CN103626733A - 一种蓝莓花青素的分离方法 - Google Patents

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    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
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Abstract

本发明公开了一种蓝莓花青素的分离方法，包括如下步骤：（1）将蓝莓干粉与酸化甲醇混合，搅拌，萃取，静置、过滤，萃取，合并萃取液，蒸发干燥；（2）将步骤（1）获得的产物与正己烷混合，萃取，上清液并回收正己烷；将萃取物加入乙酸乙酯，萃取，合并上清液蒸发出乙酸乙酯，固体冻结后冷冻干燥得蓝莓花青素粗提物。本发明的方法过程简单、能耗低，分离条件温和、样品回收率高、实验结果重现性高、设备简便经济。

Description

一种蓝莓花青素的分离方法
技术领域
本发明属于花青素的制备技术领域，涉及具有抗氧化作用的蓝莓花青素的分离方法。
背景技术
相关研究显示蓝莓花青素是迄今发现的效果最好的植物抗氧化剂。蓝莓果实内天然色素的含量较高，花色素苷的含量远远超过其他植物许多倍。蓝莓花青素提取物所含成分特点鲜明，大部分的花青素成分是低聚体，这种结构易于人体吸收，同时还可以较容易的扩散到人体的血液和脑细胞中，保护这些精细细胞。尤其是占大多数的原花青素二聚体以及三聚体对体内氧自由基的清除效果最为显著，研究证明，这些原花青素的低聚体对过氧化氢的抑制率最高可达到40%。蓝莓花青素突出的抗氧化能力，可有效的调节人体机能，改善人体内部抗氧化环境，提高机体免疫能力。
花青素在食品工业上的应用日益受到关注，因此对花青素这种天然物质的研究和开发就显得越来越急切。目前想补充花青素，只能通过饮食的方式获取。另一方面，要想深入研究开发花青素的功能保健品又必须以花青素纯品为最终的生产对象，因此，一套完整有效的大规模生产的工艺流程亟待开发。
存在于蓝莓果实中的花青素，是水溶性天然色素，属黄酮类化合物。目前常用的提取方法有溶剂提取法、超临界萃取法、微波法、酶解法和超声波萃取法。目前，我国对蓝莓中花青素提取实验的技术主要针对2个方面：分离提取液的不同选取和配比，对提取过程的方法改进。怎样选取加入的浸提液和分离方法对提取效果很重要。溶剂提取法是常见的提取花青素方法，在提取过程中会加入一定浓度的盐酸或甲酸以防止非酰基化的花靑素的分解。用溶剂提取完后，需要用一些有机溶剂比如石油醚、正己院、乙醚等萃取以除去粗提液中的脂溶性物质。溶剂提取法的优点是操作简便，不需要复杂的仪器设备；缺点是提取率不高、费时，而且提取时要加热会造成花青素的降解。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种蓝莓花青素的分离方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种蓝莓花青素的分离方法，包括如下步骤：
（1）按比例将150g的蓝莓干粉与700-800mL的酸化甲醇混合，搅拌，萃取3-5h，静置、过滤，萃取1-3次，合并萃取液，将所述萃取液在35-45℃蒸发干燥；所述酸化甲醇为体积比为98.5-99.5：1.5-0.5的甲醇和浓盐酸混合液；
（2）按比例为1g：4-6mL的比例，将步骤（1）获得的产物与正己烷混合，萃取2-4次，合并上清液并回收正己烷；按比例为1g：4-6mL的比例将萃取物加入乙酸乙酯，萃取2-4次，合并上清液在35-45℃蒸发，蒸发出乙酸乙酯，固体冻结后冷冻干燥得蓝莓花青素粗提物。
本发明的方法过程简单、能耗低，分离条件温和、样品回收率高、实验结果重现性高、设备简便经济。
附图说明
图1为蓝莓花青素层析图谱。
具体实施方式
本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，并不能对本发明作任何限制。
蓝莓又称越橘，杜鹃花科越橘属，多年生绿叶或是常绿灌木。选取成熟度一致的蓝莓（品种蓝丰，产地大连）作为实验材料，避光储存释放生物热，后液氮速冻保存。取速冻蓝莓鲜果快速捣碎，放入冰箱冷冻，后冷冻干燥24小时，即得到蓝莓干粉。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种蓝莓花青素的分离方法，包括如下步骤：
（1）按比例将150g的蓝莓干粉与750mL的酸化甲醇混合，搅拌，萃取4h，静置、过滤，萃取2次，合并萃取液，将萃取液在40℃蒸发干燥；所述酸化甲醇为体积比为99.0：1.0的甲醇和浓盐酸混合液；
