸收垫用含牛血清白蛋白（牛血清白蛋白在缓冲液中的终浓度为0.5～1.0%（体积百分含量））、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h,在37℃下烘干2h。 

8）在底板上按顺序贴上样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜制备成试纸条； 

9）将制备好的微孔试剂和试纸条组装，2-8℃条件下保存12个月。 

本发明的另一个目的提供了一种牛奶样本中氟苯尼考和甲砜霉素残留的检测方法。 

保藏号为CGMCC No. 6067的甲砜霉素单克抗体隆杂交瘤细胞株D-4-1也属于本发明的保护范围内。 

本发明试纸的检测原理：将待检牛奶样本滴加于微孔试剂，混匀后，将标有MAX标记线端的试纸条向下，插入孵育后的微孔试剂，待检样品液与微孔中的金标抗体结合后一起向反应膜扩散；若待检样品液中氟苯尼考或甲砜霉素的含量高，则扩散过程中待测样品液中的氟苯尼考或甲砜霉素可与金标抗体相结合，进而完全封闭金标抗体上的抗原结合点，阻止金标抗体与反应膜上甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物结合，检测区不能显色，而抗抗体则可与金标抗体结合，质控区显色；若待检样品液中氟苯尼考或甲砜霉素的含量低或者无，则金标抗体上的抗原结合位点不能被封闭，进而金标抗体会与反应膜上甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联抗原结合，检测区显色，同时抗抗体也可与金标抗体结合，质控区显色。如果质控区不显色，则试纸失效。如图3所示。 

阳性：当质控区（C）显示出红色条带，而检测区（T）不显色，判为阳性，用“＋”表示。 

阴性：当质控区（C）显示出红色条带，而检测区（T）显色，判为阴性，用“－”表示。 

无效：当质控区（C）不显示红色条带，则无论检测区（T）是否出现红色条带，试纸均失效。 

本发明的试纸具有敏感度高、特异性高、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。其中，采用高特异性的甲砜霉素药物单克隆抗体，保证了检测结果的可靠性；将金标抗体冻干在微孔试剂中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。用本发明试纸检测氟苯尼考和甲砜霉素的方法，简便、快速、直观、准确，适用范围广，成本低，易推广使用。 

附图说明

图1为试纸条剖面结构示意图。 

图2为试纸条的俯视图。 

图3 为试纸条检测结果判定图。 

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 

实施例1、检测氟苯尼考和甲砜霉素的试纸的构成 

一、微孔试剂 

所述微孔试剂上具有微孔塞； 

所述微孔试剂上冻干有甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物，包被量0.15-0.25μg/ml。 

二、试纸条（图1）： 

所述试纸条是由底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜组成； 

所述样品吸收垫1、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序黏贴在所述底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐； 

所述试纸保护膜7覆盖在样品吸收垫上的检测端，在检测端保护膜上应有MAX字样（图2）。 

所述反应膜上有检测区4和质控区5，检测区和质控区均为与所述试纸条的长相垂直的条带状，检测区位于近于有MAX标记线的保护膜的一侧，质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一侧。检测区包被有甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物（甲砜霉素半抗原-卵清蛋白的偶联物），质控区包被有羊抗鼠抗抗体。 

底板为PVC底板；样品吸收垫为吸滤纸；吸水垫为吸水纸；反应膜为硝酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。 

将上述试纸条与微孔试剂组装，在2～8℃的环境中储存，有效期12个月。 

实施例2、实施例1中所述试纸的制备方法 

三、试纸的制备 

该试纸的制备方法主要包括如下步骤： 

1）制备冻干有甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂； 

2）制备具有包被甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被羊抗鼠抗抗体的质控区的反应膜； 

3）将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸条； 

4）将1）和3）制备好的冻干有甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸条组装。 

下面分步详细叙述： 

（一）各部件的制备 

1、甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物的合成与鉴定 

甲砜霉素药物是小分子物质，只有免疫反应性，没有免疫原性，不能诱发机体产生免疫应答，必须与大分子载体蛋白偶联后才具有免疫原性。 

1）甲砜霉素半抗原的制备： 

0.39g溴乙酸叔丁酯在5ml 二甲基亚砜（DMSO）中的溶液，40℃下缓慢滴加入0.71g甲砜霉素和1ml吡啶在10ml DMSO中的混合物中。滴加完毕后，继续反应4小时后，蒸除溶剂。简单柱层析分离后，除去溶剂，加入20ml DMSO和5ml甲酸，室温反应20小时，蒸除溶剂，乙醇-水体系中重结晶得到半抗原羧甲基甲砜霉素。 

2）免疫原的制备-甲砜霉素半抗原与牛血清白蛋白偶联物合成 

取甲砜霉素半抗原10mg溶于1ml水中，得到Ⅰ液；取牛血清白蛋白50mg溶于5ml水中，再向其中加入碳化二亚胺（EDC）25mg活化反应 30min，得到Ⅱ液；将Ⅰ液加到Ⅱ液后搅拌反应过夜，得到免疫原。 

