CN103608020B - 核苷化合物在制备用于治疗登革热的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本申请提供了用式I化合物治疗或预防登革热病毒介导的疾病的方法，其中R¹、R^2a、R^2b、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R^8a、R⁹和R¹⁰如本文所定义的。本申请进一步公开了用包含式I化合物的药物组合物治疗或预防登革热病毒介导的疾病的方法。

Description

核苷化合物在制备用于治疗登革热的药物中的用途

发明领域

本申请提供了式I的核苷化合物，其用于治疗登革热(DF)。本申请提供了应用式I的核苷化合物治疗登革热的方法。

登革热是由四种密切相关的病毒血清型(DEN-I、DEN-2、DEN-3和DEN-4)之一引起的急性热病。登革热是根据它的临床特征分为经典型登革热或更多严重形式，登革出血热综合症(DHF)和登革热休克综合征(DSS)。从一种血清型感染到恢复产生对该特定血清型的终身免疫，但仅提供对任何其它血清型的短效且有限的保护。登革热是黄病毒科成员，其是包膜的正义RNA病毒，它的人类病原体还包括西尼罗病毒(WNV)、黄热病毒(YFV)、日本脑炎病毒(JEV)以及蜱传脑炎病毒(TBEV)等。

登革热传播是通过感染的埃及伊蚊的叮咬，该埃及伊蚊存在于世界的热带和亚热带区域。

每年登革热的区域流行导致严重的发病率和死亡率，社会分离以及社会在住院治疗和防控蚊方面承担沉重的经济负担。登革热被世界卫生组织(WHO)认为是最重要的节肢动物传播的病毒疾病，估计全世界每年有五千万登革热感染病例，包括500,000DHF病例和24,000死亡。WHO估计40%的世界人口(25亿人)面临DF、DHF和DSS风险。登革热还是NIAID A类病原体，并且以生物防御观点来看，这表示对美国海外部队有严重威胁。登革热对于北美是一种新出现的威胁，在过去25年中严重疾病显著增加，包括古巴和委内瑞拉的大流行以及德克萨斯和夏威夷的暴发流行。

无法防控蚊子媒介和长距离传播的增加促进了登革热的增加和扩散。作为病毒出血性热病毒的登革热特征(节肢动物传播、广泛扩散并且能诱导大量细胞损伤和引发免疫应答，其导致严重的出血、休克和死亡)使得该病毒成为世界范围内部署的军事人员以及热带区域旅游者的异常威胁。为了应对登革热引起的生物防御和公共健康挑战的准备需要开发新疫苗和抗病 毒治疗。

登革热导致多种疾病，部分由不同血清型病毒的早期感染引起的严重性增加。典型的登革热(DF)在感染的蚊子叮咬后3-8天开始，并且特征在于突发发烧、头痛、背痛、关节痛、麻疹样疹以及恶心和呕吐。由于这些症状，DF通常称为“断骨”热。疾病通常在两周后消退，但是虚弱和抑郁的延长的恢复期是常见的。

该疾病更严重的形式，登革出血热(DHF)具有与登革热相似的发作和疾病早期相。然而，发作后很快，疾病的特征为高烧，肝肿大和出血现象例如由于血管通透性出现鼻、口和内脏器官出血。在登革热休克综合征(DSS)中出现血浆渗漏引起的循环衰竭和低血量休克，没有血浆置换会导致在12-24小时内死亡。没有治疗的话DHF/DSS的病死率可以高达20%。DHF已经成为很多国家儿童中住院治疗和死亡的主要原因，估计每年500,000例需要住院治疗，并且病死率约5%。

DHF/DSS的发病机制仍在研究，但认为部分是由于异型抗体促进巨噬细胞中的病毒复制，称为抗体依赖性增强(ADE)。在不同血清型登革热病毒的继发感染过程中，不是中和作用的交叉反应抗体形成病毒-抗体复合物，其被单核细胞和郎格尔汉斯细胞(树突细胞)摄取并且增加感染细胞的数量。这导致细胞毒性淋巴细胞活化，其能引起DHF和DSS的血浆渗漏和出血性特征。感染的这种抗体-依赖性增强是为什么难以开发成功疫苗的一种原因。尽管频率不高，在首次感染后会出现DHF/DSS，因此病毒毒力和免疫活化也被认为促成该疾病的发病机制。

登革热在非洲、美洲、东地中海、东南亚和西太平洋的100多个国家中流行。在流行期，发作率可以高达易感人群的80-90%。所有四种血清型的病毒在世界范围内出现，增加了疾病的病例数量以及爆发的数量。例如在2002年，美洲有1,015,420例登革热报告病例，以及14,374例DHF病例，这超过了1995年美洲报告的登革热病例数量的三倍。

登革热基因组，长度约11kb，由线性、单链、传染性的正义RNA组成，其翻译成单个长多聚蛋白质。

基因组由七个非结构(NS)蛋白质基因和三个结构蛋白质基因组成，结 构蛋白质基因编码核衣壳蛋白质(C)、膜相关蛋白质(M)和包膜蛋白质(E)。非结构蛋白质参与病毒RNA复制病毒组装，和疾病的炎性组分。结构蛋白质主要参与病毒颗粒形成。前体多聚蛋白质被细胞蛋白酶裂解以分离成结构蛋白质，而病毒编码的蛋白酶裂解多聚蛋白质的非结构区。基因组是加帽的，并且3’末端不含聚(A)尾巴，但是替换为含有稳定的茎环结构，这是基因组RNA稳定性和复制所需的。病毒通过E蛋白质结合细胞受体，并且在溶酶体的低pH融合后经历受体介导的胞吞作用。

然后，病毒基因组是裸露的并且翻译成病毒前体多聚蛋白质。同时和翻译后蛋白水解加工分离结构和非结构蛋白质。RNA依赖的RNA聚合酶连同辅助因子合成负链RNA，其作为合成子代正链RNA的模板。

病毒复制是膜相关的。复制后，基因组壳体化，并且脂质包膜包裹的未成熟的病毒长成管腔。包膜蛋白质糖基化，并且成熟的病毒释放到细胞外。病毒生命周期中的必要阶段或加工是抗病毒药物抑制的可能靶点，并且包括病毒通过E蛋白质结合细胞，病毒摄入细胞，加帽机制，病毒蛋白酶，病毒RNA依赖的RNA聚合酶，和病毒解链酶。

