CN103705501A - 槲皮素在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中医药的技术领域，本发明提供了槲皮素在治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。本发明采用槲皮素对多囊卵巢综合征大鼠模型进行试验，发现具有明显的治疗作用，可明显逆转胰岛素抵抗，且槲皮素无肝、肾毒性，副作用小，临床应用前景较好。无耐药性，避免手术创伤，在治疗PCOS中取得颇佳的临床疗效，有较好的临床应用前景。

Description

槲皮素在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用

技术领域

本发明涉及中医药的技术领域，具体涉及一种槲皮素在治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。

背景技术

山楂（Hawthorn Fruit）,又名山里红，为蔷薇科植物，以果实入药。现代药理研究发现，山楂含有槲皮素（Quercetin）、芹菜素（Apigenin）、山奈酚类（Kaempferol）、木犀草素（Luteolin）及二氢黄酮类（Bi-hydroflavonoids）等60余种黄酮类化合物，具有降压、降血脂、健胃止痢、增强心肌收缩力、增加冠脉流量、抗心律不齐、抗菌等作用。中医认为山楂性微温、味酸、甘，入脾、胃、肝经，具有消食化积，活血化瘀之功效，且无抗药性，临床应用疗效颇佳。

槲皮素(Quercetin)是从山楂果实中提取的一种黄酮类化合物，是槲皮素中含量丰富的活性成分，化学名为4H-1-Benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-Flavone，其分子式为C₁₅H₁₀O₇，分子量为302.23，其结构式如下：

                     槲皮素

                      二水槲皮素

现代药理研究表明，槲皮素具有止咳、平喘、降压、降血脂、抗菌、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。临床主要用于治疗慢性支气管炎、高血压、冠心病等（参见文献：崔山风，槲皮素的研究进展，[J]西北药学杂志，2006，21（6）：279.）。

多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是妇科常见的内分泌代谢性疾病，临床常见月经紊乱(如闭经、月经稀发、功血等)、多毛、肥胖、黑棘皮症、痤疮、不孕等症状，高雄激素血症和胰岛素抵抗是其典型临床特征，其中50-70%的患者存在胰岛素抵抗。目前，PCOS仍缺根治性的治疗方法，西医主要是药物和手术，但药物副作用大，手术远期有盆、腹腔粘连，卵巢功能损害等并发症，使其临床应用均受到一定的限制。

目前仍未见槲皮素用以治疗多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的相关研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供槲皮素在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用，它可克服现有技术中西医治疗多囊卵巢综合征缺乏根治性、药物副作用大、手术有并发症等缺陷。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：槲皮素在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用，所述的槲皮素是作为唯一活性成分在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。

所述的槲皮素在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用，槲皮素可以和常规药物辅药制备成注射剂、片剂、丸剂、胶囊、糖锭剂、悬浮剂、乳剂、栓剂或者气溶胶等。

所述的槲皮素可采用生物提纯方法从芦丁（芸香甙），槲皮甙，金丝桃甙等植物的花、叶、果实中提取分离得到，也可购自市售产品；可以是槲皮素、二水槲皮素、槲皮素的衍生物。

本发明采用槲皮素（100mg/kg）对多囊卵巢综合征大鼠模型进行动物实验，发现具有明显的治疗作用，可明显逆转胰岛素抵抗，且槲皮素无肝、肾毒性，副作用小，临床应用前景较好。无耐药性，避免手术创伤，在治疗PCOS中取得颇佳的临床疗效，有较好的临床应用前景。

本发明为治疗多囊卵巢综合征提供了新的药物和治疗手段，且克服现有技术中西医治疗多囊卵巢综合征缺乏根治性、药物副作用大、手术有并发症等缺陷。

具体实施方式

现结合实施例，对本发明作进一步描述，但本发明的实施并不仅限于此。实施例1

选用Wister大鼠，用于制备多囊卵巢综合征胰岛素抵抗动物模型，对成功模型鼠进行药物干预。

采用ELISA等方法进行检测，采用统计软件SPSS17.0进行分析，明确槲皮素对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗动物模型的治疗作用及可能的作用机制。

1.材料

1.1实验动物

21日龄的SPF级雌性Wister大鼠75只，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，饲养于第二军医大学海医系动物中心。25℃恒温（50%湿度）清洁级饲养，不加饲维生素制品，12h光照和12h黑暗周期性交替进行。

1.2主要器械

高精度变焦光学显微镜(日本PLYMPUS公司BH-2型)，低温离心机(上海中科生物医学高科技开发有限公司TDL-5型)，血糖仪(德国ACCU-CHEKActive)，血糖试纸（德国ACCU-CHEK罗氏乐康全），-80℃低温冰箱（美国Forma725型），毛细玻璃管，眼科剪，眼科镊等。

