CN103675133A - 气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、有机酸的方法 - Google Patents
气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、有机酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103675133A CN103675133A CN201310652674.5A CN201310652674A CN103675133A CN 103675133 A CN103675133 A CN 103675133A CN 201310652674 A CN201310652674 A CN 201310652674A CN 103675133 A CN103675133 A CN 103675133A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- gas chromatography
- sample
- amino acid
- mass spectrum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,属于生物化学检验测定技术领域。本发明检测方法步骤包括:(1)取发酵液,高速离心,分别收集细胞和细胞外液;(2)细胞内代谢物样品制备,将收集的菌体用生理盐水清洗,冷甲醇溶解后超声破碎,低温萃取,离心收集萃取上清液,加入内标物,低温真空烘干;(3)样品衍生,加入糖衍生剂、氨基酸衍生剂;(4)气相色谱-质谱分析和数据采集。本发明具有样品处理简单,操作简便,检测氨基酸、有机酸时间短,灵敏度高,检测结果重复性高,可实现多个样品制备等优点。
Description
技术领域
本发明属于生物化学检验测定技术领域,特别是涉及一种气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、有机酸的方法。
背景技术
在利用气相色谱-质谱检测糖代谢物方面,目前已有相关技术报道,如专利201210046953.2,公布了一种气相色谱-质谱检测尿糖的方法,包括如下步骤:(1)对待检尿液样本完成尿酶处理;(2)加入内标品,采用冷冻乙醇进行沉淀蛋白的处理,将样本吹干;(3)对上述样本进行甲基硅烷化衍生处理;(4)采用上述1-3的步骤处理标准糖,得到标准糖样本;(5)采用气相色谱-质谱联用仪对标准糖样本和待检尿液样本进行检测;(6)以标准糖样本的检测结果作为参比曲线,用常规算法对待检尿液样本的糖进行定量。该专利发明主要应用领域为尿样检测,且该检测方法仅局限于糖代谢物的检测。
对于微生物胞内、胞外代谢物的检测研究,可以揭示微生物在发酵条件下的代谢规律,尤其是发酵条件对于微生物目标产物的影响规律。掌握微生物的代谢规律可以不仅有利的促进目标产物的产量提升,而且可确定菌体内的代谢通量分布,进而利用基因工程手段实现菌体内代谢途径的优化与重构,实现目标产物高效生物合成。
目前对于细胞内的代谢物分析检测方法局限用于特定某类物质,不可实现多类代谢物同时检测。由于细胞内各成分含量复杂多样,对于样品的处理方法很关键,目前还没有相关细胞内、细胞外代谢物的系统处理检测方法,使得开发一种更为灵敏的、广谱的、通用的发酵代谢物检测方法,鉴定各种谱峰对映的化合物结构,以及与其它虚拟模型的整合,成为微生物代谢组研究的热点。
发明内容
本发明的目的是提供一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,弥补目前在微生物发酵中对代谢物系统检测方法的空白,克服现有检测技术干扰因素很多、操作繁琐、测试成本高、灵敏度低、检测范围窄等缺点。
本发明的方案是通过这样实现的:一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,检测方法步骤包括:
(1)取发酵液,高速离心,分别收集菌体和上清液Ⅰ;
(2)细胞内代谢物样品制备:取步骤1)得到的菌体,用生理盐水清洗2~3次,冷甲醇溶解后超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,离心收集50~200ul萃取后裂解上清液Ⅱ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅱ体积与内标物核糖醇重量比例为50~200ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ;
(3)样品衍生:在步骤2)得到的样品Ⅰ中,分别加入50~150ul糖衍生剂,恒温放置1.5~4h,再分别加入50~150ul糖衍生剂,恒温放置过夜,衍生完毕,离心衍生后的样品Ⅰ,收集上清得到待测胞内样品Ⅰ;
(4)利用气相色谱-质谱对步骤3)得到的待测胞内样品Ⅰ,进行分析和数据采集。
作为本发明的进一步限定,所述菌体其取样量为用冷甲醇溶解后生物量干重达0.2~1.0g/ml;所述的冷甲醇为经过冷浴槽预冷至-40℃;所述低温萃取为-40℃至-50℃下萃取2~7h。
作为本发明的进一步改进,所述糖衍生剂为0.1~0.3mg甲氧胺盐酸溶于10ml吡啶溶液中配制而得;所述氨基酸衍生剂为50~200ul三甲基氯硅烷溶于10ml的三氟乙酰胺中。
作为本发明的进一步改进,所述气相色谱-质谱其仪器分析条件为:气相色谱:色谱柱为30 m×0.25 mm的HP-5MS或者DB-5MS毛细管柱,进样口温度300℃,检测器温度250℃,柱箱升温程序平衡时间3 min→80℃维持1min →2℃/min升温至100℃→15℃/min升温至220℃→30℃/min升温至300℃→300℃维持3 min,进样体积1μL;质谱:离子源EI,检测器为四级杆,电离能70 eV,离子源表面温度280℃。
作为本发明的进一步改进,该方法应用于检测酵母菌、乳酸菌、梭菌、霉菌的生物发酵过程中的细胞内的氨基酸、有机酸。