登革热病毒相关的疾病的现行管理仅依靠媒介控制。目前没有批准的抗病毒剂或疫苗用于治疗或预防登革热。利巴韦林，鸟苷类似物，显示出有效对抗一系列RNA病毒感染，并且在组织培养中通过抑制登革热2’-O-甲基转移酶NS5区对抗登革热。然而，在小鼠模型和恒河猴模型中利巴韦林没有显示出防护登革热，相反它诱导贫血和血小板增多。

尽管目前没有可获得的批准的疫苗，但是多价登革热疫苗在人类中显示出一些有限的潜力。然而，由于存在四种不同血清型病毒(其各自引起疾病)，因此疫苗开发是困难的。疫苗开发还面临ADE挑战，其中对抗不同病毒株的不同保护事实上会增加更严重疾病的风险。因此，需要靶向所有血清型登革热的抗病毒药。在登革热感染过程中早期施用的抑制病毒复制的抗病毒药物防止与DHF相关的高病毒载量，并且成为治疗和预防疾病的有吸引力的策略。抑制病毒复制的抗病毒药可以在旅行至登革热流行区之前施用，以预防感染疾病，或对于早先暴露于登革热的那些能预防另一种血清型病毒的感染并且降低威胁生命的DHF和DSS的机会。获得抗病 毒药还将有助于疫苗开发，通过在手边有治疗由于对抗不同血清型的不同免疫保护引起的并发症的工具。尽管一种成功的疫苗会成为有效生物防御的重要组成部分，但是与对抗低威胁风险因子的大规模市民免疫相关的典型延迟出现免疫、潜在的副作用、成本和后勤表明综合生物防御包括单独的快速响应元素。

一种清晰且长期需要是开发有效的疗法用于治疗登革热病毒。特别的是，需要开发可用于治疗登革热感染的患者的化合物和选择性抑制登革热病毒复制的化合物。

发明概述

本申请提供了式I的核苷化合物，其用于治疗登革热(DF)，以及治疗登革热的方法，该方法包括给需要的患者施用式I化合物或其可药用盐

其中：

R¹是氢、C_1-6卤代烷基或芳基，其中所述的芳基是苯基或萘基，任选被1至3个独立地选自下列的取代基取代：C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_1-6烷氧基、卤素、C_1-6卤代烷基、-N(R^1a)₂、C_1-6酰基氨基、-NHSO₂C_1-6烷基、-SO₂N(R^1a)₂、-SO₂C_1-6烷基、-COR^1b、硝基和氰基；

R^1a独立地是氢或C_1-6烷基；

R^1b是-OR^1a或-N(R^1a)₂；

R^2a和R^2b(i)独立地选自氢、C_1-10烷基、-(CH2)_rN(R^1a)₂、C_1-6羟基烷基、-CH₂SH、-(CH₂)S(O)_pMe、-(CH2)₃NHC(=NH)NH₂、(1H-吲哚-3-基)甲基、(1H-吲哚-4-基)甲基、-(CH2)_mC(=O)R^1b、芳基和芳基C_1-3烷基，所述的芳基任选被选自羟基、C_1-10烷基、C_1-6烷氧基、卤素、硝基和氰基的基团取代；(ii)R^2a是氢，并且R^2b和R⁴一起是(CH₂)₃；(iii)R^2a和R^2b一起 是(CH₂)_n；或者(iv)R^2a和R^2b都是C_1-6烷基；

R³是氢、C_1-10烷基、C_1-10卤代烷基、芳基或芳基-C_1-3烷基，其中所述的芳基是苯基；

R⁴是氢、C_1-3烷基，或者R^2b和R⁴一起是(CH₂)₃；

R⁶是A、B、C或D，其中R⁸是氢或C_1-3烷基；

R⁵和R⁷独立地选自氢、C(=O)C_1-6烷基、C(=O)R^1b；

m是0至3；

n是4或5；

p是0至2；并且

r是1至6。

发明详述

定义

如本文应用的短语“一(a)”或“一(an)”种实体是指一种或多种该实体；例如，一种化合物指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一种(a)”(或“一种(an)”)，“一种或多种”和“至少一种”可以在本文中可交换应用。

短语“如上文定义”是指如发明概述或最宽权利要求中提供的每个基团的最宽定义。在下面提供的所有的其它实施方案中，可以在每个实施方案中存在并且没有明确定义的取代基保留在发明概述中提供的最宽定义。

如在本说明书中应用的，不管在过渡性短语中或在权利要求的主体中，术语“包含”和“包括”应当被解释为具有开放式的含义。即，该术语应当被解释为与短语“至少具有”或“至少包括”同义。当在方法的上下文中应用时，术语“包括”是指该方法至少包括所述的步骤，但是可以包括另外的步骤。当在化合物或组合物的上下文中应用时，术语“包含”是指该化合物或组合物至少包括所述的特征或组分，但是还可以包括另外的特征或组分。

如本文中所用的，除非另外具体指出，单词“或”的应用是“和/或”的“包括”意思，而不是“或/或”的“排它”意思。

本文中应用的术语“独立地”是指变量被用于任何一种情况，而不考 虑在相同的化合物内存在或不存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R”出现两次并且被定义为“独立地为碳或氮”的化合物中，两个R”可以是碳，两个R”可以是氮，或者一个R”可以是碳并且另一个是氮。

在描绘或描述本发明中采用的或要求保护的化合物的任何部分或结构式中，任何变量出现多于一次时，其在每一次出现时的定义独立于其在每一次另外出现时的定义。此外，取代基和/或变量的组合只有在这些化合物导致稳定的化合物的情况下才是允许的。

在键末端处的符号“＊”或划过键的“------”分别是指官能团或其它化学部分与其作为一部分的分子的余下部分的连接点。因此，例如：

MeC(=O)OR⁴其中

划入环体系中的键(与在明确的顶点处连接相反的)是指该键可以连接到任何适合的环原子上。

如本文中所用的术语“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情形可以、但不是必须发生，并且是指该描述包括事件或情形发生的情况，和它不发生的情况。例如，“任选取代的”是指任选取代的部分可以结合氢原子或取代基。

短语“任选的键”是指该键可以存在或可以不存在，并且是指该描述包括单键、双键或三键。如果取代基被指定为是“键”或“不存在”，则连接到该取代基上的原子直接连接。

本文应用的术语“约”是指大致地、在......的附近、粗略地或大约。当术语“约”与数值范围一起应用时，它通过将边界延伸高于和低于所列出的数值而改变该范围。通常，本文应用的术语“约”将数值改变到高于和低于所述的值至20%的差异的程度。

