CN103713072B - 一种gc-ms靶向性烟草样品甾醇提取方法 - Google Patents
一种gc-ms靶向性烟草样品甾醇提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103713072B CN103713072B CN201410004090.1A CN201410004090A CN103713072B CN 103713072 B CN103713072 B CN 103713072B CN 201410004090 A CN201410004090 A CN 201410004090A CN 103713072 B CN103713072 B CN 103713072B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- sterol
- tobacco
- supernatant
- extracting method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
一种GC-MS靶向性烟草样品甾醇提取方法，包括以下工艺步骤：1）烟草样品冷冻冻干，粉碎机打碎；2）粉碎好样品50mg加入正己烷1.5ml，超声提取；3）提取完样品室温高速离心，上清转移到色谱瓶，氮气吹干，为一；4）沉淀加80%甲醇、20%KOH溶液1.2ml；5）高速离心，取上清转移至色谱瓶，加正己烷1.0ml，震荡、静置；6）取上清，加饱和NaCl1.0ml，取上清为溶液二，一二合并，氮气吹干，加氯仿0.5ml溶解后，即为专一适于GC-MS测定的烟草样品甾醇上样分析溶液。本发明的优点在于：提供了一种最适合烟草叶片甾醇的提取方法；样品用量少，仅为50mg；有机试剂使用种类少，使用量少，相对便宜，毒性较小；提取时间更短，样品重现性较好。
Description
技术领域
本发明涉及烟草代谢组学新鲜烟叶样品甾醇提取方法，具体是一种GC-MS靶向性烟草样品甾醇提取方法，本发明以GC-MS为分析平台，采用了SIM离子模式，分析出适合烟草叶片甾醇的最佳提取方法。
背景技术
植物甾醇是一类广泛存在于自然界中的甾体化合物，属于饱和或不饱和的仲醇，以往人们针对动物甾醇类物质的研究较多，而对植物甾醇有所忽视。烟草中含有多种甾醇类化合物，主要为胆甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和β-谷甾醇等，是构成烟叶油分的主要成分之一。但当烟叶在燃吸时，甾醇的母体多环结构也可形成稠环芳烃，如豆甾醇在750℃下热解生成苯并［α］芘（Stedman R L,1968），因此分析烟草中的植物甾醇对卷烟减害降焦研究十分必要。尽可能多的一次检测到鲜烟叶样品中的甾醇化合物，并准确定性定量，为烟草代谢组学研究提供技术支撑。烟草中常见甾醇的分析方法有衍生化气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、超临界流体色谱法和气质联用法等。
代谢组学研究中最容易引入系统误差的是样品制备过程，其它植物甾醇通常用有机溶剂（如甲醇和氯仿等）提取。目前还没有新鲜烟叶甾醇通用的抽提方法，只能根据其它植物及烤后烟叶的提取方法，结合使用的检测方法（GC-MS），建立新鲜烟叶甾醇通用提取方法。
因此建立一种简单、重现性好的新鲜烟叶甾醇提取方法很有必要，可为后期甾醇的定性定量提供保障，也为烟草代谢组学研究提供技术支持。
发明内容
本发明的目的正是基于上述现有技术状况而专门提供的一种GC-MS靶向性烟草样品甾醇提取方法，利用该方法可实现鲜烟叶样品甾醇的快速、有效提取，且具有提取简单、重现性好的特点。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种GC-MS靶向性烟草样品甾醇提取方法，包括以下工艺步骤：
1）烟草样品冷冻冻干（冻干机冻干温度为-40℃），粉碎机打碎；
2）粉碎好样品50mg加入正己烷1.5ml，25℃下超声提取20 min；
3）提取完样品室温（20℃）高速离心，上清转移到色谱瓶，氮气吹干，为一；
4）沉淀加80%甲醇、20%KOH溶液1.2ml，70℃ 30min；
5）高速离心，取上清转移至色谱瓶，加正己烷1.0ml，震荡、静置；
6）取上清，加饱和NaCl 1.0ml，取上清为溶液二，一二合并，氮气吹干，加氯仿0.5 ml溶解后，即为专一适于GC-MS测定的烟草样品甾醇上样分析溶液。
在本发明中我，所述烟草样品为新鲜烟草叶片。
步骤3）、5）中的高速离心时离心速率为12000rpm，时间10min，所用的色谱瓶为尖底色谱瓶（以便于溶液混合和氮气吹干）。
本发明提取时所用抽提溶液为正己烷，相对其他溶剂（氯仿等），因正己烷密度小（0.6594g/ml）、挥发性小、毒性小，便于烟叶样品沉淀离心，也利于提高样品检测重复性，减少对操作人员的毒害。
本发明具有以下优点：
1. 提供了一种最适合烟草叶片甾醇的提取方法。
2. 样品用量少，仅为50mg。
3. 有机试剂使用种类少，使用量少，相对便宜，毒性较小。
4. 提取时间短，样品重现性好。
附图说明
图1为本发明工艺流程图。
图2为本提取方法的实验样本植物甾醇的色谱峰图。
图3为采用本发明方法对中烟100成熟期新鲜烟叶进行6次重复的植物甾醇色谱峰图。
具体实施方式
本发明以下结合实施例作进一步描述
实施案例
1）本提取方法的实验样本甾醇的色谱峰图
采用该方法对2012年河南中烟100新鲜烟叶样品进行提取，通过GC-MS（SIM）法分析，色谱峰如图2所示，可明确定性7种甾醇（依据已有标样，1、2为内标），已经为所见文献中最多。本发明所确立的提取方法：以正己烷作为提取溶剂（便于烟叶样品沉淀离心，利于提高样品检测重复性，减少对操作人员的毒害），超声提取20min，80%甲醇、20%KOH溶液作为皂化剂，饱和氯化钠溶液洗涤。
2） 方法重复性考查
采用该方法对中烟100成熟期新鲜烟叶进行了6次重复的进样分析，分析结果见图3，随机序列分析中，单独提取的6次重复实验，重现性好。
Claims (3)