作为本发明的进一步改进,其特征在于,所述氨基酸为谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天门冬氨酸、天门冬酰胺、酪氨酸、脯氨酸;所述有机酸为琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、丙酮酸、富马酸。
本发明的实质性特点和显著进步是:(1)该方法可以检测细胞内细胞内中氨基酸类物质的检测,不需要对发酵液进行多次复杂处理,节约时间和简化操作步骤,及时得到发酵过程中微生物代谢规律,分析胞内代谢流量。(2)该方法采用冷甲醇萃取细胞内代谢物法,其萃取效果优良,获得细胞内较多代谢物种类,有利于代谢规律的分析。(3)样品分析得到的色谱峰分析效果良好,可对谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天门冬氨酸、天门冬酰胺、酪氨酸、脯氨酸等氨基酸实现检测;可对琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、丙酮酸、富马酸等有机酸实现检测。
附图说明
图1.GC-MS检测图谱。图中1为甘氨酸; 2为丝氨酸;3为色氨酸;4为丙氨酸;5为甲硫氨酸;6为脯氨酸;7为天门冬氨酸;8为酪氨酸;9为核糖醇;10为琥珀酸;11为富马酸。
具体实施方式
下面将通过实施例对本发明方法进一步的描述,这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。
以下实施例中离心条件为:-4℃下10000 rpm离心10 min。
以下实施例中气相色谱-质谱其仪器分析条件为:气相色谱:色谱柱为30 m×0.25 mm的HP-5MS或者DB-5MS毛细管柱,进样口温度300℃,检测器温度250℃,柱箱升温程序平衡时间3 min→80℃维持1min →2℃/min升温至100℃→15℃/min升温至220℃→30℃/min升温至300℃→300℃维持3 min,进样体积1μL;质谱:离子源EI,检测器为四级杆,电离能70 eV,离子源表面温度280℃。
以下实施例皆可实现对谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天门冬氨酸、天门冬酰胺、酪氨酸、脯氨酸等氨基酸进行检测;可对琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、丙酮酸、富马酸等有机酸实现检测。
实施例1
取酵母菌发酵培养液。
(1)细胞内代谢物样品制备:取5ml发酵液,离心得到菌体,用生理盐水清洗菌体2次,-40℃冷甲醇溶解后生物量干重达0.2g/ml,超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,低温条件为:-40℃至-50℃下萃取4h,离心收集150ul萃取后裂解上清液Ⅰ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅰ体积与内标物核糖醇重量比例为150ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ。
(2)细胞外液样品制备:取发酵液,离心得到上清液Ⅱ,取300ul上清液Ⅱ,在清液Ⅱ中加入乙腈除去蛋白,上清液Ⅱ与乙腈体积比为1:1.2,涡旋振荡,再离心收集得上清液Ⅲ,加入内标物核糖醇溶液,上清液Ⅲ体积与内标物核糖醇重量比例为100ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞外液样品Ⅱ。
(3)样品衍生:在步骤1)和步骤2)得到的样品Ⅰ和样品Ⅱ中,分别加入100ul糖衍生剂(糖衍生剂为0.1mg甲氧胺盐酸溶于10ml吡啶溶液中配制而得),恒温放置1.5h,再分别加入100ul氨基酸衍生剂(氨基酸衍生剂为100ul三甲基氯硅烷溶于10ml的三氟乙酰胺中配制而得),恒温放置过夜,衍生完毕,分别离心衍生后的样品Ⅰ和样品Ⅱ,对应收集各自上清得到待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ。
(4)按照气相色谱-质谱其仪器分析条件,对待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ进行分析和数据采集。
检测结果如图1所示。
实施例2
取乳酸菌发酵培养液。
(1)细胞内代谢物样品制备:取5ml发酵液,离心得到菌体,用生理盐水清洗菌体3次,-40℃冷甲醇溶解后生物量干重达1.0g/ml,超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,低温条件为:-40℃至-50℃下萃取5h,离心收集100ul萃取后裂解上清液Ⅰ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅰ体积与内标物核糖醇重量比例为100ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ。
(2)细胞外液样品制备:取发酵液,离心得到上清液Ⅱ,取350ul上清液Ⅱ,在清液Ⅱ中加入乙腈除去蛋白,上清液Ⅱ与乙腈体积比为1:0.7,涡旋振荡,再离心收集得上清液Ⅲ,加入内标物核糖醇溶液,上清液Ⅲ体积与内标物核糖醇重量比例为200ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞外液样品Ⅱ。
(3)样品衍生:在步骤1)和步骤2)得到的样品Ⅰ和样品Ⅱ中,分别加入50ul糖衍生剂(糖衍生剂为0.3mg甲氧胺盐酸溶于10ml吡啶溶液中配制而得),恒温放置2.0h,再分别加入150ul氨基酸衍生剂(氨基酸衍生剂为150ul三甲基氯硅烷溶于10ml的三氟乙酰胺中配制而得),恒温放置过夜,衍生完毕,分别离心衍生后的样品Ⅰ和样品Ⅱ,对应收集各自上清得到待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ。
(4)按照气相色谱-质谱其仪器分析条件,对待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ进行分析和数据采集。