某些化合物可以显示出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或更多种可以相互转化的种类存在。质子转移的互变异构体由共价结合的氢原子在两个原子之间的迁移得到。互变异构体通常存在着平衡并且分离单个互变异构体的尝试通常制备出其化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于在分子内的化学特征。例如，在许多脂族醛和酮例如乙醛的情况下，酮形式占优势，而在酚中，烯醇形式占优势。 常见的质子转移的互变异构体包括酮/烯醇(-C(=O)-CH--C(-OH)=CH-)、酰胺/亚氨酸(-C(=O)-NH--C(-OH)=N-)和脒(-C(=NR)-NH--C(-NHR)=N-)互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中是特别常见的，并且本发明包括化合物的所有互变异构形式。

本文应用的技术和科学术语具有本发明所属技术领域内的技术人员所通常理解的含义，除非另外定义。本文参考本领域技术人员已知的多种方法和材料。列出药理学的通用原理的标准参考书包括Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis ofTherapeutics,第10版,McGraw Hill Companies Inc.,New York(2001)。可以将本领域技术人员已知的任何适合的材料和/或方法用于实施本发明。但是，描述的是优选的材料和方法。在下面的说明和实施例中涉及的材料、试剂等可获自商业来源，除非另外指出。

本文所述的定义可以被附加以形成化学上相关的组合，例如“杂烷基芳基”、“卤代烷基杂芳基”、“芳基烷基杂环基”、“烷基羰基”、“烷氧基烷基”等。当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，例如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”是指具有1至2个苯基取代基的烷基，并且因此包括苄基、苯基乙基和联苯。“烷基氨基烷基”是具有1至2个烷基氨基取代基的烷基。“羟基烷基”包括2-羟基乙基、2-羟基丙基、1-(羟基甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、2,3-二羟基丁基、2-(羟基甲基)、3-羟基丙基等。因而，如本文中所用的，术语“羟基烷基”用来定义下面定义的杂烷基的子集。术语-(芳)烷基是指未取代的烷基或芳烷基。术语(杂(hetero))芳基或(杂(het))芳基是指芳基或杂芳基。

如本文中所用的术语“螺环烷基”是指螺环的环烷基，诸如，例如螺[3.3]庚烷。如本文中所用的术语螺杂环烷基是指螺环的杂环烷基，诸如，例如2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷。

如本文中所用的术语“酰基”表示式-C(=O)R的基团，其中R是氢或如本文中定义的低级烷基。如本文中所用的术语“烷基羰基”表示式 -C(=O)R的基团，其中R是如本文中定义的烷基。术语C_1-6酰基是指基团-C(=O)R，其含6个碳原子。如本文中所用的术语“芳基羰基”表示式C(=O)R的基团，其中R是芳基；如本文中所用的术语“苯甲酰基”是其中R是苯基的“芳基羰基”。

如本文中所用的术语“酯”表示式-C(=O)OR的基团，其中R是如本文所定义的低级烷基。

如本文中所用的术语“烷基”表示含有1至10个碳原子的非支链或支链的饱和一价烃残基。术语“低级烷基”表示含有1至6个碳原子的直链或支链烃残基。如本文中所用的“C_1-10烷基”是指由1至10个碳构成的烷基。烷基的实例包括但不限于低级烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基或戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。

当术语“烷基”被用作另一个术语之后的后缀时，如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中时，它意在表示如上定义的烷基，其被一至两个选自所述的另外具体标名的基团的取代基取代。因此，例如“苯基烷基”表示基团R’R”-，其中R’是苯基，并且R”是如本文中定义的亚烷基，其中理解的是苯基烷基部分的连接点将在亚烷基上。芳基烷基的实例包括但不限于苄基、苯基乙基、3-苯基丙基。术语“芳基烷基”或“芳烷基”被类似地解释，不同之处在于R’是芳基。术语“(杂)芳基烷基”或“(杂)芳烷基”被类似地解释，不同之处在于R’任选是芳基或杂芳基。

术语“卤代烷基”或“卤代-低级烷基”或“低级卤代烷基”是指含1至6个碳原子的直链或支链烃残基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。

如本文中所用的术语“亚烷基(alkylene或alkylenyl)”表示1至10个碳原子的二价饱和直链烃基(例如(CH₂)_n)或2至10个碳原子的支链饱和二价烃基(例如-CHMe-或-CH₂CH(i-Pr)CH₂-)，除非另外指出。除了在亚甲基的情况下之外，亚烷基的开放价态不连接到相同的原子上。亚烷基的实例包括但不限于：亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基-亚丙基、1,1-二甲基-亚乙基、亚丁基、2-乙基亚丁基。

如本文中所用的术语“烷氧基”表示-O-烷基，其中烷基如上定义，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括它们的异构体。如本文中所用的“低级烷氧基”表示具有如上面定义的“低级烷基”基团的烷氧基。如本文中所用的“C_1-10烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基是C_1-10。

术语“PCy₃”是指被三个环状部分三取代的膦。

术语“卤代烷氧基”或“卤代-低级烷氧基”或“低级卤代烷氧基”是指低级烷氧基，其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。

如本文中所用的术语“羟基烷基”表示如本文中定义的烷基，其中在不同碳原子上的1至3个氢原子被羟基代替。

如本文中所用的术语“烷基磺酰基”和“芳基磺酰基”是指式-S(=O)₂R的基团，其中R分别是烷基或芳基，并且烷基和芳基如本文中定义。如本文中所用的术语“杂烷基磺酰基”表示式-S(=O)₂R的基团，其中R是如本文中定义的“杂烷基”。

如本文中所用的术语“烷基磺酰基氨基”和“芳基磺酰基氨基”是指式-NR’S(=O)₂R的基团，其中R分别是烷基或芳基，R’是氢或C_1-3烷基，并且烷基和芳基如本文中所定义。

如本文中所用的术语“环烷基”是指含有3至8个碳原子的饱和碳环，即环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。如本文中所用的“C_3-7环烷基”是指由在碳环中的3至7个碳构成的环烷基。

如本文中所用的术语羧基-烷基是指烷基部分，其中一个氢原子已经被羧基代替，其中应理解，杂烷基的连接点是通过碳原子。术语“羧基(carboxy或carboxyl)”是指-CO₂H部分。

