CN103655710B - 一种马钱子总碱微乳及其制剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种马钱子总碱微乳及其制备方法、含有马钱子总碱微乳的制剂及其制备方法，属于药物制剂领域。该马钱子总碱微乳由马钱子总碱、油相、乳化剂、助乳化剂、水相制成。该马钱子总碱微乳优选制备成外用凝胶剂型。马钱子总碱经皮给药外用制剂对该药物具有独特的优势，应用新型微乳给药系统，增加药物的透皮吸收，增强临床疗效，避免口服和注射给药时的毒副作用。可用于在制备抗炎镇痛药物中的应用等。

Description

一种马钱子总碱微乳及其制剂及制备方法

技术领域

本发明涉及一种马钱子总碱微乳及其制备方法、含有马钱子总碱微乳的制剂及其制备方法，属于药物制剂领域。

背景技术

马钱子为马钱科植物马钱(Srtychno6 nux-vomica L)或云南马钱(S PierrianaA.w.Hil1)的成熟种子，具通络止痛、散结消肿功效，擅治风湿等疾病。临床应用已有近千年的历史。《外科全生集》谓其“能搜筋骨入骱之风湿，祛皮里膜外凝结之痰毒”。马钱子总碱是从马钱子种子中提取分离纯化得到的有效部位，具有镇痛、消炎、促进软骨细胞殖、免疫调节等作用。长期的临床实践和药理研究发现，以马钱子为主药治疗各类风湿疾病有明显疗效，但马钱子有较大的毒性，治疗量和安全量较接近，内服易中毒，但外用则较安全，其外用活络、止痛、散结又胜于它药，更避免了口服的毒性问题。

近年来，有关马钱子单味或复方外用的报告日渐增多，涉及的剂型多为酊剂、油剂、膏剂、硬膏剂、橡胶膏、喷雾剂、涂膜剂等外用制剂。但这些普通外用制剂均具有较大的刺激性，透过量小，很难保证疗效，致使马钱子临床应用严重受限。因此如何减少马钱子的毒性和刺激性，并大大提高马钱子应用安全性、有效性，是亟待解决的问题，本发明从马钱子的给药途径及药物的剂型方面着手提供了一种有效的制剂技术手段解决临床受限问题。

经皮给药(Transdermal Delivery System，TDS)系统是指通过皮肤表面给药，以达到局部或全身治疗作用的一种给药途径。合适的经皮给药制剂，可控制药物经皮渗透的速度和程度，使其给药后能迅速、特定的递送至浅表感染部位发挥疗效，具有一定的靶向意义；同时，由于药物靶向富集于表皮层，从而使其较少或几乎不渗入真皮层，避免药物渗入真皮层后进一步通过毛细血管迅速吸收进入全身循环，降低了由全身吸收所引起的毒副作用与不良反应，提高了用药的安全、有效和临床顺应性。

微乳(Microemulsion)是由水、油、乳化剂和助乳化剂按适当比例混合而自发形成的各向同性、透明、热力学稳定的胶体分散体系，近年来，微乳以其独特的应用优势在经皮给药系统中得到广泛的研究与应用。

此外，微乳作为药物载体还具有以下优点：微乳更稳定，具有增加药效，减少毒副作用的优点，是一种新型的药物载体。由于微乳中含有较大量的表面活性剂，所以具有优良的经皮渗透性能，对于中药尤其是毒性中药透皮靶向新型给药系统的研发，具有重要意义。

马钱子总碱微乳凝胶能减少对皮肤的刺激，微乳达到循环系统后，由于自身的靶向性，在肝、脾部位浓度较高，可避免马钱子总碱对心、肾等器官的损害，减轻对中枢神经系统的毒性作用，使用药安全性大大提高。

发明内容

本发明将马钱子总碱制成新型靶向给药制剂微乳凝胶来解决马钱子制剂技术及临床应用的瓶颈技术。

本发明的目的是提供马钱子总碱微乳及其制备方法、以及马钱子总碱微乳的制剂及其制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

马钱子总碱微乳是由下述重量份处方组成：

优选由下述重量份处方组成：

更优选由下述重量份处方组成：

其中，油相是指大豆油、花生油、蓖麻油、油酸、亚油酸、油酸乙酯、亚油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸异丙酯、甘油单辛酸酯、中碳链脂肪酸甘油三酯中的一种或一种以上；

优选油酸乙酯、亚油酸乙酯、油酸、中碳链脂肪酸甘油三酯。其中，中碳链脂肪酸甘油三酯属于混合脂肪酸甘油三酯，是指碳链较长的过饱和脂肪酸（C₈H₁₇COOH～C₁₈H₃₇COOH）的甘油三酯，具体是指辛酸/癸酸甘油三酯。

