CN103724422B - 一种裂解胸腺素β4的方法 - Google Patents

一种裂解胸腺素β4的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103724422B
CN103724422B CN201410014225.2A CN201410014225A CN103724422B CN 103724422 B CN103724422 B CN 103724422B CN 201410014225 A CN201410014225 A CN 201410014225A CN 103724422 B CN103724422 B CN 103724422B
Authority
CN
China
Prior art keywords
extrasin beta
peptide
filtrate
trifluoroacetic acid
filter cake
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410014225.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103724422A (zh
Inventor
冷国庆
余荣熹
王艳
王浩
迟帅
刘宇帅
田辉
张琪
李迎新
肖明辉
李喜全
赵民喜
苏宏健
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HARBIN JIXIANGLONG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
HARBIN JIXIANGLONG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HARBIN JIXIANGLONG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical HARBIN JIXIANGLONG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201410014225.2A priority Critical patent/CN103724422B/zh
Publication of CN103724422A publication Critical patent/CN103724422A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103724422B publication Critical patent/CN103724422B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/57581—Thymosin; Related peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种裂解胸腺素β4的方法，包括对胸腺素β4肽树脂进行裂解得到粗肽的步骤；所述裂解，采用三氟乙酸、茴香硫醚、乙二硫醇、苯酚、水、甲硫醚、碘化铵的混合溶剂作为裂解试剂；本发明的裂解胸腺素β4的方法，大大提高了粗肽纯度，同时大大提高了总收率，降低了生产成本，工艺简单，便于工业化生产。