1.一种GC-MS靶向性烟草样品甾醇提取方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
1）烟草样品冷冻冻干，粉碎机打碎，所述烟草样品为新鲜烟草叶片；
2）粉碎好样品50mg加入正己烷1.5ml，25℃下超声提取20 min；
3）提取完样品室温20℃高速离心，上清转移到色谱瓶，氮气吹干，为一；
4）沉淀加80%甲醇、20%KOH溶液1.2ml，70℃ 30min；
5）高速离心，取上清转移至色谱瓶，加正己烷1.0ml，震荡、静置；
6）取上清，加饱和NaCl 1.0ml，取上清为溶液二，一二合并，氮气吹干，加氯仿0.5 ml溶解后，即为专一适于GC-MS测定的烟草样品甾醇上样分析溶液
在步骤3）、5）中，所述的高速离心时离心速率为12000rpm，时间10min。
2.根据权利要求1所述的GC-MS靶向性烟草样品甾醇提取方法，其特征在于：步骤3）、5）中所用的色谱瓶为尖底色谱瓶，以便于溶液混合和氮气吹干。
3.根据权利要求1所述的GC-MS靶向性烟草样品甾醇提取方法，其特征在于：冷冻冻干时的冻干机冻干温度为-40℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410004090.1A CN103713072B (zh) | 2014-01-06 | 2014-01-06 | 一种gc-ms靶向性烟草样品甾醇提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410004090.1A CN103713072B (zh) | 2014-01-06 | 2014-01-06 | 一种gc-ms靶向性烟草样品甾醇提取方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103713072A CN103713072A (zh) | 2014-04-09 |
| CN103713072B true CN103713072B (zh) | 2015-07-29 |
Family
ID=50406216
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410004090.1A Active CN103713072B (zh) | 2014-01-06 | 2014-01-06 | 一种gc-ms靶向性烟草样品甾醇提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103713072B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104101662B (zh) * | 2014-08-01 | 2015-07-08 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种检测新鲜烟叶萜类化合物代谢组学方法 |
| CN106124648B (zh) * | 2016-06-14 | 2019-04-16 | 中国农业科学院烟草研究所 | 一种同时提取并测定烟草西柏三烯二醇、维生素e、植物甾醇的方法 |
| CN110133155B (zh) * | 2019-06-24 | 2021-09-14 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种烟用香精香料的气相色谱-串联质谱分析方法 |
| CN110208414B (zh) * | 2019-06-24 | 2021-10-15 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种定量测定烟草中超多靶标香味成分的分析方法 |
| CN110133156B (zh) * | 2019-06-24 | 2021-10-15 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种高通量测定电子烟烟液中超多靶标香味成分的分析方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101963604B (zh) * | 2010-10-29 | 2013-09-04 | 川渝中烟工业有限责任公司 | 烟草中甾醇的测定方法 |
| CN102980953B (zh) * | 2012-11-26 | 2014-09-03 | 武汉大学 | 一种植物样品中内源性油菜素甾醇的定量检测方法 |
-
2014
- 2014-01-06 CN CN201410004090.1A patent/CN103713072B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103713072A (zh) | 2014-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103713072B (zh) | 一种gc-ms靶向性烟草样品甾醇提取方法 | |
| Shen et al. | Determination of tobacco alkaloids by gas chromatography–mass spectrometry using cloud point extraction as a preconcentration step | |
| Lee et al. | Simultaneous analysis of antioxidants and preservatives in cosmetics by supercritical fluid extraction combined with liquid chromatography–mass spectrometry | |
| Deng et al. | Development of microwave-assisted extraction followed by headspace single-drop microextraction for fast determination of paeonol in traditional Chinese medicines | |