如本文中所用的术语“杂芳基”或“杂芳族”是指5至12个环原子的单环或二环基团，其具有至少一个芳族或部分不饱和的环，每个环含有4至8个原子，结合有一个或多个N、O或S杂原子，其余环原子是碳，其中理解的是杂芳基的连接点将在芳族或部分不饱和的环上。如本领域中技术人员周知的，杂芳基环比它们的全碳副本(counter parts)具有更低的芳族特性。因此，对于本发明的目的而言，杂芳基只需要具有一定程度的芳族 特性。杂芳基部分的实例包括具有5至6个环原子和1至3个杂原子的单环芳族杂环，包括但不限于吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、4,5-二氢-唑基、5,6-二氢-4H-[1,3]唑基、异唑、噻唑、异噻唑、三唑啉、噻二唑和二唑啉(oxadiaxoline)，它们可以任选被1个或多个，优选1或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氰基、烷基、烷氧基、硫代、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、卤素、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基、硝基、烷氧基羰基和氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、烷基羰基氨基和芳基羰基氨基。二环部分的实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并唑、苯并异唑、苯并噻唑、萘啶基、5,6,7,8-四氢-[1,6]萘啶基和苯并异噻唑。二环部分可以在任一环上任选取代，但是连接点在含有杂原子的环上。

如本文中所用的术语“杂环基”、“杂环烷基”或“杂环”表示由一个或多个环，优选1至2个环(包括螺环环系)组成的一价饱和环状基团，每个环3至8个原子，其结合有一个或多个环杂原子(选自N、O或S(O)_0-2)，并且其可以任选独立地被一个或多个、优选1个或2个取代基取代，所述的取代基选自羟基、氧代、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、低级卤代烷基、羟基烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷基氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基及其离子形式，除非另外指出。杂环基的实例包括但不限于吗啉基、哌嗪基、哌啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、六氢氮杂基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、唑烷基、噻唑烷基、异唑烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、奎宁环基和咪唑啉基及其离子形式。实例还可以是二环的，诸如，例如3,8-二氮杂-二环[3.2.1]辛烷、2,5-二氮杂-二环[2.2.2]辛烷或八氢-吡嗪并[2,1-c][1,4]嗪。

登革热病毒抑制剂

本申请提供了治疗登革热的方法，该方法包括给需要的患者施用式I 化合物或其可药用盐

其中：

R¹是氢、C_1-6卤代烷基或芳基，其中所述的芳基是苯基或萘基，任选被1至3个独立地选自下列的取代基取代：C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_1-6烷氧基、卤素、C_1-6卤代烷基、-N(R^1a)₂、C_1-6酰基氨基、-NHSO₂C_1-6烷基、-SO₂N(R^1a)₂、-SO₂C_1-6烷基、-COR^1b、硝基和氰基；

R^1a独立地是氢或C_1-6烷基；

R^1b是-OR^1a或-N(R^1a)₂；

R^2a和R^2b(i)独立地选自氢、C_1-10烷基、-(CH2)_rN(R^1a)₂、C_1-6羟基烷基、-CH₂SH、-(CH₂)S(O)_pMe、-(CH2)₃NHC(=NH)NH₂、(1H-吲哚-3-基)甲基、(1H-吲哚-4-基)甲基、-(CH2)_mC(=O)R^1b、芳基和芳基C_1-3烷基，所述的芳基任选被选自羟基、C_1-10烷基、C_1-6烷氧基、卤素、硝基和氰基的基团取代；(ii)R^2a是氢，并且R^2b和R⁴一起是(CH₂)₃；(iii)R^2a和R^2b一起是(CH₂)_n；或者(iv)R^2a和R^2b都是C_1-6烷基；

R³是氢、C_1-10烷基、C_1-10卤代烷基、芳基或芳基-C_1-3烷基，其中所述的芳基是苯基；

R⁴是氢、C_1-3烷基，或者R^2b和R⁴一起是(CH₂)₃；

R⁶是A、B、C或D，其中R⁸是氢或C_1-3烷基；

R⁵和R⁷独立地选自氢、C(=O)C_1-6烷基、C(=O)R^1b；

m是0至3；

n是4或5；

p是0至2；并且

r是1至6。

本申请提供了治疗登革热的方法，该方法包括给需要的患者施用式Ia化合物或其可药用盐

其中：

R¹是氢、C_1-6卤代烷基或芳基，其中所述的芳基是苯基或萘基，任选被1至3个独立地选自下列的取代基取代：C_1-6烷基、C_2-6链烯基、C_2-6炔基、C_1-6烷氧基、卤素、C_1-6卤代烷基、-N(R^1a)₂、C_1-6酰基氨基、-NHSO₂C_1-6烷基、-SO₂N(R^1a)₂、-SO₂C_1-6烷基、-COR^1b、硝基和氰基；

R^1a独立地是氢或C_1-6烷基；

R^1b是-OR^1a或-N(R^1a)₂；

R^2a和R^2b(i)独立地选自氢、C_1-10烷基、-(CH2)_rN(R^1a)₂、C_1-6羟基烷基、-CH₂SH、-(CH₂)S(O)_pMe、-(CH2)₃NHC(=NH)NH₂、(1H-吲哚-3-基)甲基、(1H-吲哚-4-基)甲基、-(CH2)_mC(=O)R^1b、芳基和芳基C_1-3烷基，所述的芳基任选被选自羟基、C_1-10烷基、C_1-6烷氧基、卤素、硝基和氰基的基团取代；(ii)R^2a是氢，并且R^2b和R⁴一起是(CH₂)₃；(iii)R^2a和R^2b一起是(CH₂)_n；或者(iv)R^2a和R^2b都是C_1-6烷基；