Description

一种裂解胸腺素β4的方法
技术领域
本发明涉及一种多肽的裂解方法，具体涉及胸腺素β4的裂解方法。
背景技术
胸腺肽（thymosin）由Goldstein和White于1966年首次从小牛胸腺中提取得到。根据等电点的不同，可将胸腺肽分为α（PI<5）、β（5<PI<7）和γ（PI>7）等3类，目前已有20多种β胸腺肽（Tβ）异构体被鉴定，而人体内主要存在3种，即胸腺素β4（Tβ4）、Tβ10和Tβ15，其中胸腺素β4含量最高。胸腺素β4是由43个氨基酸残基组成的结构高度保守的水溶性多肽，相对分子质量为4964。
胸腺素β4的分子式为： 
Ac-Ser-Asp-Lys-Pro-Asp-Met-Ala-Glu-Ile-Glu-Lys-Phe-Asp-Lys-S er-Lys-Leu-Lys-Lys-Thr-Glu-Thr-Gln-Glu-Lys-Asn-Pro-Leu-Pro-Se r-Lys-Glu-Thr-Ile-Glu-Gln-Glu-Lys-Gln-Ala-Gly-Glu-Ser-OH胸腺素β4被认为是主要的球形肌动蛋白（G-肌动蛋白）结合肽，能与G-肌动蛋白单体结合从而阻断其聚合。此外，胸腺素β4还具有多种生物学功能，如促进血管生成、创伤愈合、角膜修复、抑制炎症，以及调控肿瘤转移等。
最近的研究发现,在心肌、角膜和皮肤的创伤愈合过程中,胸腺素β4主要是作为一种化学诱导因子,调节多种生长因子的表达以及趋化新生细胞的迁移。由于机体自身修复愈合的能力极其有限,一旦发生损伤或者病变很难自愈,甚至导致溃疡或瘢痕形成,多需要外缘性修复或启动内源性修复,但目前尚未发现有效的促进创伤愈合的药物，胸腺素β4为创伤愈合药物的研究提供了一个新方向。
裂解是将肽树脂经过裂解试剂处理得到粗肽的过程，目前，胸腺素β4以及其他多肽类产品的裂解方法主要有以下方法：
方法1氟化氢裂解，第一步先将氟化氢气体冷冻成液体，第二步将氟化氢液体加入到树脂中反应2小时，控制反应温度0度，裂解完毕真空抽走氟化氢，第三步用乙醚洗涤树脂，第四步过滤除掉乙醚，第五步用水溶解粗肽过滤除掉树脂，得到粗肽水溶液。
方法2对三氟甲基水杨酸裂解，第一步配置裂解液30%二甲硫醚、20%清除剂、40%三氟乙酸、10%三氟甲基水杨酸，第二步将树脂加入裂解液中裂解2小时，第三步过滤抽去反应液，保留树脂，第四步将树脂再次用100%三氟甲基水杨酸裂解2小时，第五步过滤收集滤液，加乙醚沉淀，离心得到粗肽。
上述方法存在以下缺陷：
方法1所需的设备要求高，成本投入较大，操作危险性大，对环境污染较严重。
方法2操作过程繁琐，且操作危险性大，试剂使用量大，使产品 成本提高。
由于胸腺素β4具有特殊性，上述方法不适合胸腺素β4的裂解，本发明经过研究，找到了一种新的裂解方法，特别适合胸腺素β4的裂解。
发明内容
本发明的目的是提供一种胸腺素β4的裂解方法，提高胸腺素β4的粗肽纯度，进而提高总收率。
本发明提供一种裂解胸腺素β4的方法，包括以下步骤：1）胸腺素β4肽树脂的制备，2）对胸腺素β4肽树脂裂解得到粗品胸腺素β4，3）精制。
其中，1）胸腺素β4肽树脂的制备包括以下步骤：
用Fmoc-Ser(tbu)-OH和羟基树脂，得到Fmoc-Ser(tbu)-羟基树脂；将Fmoc-Ser(tbu)-羟基树脂逐一偶联得到胸腺素β4肽树脂。
优选可以采用以下方法进行多肽的固相合成：
其中所述的羟基树脂选自：wang树脂、二氯三苯甲基氯树脂，优选wang树脂。因为wang树脂比二氯三苯甲基氯树脂更稳定，价格更低。Fmoc-Ser(tbu)-羟基树脂的制备优选如下操作：将wang树脂加入反应柱中，加入DMF溶胀，溶胀结束，将Fmoc-Ser(tbu)-OH、HOBT、DMAP和DIC用DMF溶解后加入至上述反应柱中，室温下氮气鼓泡120分钟，反应完成，抽去反应液，用DMF洗涤3次，加入乙酸酐、吡啶反应120分钟，抽 去反应液，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，甲醇洗涤3次。
所述由Fmoc-Ser(tbu)-OH、羟基树脂出发得到Fmoc-Ser(tbu)-羟基树脂和由Fmoc-Ser(tbu)-羟基树脂采用Fmoc/tbu策略逐一偶联得到胸腺素β4肽树脂，所使用的偶联剂体系为HOBT和DIC，或者偶联剂体系为TBTU和DIEA。其中步骤2）中胸腺素β4肽树脂的制备优选如下，将Fmoc-Ser(tbu)-羟基树脂加入到反应柱中，加入DMF溶胀后，用25%六氢吡啶的DMF溶液脱FMOC两次，每次15-20分钟，然后用DMF洗涤6次，将Fmoc-Glu(otbu)-OH,HOBT和DIC用DMF溶解后加入至上述反应柱中，室温下氮气鼓泡120分钟，茚三酮检测反应完全，真空抽去反应液，用DMF洗涤3次，用25%六氢吡啶的DMF溶液脱FMOC两次，每次15-20分钟，然后用DMF洗涤6次，重复偶联Fmoc-Glu(otbu)-OH的操作，接下来对
Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、
Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、
Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、
Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、
Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、
Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、
Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、
Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、
Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、
Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、
Fmoc-Glu(otbu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(otbu)-OH、
Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、
Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH和
Fmoc-Ser(tBu)-OH进行偶联，最后得到
Fmoc-Ser(tbu)-Asp(otbu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(otbu)-Met-Ala-Glu(otb u)-Ile-Glu(otbu)-Lys(Boc)-Phe-Asp(otbu)-Lys(Boc)-Ser(tbu)-Lys(B oc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tbu)-Glu(otbu)-Thr(tbu)-Gln(trt)-G lu(otbu)-Lys(Boc)-Asn(trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tbu)-Lys(Boc)-Glu(otb u)-Thr(tbu)-Ile-Glu(otbu)-Gln(trt)-Glu(otbu)-Lys(Boc)-Gln(trt)-Ala-Gly-Glu(otbu)-Ser(tbu)-wang树脂，用25%六氢吡啶的DMF溶液脱FMOC两次，每次15-20分钟，然后用DMF洗涤6次，加入乙酸酐和吡啶，室温下氮气鼓泡120分钟，反应结束，抽去反应液，用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，甲醇洗涤3次，真空干燥，得到胸腺素β4肽树脂，