1.3主要试剂

脱氢表雄酮(Sigma公司)，芝麻油(Sigma公司)，槲皮素(Sigma公司)，二甲双胍(上海紫一有限公司)，血糖仪（德国ACCU-CHEK Active），血清胰岛素(INS)、睾酮(T)酶联免疫ELISA检测试剂盒（美国Novertaine公司）。

1.4实验方法

1.4.1多囊卵巢综合征胰岛素抵抗动物模型的建立

21日龄Wister大鼠每日颈背部皮下注射脱氢表雄酮（DHEA）0.6mg/100g+0.2ml注射用芝麻油，连续注射20天后行阴道脱落细胞学观察10天，阴道上皮细胞持续呈角化状态的大鼠作为DHEA诱导成功的大鼠多囊卵巢综合征动物模型，进入后续实验，不典型者弃去不用。将成功模型鼠当晚8时禁食，次晨8时眶静脉取血做空腹血糖和胰岛素检测，血糖检测：开启血糖机，当显示屏出现试纸符号及闪烁的滴血符号时，将适量血滴紧贴于弧线形试纸边缘，血液便会自动被吸入黄色窗口内，直至血液完全填满整个黄色窗口，测试会自动进行测试结果于26秒后与时间和日期同时显示并自动储存。胰岛素检测：将血静置2小时后，离心（2000转/分）15分钟，分离血清，采用酶联免疫ELISA方法检测血胰岛素水平。

依据计算公式：大鼠胰岛素抵抗指数=空腹血糖×空腹胰岛素/22.5，其中胰岛素抵抗指数大于2.7的大鼠，作为成功的大鼠多囊卵巢综合征胰岛素抵抗动物模型，进入后续实验。

1.4.2对实验组大鼠分组并进行药物干预：

正常组：灌胃，生理盐水——10ml/kg

模型组：灌胃，生理盐水——10ml/kg

中药组：灌胃，槲皮素（100mg/kg）+生理盐水——10ml/kg

西药组：灌胃，二甲双胍（100mg/kg）+生理盐水——10ml/kg

以上四组，均在同等条件下饲养28天。

2.观察指标及结果

2.1入组各组大鼠胰岛素抵抗指数情况

依据计算公式：大鼠胰岛素抵抗指数=空腹血糖×空腹胰岛素/22.5，该指数大于2.8的大鼠为胰岛素抵抗模型鼠，从下表可以看出模型对照组胰岛素抵抗指数明显高于正常对照组（p<0.01）。

表1入组大鼠胰岛素抵抗指数情况

与A组比较：^﹡﹡p<0.01

2.2大鼠动情周期

药物干预28天后，行大鼠阴道脱落细胞学观察10天，按照大鼠性周期各阶段阴道涂片组织学特点，观察大鼠性周期变化情况，其性周期恢复率达到58.33％，与未进行药物干预的模型组相比，差异具有统计学意义。表明槲皮素对于多囊卵巢综合征大鼠模型性周期具有明显的改善作用，其作用与阳性对照药二甲双胍无差别。

2.3大鼠体重及卵巢系数

体重差异不明显。表明DHEA制备多囊卵巢综合征动物模型对其体重影响较小，而各组药物干预对大鼠体重的影响亦不显著。

手术摘取大鼠双侧卵巢，电子天平称取湿重，计算卵巢系数。模型组大鼠卵巢湿重较正常组显著增加，而药物干预组卵巢湿重显著低于模型组。因此可以得出在体重基本相同的情况下DHEA造模成功的大鼠卵巢体积增大，湿重增加，槲皮素和二甲双胍两种药物均可以缓解这种情况，但均无统计学意义，两药之间亦无统计学差异。

2.4大鼠肝肾及卵巢形态病理学观察

2.4.1肝脏

正常组与中药组：小叶结构完好，肝窦清晰，肝细胞呈放射状排列，大小均匀，单核，核浆比正常，胆管上皮呈立方形。

西药组：个别出现肝细胞脂肪样变性，胞浆透明度增加，细胞胞浆不清，

部分细胞核崩解，肝板破坏，汇管区增粗。

2.4.2肾脏

各组均正常，肾盂上皮细胞呈假复层（适合功能要求），上皮完整。

2.4.3卵巢

正常组：卵巢颜色鲜艳，镜下可见多个黄体及不同发育期的卵泡，颗粒细胞层6-8层，形态完整，排列整齐。

模型组：卵巢颜色苍白，镜下可见多个囊性扩张的卵泡，颗粒细胞层1-2层，甚或消失，黄体减少。

药物组：卵巢颜色好转，镜下囊性扩张的卵泡减少，不同发育期的卵泡及黄体的数量增加，颗粒细细胞层数增加至3-6层。

2.5各组大鼠胰岛素释放试验情况

大鼠药物干预结束后，依据阴道脱落细胞学检查，将处于动情前期的大鼠眶静脉取血，检测血清胰岛素水平。从下表可以看出，模型对照组各时间点的血INS水平均高于正常对照组（p<0.05）；中药干预组与模型对照组比较，空腹、餐后30min、餐后60min、餐后120min血INS水平均低于后者（p<0.05），见表2-1、2-2、2-3、2-4。

表2-1各组大鼠胰岛素释放试验情况

与B组比较：^﹡p<0.05;与A组比较：^△p<0.05

表2-2各组大鼠胰岛素释放试验情况

与B组比较：^﹡p<0.05;与A组比较：^△p<0.05

表2-3各组大鼠胰岛素释放试验情况

与B组比较：^﹡p<0.05;与A组比较：^△p<0.05

表2-4各组大鼠胰岛素释放试验情况

与B组比较：^﹡p<0.05;与A组比较：^△p<0.05

实验结论：槲皮素可以改善多囊卵巢综合征胰岛素抵抗模型大鼠各时点血清胰岛素的含量，有改善胰岛素抵抗的作用。

2.6各组大鼠血胰岛素曲线下面积情况

依据计算公式：大鼠血胰岛素释放曲线下面积＝1/4×空腹值＋3/4×60min值＋1/2×120min值，模型对照组大鼠血胰岛素曲线下面积大于正常对照组（p<0.05）；中药干预组血胰岛素曲线下面积与模型对照组相比有统计学差异(p<0.05)，见表3。

表3各组大鼠血胰岛素曲线下面积变化情况

与B组比较：^﹡p<0.05;与A组比较：^△p<0.05

实验结论：槲皮素可以降低多囊卵巢综合征胰岛素抵抗模型大鼠血胰岛素释放曲线下面积，有改善胰岛素抵抗的作用。

2.7各组大鼠胰岛素抵抗指数变化情况

中药干预组胰岛素抵抗指数与模型对照组相比，有统计学差异(p<0.05)，西药干预组胰岛素抵抗指数与模型对照组相比，有统计学差异(p<0.05)见表4。

表4各组大鼠胰岛素抵抗指数情况

与B组比较：^﹡p<0.05;与A组比较：^△p<0.05

实验结论：槲皮素可以降低多囊卵巢综合征胰岛素抵抗模型大鼠的胰岛素抵抗指数，有改善胰岛素抵抗的作用。

2.8中药干预组大鼠用药前后胰岛素抵抗指数变化情况

实验结果见表5。

表5中药干预组大鼠用药前后胰岛素抵抗指数情况

与A组比较：^﹡p<0.05

实验结论：槲皮素可以降低多囊卵巢综合征胰岛素抵抗模型大鼠的胰岛素抵抗指数，有改善胰岛素抵抗的作用。

2.9西药干预组大鼠用药前后胰岛素抵抗指数变化情况

实验结果见表6。

表6西药干预组大鼠用药前后胰岛素抵抗指数情况

与A组比较：^﹡p<0.05

实验结论：二甲双胍可以降低多囊卵巢综合征胰岛素抵抗模型大鼠的胰岛素抵抗指数，有改善胰岛素抵抗的作用。

根据以上各组大鼠血清胰岛素ELISA检测结果可以看出，模型对照组各时间点的血INS水平及胰岛素抵抗指数均高于正常对照组，这与多囊卵巢综合征胰岛素抵抗患者血清胰岛素水平相似，表明我们造模成功。而槲皮素药物干预后可明显降低大鼠血清胰岛素的含量，且对胰岛素抵抗指数具有明显的逆转作用，与西药二甲双胍药效比较无统计学差异。因此可以得出：中药单体槲皮素对胰岛素抵抗具有明显的逆转作用，对多囊卵巢综合症胰岛素抵抗大鼠模型具有显著的治疗作用。

上述实验结果表明：槲皮素可以改善多囊卵巢综合征胰岛素抵抗模型大鼠血清胰岛素的含量，及胰岛素抵抗指数，从而逆转其紊乱的性周期，对多囊卵巢综合征具有显著的治疗作用，且槲皮素不具有肝肾毒性，具有安全性。因此可以得出：槲皮素可以应用于制备治疗多囊卵巢综合征药物，并且具有良好的前景。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (2)

1.槲皮素在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用，其特征在于，所述的槲皮素是作为唯一活性成分用于制备治疗多囊卵巢综合征的药物。

2.根据权利要求1所述的槲皮素在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用，其特征在于，槲皮素和常规药物辅料制备成注射剂、片剂、丸剂、胶囊、糖锭剂、悬浮剂、乳剂、栓剂或气溶胶。