乳化剂是指聚氧乙烯型和多元醇型中的一种或多种，具体是指大豆磷脂、 卵磷脂、辛酸/癸酸聚乙二醇甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温、司盘中的一种或一种以上；其中，优选吐温、聚氧乙烯蓖麻油、司盘；聚氧乙烯蓖麻油是指聚氧乙烯蓖麻油RH40、聚氧乙烯蓖麻油EL-35，更优选聚氧乙烯蓖麻油EL-35；吐温是指吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，更优选吐温80；司盘是指司盘20、司盘40、司盘60、司盘80，更优选司盘80。助乳化剂是指丙二醇、丙三醇、异丙醇、正丁醇、乙醇、乙二醇、吐温、甘油、聚乙二醇中的一种或一种以上，优选丙二醇、乙醇、聚乙二醇，其中聚乙二醇更优选聚乙二醇400(PEG400)。

优选的是油相为油酸乙酯，乳化剂为聚氧乙烯蓖麻油EL-35，助乳化剂为PEG400；

优选的是油相为辛酸/癸酸甘油三酯，乳化剂为吐温80、助乳化剂为PEG400；

水相是指注射用水、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、生理盐水和葡萄糖生理盐水注射液中的一种或一种以上，优选注射用水、pH7.4磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液，更优选注射用水、pH7.4的磷酸盐缓冲液。

本发明中能形成微乳的最低乳化剂和助乳化剂的比例Km为2:8-8:2，优选Km为4:6-7:3；更优选Km为4:6-5:5， 最佳优选Km为4.5:5.5。

形成微乳的水相与助乳化剂的比值（W/A）为0.21-0.62，较优选的（W/A）为0.40-0.62，更优选（W/A）为0.5-0.6。

本发明马钱子总碱微乳可采取搅拌法、超声法、高压匀质法制备而成，优选以下制备方法：

称取适量乳化剂、助乳化剂混匀，加入马钱子总碱，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油相进行混合，搅拌均匀，慢慢加入适量的水相，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

本发明马钱子总碱微乳的制备方法也可以为：

称取适量的乳化剂、助乳化剂混匀，加入马钱子总碱，超声，使其充分溶解，再与油相进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入适量的水相，即得。

本发明马钱子总碱微乳的制备方法还可以为：

称取适量的乳化剂、助乳化剂、油相、水相和马钱子总碱，加入高压匀质机中进行高压均质，即得马钱子总碱微乳。

以上制备方法制备得到的微乳的平均粒径为10-100nm，Zeta电位为-10至-50mV。

得到的马钱子总碱微乳可以进一步制备为口服制剂或外用制剂，优选外用制剂，进一步优选凝胶剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂、气雾剂等，更进一步优选 为凝胶剂。

马钱子总碱微乳凝胶剂是由下述重量份的组分组成：

马钱子总碱微乳0.5-150份，增稠剂 0.1-30份、保湿剂0.1-80份、pH调节剂0-30份、透皮剂0-15份、防腐剂0-10份，水相1-100份。

优选是由下述重量份的组分组成：

马钱子总碱微乳1-100份，增稠剂 0.5-10份、保湿剂1-30份、pH调节剂0.1-10份、透皮剂1-10份、防腐剂0.1-1.5份，水相1-100份。

其中，增稠剂为交联聚丙烯树脂类、交联聚丙烯树脂不同种类盐及衍生物、羟丙甲基纤维素、黄原胶中的一种或一种以上；交联聚丙烯树脂类增稠剂是指卡波姆941、卡波姆974、卡波姆934P、卡波姆980、卡波姆981。

保湿剂是指甘油、丙二醇、异丙醇、透明质酸中的一种或一种以上，优选甘油、丙二醇。

pH调节剂是指有机碱类或无机碱类；有机碱类pH调节剂是指三乙醇胺，三乙胺、二乙胺、月桂胺；无机碱类pH调节剂是指氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠。优选氢氧化钠、三乙胺。

透皮剂是指氮酮、薄荷醇、精油、二甲基亚砜、丙二醇、肉豆蔻异丙基酸酯、N-甲基吡咯烷酮、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯、油酸聚乙二醇甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或一种以上，优选氮酮、N-甲基吡咯烷酮。

防腐剂是指山梨酸钾、山梨酸、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯甲酯、苯酚中的一种或一种以上，优选羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯甲酯。

马钱子总碱微乳凝胶剂的制备方法为：

取增稠剂、保湿剂、透皮剂、防腐剂，加入水、pH调节剂，制成凝胶基质，和所制得的马钱子总碱微乳液混合，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

马钱子总碱微乳制剂的制备方法还可以为：

取马钱子总碱微乳适量，按常规方法制备成各种外用制剂。

具体为：

取马钱子总碱微乳适量，按常规方法制备成软膏剂。

取马钱子总碱微乳适量，按常规方法制备成贴剂。

取马钱子总碱微乳适量，按常规方法制备成喷雾剂。

取马钱子总碱微乳适量，按常规方法制备成气雾剂。

评价微乳的关键的指标是微乳中的药物量即载药量，通常微乳中载药量越多，渗透梯度越高，透皮速率相应越高。而特定药物的微乳选择何种的油相、水相、乳化剂、助乳化剂制备得到最大载药量的微乳，并且具有较好的透过性， 则需要通过大量创造性的实验才能得以实现。本发明就以上提到的微乳处方组成及工艺条件进行了实验研究，具体如下：

1、油相/乳化剂/助乳化剂的初筛

比较马钱子总碱在不同的油相/乳化剂/助乳化剂中的溶解度，筛选溶解度较大的油相、乳化剂和助乳化剂，结果见表1：

表1 马钱子总碱在不同油相/乳化剂/助乳化剂中溶解度比较

由表1可知，马钱子总碱在上述列举的油相/乳化剂/助乳化剂均有一定的溶解度，根据其溶解度数值的不同，优选油酸乙酯、辛酸/癸酸甘油三酯、油酸、亚油酸乙酯作为油相，优选吐温80、聚氧乙烯蓖麻RH40/聚氧乙烯蓖麻油EL-35、司盘80作为乳化剂，优选丙二醇、乙醇和聚乙二醇400作为助乳化剂。

2、微乳组合的筛选

分别将以上优选的油相、乳化剂和助乳化剂采用自由组合的方式进行空白微乳的组合（暂定三者比例为油相：乳化剂：助乳化剂=1：6:3），将乳化剂和助乳化剂按比例混匀后加入油相搅拌，搅拌的同时，逐滴加入注射用水，观察其整个体系的微乳形成情况：澄明，乳光（淡蓝色）的胶体溶液即为形成微乳，乳白色液体为乳剂状态。澄清无乳光状态为凝胶态。加入采用不同乳化剂、助 乳化剂分别与油相组合制备空白微乳，考察微乳形成情况，结果见表2：

表2 不同油相、乳化剂与助乳化剂形成微乳情况

由表2可知，以上的组合均可以形成微乳或形成凝胶态后继续加入水相无浑浊出现，按照上述实验方法，优选的油相、乳化剂和助乳化剂其他可能的自由组合也得到了相似的结果。

3、微乳组合的相图制备

将表2的微乳组合分别进行伪三元相图制备，比较各个微乳区域的大小。

方法：固定乳化剂：助乳化剂的比例=2:1，按照此比例混合乳化剂和助乳化剂得到混合乳化剂后，按照油相：混和乳化剂比例1:9、2:8、3:7、4:6、3:7、2:8、9:1比例混合，室温下,边搅拌边滴加注射用水,直至微乳形成,记录消耗水的重量。计算三相（水、油、混和乳化剂）的百分比，制备微乳的三元相图。

通过比较，优选微乳区域较大的以下几个组合：

（1）油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-35、丙二醇、注射用水；

（2）油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-35、乙醇、注射用水；

（3）油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-35、PEG400、注射用水；

（4）辛酸/ 癸酸甘油三酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-35、PEG400、注射用水；

（5）油酸乙酯、吐温80、PEG400、注射用水；

（6）辛酸/ 癸酸甘油三酯、吐温80、PEG400、注射用水；

（7）辛酸/ 癸酸甘油三酯、司盘80、丙二醇、注射用水。

（8）亚油酸乙酯、吐温80、PEG400、注射用水；

（9）油酸、聚氧乙烯蓖麻油RH40、PEG400、注射用水；

（10）亚油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-35、丙二醇、注射用水；

4、微乳组合优选

按照油相：乳化剂：助乳化剂：水相=4:6:3:6的比例将以上前5个组合制备微乳样品，进行载药能力的比较。

方法：按比例将乳化剂、助乳化剂混合后将过量的药物加入其中进行混合后搅拌使其充分，再与油相进行混合进行搅拌均匀后，一边搅拌同时慢慢加入注射用水，制备好微乳后通过5000rpm离心30min后取上清微乳适量，加入甲醇完全消解后测定含量，比较不同微乳组合的载药量，具体见表3。

表3 不同微乳组合的载药量考察

由表3可知，油酸乙酯作为油相，氧乙烯蓖麻油EL-35作为乳化剂，PEG400作为助乳化剂，注射用水作为水相所得到的微乳载药量较大，按照上述实验方法，将上述6-10的组合同样进行载药量的考察，结果辛酸/癸酸甘油三酯作为油相，吐温80作为乳化剂、PEG400作为助乳化剂，注射用水作为水相所得到的微乳载药量较大。下面对该微乳处方进行比例优化。

5、微乳处方比例优化

以油酸乙酯作为油相，氧乙烯蓖麻油EL-35作为乳化剂，PEG400作为助乳化剂，注射用水作为水相选取，进行微乳处方乳化剂重量比、助乳化剂重量比、油相重量比、水相重量比的筛选。

（1）确定Km值（形成微乳的最低的乳化剂和助乳化剂）

通过传统三元相图确定能形成微乳的最低的乳化剂和助乳化剂的比例Km。

方法：称取聚氧乙烯蓖麻油EL-35:PEG400(w/w) 约为9∶1、8∶2、7：3、6∶4、 5：5、4∶6、3∶7、2∶8和1∶9，总量固定，加油酸乙酯50%的量搅拌,于(25 ±1)℃加入蒸馏，观察形状变化，可得到聚氧乙烯蓖麻油EL-35/PEG400/水的经典三元相图。根据相图情况确定聚氧乙烯蓖麻油EL-35/PEG400的比值(Km)，具体见表4。

表4 各比例微乳形成的过程和性状

由表4可知，能形成微乳的乳化剂和助乳化剂的比例Km为2:8-8:2，优选4:6-7:3。

为了进一步优选Km值，考虑到2:8、3:7的微乳区域较小，分别对比乳化剂：助乳化剂=5:5，4.5:5.5，4.3:5.7，4:6，比较不同km形成微乳的所需要乳化剂的用量和性状，具体见表5。

表5 比较不同的km制备微乳的性状和乳化剂用量

由表5可知，形成微乳的乳化剂和助乳化剂的比例优选的为4:6-5:5，根据以上四个微乳处方形成微乳的性状和所需要乳化剂的比例，更优选的为Km=4.5:5.5。

（2）W/A(形成微乳的水相与助乳化剂的比值_)确定

固定Km，对油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-35、PEG400、注射用水系统形成微乳中的注射用水与助乳化剂的比值（W/A）进行考察。

固定Km=4.5:5.5，按该比例混合乳化剂和助乳化剂得到混和乳化剂后备用，分别取油相（油酸乙酯）和混和乳化剂（聚氧乙烯蓖麻油、PEG400）(w/w) 约为9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9，固定总量，于 室温下逐滴滴入注射用水至性状变化、形成微乳，记录加入的水量，计算各相的百分比，可得到油酸乙酯/混和乳化剂（聚氧乙烯蓖麻油、PEG400）/注射用水的经典三角相图。根据相图情况计算确定注射用水/PEG400的比值(W/A)，具体见表6。

表6 制备微乳的性状和形成微乳的W/A考察

由表6可知，微乳的油相和混合乳化剂的比例在1：9-5：5之间，注射用水与助乳化剂的比值（W/A）0.21-0.62，较优选的为微乳的油相和混合乳化剂的比例在1：9-4：6，注射用水与助乳化剂的比值（W/A）0.40-0.62，更优选为0.5-0.6。

（3）处方的进一步优选

方法：固定W/A=0.4，W/A=0.5，W/A=0.6，分别按照比例混合注射用水和助乳化剂得到混合溶液后，按照乳化剂：油相的比例为1:9、2:8、3:7、4:6、3:7、2:8、9:1比例混合，总量固定，边搅拌边滴加注射用水和助乳化剂的混合溶液，仔细观察性状变化并记录消耗的注射用水和助乳化剂混合溶液的量，直至溶液性状不变，记录最后状态，确定优选配方，具体见表7。

表7 不同重量份的原辅料制备得到的马钱子总碱微乳的比较

由以上的研究可知，本发明中所描述的不同重量份的原辅料均能制备出载药量较高、稳定性较好的马钱子总碱微乳，其中，以马钱子总碱1-5份、油相15-25 份、乳化剂20-40份、助乳化剂10-20份、水相30-75份的用量比例制备得到的马钱子总碱微乳载药量高，稳定性好，粒径小。

6、水相的选择

按照上面优选最佳处方组合比例混合乳化剂、助乳化剂、油相和相同量的药物，边搅拌边加入不同的水相（注射用水、磷酸盐缓冲液（pH7.4、pH6.8）、碳酸盐缓冲液、生理盐水）至定量，制备好微乳后通过5000rpm离心30min，观察离心后微乳的状态，是否有药物析出，并通过离心分光光度法测定其稳定性参数KE，具体见表8。

表8 不同水相的制备的微乳比较

由表8可知，比较以上不同水相制备的微乳的稳定性，相差不多，因此水相可选择注射用水、pH7.4磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、生理盐水。后对其粒径分布考察发现，优选的水相为注射用水、磷酸盐缓冲液。更优选的水相为注射用水、pH7.4的磷酸盐缓冲液。

7、制备方法

微乳的制备方法主要有搅拌法、超声法、高压均质法等，以油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油EL、PEG400、注射用水作为辅料，固定以上优选的比例分别考察不同方法制备的马钱子总碱微乳，以稳定性和粒径分布作为考察指标，考察其制备方法，具体见表9。

表9 不同制备方法制备的微乳比较

由表9可知，搅拌法、超声法、高压均质法三种方法均能制备出微乳，但根据粒径大小和分布结合生产综合考虑，优选搅拌法和高压均质法，而且从生产角度来看搅拌法和高压均质法均比较适合大生产。

附图说明

图1为实施例1的马钱子总碱微乳的粒径分布图。

图2为实施例1的马钱子总碱微乳的Zeta图。

图3为实施例2的马钱子总碱微乳的粒径分布图。

图4为实施例2的马钱子总碱微乳的Zeta图。

图5为实施例3的马钱子总碱微乳的粒径分布图。

图6为实施例3的马钱子总碱微乳的Zeta图。

图7为实施例4的马钱子总碱微乳的粒径分布图。

图8为实施例4的马钱子总碱微乳的Zeta图。

具体实施方式

与现有技术相比，本发明微乳凝胶制剂具有以下有益效果：

1）本发明通过处方筛选和优化，所选处方组成下，马钱子总碱、乳化剂、助乳化剂、油相、水相在所述工艺条件下形成的微乳均匀、澄明、热力学稳定；

2）本发明将马钱子总碱微乳制备成凝胶制剂，提高了其对皮肤的粘附性，经皮给药方便，易于涂敷均匀，且不污染衣物，易于清洗；

3）本发明马钱子总碱微乳凝胶制剂，同马钱子总碱凝胶剂相比，经皮给药后0-1.625h内在关节腔内迅速吸收至峰浓度，2小时后开始缓慢消除，能够在8h保持相对稳定的药物浓度，更有利于药物的透皮吸收；4）本发明马钱子总碱微乳凝胶制剂，同马钱子总碱凝胶剂相比，抗炎镇痛的起效剂量较低，提高了马钱子总碱临床应用的安全性；

5）本发明马钱子总碱微乳凝胶制剂，同马钱子总碱凝胶剂相比起效快（1.625h内吸收至峰浓度），释药平稳（8h保持相对稳定的药物浓度），具有一定的缓释作用； 6）本发明马钱子总碱微乳凝胶制剂，同马钱子总碱凝胶剂相比，经皮给药后，马钱子总碱主要分布于肝、肾、肺、胃、小肠，其次为心脏、关节，在脑、肌肉、脂肪分布很少。在6h后，除肝肾组织外，胃、小肠中的药物浓度升高，说明由于微乳的靶向性，能够帮助药物肝、脾组织富集，降低了其在心脏、脑内的浓度，从而降低了马钱子总碱的中枢毒性和心脏毒性；

7）本发明应用微乳这一具有良好生物相容性的药物载体，首先将马钱子总碱制备为微乳，而后再制备成凝胶制剂经皮给药，同马钱子总碱凝胶剂相比，微乳凝胶制剂具有透皮靶向缓释的特点，药物起效剂量低，预期的不良反应极大减少，临床安全性提高，综合应用指数高。

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述组合物的有益效果。

实验例1：马钱子总碱微乳凝胶对弗氏完全佐剂致大鼠足跖急性肿胀及痛反应指数的影响

1、实验方法

1.1大鼠AA模型诱导

将BCG 80°C、1h灭活后，以高压灭菌的液体石蜡配成10mg.ml^-1的乳剂，充分研磨、混匀，即得弗氏完全佐剂（ FCA），于每鼠左后足足趾内皮注射FCA 0.1ml致炎。

1.2动物分组及给药方案

大鼠随机分组 8组：正常组；AA模型组；马钱子总碱微乳凝胶高剂量（25 mg. kg^-1）组；马钱子总碱微乳凝胶中剂量（12.5 mg.kg^-1）组；马钱子总碱微乳凝胶低剂量（6.25mg.kg^-1）组；马钱子总碱凝胶高剂量（25 mg. kg^-1）组；马钱子总碱凝胶中剂量组（12.5mg.kg^-1）组；马钱子总碱凝胶低剂量（6.25 mg.kg^-1）组。除正常组外，其余各组均以FCA每鼠左后足足趾内皮注射FCA 0.1ml致炎。

于至炎后即出现急性局部炎症，第2天给予油纸包裹药膏，敷于大鼠左后足部，再用医用胶布包裹，防止药物脱落脱落，正常组及模型组不给药。6h后去除胶布，洗净大鼠左足。

1.3关节肿胀度测定

大鼠至炎前、后第3天分别在足容积仪上测定致炎侧足容积，某一时间至炎后与至炎前足容积的差值即为该时大鼠足肿胀度。

1.4屈关节疼痛评分

踝关节疼痛实验评分方法：将大鼠装进特制的鼠筒内，后退及尾部伸出筒外，稳定几分钟后测定，向脚掌侧缓慢屈曲动物的一侧踝关节，每隔5秒进行一次，共5次。屈关节时，动物出现短促而明显的缩腿反应或嘶叫评1分，无反应0分，每侧踝关节的评分为0-5分。

2、结果

2.1 对AA大鼠关节肿胀的影响

AA模型在免疫1d后，原发侧足肿胀度与正常组比较明显增加；与模型组相比，马钱子总碱微乳凝胶3个剂量组（6.25、12.5和25mg.kg^-1）在d3对AA大鼠原发侧足肿胀均由抑制作用；马钱子总碱凝胶高剂量组（25mg.kg^-1）亦可减轻AA大鼠原发性足肿胀。抑制AA大鼠原发性足肿胀作用明显。

表1两种凝胶对FCA致大鼠足跖炎症原发侧急性踝关节肿胀的影响

*P<0.5 vs AA group,***P<0.001 vs AA group

由表1可知，马钱子总碱微乳凝胶低、中、高剂量组均能抑制由FCA引起的急性足跖肿胀，而普通凝胶只有高剂量组才能抑制由FCA引起的急性足跖肿胀，表明马钱子总碱微乳凝胶的起效剂量较普通凝胶低，提高了马钱子总碱临床应用的安全性。

2.2 对AA大鼠屈关节疼痛评分的影响

同一时间内，AA模型组与正常组的疼痛评分差异有高度显著性（P<0.01）；马钱子总碱微乳凝胶3个剂量组（6.25、12.5和25mg.kg^-1）和马钱子总碱凝胶高剂量组（25mg.kg^-1）可明显减轻疼痛反应。

表2两种凝胶对FCA致大鼠足跖炎症原发侧屈关节疼痛评分的影响

*P<0.5 vs AA group,***P<0.001 vs AA group

由表2可知，马钱子总碱微乳凝胶低、中、高剂量组均能抑制屈关节疼痛，而普通凝胶只有高剂量组才能抑制屈关节疼痛，表明马钱子总碱微乳凝胶的起 效剂量较普通凝胶低，提高了其马钱子总碱临床应用的安全性。

按照实验例1的实验方法对其马钱子总碱微乳软膏剂、马钱子总碱微乳贴剂、马钱子总碱微乳喷雾剂、马钱子总碱微乳气雾剂进行了考察，也得到了相似的结果，表明以上四种制剂的起效剂量较马钱子总碱软膏剂、马钱子总碱贴剂、马钱子总碱喷雾剂、马钱子总碱气雾剂均低，表明了其微乳制剂的临床应用安全的优越性。

实验例2：马钱子总碱微乳凝胶体外透皮研究

1、实验方法

取健康SD大鼠6只，随机分为2组（微乳凝胶组和普通凝胶组），每组3只。大鼠麻醉后，仰卧固定于大鼠固定板上，大鼠膝关节处脱毛，用酒精消毒，将探针导管小心刺入大鼠关节腔内，使导管一段留在关节腔中，以保护探针的埋植。将线性探针从导管的一端进入，从导管另一端缓慢拉出，至线性探针的膜进入关节腔后，小心将探针导管从关节腔中拉出，使线性探针的膜留在关节腔内。调整灌流泵速度使灌流液以0.4ml/h的流速灌流5min，之后，调整流速为0.2ml/h灌流30min，涂抹微乳凝胶和药物凝胶（25mg/kg）， 均匀的将给药剂量的微乳凝胶涂抹在关节上，盖上保鲜膜，同时开始收集透析液，计算药物浓度。具体见表3。

表3 两种凝胶经皮给药关节腔微透析药物浓度数据

2、实验结论

上述实验表明，马钱子总碱微乳凝胶经皮给药后0-1.625h在关节腔内迅速吸收至峰浓度，2小时后开始缓慢消除，能够在8h保持相对稳定的药物浓度；而马钱子总碱凝胶经皮给药后，药物进入关节腔少，消除快，几乎难以测出。提示马钱子总碱微乳凝胶较普通凝胶更有利于药物的透皮吸收，可以有效的促进药物的透皮吸收。

马钱子总碱微乳软膏剂、马钱子总碱微乳贴剂、马钱子总碱微乳喷雾剂、马钱子总碱微乳气雾剂按照实验例2的研究方法试验，结果显示，以上四种制剂更有利于药物的透皮吸收，作用效果明显优于马钱子总碱软膏剂、马钱子总碱贴剂、马钱子总碱喷雾剂、马钱子总碱气雾剂。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 22g， PEG400 26g加入马钱子总碱2g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯40g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水12g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例2

取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 25g、PEG400 30g混匀，加入马钱子总碱4g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯30g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水15g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例3

取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 22g、PEG400 11g混匀，加入马钱子总碱1g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯16g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入注射用水44g，即得马钱子总碱微乳。

实施例4

取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 19g、PEG400 30g混匀，加入马钱子总碱5g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯29g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水15g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例5

取吐温80 21g、PEG400 27g混匀，加入马钱子总碱3g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯30g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水22g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例6

称取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 17g、PEG400 37g、辛酸/癸酸甘油三酯25g、注射用水21g和马钱子总碱2g，加入高压匀质机中进行高压均质，即得马钱子总碱微乳。

实施例7

取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 30g、PEG400 15g混匀，加入马钱子总碱3g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯20g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水50g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例8

取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 40g、丙二醇10g混匀，加入马钱子总碱5g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯15g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入注射用水75g，即得马钱子总碱微乳。

实施例9

称取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 20g、PEG400 20g、油酸乙酯15g、注射用水30g和马钱子总碱0.5g，加入高压匀质机中进行高压均质，即得马钱子总碱微乳。