| Deng et al. | Rapid determination of essential oil compounds in Artemisia Selengensis Turcz by gas chromatography-mass spectrometry with microwave distillation and simultaneous solid-phase microextraction | |
| Li et al. | Gas chromatography–mass spectrometry following microwave distillation and headspace solid-phase microextraction for fast analysis of essential oil in dry traditional Chinese medicine | |
| CN103149303B (zh) | 植物油中脂肪酸及角鲨烯的快速测定方法 | |
| Deng et al. | Rapid analysis of essential oil from Fructus Amomi by pressurized hot water extraction followed by solid-phase microextraction and gas chromatography–mass spectrometry | |
| ElSohly et al. | Analysis of the anthraquinones aloe-emodin and aloin by gas chromatography/mass spectrometry | |
| Řimnáčová et al. | A new method for immediate derivatization of hydroxyl groups by fluoroalkyl chloroformates and its application for the determination of sterols and tocopherols in human serum and amniotic fluid by gas chromatography–mass spectrometry | |
| CN102998382B (zh) | 一种烟用添加剂中甲醇、仲丁醇、芝麻酚和二甲苯麝香含量的测定方法 | |
| CN104330496B (zh) | 食用植物油中9种营养物的检测方法 | |
| CN105445407A (zh) | 一种山桐子中脂肪酸和维生素e的检测方法 | |
| CN102980956A (zh) | 一种9-羰基-10,11-去氢泽兰酮的快速提取检测方法 | |
| Xin et al. | Ionic liquid-based dispersive liquid-liquid microextraction coupled with capillary electrophoresis to determine drugs of abuse in urine | |
| Qin et al. | Needle trap device as a new sampling and Preconcentration approach for volatile organic compounds of herbal medicines and its application to the analysis of volatile components in Viola tianschanica | |
| CN104181269B (zh) | 基于山奈酚3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷鉴别蜂花粉的方法 | |
| Song et al. | Comparison of headspace solid-phase microextraction with solvent extraction for the analysis of the volatile constituents of leaf twigs of Chinese arborvitae | |
| CN109633014B (zh) | 一种测定烟叶中21种萜类化合物含量的方法及其应用 | |
| Zhou et al. | Evaluation of microwave‐assisted extraction for aristolochic acid from Aristolochiae Fructus by chromatographic analysis coupled with nephrotoxicity studies | |
| Wu et al. | Rapid analysis of essential oils in fruits of Alpinia oxyphylla Miq. by microwave distillation and simultaneous headspace solid-phase microextraction coupled with gas chromatography-mass spectrometry | |
| CN109781879A (zh) | 一种利用带固相萃取功能的索氏提取装置提取烟用香料中香气成分的方法 | |
| CN109884199A (zh) | 一种蜂蜜中黄酮类成分的含量测定方法 | |
| CN103163231B (zh) | 测定卷烟及主流烟气粒相物中贝母素甲、贝母素乙的方法 | |
| CN102175793B (zh) | 一种检测塑料制品中苏丹红含量的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |