CN103667496A - 人类多巴胺d2受体基因型检测芯片及其应用 - Google Patents
人类多巴胺d2受体基因型检测芯片及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明人类多巴胺2型受体基因型检测芯片,包括固相支持物和固定在其上的寡核苷酸探针,所述探针包含以下序列或其互补序列中的包含DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2TaqIA_G>A(rs1800497)、DRD2_TaqIBG>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)突变位点在内的14-20个连续核苷酸。本发明芯片检测灵敏度率大于96%,特异度率大于98%。
Description
技术领域
本发明涉及微生物或酶,属于基因分析检测产品的基因检测芯片,具体是指一种适用于检测人类多巴胺2型受体基因型的基因检测芯片以及检测人类多巴胺2型受体基因型的方法。
背景技术
多巴胺受体在中枢神经系统中表达,控制运动功能、情绪、内分泌生理系统。多巴胺受体与某些神经精神病(如药物依赖、帕金森病、精神分裂症、狂躁、抑郁症等)、肾病、心血管疾病有关。
多巴胺作为中枢神经系统的重要神经递质,主要参与运动、情感以及神经内分泌的调节。目前已分离出五种多巴胺受体(DA2R),根据它们的生物化学和药理学性质,可分为D1类和D2类受体。D1类受体包括D1和D5受体(在大鼠也称D1A和D1B受体)。D2类受体包括D2,D3和D4受体。两类受体的C端含有磷酸化和棕榈酰化位点,涉及激动剂依赖性受体的去敏感化过程和第四胞内环的形成多巴胺的配体化合物很容易将D1受体和D2受体家族区分开来,但大多数化合物不能区分相同家族的受体亚型。20世纪90年代以来分子生物学以及基因遗传学迅速发展,推动了脑内多巴胺受体(dopamine receptor,DR)的分子克隆、DR亚型结构与功能的关系研究。随着对多巴胺受体亚型研究的不断深入,为多巴胺受体基因多态性与神经性精神病的相关性提供了越来越多的证据,相关的研究主要集中在多巴胺受体D2家族。具体来说,人类多巴胺D2受体在人群中存在不同的基因型(即基因多态性),而基因型不同人类多巴胺二型受体对不同的精神药物作用明显不同,最终导致基因型不同的精神病患者对同一精神药物的药效存在差异。因此检测人类多巴胺D2受体的基因型方法的研究是学界研究热点。但目前测定类多巴胺D2受体的基因型的方法主要是采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)、手工或自动顺序、序列特异性引物PCR等方法,这些方法不仅操作繁琐,检测周期长,而且影响检测结果的因素多,不易控制,难以满足实际应用的要求,使科研单位和临床上至今还无法广泛开展有关类多巴胺2型受体的基因型的检测。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对目前测定类多巴胺二型受体的基因型的方法存在的问题和不足,提供一种用于检测类多巴胺二型受体的基因型的基因检测芯片以及用基因检测芯片检测类多巴胺二型受体的基因型的检测方法。本发明提供的人类多巴胺2型受体基因型检测芯片,包括固相支持物和有序固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探针,所述寡核苷酸探针包含以下序列或其互补序列中的包含DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)
突变位点在内的14-20个连续核苷酸。
DRD2_-141Cins/del(rs1799732):ggcggaatcccccaacccctcctacccgttCcaggccggggatcgccgaggaggtacagct(SEQ ID NO:1)
DRD2_-141Cins/del(rs1799732):ggcggaatcccccaacccctcctacccgtt[-]caggccggggatcgccgaggaggtacagct(SEQ ID NO:2)
DRD2_957C>T(rs6277):cccgtcccaccatggtctccacagcactccCgacagccccgccaaaccagagaagaatg gg(SEQ ID NO:3)
DRD2_957C>T(rs6277):cccgtcccaccatggtctccacagcactccTgacagccccgccaaaccagagaagaatg gg(SEQ ID NO:4)
DRD2_T>C(rs6275):ccagctgactctccccgacccgtcccaccaTggtctccacagcactcccgacagccccgcc(SEQID NO:5)
DRD2_T>C(rs6275):ccagctgactctccccgacccgtcccaccaCggtctccacagcactcccgacagccccgcc(SEQID NO:6)
DRD2_A>G(rs1079727):tctctgtgatgaatgggtgccaaatacacaAatacagaatctaagaaaacacatggggtta(SEQID NO:7)
DRD2_A>G(rs1079727):tctctgtgatgaatgggtgccaaatacacaGatacagaatctaagaaaacacatggggtta(SEQID NO:8)