AC-Ser(tbu)-Asp(otbu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(otbu)-Met-Ala-Glu(otbu)-Ile-Glu(otbu)-Lys(Boc)-Phe-Asp(otbu)-Lys(Boc)-Ser(tbu)-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tbu)-Glu(otbu)-Thr(tbu)-Gln(trt)-Glu(otbu)-Lys(Boc)-Asn(trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tbu)-Lys(Boc)-Glu(otbu)-Thr(tbu)-Ile-Glu(otbu)-Gln(trt)-Glu(otbu)-Lys(Boc)-Gln(trt)-Ala-Gl y-Glu(otbu)-Ser(tbu)-wang树脂。
本发明最重要的发明点为2）对胸腺素β4肽树脂裂解得到粗品胸腺素β4的方法，所述方法步骤如下：
将裂解试剂和胸腺素β4肽树脂混合反应，反应结束后，过滤，收集滤液，将滤液加入冰乙醚中沉淀，过滤，收集固体，得到胸腺素β4粗肽。
其中所述裂解试剂是三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵的混合物。
它们的质量配比如下：三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵=（81～85）：（2～6）：（1～5）：（2～6）：（1～5）：（1～3）：（0.5～1.5）。
最优选：
三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵=83.5：4：3：4：3：2：0.5。
三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵=83：4：3：4：3：2：1。
三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵=82：4：3：4：3：2：2。
其中裂解试剂和胸腺素β4肽树脂的重量比例可以是93%-99%：
1%～7%之间，优选95%：5%。
本发明优选的裂解方法如下：
称量93%-99%重量份的裂解试剂：三氟乙酸，茴香硫醚，乙二硫醇，苯酚，水，甲硫醚，碘化铵的混合溶液至烧杯中，搅拌均 匀，称量1%～7%重量份的胸腺素β4肽树脂，加入上述烧杯中，反应100-150分钟，反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液，将滤液加入冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。
本发明进一步包括对胸腺素β4粗肽进行3）精制的过程，所述精制，步骤如下：
粗肽经过纯化、转盐、冻干得到胸腺素β4精肽；
其中：粗肽经过纯化、转盐、冻干得到胸腺素β4精肽；是采用反相高效液相色谱法进行纯化、转盐，色谱柱为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱，最后通过冻干得到胸腺素β4精肽。
本发明提供了一种裂解胸腺素β4的方法。相较于现有技术，本发明的重点创新之处在于在裂解胸腺素β4时在裂解试剂中加入了碘化铵，同时将各组分的配比调整到最佳比例，采用此种裂解试剂的好处在于，能够有效的清除肽链上的侧链保护基，能够有效防止肽链的氧化，进而提高粗肽纯度；同时大大提高了总收率，降低了生产成本，工艺简单，便于工业化生产。
为进一步说明本发明的优点，以下通过实验数据加以证明：
从以上结果可知，本发明实施例4裂解效果最优。
其中收率的计算方法如下：目的肽含量=（样品主峰峰面积/对照品主峰峰面积）*对照品浓度*溶解样品的体积理论肽含量=理论物质的量*分子质量裂解收率=（目的肽含量/理论肽含量）*100%
纯度的检测方法如下：以乙腈：磷酸（1000:1）为流动相A,以水：磷酸（1000:1）为流动相B，色谱柱为C18柱，检测波长210nm，柱温40℃，流速为1.0m l/min,进行梯度洗脱。初始状态为10%流动相A，30分钟将流动相A升至40%，再于5分钟内将A相升至100%，保持5分钟，然后在2分钟内回到初始状态，保持10分钟。
本发明的裂解试剂，是经过筛选获得的，筛选过程如下：
从以上结果可知，本发明实施例4配方效果最优。
具体实施方式
实施例1
固相合成法获得胸腺素β4肽树脂。
配制裂解液，质量比（三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水=86：4：3：4：3）100克，将配制好的裂解液搅拌均匀。称量5%的胸腺素β4肽树脂（5克），加入上述裂解液中，反应120分钟。反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液。将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。称量 得粗品2.55克，粗肽重量收率：96.2%，通过HPLC检测，粗肽纯度：29.3%
经过高效液相纯化得到胸腺素β4精肽：213.5毫克，总收率：8.1%
实施例2
固相合成法获得胸腺素β4肽树脂。
配置裂解液，质量比（三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚=84：4：3：4：3：2）100克，将配置好的裂解液搅拌均匀。称量5%的胸腺素β4肽树脂（5克），加入上述裂解液中，反应120分钟。反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液。将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。称量得粗品2.63克，粗肽重量收率：99.2%，通过HPLC检测，粗肽纯度：33.5%
经过高效液相纯化得到胸腺素β4精肽：244.1毫克，总收率：9.2%
实施例3
固相合成法获得胸腺素β4肽树脂。
配置裂解液，质量比（三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵=83.5：4：3：4：3：2：0.5）100克，将配置好的裂解液搅拌均匀。称量5%的胸腺素β4肽树脂（5 克），加入上述裂解液中，反应120分钟。反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液。将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。称量得粗品2.88克，粗肽重量收率：108.7%，通过HPLC检测，粗肽纯度：43.5%
经过高效液相纯化得到胸腺素β4精肽：408.7毫克，总收率：15.4%
实施例4
固相合成法获得胸腺素β4肽树脂。
配置裂解液，质量比（三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵=83：4：3：4：3：2：1）100克，将配置好的裂解液搅拌均匀。称量5%的胸腺素β4肽树脂（5克），加入上述裂解液中，反应120分钟。反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液。将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。称量得粗品2.95克，粗肽重量收率：111.3%，通过HPLC检测，粗肽纯度：49.8%
经过高效液相纯化得到胸腺素β4精肽：469.6毫克，总收率：17.7%
实施例5
固相合成法获得胸腺素β4肽树脂。
配置裂解液，质量比（三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵=82：4：3：4：3：2：2）100克，将配置好的裂解液搅拌均匀。称量5%的胸腺素β4肽树脂（5克），加入上述裂解液中，反应120分钟。反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液。将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。称量得粗品2.97克，粗肽重量收率：112.1%，通过HPLC检测，粗肽纯度：46.2%
经过高效液相纯化得到胸腺素β4精肽：435.7毫克，总收率：16.4%。