3）包被原的制备-甲砜霉素半抗原与卵清蛋白偶联物合成 

取甲砜霉素半抗原10mg溶于1ml水中，得到Ⅰ液；取卵清蛋白50mg溶于5ml水中，再向其中加入EDC 25mg活化反应 30min，得到Ⅱ液；将Ⅰ液加到Ⅱ液后搅拌反应过夜，得到包被原。 

4）甲砜霉素半抗原-载体偶联物的鉴定 

将载体蛋白、甲砜霉素半抗原、甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物用pH7.4的PBS配成0.5mg/ml的溶液，以0.01mol/L ，pH7.4 PBS调零，用紫外分光光度计在波长200-800 nm范围内扫描，得到载体蛋白、甲砜霉素半抗原、甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物的吸收曲线。三者出现不同的吸收曲线，甲砜霉素半抗原与载体蛋白偶联成功。   

2、甲砜霉素药物单克隆抗体的制备 

（1）制备单抗 

a. 动物免疫 

将步骤1得到的免疫原注入到Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。 

b. 细胞融合和克隆化 

取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按9：1（数量配比）比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选得到稳定分泌甲砜霉素药物单克隆抗体的甲砜霉素药物单克隆杂交瘤细胞株。 

经筛选得到分类命名为甲砜霉素单克隆抗体交瘤细胞株。该杂交瘤细胞株于2012年5月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC，中国，北京），保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No. 6067。该杂交瘤细胞株分泌的抗体针对氟苯尼考和甲砜霉素特异性良好，检测灵敏度能达到5μg/L。 

c. 细胞冻存和复苏  

将杂交瘤细胞用冻存液制成1×10⁹个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。 

d. 单克隆抗体的制备与纯化 

增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20℃保存。 

所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20%（质量百分含量），使碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2%（质量百分含量）；所述细胞培养基的pH为7.4。 

3、羊抗鼠抗抗体的制备 

以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。 

4、甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物的制备 

（1）胶体金的制备 

用双蒸去离子水将1%氯金酸稀释成0.01%（质量百分含量），置磁力加热搅拌器上搅拌煮沸，每100ml 0.01%氯金酸加入2.5 ml 1%柠檬酸三钠，继续搅拌加热反应至液体呈红色时停止加热，冷却至室温后补足失水。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。 

（2）甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物的制备 

在磁力搅拌下，用0.2mol/L碳酸钾调胶体金的pH值至7.0，按50-100μg抗体/ml胶体金的标准向胶体金溶液中加入上述甲砜霉素药物单克隆抗体，继续搅拌混匀30min, 加入10%牛血清白蛋白至牛血清白蛋白在胶体金溶液中的终浓度为1%（体积百分含量），静置30min。12000rpm、4℃离心30min, 弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/20的复溶缓冲液将沉淀重悬，得到的甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物溶液的浓度为50μg单抗/ml溶液，置4℃备用。 

复溶缓冲液：含牛血清白蛋白、吐温-80 的0.02mol/L、 pH7.2 的磷酸盐溶液，其中牛血清白蛋白在复溶缓冲液中的终浓度为0.06～0.1％（体积百分含量），吐温-80在复溶缓冲液中的终浓度为0.05～0.10％（质量百分含量）。 

5、将甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物冻干到微孔试剂上 

向微孔试剂微孔中加入50μl甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物，放入冷冻干燥机中，在冷阱温度为-50℃条件下，预冻3h后，再真空干燥15h，即可取出，得到冻干有甲砜霉素药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂。 

6、样品吸收垫的准备 

将样品吸收垫置于含牛血清白蛋白（牛血清白蛋白在缓冲液中的终浓度为0.5%（体积百分含量））、pH为7.2、0.05mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃烘2h备用。 

7、反应膜的制备 

包被过程：用磷酸缓冲液将甲砜霉素半抗原-卵清蛋白偶联物稀释到10mg/mL，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测区，包被量为1.0μg/cm²；用0.01mol/L、pH 7.4 PBS 缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释到200μg/ml，用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控区，包被量为1.0μg/cm²。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h，备用。 

（二）各部件的组装 

1、试纸条的组装： 

将所述样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次按顺序黏贴在所述底板上；样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；在组装好试纸的样品吸收垫端黏贴保护膜，保护膜上印有MAX标记线。 

2、试纸组装 

将上述步骤1得到试纸条与微孔试剂组装，在2～8℃的环境中储存，有效期12个月。 

二、试纸的灵敏度和特异性检验 

（一）灵敏度试验  

将氟苯尼考和甲砜霉素标准品（购自德国Dr）；稀释成如下不同浓度：0、1、2、4、5、8μg/L氟苯尼考；0、1、2、4、5、8μg/L的甲砜霉素；所用的稀释液为pH为7.2、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液。 

用试纸进行检测。将试纸插入检测，结果为：滴试0、1、2、4μg/L氟苯尼考，0、 1、2、4μg/L甲砜霉素时，试纸条上显示出肉眼可见的两条红色条线，呈阴性；当滴试5、8μg/L氟苯尼考，5、8μg/L甲砜霉素时，试纸条质控区显色，但检测区不显色，呈阳性；表明，本试纸对氟苯尼考和甲砜霉素的检测限均为5μg/L。 