R³是氢、C_1-10烷基、C_1-10卤代烷基、芳基或芳基-C_1-3烷基，其中所述的芳基是苯基；

R⁴是氢、C_1-3烷基，或者R^2b和R⁴一起是(CH₂)₃；

R⁵和R⁷独立地选自氢、C(=O)C_1-6烷基、C(=O)R^1b；

m是0至3；

n是4或5；

p是0至2；并且

r是1至6。

本申请提供了以上方法，其中：

R¹是苯基、萘基或邻-甲氧基苯基；

R^2a和R^2b独立地是氢、甲基或苄基；

R³是甲基、乙基或苄基；

R⁴是H；

R⁵和R⁷都是H、-C(=O)Et或-C(=O)Bu；并且

R⁸是H。

本申请提供了以上方法，其中：

R¹是苯基或萘基；

R^2a是氢，并且R^2b是甲基；

R³是乙基或苄基；并且

R⁵和R⁷都是H或-C(=O)Et。

本申请提供了以上方法，其中：

R¹是萘基；

R^2a是氢，并且R^2b是甲基；

R³是苄基；并且

R⁵和R⁷都是H。

在一个变通实施方案中，本申请提供了任何以上方法，其中：

R¹是萘基；

R^2a是H，并且R^2b是苄基；

R³是乙基；

R⁴是H；

R⁵是H；

R⁶是A；

R⁷是H；并且

R⁸是H。

在另一个变通实施方案中，本申请提供了任何以上方法，其中：

R¹是萘基；

R^2a是H，并且R^2b是苄基；

R³是苄基；

R⁴是H；

R⁵是H；

R⁶是A；并且

R⁷是H。

在另一个变通实施方案中，本申请提供了任何以上方法，其中：

R¹是苯基；

R^2a是H，并且R^2b是甲基；

R³是苄基；

R⁴是H；

R⁵是H；

R⁶是C；并且

R⁷是H。

本申请提供了治疗登革热的方法，该方法包括给需要的患者施用选自下列的化合物：

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-嘌呤-9-基)-2-叠氮基-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-丙酸乙酯；

(S)-2-{[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-嘌呤-9-基)-2-叠氮基-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基}-丙酸苄酯；

(S)-2-{[(2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基}-丙酸甲酯；

戊酸(2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-2-[((S)-1-苄基氧基羰基-乙基氨基)-(2-甲氧基-苯氧基)-磷酰基氧基甲基]-4-戊酰基氧基-四氢-呋喃-3-基酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-丙酸苄酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-丙酸苄 酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-戊二酸二乙酯；

(S)-2-{[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二-丙酰基氧基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基}-丙酸乙酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸苄酯；和

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸乙酯。

本申请提供了任何以上方法，该方法进一步包括施用至少一种其它抗病毒剂。

本申请提供了选自下列的化合物：

戊酸(2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-2-[((S)-1-苄基氧基羰基-乙基氨基)-(2-甲氧基-苯氧基)-磷酰基氧基甲基]-4-戊酰基氧基-四氢-呋喃-3-基酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-戊二酸二乙酯；

(S)-2-{[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二-丙酰基氧基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基}-丙酸乙酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸苄酯；和

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1- 基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸乙酯。

用于治疗登革热的方法的化合物

以下的表I中提供了本文公开的可用于治疗登革热的通式I的代表性化合物。以下提供这些实施例和制备例是为了使本领域的技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。它们不应被理解为限制本发明的范围，而仅仅是其举例说明和代表。

通常，本申请中所用的命名法是基于AUTONOMTM v.4.0即用于生成IUPAC系统命名法的Beilstein Institute电脑化系统。如果在绘制的结构和结构所给的名称之间存在不一致，以绘制的结构为准。此外，如果结构或部分结构的立体化学没有用例如粗体或虚线标明，则将该结构或部分结构解释为包括其全部立体异构体。

表I描述了根据通式I的化合物的实例。

表I.

合成

通用流程图

本发明的磷酰胺酯(phosphoramidate)化合物可以通过4’-叠氮基核苷4与适合的取代的磷酰氯化合物3在强碱的存在下缩合而制备(流程图1)。本 发明的核苷通常包含任选取代的嘧啶(R⁶=A或B)或嘌呤(R⁶=C或D)，并且R⁵和R⁷之一或二者均是氢或酰基或氨基甲酰基或烷氧基羰基。用于制备本发明化合物的4’-叠氮基核苷的实例可以是4’-叠氮基腺苷或4’-叠氮基尿苷，其不旨在用于限制，并且本发明核苷的范围可以在权利要求中查找。缩合可以在未保护的核苷上进行的，或者核苷的2’,3’-羟基可以被保护成丙酮化合物或本领域已知的其它二醇保护基。缩合后核苷的脱保护是应用核酸化学的标准方法进行的。

流程图1

用于制备本发明化合物的必需取代的磷酰氯化合物3是通过两步顺序制备的，包括磷酰氯(1)与适合的取代的酚缩合，得到芳基氧基磷酰二氯2，其随后用α-氨基酸酯的酸加成盐在TEA的存在下处理，得到芳基氧基磷酰氯3(代表性方法参见例如D.Curley等人,Antiviral Res.199014:345-356；C.McGuigan等人,Antiviral Res.199217:311-321；McGuigan等人,Antiviral Chem.Chemother19901(2):107-113)。

芳基氧基磷酰氯3与核苷4的缩合，其中R⁶是任选取代的尿苷、胞苷、腺苷或肌苷，R⁵和R⁷之一或二者均是氢或酰基或氨基甲酰基或烷氧基羰基。当R⁵和R⁷都是氢时，2’,3’-二醇可以形成缩醛或缩酮保护基。在强碱的存在下用芳基氧基磷酰胺酯处理核苷得到本发明的磷酰胺酯衍生物(代表性方法参见例如K.S.Gudmundsson,Nucleosides,Nucleotides&Nucleic Acids200322(10):1953-1961)。当2’,3’-二醇是被缩醛或缩酮基团保护时，需要随后的脱保护步骤，这些步骤是本领域已知的。

式I化合物可以显示出互变异构现象。互变异构的化合物可以以两种或更多种可以相互转化的种类存在。质子转移的互变异构体由共价结合的氢原子在两个原子之间的迁移得到。互变异构体通常存在着平衡并且分离单个互变异构体的尝试通常制备出其化学和物理性质与化合物的混合物一致的混合物。平衡的位置取决于在分子内的化学特征。例如，在许多脂族醛和酮例如乙醛的情况下，酮形式占优势，而在酚中，烯醇形式占优势。常见的质子转移的互变异构体包括酮/烯醇(-C(=O)-CH--C(-OH)=CH-)、酰胺/亚氨酸(-C(=O)-NH--C(-OH)=N-)和脒(-C(=NR)-NH--C(-NHR)=N-)互变异构体。后两种在杂芳基和杂环中是特别常见的，并且本发明包括化合物的所有互变异构形式。