Claims (6)

1.一种裂解胸腺素β4的方法，其特征在于，包括对胸腺素β4肽树脂进行裂解得到粗肽的步骤，其中所述裂解，采用三氟乙酸、茴香硫醚、乙二硫醇、苯酚、水、甲硫醚、碘化铵混合溶液作为裂解试剂；其质量配比如下：三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵＝83.5：4：3：4：3：2：0.5或83：4：3：4：3：2：1或82：4：3：4：3：2：2，裂解试剂和胸腺素β4肽树脂的重量比例为95％：5％。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：将裂解试剂和胸腺素β4肽树脂混合反应，反应结束后，过滤，收集滤液，将滤液加入冰乙醚中沉淀，过滤，收集固体，得到胸腺素β4粗肽，其中裂解试剂和胸腺素β4肽树脂的重量比例为95％：5％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤如下：称量95％重量份的裂解试剂：三氟乙酸，茴香硫醚，乙二硫醇，苯酚，水，甲硫醚，碘化铵的混合溶液至烧杯中，搅拌均匀，称量5％重量份的胸腺素β4肽树脂，加入上述烧杯中，反应100-150分钟，反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液，将滤液加入冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤如下：配置裂解液100克，三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵＝83.5：4：3：4：3：2：0.5，将配置好的裂解液搅拌均匀，称量5克的胸腺素β4肽树脂，加入上述裂解液中，反应120分钟，反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液，将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤如下：配置裂解液100克，三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵＝83：4：3：4：3：2：1，将配置好的裂解液搅拌均匀，称量5克胸腺素β4肽树脂，加入上述裂解液中，反应120分钟，反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液，将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤如下：配置裂解液100克，三氟乙酸：茴香硫醚：乙二硫醇：苯酚：水：甲硫醚：碘化铵＝82：4：3：4：3：2：2，将配置好的裂解液搅拌均匀，称量5克的胸腺素β4肽树脂，加入上述裂解液中，反应120分钟，反应结束，用砂芯漏斗过滤上述反应液，收集滤液，用三氟乙酸洗涤滤饼，合并滤液，将滤液加入1000ml冰乙醚中沉淀，用砂芯漏斗过滤，收集滤饼，用冰乙醚洗涤滤饼，滤饼放入真空干燥箱内进行真空干燥，得到胸腺素β4粗肽。
CN201410014225.2A 2014-01-13 2014-01-13 一种裂解胸腺素β4的方法 Active CN103724422B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410014225.2A CN103724422B (zh) 2014-01-13 2014-01-13 一种裂解胸腺素β4的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410014225.2A CN103724422B (zh) 2014-01-13 2014-01-13 一种裂解胸腺素β4的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103724422A CN103724422A (zh) 2014-04-16
CN103724422B true CN103724422B (zh) 2015-10-21