实施例3
取梭菌发酵培养液。
(1)细胞内代谢物样品制备:取5ml发酵液,离心得到菌体,用生理盐水清洗菌体3次,-40℃冷甲醇溶解后生物量干重达0.6g/ml,超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,低温条件为:-40℃至-50℃下萃取3h,离心收集200ul萃取后裂解上清液Ⅰ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅰ体积与内标物核糖醇重量比例为200ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ。
(2)细胞外液样品制备:取发酵液,离心得到上清液Ⅱ,取60ul上清液Ⅱ,在清液Ⅱ中加入乙腈除去蛋白,上清液Ⅱ与乙腈体积比为1:1.5,涡旋振荡,再离心收集得上清液Ⅲ,加入内标物核糖醇溶液,上清液Ⅲ体积与内标物核糖醇重量比例为50ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞外液样品Ⅱ。
(3)样品衍生:在步骤1)和步骤2)得到的样品Ⅰ和样品Ⅱ中,分别加入150ul糖衍生剂(糖衍生剂为0.15mg甲氧胺盐酸溶于10ml吡啶溶液中配制而得),恒温放置2.5h,再分别加入50ul氨基酸衍生剂(氨基酸衍生剂为200ul三甲基氯硅烷溶于10ml的三氟乙酰胺中配制而得),恒温放置过夜,衍生完毕,分别离心衍生后的样品Ⅰ和样品Ⅱ,对应收集各自上清得到待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ。
(4)按照气相色谱-质谱其仪器分析条件,对待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ进行分析和数据采集。
实施例4
取霉菌发酵培养液。
(1)细胞内代谢物样品制备:取5ml发酵液,离心得到菌体,用生理盐水清洗菌体2次,-40℃冷甲醇溶解后生物量干重达0.8g/ml,超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,低温条件为:-40℃至-50℃下萃取2h,离心收集50ul萃取后裂解上清液Ⅰ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅰ体积与内标物核糖醇重量比例为50ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ。
(2)细胞外液样品制备:取发酵液,离心得到上清液Ⅱ,取200ul上清液Ⅱ,在清液Ⅱ中加入乙腈除去蛋白,上清液Ⅱ与乙腈体积比为1:1.0,涡旋振荡,再离心收集得上清液Ⅲ,加入内标物核糖醇溶液,上清液Ⅲ体积与内标物核糖醇重量比例为150ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞外液样品Ⅱ。
(3)样品衍生:在步骤1)和步骤2)得到的样品Ⅰ和样品Ⅱ中,分别加入120ul糖衍生剂(糖衍生剂为0.2mg甲氧胺盐酸溶于10ml吡啶溶液中配制而得),恒温放置3.0h,再分别加入80ul氨基酸衍生剂(氨基酸衍生剂为50ul三甲基氯硅烷溶于10ml的三氟乙酰胺中配制而得),恒温放置过夜,衍生完毕,分别离心衍生后的样品Ⅰ和样品Ⅱ,对应收集各自上清得到待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ。
(4)按照气相色谱-质谱其仪器分析条件,对待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ进行分析和数据采集。
实施例5
取酵母菌发酵培养液。
(1)细胞内代谢物样品制备:取5ml发酵液,离心得到菌体,用生理盐水清洗菌体3次,-40℃冷甲醇溶解后生物量干重达0.5g/ml,超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,低温条件为:-40℃至-50℃下萃取3h,离心收集200ul萃取后裂解上清液Ⅰ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅰ体积与内标物核糖醇重量比例为150ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ。
(2)细胞外液样品制备:取发酵液,离心得到上清液Ⅱ,取300ul上清液Ⅱ,在清液Ⅱ中加入乙腈除去蛋白,上清液Ⅱ与乙腈体积比为1:0.5,涡旋振荡,再离心收集得上清液Ⅲ,加入内标物核糖醇溶液,上清液Ⅲ体积与内标物核糖醇重量比例为300ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞外液样品Ⅱ。
(3)样品衍生:在步骤1)和步骤2)得到的样品Ⅰ和样品Ⅱ中,分别加入100ul糖衍生剂(糖衍生剂为0.2mg甲氧胺盐酸溶于10ml吡啶溶液中配制而得),恒温放置4.0h,再分别加入120ul氨基酸衍生剂(氨基酸衍生剂为120ul三甲基氯硅烷溶于10ml的三氟乙酰胺中配制而得),恒温放置过夜,衍生完毕,分别离心衍生后的样品Ⅰ和样品Ⅱ,对应收集各自上清得到待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ。
(4)按照气相色谱-质谱其仪器分析条件,对待测胞内样品Ⅰ和待测胞外样品Ⅱ进行分析和数据采集。
Claims (7)
1.一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,其特征在于,检测方法步骤包括:
(1)取发酵液,高速离心,分别收集菌体和上清液Ⅰ;
(2)细胞内代谢物样品制备:取步骤1)得到的菌体,用生理盐水清洗2~3次,冷甲醇溶解后超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,离心收集50~200ul萃取后裂解上清液Ⅱ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅱ体积与内标物核糖醇重量比例为50~200ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ;
(3)样品衍生:在步骤2)得到的样品Ⅰ中,分别加入50~150ul糖衍生剂,恒温放置1.5~4h,再分别加入50~150ul氨基酸衍生剂,恒温放置过夜,衍生完毕,离心衍生后的样品Ⅰ,收集上清得到待测胞内样品Ⅰ;
(4)利用气相色谱-质谱对步骤3)得到的待测胞内样品Ⅰ,进行分析和数据采集。
2.根据权利要求1所述的一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,其特征在于,所述菌体其取样量为用冷甲醇溶解后生物量干重达0.2~1.0g/ml;所述的冷甲醇为经过冷浴槽预冷至-40℃;所述低温萃取为-40℃至-50℃下萃取2~7h。
3.根据权利要求1或2所述的一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,其特征在于,所述糖衍生剂为0.1~0.3mg甲氧胺盐酸溶于10ml吡啶溶液中配制而得;所述氨基酸衍生剂为50~200ul三甲基氯硅烷溶于10ml的三氟乙酰胺中。
4.根据权利要求3所述的一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,其特征在于,所述气相色谱-质谱其仪器分析条件为:气相色谱:色谱柱为30 m×0.25 mm的HP-5MS或者DB-5MS毛细管柱,进样口温度300℃,检测器温度250℃,柱箱升温程序平衡时间3 min→80℃维持1min →2℃/min升温至100℃→15℃/min升温至220℃→30℃/min升温至300℃→300℃维持3 min,进样体积1μL;质谱:离子源EI,检测器为四级杆,电离能70 eV,离子源表面温度280℃。
5.根据权利要求4所述一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,其特征在于,该方法应用于检测酵母菌、乳酸菌、梭菌、霉菌的生物发酵过程中的细胞内的氨基酸、有机酸。
6.根据权利要求1~2或4~5任一项所述的一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,其特征在于,所述氨基酸为谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天门冬氨酸、天门冬酰胺、酪氨酸、脯氨酸;所述有机酸为琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、丙酮酸、富马酸。
7.根据权利要求3所述的一种气相色谱-质谱检测细胞内氨基酸、有机酸的方法,其特征在于,所述氨基酸为谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天门冬氨酸、天门冬酰胺、酪氨酸、脯氨酸;所述有机酸为琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、丙酮酸、富马酸。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310652674.5A CN103675133A (zh) | 2013-12-05 | 2013-12-05 | 气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、有机酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310652674.5A CN103675133A (zh) | 2013-12-05 | 2013-12-05 | 气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、有机酸的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103675133A true CN103675133A (zh) | 2014-03-26 |
Family
ID=50313330
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310652674.5A Pending CN103675133A (zh) | 2013-12-05 | 2013-12-05 | 气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、有机酸的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103675133A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114778749A (zh) * | 2022-05-05 | 2022-07-22 | 杭州度安医学检验实验室有限公司 | 一种高效测定细胞裂解液中4种有机酸的方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007116322A2 (en) * | 2006-02-17 | 2007-10-18 | Novartis Ag | Purification of bacterial antigens |
CN102246033A (zh) * | 2008-11-12 | 2011-11-16 | 华盛顿大学 | 生物分子的同种型的体内代谢的同时测量 |
-
2013
- 2013-12-05 CN CN201310652674.5A patent/CN103675133A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007116322A2 (en) * | 2006-02-17 | 2007-10-18 | Novartis Ag | Purification of bacterial antigens |
CN102246033A (zh) * | 2008-11-12 | 2011-11-16 | 华盛顿大学 | 生物分子的同种型的体内代谢的同时测量 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
QING YE等: "Microwave-assisted derivatization for methylmalonic acid analysis in human serum by gas chromatography-mass spectrometry", 《ANALYTICAL METHODS》, vol. 2, no. 4, 30 April 2010 (2010-04-30), pages 354 - 358 * |
何瑞华等: "气相色谱-质谱结合化学计量学方法用于2型糖尿病小鼠尿液代谢物的定性定量分析", 《分析科学学报》, vol. 29, no. 4, 31 August 2013 (2013-08-31) * |
孙茂成: "保加利亚乳杆菌代谢组学样品的前处理研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技I辑》, no. 10, 15 October 2013 (2013-10-15) * |
李晓雪等: "拟干酪乳杆菌胞内代谢产物的GC- MS分析方法的建立", 《食品工业科技》, vol. 34, no. 18, 30 September 2013 (2013-09-30), pages 169 - 173 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114778749A (zh) * | 2022-05-05 | 2022-07-22 | 杭州度安医学检验实验室有限公司 | 一种高效测定细胞裂解液中4种有机酸的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109298115B (zh) | 生物样品中多种代谢物定量检测方法及代谢芯片 | |
CN101430307B (zh) | 一种同时分析氨基酸和有机酸代谢物谱的方法 | |
US20160002696A1 (en) | Method to identify bacterial species by means of gas chromatography/mass spectrometry in biological samples | |
Olivier | A metabolomics approach to characterise and identify various Mycobacterium species | |
CN102621249A (zh) | 一种多步衍生法同步分析碱基、核苷、有机酸、脂肪酸、氨基酸及糖类代谢产物的方法 | |
CN103424448A (zh) | 一种电化学适配体传感器检测痕量赭曲霉毒素a的方法 | |
CN107085066B (zh) | 一种用于lc-ms检测黄曲霉菌代谢组学的前处理方法 | |
CN102175809A (zh) | 细胞代谢物相对含量作为细胞数量指标进行数据校正的新方法 | |
CN103257194A (zh) | 同时分析卷烟主流烟气中三种多环芳烃和四种烟草特有亚硝胺的gc-ms/ms方法 | |
CN103293245A (zh) | 同时分析卷烟主流烟气中四种烟草特有亚硝胺(TSNAs)的GC-MS/MS方法 | |
Shen et al. | Quantitative metabolic network profiling of Escherichia coli: An overview of analytical methods for measurement of intracellular metabolites | |
CN104391060A (zh) | Gc-ms研究灰葡萄孢菌代谢组的样品前处理及检测方法 | |
CN103792204A (zh) | 一种基于太赫兹时域光谱技术的微生物快速检测技术 | |
CN102944636B (zh) | 蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的高效液相色谱-质谱检测方法 | |
CN103792312A (zh) | 气相色谱-质谱检测发酵液中氨基酸、糖的方法 | |
CN103675128A (zh) | 气相色谱-质谱检测细胞内外液中氨基酸的方法 | |
CN103364510A (zh) | Hpcl-ms/ms结合代谢流量分析系统评估环境污染物细胞毒性的方法 | |
CN103675132B (zh) | 气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、糖、有机酸的方法 | |
CN103808841B (zh) | 气相色谱-质谱检测发酵液中有机酸、氨基酸、糖的方法 | |
CN103698451A (zh) | 气相色谱-质谱检测发酵液中氨基酸的方法 | |
CN103675133A (zh) | 气相色谱-质谱检测细胞内中氨基酸、有机酸的方法 | |
Deng et al. | Investigation of tomato plant defence response to tobacco mosaic virus by determination of methyl salicylate with SPME-capillary GC-MS | |
CN103675180A (zh) | 气相色谱-质谱检测细胞内中糖、氨基酸的方法 | |
CN103675178A (zh) | 气相色谱-质谱检测发酵液中有机酸、糖的方法 | |
CN103675130A (zh) | 气相色谱-质谱检测细胞内外液中氨基酸、糖的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140326 |