本文所用的术语“氨基酸”是指天然存在的α氨基羧酸，以及旋光异构体(对映异构体和非对映异构体)，合成的类似物及其衍生物。α-氨基酸包括键合羧基的碳原子、氨基、氢原子和唯一的“侧链”基团。术语“天然存在的氨基酸”是指天然存在的氨基酸的L-异构体。天然存在的氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、组氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-羧基谷氨酸、精氨酸、鸟氨酸和赖氨酸。天然存在的氨基酸的侧链包括：氢、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、-CH₂OH、-CH(OH)CH₃、-CH₂SH、-CH₂CH₂SMe、-(CH₂)_pCOR(其中R是-OH或-NH₂，并且p是1或2)、-(CH₂)_q-NH₂(其中q是3或4)、-(CH₂)₃-NHC(=NH)NH₂、-CH₂C₆H₅、-CH₂-对-C₆H₄-OH、(3-二氢吲哚基)亚甲基、(4-咪唑基)亚甲基。

本发明化合物可以在羧酸酯、酰胺或碳酸酯的侧链上含有不对称中心，当连接到核苷时产生非对映异构体。考虑混合物或纯的或基本上纯的形式的本发明化合物的侧链的所有立体异构体。本发明化合物的定义包括所有分离的旋光异构体、对映异构体和它们的混合物，包括外消旋形式。纯的旋光异构体可以通过从α-D-核糖立体特异性地合成制备的，或者外消旋形式可以通过物理方法拆分，例如分步结晶、非对映异构体衍生物的分离或结晶或通过手性柱色谱法分离。单独的旋光异构体可以通过常规方法由外消旋体获得，例如结晶后用旋光活性的酸的盐形成。

药物组合物和施用

通过多种途径施用的主题化合物的药物组合物是如本实施例所描述的制备的。

口服施用的组合物(A)

将成分混合并且分散到胶囊中，每个含约100mg；一个胶囊约为总的日剂量。

口服施用的组合物(B)

将成分合并并且用溶剂例如甲醇制粒。然后干燥配制物并且用适合的压片机形成片剂(含有约20mg活性化合物)。

口服施用的组合物(C)

将成分混合以形成口服施用的混悬剂。

非肠道制剂(D)

将活性成分溶于部分注射用水中。然后在搅拌下加入足量氯化钠制成等渗溶液。用剩余的注射用水使溶液加至重量，经0.2微米膜过滤器过滤并且在无菌条件下包装。

剂量与施用：

可以将本发明化合物配制到多种口服施用剂型和载体中。口服施用的形式可以是片剂、包衣片、糖衣丸、硬和软明胶胶囊剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或混悬剂。本发明化合物当由其它的施用途径(包括连续(静脉内滴注)局部非肠道、肌内、静脉内、皮下、经皮(其可以包括渗透增强剂)、经颊、经鼻、吸入和栓剂施用等)施用时是有效的。优选的施用方式通常是应用方便的每日给药方案的口服，能够根据痛苦的程度和患者对活性成分的响应对其进行调节。

可以将本发明化合物及其可药用盐与一种或多种常规的赋形剂、载体或稀释剂一起制成药物组合物和单位剂量的形式。药物组合物和单位剂型可以由常规比例的常规成分组成，具有或没有另外的活性化合物或物质，并且单位剂型可以含有与预计应用的每日剂量范围相匹配的任何适合的有效量的活性成分。药物组合物可以以口服的固体(例如片剂或填充的胶囊剂)、半固体、粉末、缓释制剂或液体(例如溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂或填充的胶囊剂)应用；或者以用于直肠或阴道施用的栓剂的形式；或者以非肠道应用的无菌注射液的形式。典型的制剂将含有约5%至约95%的活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”旨在包括活性化合物的固体和液体制剂，并且本领域技术人员将理解活性成分可以取决于靶器官或组织以及需要的剂量和药物代谢动力学参数而存在于不同的制剂中。

本文所用的术语“赋形剂”是指可用于制备药物组合物的化合物，其通常是安全的、无毒的并且既不是生物学上的也不是其它方面不希望的，并且其包括可兽用和可人药用的赋形剂。本发明化合物可以单独施用，但是通常与根据预计的施用途径和标准的制药实践选择的一种或多种适合的药物赋形剂、稀释剂或载体混合施用。

“可药用的”是指其可用于制备药物组合物，其通常是安全的、无毒的并且既不是生物学上的也不是其它方面不希望的，并且其包括可兽用和可人药用。

活性成分的“可药用盐”形式也可以最初赋予活性成分在非盐的形式中所没有的需要的药物代谢动力学性质，并且甚至可以在其体内治疗活性方面正面地影响活性成分的药效学。用语化合物的“可药用盐”是指可药用的并且具有需要的母体化合物的药理活性的盐。所述盐包括：(1)与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)形成的或与有机酸(例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、 十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等)形成的酸加成盐；或(2)当母体化合物中所存在的酸性质子被金属离子(例如碱金属离子、碱土离子或铝离子)代替或与有机碱(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等)一起时所形成的盐。

固体形式制剂包括散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以作为稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包囊材料。在散剂中，载体通常是细碎的固体，其是与细碎的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分通常以适合的比例与具有必要的结合容量的载体混合，并且压制成需要的形状和尺寸。适合的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除了活性组分，固体形式制剂还可以含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

液体制剂也适用于口服施用，液体制剂包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液剂、水混悬剂。这些包括预计在应用前转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以在溶液中、例如在丙二醇水溶液中进行制备，或者其可以含有乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液剂可以通过将活性组分溶解于水中并且加入适合的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂进行制备。水混悬剂可以通过将细碎的活性组分分散于含有粘性材料(例如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它众所周知的助悬剂)的水中进行制备。

本发明化合物可以配制用于非肠道施用(例如通过注射，例如推注或连续输注)并且其可以是在安瓿、预填充注射器、小容量输液中或在具有添加的防腐剂的多剂量容器中的单位剂型。组合物可以采用如混悬剂、溶液剂或在油性或水性载体中的乳剂的形式，例如在水性聚乙二醇中的溶液剂。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或溶媒的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)，并且其可以含有配方剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂或助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者， 活性成分可以是在应用前用适合的溶媒(例如无菌、无热源的水)构建的粉末形式，其通过无菌固体的无菌分离或通过溶液的冷冻干燥而得到。

本发明化合物可以配制用于以软膏剂、乳膏剂或洗剂或者以透皮贴剂向表皮局部施用。例如，软膏剂和乳膏剂可以与添加了适合的增稠剂和/或胶凝剂的水性或油性基进行配制。洗剂可以与水性或油性基进行配制并且通常也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。适合于在口中局部施用的制剂包括：在矫味的基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含活性剂的锭剂；在惰性基质(例如明胶和甘油或者蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的软锭剂；和在适合的液体载体中包含活性成分的漱口剂。