Family

ID=50448746

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410014225.2A Active CN103724422B (zh) 2014-01-13 2014-01-13 一种裂解胸腺素β4的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103724422B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104610426A (zh) * 2015-01-07 2015-05-13 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 一种依替巴肽线性肽树脂裂解的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035008A3 (en) * 2002-02-06 2004-11-04 Regenerx Biopharmaceuticals Treatment of infections and other disorders
WO2007009359A1 (fr) * 2005-07-15 2007-01-25 Beijing Northland Biotech Co., Ltd. Derives de thymosine beta 4 et utilisation
CN101412755A (zh) * 2007-12-26 2009-04-22 杭州诺泰制药技术有限公司 一种胸腺素β4的固相合成方法
CN103333237A (zh) * 2013-05-07 2013-10-02 海南双成药业股份有限公司 一种固相片段法合成艾塞那肽

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035008A3 (en) * 2002-02-06 2004-11-04 Regenerx Biopharmaceuticals Treatment of infections and other disorders
WO2007009359A1 (fr) * 2005-07-15 2007-01-25 Beijing Northland Biotech Co., Ltd. Derives de thymosine beta 4 et utilisation
CN101412755A (zh) * 2007-12-26 2009-04-22 杭州诺泰制药技术有限公司 一种胸腺素β4的固相合成方法
CN103333237A (zh) * 2013-05-07 2013-10-02 海南双成药业股份有限公司 一种固相片段法合成艾塞那肽

Also Published As

Publication number Publication date
CN103724422A (zh) 2014-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103497245B (zh) 一种合成胸腺法新的方法
CN103864918B (zh) 一种利拉鲁肽的固相合成方法
CN109627317A (zh) 片段缩合制备索马鲁肽的方法
CN103333237B (zh) 一种固相片段法合成艾塞那肽
CN106928313B (zh) 一种c-端修饰肽的合成方法
CN113880936B (zh) 一种阿巴帕肽的固相合成方法
CN103613656B (zh) 一种艾塞那肽的固相片段合成方法
CN103224558B (zh) 一种艾塞那肽的制备方法
CN101357938B (zh) 固相多肽合成Exenatide的制备方法
CN108047329A (zh) 一种阿巴帕肽的制备方法
CN111087462A (zh) 一种阿巴帕肽的固相合成方法
CN106397573A (zh) 一种利拉鲁肽的固相合成方法
CN104672320A (zh) 一种纯固相合成醋酸鲑降钙素的方法
CN106478805A (zh) 一种glp-1衍生物的制备方法
CN101412755A (zh) 一种胸腺素β4的固相合成方法
CN104177491A (zh) 一种替莫瑞林的制备方法
CN103724422B (zh) 一种裂解胸腺素β4的方法
CN105111301B (zh) 一种鲑鱼降钙素的制备方法
CN107827973A (zh) 一种利拉鲁肽的固相合成方法
CN104311639B (zh) 一种生长抑素的合成工艺
CN108070030A (zh) 洛塞那肽及其类似物的制备方法
CN103159850B (zh) 替可克肽的制备方法
CN103992401B (zh) 一种制备艾塞那肽的方法
CN108976296A (zh) 一种利拉鲁肽的合成方法
CN112175066B (zh) 一种制备舍莫瑞林的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: A type of lysate thymosin b Method of 4

Effective date of registration: 20230707

Granted publication date: 20151021

Pledgee: Harbin Kechuang Financing Guarantee Co.,Ltd.

Pledgor: HARBIN JIXIANGLONG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Registration number: Y2023230000063