DRD2_C>T(rs4648317):cctccctgagtgcacaggatgctggagcctCccagtttctctggctttcatctcgtcttca(SEQ IDNO:9)
DRD2_C>T(rs4648317):cctccctgagtgcacaggatgctggagcctTccagtttctctggctttcatctcgtcttca(SEQ IDNO:10)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497):ggcaacacagccatcctcaaagtgctggtcGaggcaggcgcccagctggacgtccag gatg(SEQ ID NO:11)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497):ggcaacacagccatcctcaaagtgctggtcAaggcaggcgcccagctggacgtccag gatg(SEQ ID NO:12)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597):tctccacagtgctgtcagaatcacctattcGaaaggcgaatctgatcatgtggtt cctgct(SEQ ID NO:13)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597):tctccacagtgctgtcagaatcacctattcAaaaggcgaatctgatcatgtggtt cctgct(SEQ ID NO:14)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498):ctgggggtgtgaagaaaagagccttgggttCgactagggaacctggggccact ccttcctc(SEQ ID NO:15)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498):ctgggggtgtgaagaaaagagccttgggttTgactagggaacctggggccact ccttcctc(SEQ ID NO:16)。
为了增强检测信号的强度,提高检测结果的准确率,所述DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)突变位点序列中大写字母表示的碱基最好位于所述探针的中部。
所述寡核苷酸探针还可以在其5’端包含一段氨基修饰的16聚的聚脱氧胸苷酸(聚dT)。
所述固相支持物可采用各种基因芯片领域的常用材料,如但不限于尼龙膜,经活性基团修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。
上述修饰的玻片或硅片的活性基团如但不限于醛基、氨基、异硫酸基等,优选醛基修饰的玻片或硅片。
本发明基因芯片的制备可按照生物芯片的常规制造方法进行。例如,如果固相支持物采用的是修饰玻片或硅片,探针的5’端含有氨基修饰的聚dT串,可将寡核苷酸探针配置成溶液,然后用点样仪将其点在修饰玻片或硅片,排列成预定的系列或阵列,然后通过放置过夜来固定,就可得到本发明的基因芯片。如果寡核苷酸探针不含氨基修饰,则其制备方法也可参照:王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》;JL DeRisi,VR lyer,PO Brown.Exploring themetabolic and genetic control of gene expression on a genomic scale.Science,1997,278:680和马立人,蒋中华主编《生物芯片》北京:化学工业出版社,2000,1-130。
本发明的人类多巴胺D2受体基因型检测芯片的基因型检测灵敏度率大于96%,特异度率大于98%。
本发明还提供了一种人类多巴胺D2受体基因检测芯片的非以诊断为目的检测人类多巴胺D2受体基因型的方法,包括以下步骤:
(1)制备染色体DNA;
(2)用聚合酶链反应(PCR)方法扩增人类多巴胺D2受体基因型的检测方法基因中包含DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)等的基因片段;
(3)标记上述扩增产物;
(4)将上述标记的扩增产物与基因芯片杂交;
(5)检测基因芯片的杂交信号。
制备用于PCR扩增的染色体DNA的方法有很多,可以从全血中制备、也可以从发根中制备,还可以从口腔黏膜的脱落物中制备。具体方法采用常规的组织DNA提取试剂盒。
用PCR方法扩增染色体基因特定片段的方法采用常规技术。其中的关键在于引物设计,有关引物设计的方法、软件均可以从商业途径获得。本发明涉及的人类多巴胺D2受体基因的扩增引物和体系可根据上述方法完成。
对扩增产物进行标记可以通过采用5’端带标记基团的引物进行扩增的方法,也可通过在扩增过程中掺入带标记基团的单核苷酸的方法加以实现,所述标记基团包括但不限于:地高辛分子(DIG)、生物素分子(Biotin)、荧光素及其衍生物分子(FITC等)、其他荧光分子(如Cy3、Cy5等)、碱性磷酸酶(AP)、辣根过氧化物酶(HRP)等。