实施例10

取聚氧乙烯蓖麻油EL 40g、PEG400 10g混匀，加入马钱子总碱3g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯25g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水52g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例11

取吐温80 22g， PEG400 26g加入马钱子总碱2g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与辛酸/癸酸甘油三酯40g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水12g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例12

取司盘80 25g、丙二醇30g混匀，加入马钱子总碱4g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与辛酸/癸酸甘油三酯30g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水15g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例13

取吐温80 22g、PEG400 11g混匀，加入马钱子总碱0.1g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与亚油酸乙酯16g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入注射用水44g，即得马钱子总碱微乳。

实施例14

取聚氧乙烯蓖麻油RH40 19g、PEG400 30g混匀，加入马钱子总碱5g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与亚油酸乙酯29g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水15g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例15

取聚氧乙烯蓖麻油EL 21g、丙二醇27g混匀，加入马钱子总碱3g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与亚油酸乙酯30g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水22g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例16

取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 5g、PEG400 50g混匀，加入马钱子总碱2g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯50g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入注射用水20g，即得马钱子总碱微乳。

实施例17

取中碳链脂肪酸甘油三酯40g、PEG400 8g混匀，加入马钱子总碱12g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯8g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水75g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例18

取大豆磷脂22g、丙三醇30g混匀，加入马钱子总碱6g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与大豆油29g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水45g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例19

取卵磷脂1g、乙醇80g混匀，加入马钱子总碱15g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与肉豆蔻酸异丙酯80g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入磷酸盐缓冲液10g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例20

取辛酸/癸酸聚乙二醇甘油酯50g、甘油1g混匀，加入马钱子总碱3g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸1g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入碳酸盐缓冲液100g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例21

称取聚氧乙烯蓖麻油EL-35 25g、吐温40g混匀，加入马钱子总碱7g，超 声，使其充分溶解，再与油酸乙酯40g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入葡萄糖生理盐水注射液45g，即得马钱子总碱微乳。

实施例22

称取中碳链脂肪酸甘油三酯100g、乙醇0.5g混匀，加入马钱子总碱25g，超声，使其充分溶解，再与亚油酸100g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入葡萄糖注射液1g，即得马钱子总碱微乳。

实施例23

称取辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯0.5g、正丁醇80g混匀，加入马钱子总碱0.5g，超声，使其充分溶解，再与肉豆蔻酸异丙酯0.5g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入生理盐水注射液200g，即得马钱子总碱微乳。

实施例24

称取马钱子总碱12g，油酸乙酯50g，司盘80 50g，异丙醇40g，注射用水100g，搅拌均匀后，即得马钱子总碱微乳。

实施例25

称取聚氧乙烯脂肪醇醚24g、乙醇12g混匀，加入马钱子总碱2g，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油酸乙酯12g进行混合，搅拌均匀，慢慢加入注射用水50g，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳。

实施例26

称取聚氧乙烯氢化蓖麻油21g、PEG400 11g混匀，加入马钱子总碱3g，超声，使其充分溶解，再与油酸乙酯20g进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入注射用水25g、葡萄糖生理盐水20g，即得马钱子总碱微乳。

实施例27

称取聚氧乙烯蓖麻油EL 23g、PEG400 12g、月桂酸异丙酯23g、生理盐水20g、碳酸盐缓冲液20g和马钱子总碱2g，加入高压匀质机中进行高压均质，即得马钱子总碱微乳。

实施例28

称取司盘20 17g、乙醇8g、甘油单辛酸酯4g、注射用水50g、磷酸盐缓冲液20g和马钱子总碱1g，加入高压匀质机中进行高压均质，即得马钱子总碱微乳。

实施例29

称取马钱子总碱4g，油酸乙酯16g，聚氧乙烯蓖麻油EL-35 35g，PEG400 15g，注射用水30g，搅拌均匀后，即得马钱子总碱微乳。

将羟苯丙酯 0.2g溶于丙二醇10g，称取卡波姆980 1g加入适量的水溶胀，加入氢氧化钠调节pH值至7左右，与甘油5g、氮酮3g，和加入防腐剂的丙二 醇混合均匀得到凝胶基质，加入马钱子总碱微乳30g、水50g，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例30

称取马钱子总碱50g，油酸乙酯80g，吐温80 120g，乙醇80g，磷酸盐缓冲液（pH7.4）200g，加入高压匀质机中进行高压均质，即得马钱子总碱微乳。

将羟苯乙酯 1.5g溶于异丙醇25g，称取卡波姆974 10g加入适量的水溶胀，加入碳酸氢钠调节pH值至7左右，与甘油5g、N-甲基吡咯烷酮20g，和加入防腐剂的异丙醇混合均匀得到凝胶基质，加入马钱子总碱微乳100g、水100g，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例31