本发明化合物可以配制用于以栓剂施用。首先将低熔点蜡(例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物)熔化并且使活性组分均匀分散，例如通过搅拌。然后将熔融的均匀的混合物倒入常规尺寸的模具，使其冷却和固化。

本发明化合物可以配制用于阴道施用。本领域已知，除了活性成分、还含有这些载体的阴道栓剂、填塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂是适合的。

本发明化合物可以配制用于经鼻施用。通过常规的方法，例如用滴管、吸量管或喷雾器，溶液剂或混悬剂可以直接应用于鼻腔。可以以单或多剂量形式提供制剂。在滴管或吸量管的后一种情况中，这可以通过患者施用适合的、预定体积的溶液或混悬液来实现。在喷雾器的情况中，这可以例如通过计量雾化喷雾泵来实现。

本发明化合物可以配制用于气雾剂施用、特别是向呼吸道施用，并且其包括鼻内施用。化合物通常具有小粒径，例如5微米或更小的量级。该粒径可以通过本领域已知的方法得到，例如通过微粉化。以具有适合的抛射剂的加压包装提供活性成分，抛射剂例如氯氟碳(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷或二氧化碳或其它适合的气体。气雾剂也可以适合地含有表面活性剂，例如卵磷脂。通过量阀可以控制药物的剂量。或者可以以干粉的形式提供活性成分，例如在适合的粉末基质(例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(例如羟丙基甲基纤维素)和聚乙烯吡咯烷(PVP))中 的化合物的粉末混合物。粉末载体在鼻腔中将形成凝胶。粉末组合物可以是单位剂型，例如以如明胶的胶囊或药盒或泡罩包装，可以通过吸入器从其中施用粉末。

当需要的时候，制剂可以用适合于活性成分的缓释或控释施用的肠包衣进行制备。例如，本发明化合物可以配制到经皮或皮下药物递送装置中。当化合物的缓释是必需的时和当患者对治疗方案顺应性是至关重要的时，这些递送系统是有优势的。在经皮递送系统中的化合物经常附着到粘附皮肤的固体支撑物上。目的化合物也能够与渗透增强剂(例如氮酮(1-十二烷基氮杂-环庚-2-酮))组合。通过手术或注射将缓释递送系统皮下插入到皮下层。皮下植入物在脂溶性膜(例如硅酮橡胶)或生物可降解聚合物(例如聚乳酸)中包裹化合物。

具有药物载体、稀释剂和赋形剂的适合的制剂描述于由E.W.Martin编辑的Remington:The Science and Practice of Pharmacy1995,Mack Publishing Company,第19版,Easton,宾夕法尼亚州。有经验的制剂科学家在说明书的教导下可以修饰制剂从而提供用于特定的施用途径的多种制剂，但不会致使本发明组合物不稳定或损害其治疗活性。

例如，通过微小的修饰(成盐、酯化等)可以容易地实现本发明化合物的修饰从而使其在水或其它溶媒中更易溶，这属于本领域的普通技术。为了控制本发明化合物的药物代谢动力学从而使患者体内的有益效果最大化，可修饰特别的化合物的施用途径和剂量方案，这也属于本领域的普通技术。

本文所用的术语“治疗有效量”是指为了减少个体中的疾病的症状所需的量。根据每一种特别的情况中的个体需求调整剂量。剂量可以在宽限制内变化，这取决于多种因素，例如所治疗的疾病的严重性、患者的年龄和总体健康状况、患者接受治疗的同时所用的其它药物、施用途径和形式以及参与的医师的偏好和经验。对于口服施用，在每天约0.01至约1000mg/kg体重之间的每日剂量应当适用于单一治疗和/或联合治疗。优选的每日剂量是在约0.1至约500mg/kg体重之间，更优选的是在每天0.1至约100mg/kg体重之间，并且最优选的是在每天1.0至约10mg/kg体重之间。 因此，对于向70kg的人施用，剂量范围将是每天约7mg至0.7g。每日剂量可以以单一剂量或分开的剂量施用，通常每天施用在1和5个剂量之间。通常，治疗以低于化合物的最佳剂量的较小的剂量开始。其后，以小的增量来增加剂量直至达到个体患者的最佳效果。治疗本文所述的疾病的普通技术人员不需要过度的实验，并且依赖其个人的知识、经验和本申请的公开内容，将能够确定对给定的疾病和患者的本发明化合物的治疗有效量。

药物制剂优选是单位剂型。以这种形式，将制剂再分成含有适合的量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，所述的包装含有离散数量的制剂，例如包裹的片剂、胶囊剂和小瓶或安瓿中的粉末。此外，单位剂型本身也可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂，或者其可以是以包装形式的适合数量的任意的这些形式。