扩增产物的变性采用加热至94~98℃,并保温2~10分钟,然后迅速置冰上变性。
取适量变性的扩增产物加入杂交缓冲液中与基因芯片杂交。与基因芯片杂交时,可以先将基因芯片与预杂交缓冲液进行预杂交。
本发明扩增产物与基因芯片之间的固相杂交按照本领域的经典方法进行,本领域一般人员依据经验容易确定有关缓冲液、探针和样品浓度、预杂交温度、杂交温度以及时间等的最适条件。
然后根据标记信号在基因芯片上的位置、强度等信息获取待测信息。本发明所述基因检测芯片杂交信号的方法是基于与抗生物素抗体或亲合素或链亲合素或抗地高辛抗体或抗荧光素抗体复合在一起的碱性磷酸酶催化的四氮唑蓝或辣根过氧化物酶催化的四氮唑蓝(NBT)和辣根过氧化物酶催化的5-溴-4氯-3-吲哚酚-磷酸-4-甲苯胺盐(BCIP)或辣根过氧化物酶催化的四甲基联苯胺(TMB)的显色反应。若扩增产物用荧光基团标记,也可以直接用荧光检测设备(如激光共聚焦扫描仪Scanarray3000等)获取待测信息。
本发明还提供一种人类多巴胺D2受体基因检测芯片用于检测人类多巴胺D2受体基因型的试剂盒,该试剂盒包含本发明所说的用于检测人类多巴胺D2受体基因型的基因检测芯片和使用说明书,使用说明书包含非以诊断为目的检测人类多巴胺D2受体基因型的方法及上述现有技术的相关内容。
本发明提供的基因芯片及其试剂盒,可用于检测人类多巴胺D2受体基因型,这对于药物研究单位和临床有针对性的治疗等相关应用提供了一种简便易行的解决方案。
本发明的优点就在于人类多巴胺D2受体基因检测芯片以及检测人类多巴胺D2受体基因型的方法作为一种新的检测工具,克服了目前测定人类多巴胺D2受体基因型的方法操作繁琐,检测周期长,而且影响检测结果的因素多,不易控制,难以满足实际应用要求的缺陷,本发明基因芯片通过将能反映样本中大量基因信息的基因探针(寡核苷酸探针),有序固定在固相支持物(如醛基、氨基、巯基、羟基等活性基因修饰的载玻片或硅片、尼龙膜、硝酸纤维塑膜)上形成阵列,通过与实际样本(或扩增产物)进行杂交反应,只需一次实验,就可高通量获得所有待检基因的信息。本发明用基因芯片检测人类多巴胺D2受体基因型,可以发挥基因芯片检测操作简单、结果准确(本芯片检测灵敏度率大于96%,特异度率大于98%)等特点,对于科研单位和临床的相关应用具有重要的现实意义。)因此本发明人类多巴胺D2受体基因检测芯片及其检测人类多巴胺D2受体的基因型的方法具有广阔的推广应用前景。
附图说明
以下结合附图对本发明做进一步的说明;
图1是人类多巴胺D2受体的基因检测芯片上的一种点样列阵;
图2是用本发明基因检测芯片检测人类多巴胺D2受体的基因型所得结果。具体实施方式
以下是本发明的实施例,本发明的实际使用并不局限于实施例。
实施例1,人类多巴胺D2受体的基因检测芯片以及检测人类多巴胺D2受体的基因型的方法
采用本发明人类多巴胺D2受体的基因检测芯片以及检测人类多巴胺D2受体的基因型的方法。
本发明提供的基因检测芯片,包括固相支持物和有序固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探针,所述寡核苷酸探针包含以下序列或其互补序列中的包含DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)突变位点在内的14-20个连续核苷酸。
用于人类多巴胺D1受体基因检测芯片非以诊断为目的检测人类多巴胺D1受体基因型的方法,包括以下步骤:
(1)制备染色体DNA;
(2)用聚合酶链反应(PCR)方法扩增人类多巴胺D2受体基因型的检测方法基因中包含DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)等的基因片段;
(3)标记上述扩增产物;
(4)将上述标记的扩增产物与基因芯片杂交;
(5)检测基因芯片的杂交信号。
㈠基因芯片的准备
购置醛基修饰的载玻片(产品编号:BSM03011,上海百傲科技有限公司)。人工合成(上海生工生物工程技术服务有限公司)以下探针,用水溶解成浓度100μM,然后用2×点样buffer(产品编号:BST02010,上海百傲科技有限公司)等比例混合。接着,用Affmetrix公司的GMS417点样仪按图1所述方法点制阵列。然后室温放置过夜。
其中各探针序列为:
DRD2_-141Cins/del(rs1799732)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cggcctgGaacgggt-3’(15聚)(SEQ ID NO:17)
DRD2_-141Cins/del(rs1799732)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cggcctg-aacgggt-3’(15聚)(SEQ ID NO:18)
DRD2_957C>T(rs6277)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-ggctgtcGggagtgc-3’(15聚)(SEQ ID NO:19)
DRD2_957C>T(rs6277)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-ggctgtcAggagtgc-3’(15聚)(SEQ ID NO:20)
DRD2_T>C(rs6275)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-ggagaccAtggtggg-3’(15聚)(SEQ ID NO:21)
DRD2_T>C(rs6275)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-ggagaccGtggtggg-3’(15聚)(SEQ ID NO:22)
DRD2_A>G(rs1079727)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-tctgtatTtgtgtat-3’(15聚)(SEQ ID NO:23)
DRD2_A>G(rs1079727)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-tctgtatCtgtgtat-3’(15聚)(SEQ ID NO:24)
DRD2_C>T(rs4648317)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-aaactggGaggctcc-3’(15聚)(SEQ ID NO:25)
DRD2_C>T(rs4648317)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-aaactggAaggctcc-3’(15聚)(SEQ ID NO:26)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cctgcctCgaccagc-3’(15聚)(SEQ ID NO:27)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cctgcctTgaccagc-3’(15聚)(SEQ ID NO:28)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cgcctttCgaatagg-3’(15聚)(SEQ ID NO:29)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cgcctttTgaatagg-3’(15聚)(SEQ ID NO:30)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cctagtcGaacccaa-3’(15聚)(SEQ ID NO:31)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498)probe:NH2-5’-tttttttttttttttt-cctagtcAaacccaa-3’(15聚)(SEQ ID NO:32)
㈡染色体DNA的制备
取待检者全血500μl,用一次性无菌注射针头抽取,收集于含50μl的2%EDTA溶液的无菌1.5ml离心管中,将管盖盖上,上下颠倒数次,使混匀。取无菌的1.5ml离心管,向其中加入均匀的待检全血100μl和纯水300μl,充分混匀,室温静置8分钟;将离心管置离心机中,10,000g离心1分钟;取出离心管,倾去上清液,离心管底部可见少量白色沉淀;向离心管中加入抽提液(产品编号:BST01010,上海百傲科技有限公司)60μl,充分振荡使沉淀溶解;沸水裕中15分钟;取出离心管,置离心机中,12,000g离心15分钟。离心后上清液可直接用于PCR扩增。
㈢用PCR方法扩增基因片段
委托上海生工生物技术服务有限公司全成以下引物:
DRD2_-141Cins/del(rs1799732)上游引物:Biotin-5’-GAAGACTGGCGAGCAGACGG
TGAG-3’(SEQ ID NO:33)
DRD2_957C>T(rs6277)上游引物:Biotin-5’-GGAGTCTTCAGAGGGGGAAA-3’(SEQ IDNO:34)
DRD2_T>C(rs6275)上游引物:Biotin-5’-GGAGTCTTCAGAGGGGGAAA-3’(SEQ ID NO:35)
DRD2_A>G(rs1079727)上游引物:Biotin-5’-AGAGGCATCCTTCCAAGTCA-3’(SEQ IDNO:36)
DRD2_C>T(rs4648317)上游引物:Biotin-5’-CTCTTGGGCTTTCCAATCTG-3’(SEQ ID NO:37)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)上游引物:Biotin-5’-CCGTCGACGGCTGGCCAAGTTGTCTA-3’(SEQ ID NO:38)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)上游引物:Biotin-5’-GATACCCACTTCAGGAAGTC-3’(SEQ ID NO:39)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498)上游引物:Biotin5’-CCCAGCAGGGAGAGGGAGTA-3’(SEQID NO:40)
DRD2_-141Cins/del(rs1799732)下游引物:Biotin-5’-CGGTTCGGCACTGAAGCTGGA C AG-3’(SEQ ID NO:41)
DRD2_957C>T(rs6277)下游引物:Biotin-5’-GGAATGGGACCTTTCACAGA-3’(SEQ IDNO:42)
DRD2_T>C(rs6275)下游引物:Biotin-5’-GGAATGGGACCTTTCACAGA-3’(SEQ ID NO:43)
DRD2_A>G(rs1079727)下游引物:Biotin-5’-AATGGATGGACAGCAGGAGT-3’(SEQ IDNO:44)
DRD2_C>T(rs4648317)下游引物:Biotin-5’-AGAGGCACATGGACACTGCT-3’(SEQ IDNO:45)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)下游引物:Biotin-5’-CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA-3’(SEQ ID NO:46)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)下游引物:Biotin-5’-CAGTAAAGAACTAGGAGTCA G-3’(SEQ ID NO:47)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498)下游引物:Biotin5’-GACAAGTACTTGGTAAGCATG-3’(SEQID NO:48)
然后用水溶解并稀释至10μM。将购置的Taq酶(产品号:Lot00085632,Fermentas),10×缓冲液(产品号:Lot00083585,Fermentas),dNTP(产品号:Lot00083613,Fermentas),纯水以及染色体DNA制备过程中获得的PCR扩增模板按以下配方配制PCR扩增体系;
反应体系 | 体积(μl) |
10×缓冲液 | 2.5 |
dNTP(各10mM) | 0.5 |
上游引物(10μM) | 1 |
下游引物(10μM) | 1 |
Tap酶(2.5U/μl) | 0.25 |
H2O | 17.75 |
模版DNA | 2 |
总体积 | 25μl |
用PCR扩增仪(美国ABI公司GeneAmp9700型)按以下程序扩增:94℃,5min;然后94℃,30sec;60℃,30sec;72℃,1min;执行35个循环;最后保持72℃,7min。
㈣:PCR产物与基因芯片的杂交
采用上海百傲科技有限公司的芯片杂交试剂盒与芯片显色试剂盒进行此杂交试验.所述芯片杂交试剂盒(产品号:BSTO05010,上海百傲科技有限公司)包含:预杂交液,杂交缓冲液,洗液1,反应舱。所述芯片显色试剂盒(产品号:BST06010,上海百傲科技有限公司)包含:抗体液,洗液2,洗液3,显色液。
(1)将基因芯片的准备过程所得的基因芯片用预杂交液预杂交5min,然后除去预杂交液。芯片的预杂交温度为39℃。
(2)先将用PCR方法扩增基因片段过程中获得的PCR扩增产物混合物98℃变性5min,然后取其中10μl加至190μl杂交缓冲液中混匀,与预杂交完毕的基因芯片进行30分钟杂交反应,杂交温度为39℃。
(3)将杂交完毕的基因芯片用已预热至杂交温度的洗液1洗2次,每次10分钟。
(4)然后用洗液2室温洗2分钟。
(5)将基因芯片与抗体液室温反应20分钟。
(6)然后将基因芯片用洗液2室温洗5分钟,再重复此步骤一次:再用洗液3室温洗2分钟。
(7)在基因芯片上加显色液200μl,39℃放置40分钟。然后用水冲洗干净,晾干。
㈤基因芯片杂交信号的检测
将杂交并洗涤完毕的基因芯片置于Baio BE3.0生物芯片识读仪(BSE01021,上海百傲科技有限公司)上扫描后得到如图2所示的检测结果。结果表明受检者的基因型为:DRD2_-141C(rs1799732),DRD2_957C(rs6277)、DRD2_T(rs6275)、DRD2_A(rs1079727)、DRD2_C(rs4648317)、DRD2Taq IA_G(rs1800497)、DRD2_Taq IB G(rs1079597)、DRD2TaqID_C(rs1800498)。检测结果经测序结果验证完全符合。
Claims (7)
1.人类多巴胺2型受体基因型检测芯片,其特征在于包括固相支持物和有序固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探针,所述寡核苷酸探针包含以下序列或其互补序列中的包含DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2Taq IA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)突变位点在内的14-20个连续核苷酸,具体为:
DRD2_-141Cins/del(rs1799732):ggcggaatcccccaacccctcctacccgttCcaggccggggatcgccgaggaggtacagct(SEQ ID NO:1)
DRD2_-141Cins/del(rs1799732):ggcggaatcccccaacccctcctacccgtt[-]caggccggggatcgccgaggaggtacagct(SEQ ID NO:2)
DRD2_957C>T(rs6277):cccgtcccaccatggtctccacagcactccCgacagccccgccaaaccagagaagaatg gg(SEQ ID NO:3)
DRD2_957C>T(rs6277):cccgtcccaccatggtctccacagcactccTgacagccccgccaaaccagagaagaatg gg(SEQ ID NO:4)
DRD2_T>C(rs6275):ccagctgactctccccgacccgtcccaccaTggtctccacagcactcccgacagccccgcc(SEQ ID NO:5)
DRD2_T>C(rs6275):ccagctgactctccccgacccgtcccaccaCggtctccacagcactcccgacagccccgcc(SEQ ID NO:6)
DRD2_A>G(rs1079727):tctctgtgatgaatgggtgccaaatacacaAatacagaatctaagaaaacacatggggtta(SEQ ID NO:7)
DRD2_A>G(rs1079727):tctctgtgatgaatgggtgccaaatacacaGatacagaatctaagaaaacacatggggtta(SEQ ID NO:8)
DRD2_C>T(rs4648317):cctccctgagtgcacaggatgctggagcctCccagtttctctggctttcatctcgtcttca(SEQ ID NO:9)
DRD2_C>T(rs4648317):cctccctgagtgcacaggatgctggagcctTccagtttctctggctttcatctcgtcttca(SEQ ID NO:10)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497):ggcaacacagccatcctcaaagtgctggtcGaggcaggcgcccagctggacgtccag gatg(SEQ ID NO:11)
DRD2Taq IA_G>A(rs1800497):ggcaacacagccatcctcaaagtgctggtcAaggcaggcgcccagctggacgtccag gatg(SEQ ID NO:12)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597):tctccacagtgctgtcagaatcacctattcGaaaggcgaatctgatcatgtggtt cctgct(SEQ ID NO:13)
DRD2_Taq IB G>A(rs1079597):tctccacagtgctgtcagaatcacctattcAaaaggcgaatctgatcatgtggtt cctgct(SEQ ID NO:14)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498):ctgggggtgtgaagaaaagagccttgggttCgactagggaacctggggccact ccttcctc(SEQ ID NO:15)
DRD2TaqID_C>T(rs1800498):ctgggggtgtgaagaaaagagccttgggttTgactagggaacctggggccact ccttcctc(SEQ ID NO:16)。
2.根据权利要求1所述的人类多巴胺2型受体基因型检测芯片,其特征在于所述DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2TaqIA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)突变位点序列中大写字母表示的碱基位于所述探针的中部。
3.根据权利要求1所述的人类多巴胺2型受体基因型检测芯片,其特征在于所述寡核苷酸探针在其5’端包含一段氨基修饰的16聚的聚脱氧胸苷酸。
4.根据权利要求1所述的人类多巴胺2型受体基因型检测芯片,其特征在于所述固相支持物是尼龙膜、经活性基团修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片。
5.根据权利要求4所述的人类多巴胺2型受体基因型检测芯片,其特征在于所述活性基团是醛基、氨基或异硫酸基等,优选醛基修饰的玻片或硅片。
6.一种使用权利要求1所述的基因检测芯片的非以诊断为目的检测人类多巴胺D2受体基因型的方法,包括以下步骤:
(1)制备染色体DNA;
(2)用聚合酶链反应方法扩增人类多巴胺D2受体基因型的检测方法基因中包含DRD2_-141Cins/del(rs1799732)、DRD2_957C>T(rs6277)、DRD2_T>C(rs6275)、DRD2_A>G(rs1079727)、DRD2_C>T(rs4648317)、DRD2TaqIA_G>A(rs1800497)、DRD2_Taq IB G>A(rs1079597)、DRD2TaqID_C>T(rs1800498)等的基因片段;
(3)标记上述扩增产物;
(4)将上述标记的扩增产物与基因芯片杂交;
(5)检测基因芯片的杂交信号。
7.一种用于检测人类多巴胺D2受体基因型的试剂盒,其特征在于该试剂盒包含用于检测人类多巴胺D2受体基因型的如权利要求1所述的基因检测芯片和使用说明书,使用说明书包含非以诊断为目的检测人类多巴胺D2受体基因型的方法。
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