称取马钱子总碱0.5g，油酸乙酯0.5g，聚氧乙烯蓖麻油EL 0.5g，丙二醇0.5g，注射用水1g，搅拌均匀后，即得马钱子总碱微乳。

将羟苯甲酯 0.1g溶于甘油1g，称取卡波姆934P 0.5g加入适量的水溶胀，加入碳酸钠调节pH值至7左右，薄荷醇1g，和加入防腐剂的甘油混合均匀得到凝胶基质，加入马钱子总碱微乳1g、水1g，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例32

称取马钱子总碱10g，油酸30g，聚氧乙烯蓖麻油RH40 40g，乙醇 30g，注射用水150g，搅拌均匀后，即得马钱子总碱微乳。

将山梨酸钾 0.8g溶于透明质酸15.5g，称取羟丙甲纤维素5.25g加入适量的水溶胀，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯10.5g，和加入防腐剂的透明质酸混合均匀得到凝胶基质，加入马钱子总碱微乳50.5g、水80g，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例33

取黄原胶30g、丙二醇80g、薄荷醇50g、苯酚10g，加入适量水，加入三乙胺调节pH值至7左右，制成凝胶基质，和马钱子总碱微乳150g混合，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例34

取卡波姆941 0.1g、甘油0.1g、二甲基亚砜0.1g，加入适量水，加入二乙胺调节pH值至7左右，制成凝胶基质，和马钱子总碱微乳0.5g混合，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例35

取卡波姆981 15.2g、丙二醇40.2g、精油25.2g，山梨酸5g，加入适量水，加入三乙醇胺调节pH值至7左右，制成凝胶基质，和马钱子总碱微乳75.3g混合，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例36

取卡波姆981 9g、丙二醇25g、肉豆蔻异丙基酸酯18g，山梨酸1g，加入适量水，加入月桂胺调节pH值至7左右，制成凝胶基质，和马钱子总碱微乳80g混合，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例37

将山梨酸钾 1.2g溶于丙二醇18g，称取羟丙甲纤维素8g加入适量的水溶胀，加入碳酸钠调节pH值至7左右，聚甘油脂肪酸酯7g，和加入防腐剂的丙二醇混合均匀得到凝胶基质，加入马钱子总碱微乳65g，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例38

将山梨酸 3g溶于丙二醇50g，称取卡波姆981 25g加入适量的水溶胀，加入三乙胺调节pH值至7左右，月桂酸聚乙二醇甘油酯40g，和加入防腐剂的丙二醇混合均匀得到凝胶基质，加入马钱子总碱微乳100g，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例39

将苯酚 0.8g溶于丙二醇22g，称取卡波姆941 9g加入适量的水溶胀，加入三乙胺调节pH值至7左右，油酸聚乙二醇甘油酯18g，和加入防腐剂的丙二醇混合均匀得到凝胶基质，加入马钱子总碱微乳75g，搅拌均匀，即得马钱子总碱微乳凝胶。

实施例40

取马钱子总碱微乳适量，按常规方法制备成各种口服制剂。

实施例41

取马钱子总碱微乳适量，按常规方法制备成软膏剂、贴剂、喷雾剂、气雾剂。

Claims (4)

1.一种马钱子总碱微乳凝胶制剂，其特征在于，其中

马钱子总碱微乳由下述重量份成分组成：

所述马钱子总碱微乳的油相是指油酸乙酯、亚油酸乙酯、油酸；所述的乳化剂是指吐温80、司盘80、聚氧乙烯蓖麻油RH40、聚氧乙烯蓖麻油EL-35；所述的助乳化剂是指丙二醇、乙醇、聚乙二醇400；所述的水相是指注射用水、pH7.4的磷酸盐缓冲液；其中马钱子总碱微乳的乳化剂和助乳化剂的比例Km为4：6-7：3；微乳的水相与助乳化剂的比值(W/A)为0.40-0.62；水相与助乳化剂的比值(W/A)0.21-0.62；

所述马钱子总碱微乳的制备方法为：称取适量乳化剂、助乳化剂混匀，加入马钱子总碱，混合，搅拌，使其充分溶解，再与油相进行混合，搅拌均匀，慢慢加入适量的水相，同时搅拌，即得马钱子总碱微乳；

所述凝胶制剂的制备方法为：取增稠剂、保湿剂、透皮剂、防腐剂，加入水、pH调节剂，制成凝胶基质，和马钱子总碱微乳液混合，搅拌均匀即得。

2.根据权利要求1所述的微乳凝胶制剂，其特征在于，所述微乳的制备方法为：称取适量的乳化剂、助乳化剂混匀，加入马钱子总碱，超声，使其充分溶解，再与油相进行混合，超声均匀后，继续超声，同时慢慢加入适量的水相，即得马钱子总碱微乳。

3.根据权利要求1所述的微乳凝胶制剂，其特征在于，所述微乳的制备方法为：称取适量的乳化剂、助乳化剂、油相、水相和马钱子总碱，加入高压匀质机中进行高压均质，即得马钱子总碱微乳。

4.权利要求1-3任一项所述的马钱子总碱微乳凝胶制剂用于在制备抗炎镇痛药物中的应用。