（二）特异性试验 

特异性常用交叉反应率表示，是指抗体与结构不同的抗原决定簇发生结合的能力。本试纸对氟苯尼考和甲砜霉素的检测灵敏度均为5μg/L，将牛奶中常检的其他药物，如三聚氰胺、群勃龙醋酸酯、磺胺类、氯霉素类、大环内酯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类用pH为7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液进行稀释。用实施例1中所述的试纸进行检测，结果显示三聚氰胺、群勃龙醋酸酯、磺胺类药物、氯霉素类药物、大环内酯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类药物在500μg/L浓度时，试纸条质控区和检测区均显色，呈阴性，可以得出本试纸未对这些药物发生交叉反应。 

实施例3、试纸的应用 

一、用实施例1中所述试纸检测牛奶中氟苯尼考和甲砜霉素 

本发明的试纸可以检测牛奶样品。一般的检测方法如下： 

1、检测方法 

向微孔试剂中滴加需检测的样品溶液，混匀后，将试纸有MAX线标记端的试纸条朝下插入微孔试剂，在5min内观看结果。 

2、检测结果判定 

氟苯尼考和甲砜霉素药物在样品中浓度高于或等于试纸最低检测限时，胶体金抗体与氟苯尼考或甲砜霉素结合，从而在检测区内因为竞争反应不会与甲砜霉素半抗原偶联物结合而不出现红色条带，呈阳性。阴性样品在检测过程中由于缺少抗体抗原竞争反应，将会在检测区与质控区内出现红色条带。如图3所示。 

阳性：当质控区（C）显示出红色条带，而检测区（T）不显色时，判为阳性。如图3a所示 

阴性：当质控区（C）显示出红色条带，检测区（T）同时也显示出红色条带，判为阴性。如图3b所示 

无效：当质控区（C）不显示出红色条带，则无论测试区（T）显示出红色条带与否，该试纸判为无效。如图3c、3d所示 

下面具体举例： 

取已知氟苯尼考含量大于5μg/L的牛奶阳性样品20份和氟苯尼考含量小于5μg/L的牛奶样本阴性样品20份，用3个批次生产的试纸分别进行检测，计算其阴阳性率。 

表1、检测阳性样本结果 

表2、检测阴性样本结果 

结果表明：用3个批次生产的试纸检测阳性牛奶样本时，阳性符合率为100%；检测20份阴性牛奶样本时，阴性符合率为100%。 

取已知甲砜霉素含量大于5μg/L的牛奶阳性样品20份和甲砜霉素含量小于5μg/L 的牛奶样本阴性样品20份，用3个批次生产的试纸分别进行检测，计算其阴阳性率。 

表3、检测阳性样本结果 

表4、检测阴性样本结果 

结果表明：用3个批次生产的试纸检测阳性牛奶样本时，阳性符合率为100%；检测20份阴性牛奶样本时，阴性符合率为100%。 

本发明的检测氟苯尼考和甲砜霉素试纸可以对氟苯尼考和甲砜霉素残留进行快速 检测。 

Claims (10)

1.一种检测氟苯尼考和甲砜霉素的试纸，其特征在于包括试纸条和微孔试剂，所述试纸条包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板，所述反应膜上有检测区和质控区，检测区包被有甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体，所述微孔试剂上冻干有甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物。

2.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于所述试纸条由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次黏贴在底板上组成，所述微孔试剂上具有微孔塞。

3.根据权利要求2所述的试纸，其特征在于：所述保护膜粘贴在样品吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线。

4.根据权利要求3所述的试纸，其特征在于：所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一侧，所述质控区位于远离有MAX标记的保护膜的一侧。

5.根据权利要求4所述的试纸，其特征在于：所述甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物由甲砜霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白。

6.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于：甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物中的甲砜霉素药物特异性抗体是以甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；当甲砜霉素特异性抗体为甲砜霉素药物单克隆抗体时，质控区包被羊抗鼠抗抗体；当甲砜霉素药物特异性抗体为甲砜霉素药物多克隆抗体时，质控区包被羊抗兔抗抗体；所述甲砜霉素半抗原是由甲砜霉素与溴乙酸叔丁酯反应后脱脂得到的。

7.根据权利要求6所述的试纸，其特征在于所述甲砜霉素单克隆抗体由保藏号CGMCC No. 6067的细胞株分泌得到。

8.一种制备权利要求1-7任一项所述的试纸方法，其包括步骤：

1）制备冻干有甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2）制备具有包被甲砜霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3）将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、保护膜、吸水垫、底板组装成试纸条；

4）将1）和3）制备好的冻干有甲砜霉素药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸条组装。

9.一种牛奶样本中氟苯尼考和甲砜霉素残留的检测方法，其包括步骤：

1）用权利要求1-7任一项所述的试纸进行检测；

2）分析检测结果。

10.保藏号为CGMCC No. 6067的甲砜霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株D-4-1。

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