（2）按比例为1g：5mL的比例，将步骤（1）获得的产物与正己烷混合，萃取3次，合并上清液并回收正己烷；按比例为1g：5mL的比例将萃取物加入乙酸乙酯，萃取3次，合并上清液在40℃蒸发，蒸发出乙酸乙酯，固体冻结后冷冻干燥得蓝莓花青素粗提物。收率4.95%。
蓝莓花青素粗提物可以采用多种公知的方法进行提纯，下面的方法不对本发明作为限定：
（1）按比例，将100mg蓝莓花青素粗提物溶于50mL酸化甲醇中，用45μm有机滤膜过滤；
（2）滤液用恒流泵泵入预先处理好并填充好的AB-8大孔吸附树脂中，待提取物溶液充满树脂床时停泵15min，用酸化蒸馏水进行冲洗35min，用酸化甲醇解吸附，当采集器在520nm处开始出现吸收峰时开始收集洗脱液直至吸收峰结束；
（3）重复步骤（2）2次，合并洗脱液；洗脱液在40℃蒸发，蒸发到不能再蒸发出甲醇为止，-30℃温度下冻结，冷冻干燥24h，得到纯化蓝莓花青素。
酸化甲醇为体积比为99：1的甲醇和浓盐酸混合液；酸化蒸馏水为体积比为99：1的蒸馏水和浓盐酸混合液。
表1为HLPC-ESI-MS定性分析结果
实施例2
一种蓝莓花青素的分离方法，包括如下步骤：
（1）按比例将150g的蓝莓干粉与700mL的酸化甲醇混合，搅拌，萃取5h，静置、过滤，萃取1次，将萃取液在35℃蒸发干燥；所述酸化甲醇为体积比为98.5：1.5的甲醇和浓盐酸混合液；
（2）按比例为1g：4mL的比例，将步骤（1）获得的产物与正己烷混合，萃取4次，合并上清液并回收正己烷；按比例为1g：4mL的比例将萃取物加入乙酸乙酯，萃取4次，合并上清液在35℃蒸发，蒸发出乙酸乙酯，固体冻结后冷冻干燥得蓝莓花青素粗提物。收率4.87%。
蓝莓花青素粗提物可以采用多种公知的方法进行提纯，下面的方法不对本发明作为限定
（1）按比例，将100mg蓝莓花青素粗提物溶于45mL酸化甲醇中，用45μm有机滤膜过滤；
（2）滤液用恒流泵泵入预先处理好并填充好的AB-8大孔吸附树脂中，待提取物溶液充满树脂床时停泵10min，用酸化蒸馏水进行冲洗35min，用酸化甲醇解吸附，当采集器在520nm处开始出现吸收峰时开始收集洗脱液直至吸收峰结束；
（3）重复步骤（2）2次，合并洗脱液；洗脱液在40℃蒸发，蒸发到不能再蒸发出甲醇为止，-25℃温度下冻结，冷冻干燥28h，得到纯化蓝莓花青素。
酸化甲醇为体积比为99.5：0.5的甲醇和浓盐酸混合液；酸化蒸馏水为体积比为99.5：0.5的蒸馏水和浓盐酸混合液。
实施例3
一种蓝莓花青素的分离方法，包括如下步骤：
（1）按比例将150g的蓝莓干粉与800mL的酸化甲醇混合，搅拌，萃取3h，静置、过滤，萃取3次，合并萃取液，将萃取液在45℃蒸发干燥；所述酸化甲醇为体积比为99.5：0.5的甲醇和浓盐酸混合液；
（2）按比例为1g：6mL的比例，将步骤（1）获得的产物与正己烷混合，萃取2次，合并上清液并回收正己烷；按比例为1g：6mL的比例将萃取物加入乙酸乙酯，萃取2次，合并上清液在45℃蒸发，蒸发出乙酸乙酯，固体冻结后冷冻干燥得蓝莓花青素粗提物。收率4.79%。
蓝莓花青素粗提物可以采用多种公知的方法进行提纯，下面的方法不对本发明作为限定
（1）按比例，将100mg蓝莓花青素粗提物溶于55mL酸化甲醇中，用45μm有机滤膜过滤；
（2）滤液用恒流泵泵入预先处理好并填充好的AB-8大孔吸附树脂中，待提取物溶液充满树脂床时停泵15min，用酸化蒸馏水进行冲洗30min，用酸化甲醇解吸附，当采集器在520nm处开始出现吸收峰时开始收集洗脱液直至吸收峰结束；
（3）重复步骤（2）1次，合并洗脱液；洗脱液在40℃蒸发，蒸发到不能再蒸发出甲醇为止，-35℃温度下冻结，冷冻干燥20h，得到纯化蓝莓花青素。
酸化甲醇为体积比为98.5：1.5的甲醇和浓盐酸混合液；酸化蒸馏水为体积比为98.5：1.5的蒸馏水和浓盐酸混合液。

Claims (1)

1.一种蓝莓花青素的分离方法，其特征是包括如下步骤：
（1）按比例将150g的蓝莓干粉与700-800mL的酸化甲醇混合，搅拌，萃取3-5h，静置、过滤，萃取1-3次，合并萃取液，将所述萃取液在35-45℃蒸发干燥；所述酸化甲醇为体积比为98.5-99.5：1.5-0.5的甲醇和浓盐酸混合液；
（2）按比例为1g：4-6mL的比例，将步骤（1）获得的产物与正己烷混合，萃取2-4次，合并上清液并回收正己烷；按比例为1g：4-6mL的比例将萃取物加入乙酸乙酯，萃取2-4次，合并上清液在35-45℃蒸发，蒸发出乙酸乙酯，固体冻结后冷冻干燥得蓝莓花青素粗提物。
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