适应证和治疗方法

适应证

本发明化合物和它们的异构体形式及其可药用盐可用于治疗和预防登革热病毒感染。

本申请提供了治疗登革热病毒感染的方法，该方法包括给需要的患者施用治疗有效量的式I化合物。

本申请提供了用于抑制登革热病毒在细胞内复制的方法，该方法包括施用式I化合物。

实施例

缩略语

常用的缩略语包括：乙酰基(Ac)、偶氮-双-异丁腈(AIBN)、大气压(Atm)、9-硼杂二环[3.3.1]壬烷(9-BBN或BBN)、2,2’-双(二苯基膦基)-1,1’-联萘(BINAP)、叔丁氧基羰基(Boc)、焦碳酸二叔丁酯或Boc酸酐(Boc₂O)、苄基(Bn)、丁基(Bu)、化学文摘登记号(CASRN)、苄基氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷(DABCO)、二乙基氨基三氟化硫(DAST)、二亚苄基丙酮(dba)、1,5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、N,N’-二环己基碳二亚 胺(DCC)、1,2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(DDQ)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，二异丁基氢化铝(DIBAL或DIBAL-H)、二异丙基乙基胺(DIPEA)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、1,1’-双-(二苯基膦基)乙烷(dppe)、1,1’-双-(二苯基膦基)二茂铁(dppf)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)、乙基(Et)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)、乙醚(Et₂O)、乙基异丙基醚(EtOiPr)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’N’-四甲基脲六氟磷酸盐乙酸(HATU)、乙酸(HOAc)、1-N-羟基苯并三唑(HOBt)、高压液相色谱(HPLC)、异丙醇(IPA)、异丙基氯化镁(iPrMgCl)、六甲基二硅烷基胺(HMDS)、液相色谱法质谱法(LCMS)、六甲基二硅烷基胺锂(LiHMDS)、间-氯过氧基苯甲酸(m-CPBA)、甲醇(MeOH)、熔点(mp)、MeSO₂-(甲磺酰基或Ms)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、间氯过苯甲酸(MCPBA)、质谱(ms)、甲基叔丁基醚(MTBE)、甲基四氢呋喃(MeTHF)、N-溴琥珀酰亚胺(NBS)、正-丁基锂(nBuLi)、N-羧基酸酐(NCA)、N-氯琥珀酰亚胺(NCS)、N-甲基吗啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、氯铬酸吡啶(PCC)、二氯-((双-二苯基膦基)二茂铁)钯(II)(Pd(dppf)Cl₂)、乙酸钯(II)(Pd(OAc)₂)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd₂(dba)₃)、重铬酸吡啶(PDC)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、异丙基(i-Pr)、磅每平方英寸(psi)、吡啶(pyr)、1,2,3,4,5-五苯基-1’-(二-叔丁基膦基)二茂铁(Q-Phos)、室温(环境温度、rt或RT)、仲-丁基锂(sBuLi)、叔丁基二甲基甲硅烷基或t-BuMe₂Si(TBDMS)、四-正-丁基氟化铵(TBAF)、三乙胺(TEA或Et₃N)、2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基(TEMPO)、三氟甲磺酸基或CF₃SO₂-(Tf)、三氟乙酸(TFA)、1,1’-双-2,2,6,6-四甲基庚烷-2,6-二酮(TMHD)、O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、薄层色谱法(TLC)、四氢呋喃(THF)、三甲基甲硅烷基或Me₃Si(TMS)、对甲苯磺酸一水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C₆H₄SO₂-或甲苯磺酰基(Ts)和N-尿烷-N-羧基酸酐(UNCA)。常用的命名(包括前缀正(n)、异(i-)、仲 (sec-)、叔(tert-)和新)当其与烷基部分一起应用时具有其常规的含义(J.Rigaudy和D.P.Klesney，Nomenclaure in Organic Chemistry，IUPAC1979Pergamon Press，Oxford)。

通用条件

本发明化合物可以通过下面实施例部分描述的示例性合成反应所述的多种方法制备。美国专利7,608,599公开了抗病毒核苷磷酰胺酯的制备，并且将其全部内容并入本文作为参考。

制备这些化合物所用的原料和试剂通常是从供应商购买，例如Aldrich ChemicalCo.，或通过本领域技术人员已知的方法制备，依照参考文献中给出的方法，例如Fieser和Fieser’s Reagents for Organic Synthesis；Wiley&Sons:New York,1991,第1-15卷；Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds,Elsevier Science Publishers,1989,第1-5卷和增刊；和Organic Reactions,Wiley&Sons:New York,1991,第1-40卷。应当理解的是实施例部分所示的合成反应流程图仅是一些方法的举例说明，通过这些方法可以合成本发明化合物，并且可以对这些合成反应流程图进行多种修改，并且建议给本领域技术人员参考本申请中包含的公开。

如果需要可以应用常规技术分离和纯化合成反应流程图的原料和中间体，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。这些原料可以用常规方法表征，包括物理常数和光谱数据。

除非相反规定，否则本文描述的反应通常是在惰性气氛下在大气压下在反应温度范围约-78℃至约150℃，通常从约0℃至约125℃，并且更通常且便利地在约室温(环境温度)，例如约20℃下进行。

本发明化合物上多种取代基可以存在于起始化合物中，通过已知的取代方法或转换反应添加至任何一种中间体上或在形成最终产物后添加。如果取代基自身是活性的，那么取代基自身可以根据本领域已知的技术保护。多种保护基是本领域已知的，并且可以应用。很多可能的基团的实例可以在Green等人“Protective Groups in OrganicSynthesis”，John Wiley and Sons,1999中找到。例如，可以通过硝化反应添加硝基，并且可以将硝基转换成其它基团，例如通过还原转换成氨基，以及通过氨基的重氮化作用 并且用卤素代替重氮基转换成卤素。可以通过Friedel-Crafts酰化作用添加酰基。然后通过多种方法可以将酰基转变成相应的烷基，包括Wolff-Kishner还原和Clemmenson还原。氨基可以被烷基化形成单-和二-烷基氨基；并且巯基和羟基可以烷基化形成相应的醚。伯醇可以被本领域已知的氧化剂氧化形成羧酸或醛，并且仲醇可以被氧化形成酮。因此，可以应用取代或转移反应为原料、中间体或最终产物包括分离的产物的分子提供多种取代基。

通用方法

TLC是在预涂层的铝制板(60F-54，0.2mm厚；E.Merck AG供应，Darmstad,德国)进行，通过上行法展开。溶剂蒸发后，化合物是通过UV灯在254nm或366nm照射检测，观察荧光的猝灭。色谱柱是在适合的洗脱剂中在压力下浆液填充，应用硅胶，60A，40-60μm，PhaseSep，UK。样品是以在相同洗脱剂中的浓溶液应用，或预吸附在硅胶上。¹H和¹³C NMR光谱是在Bruker Advance DPX300谱仪(分别是300MHz和75MHz)上记录的，并且自动校准至氘代溶剂参比峰。所有¹³C NMR是质子解耦的。以下缩略语用于指定NMR信号：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、qu(四重峰)、q(五重峰)、m(多重峰)、bs(宽信号)、dd(双双峰)、dt(双三重峰)。低分辨率质谱是在VG Platform II Fisons仪(大气压电离、电喷射质谱)在负离子或正离子模式下运行。

所用的溶剂是无水的和应用购自Aldrich。所有玻璃器具是在130℃烘箱干燥数小时，并且在干燥氮气流下冷却。

制备实施例

实施例1

4’-叠氮基腺苷5’-O-[苯基(苄基氧基-L-丙氨酰基)]磷酸酯

M.W.625.54C₂₆H₂₈N₉O₈P

标题化合物(I-2)的制备已被McGuigan、Christopher等人在Journal ofMedicinal Chemistry(2007),50(22),5463-5470中公开。

HRMS(E/I)m/e648.1696(MNa⁺)。精确质量：C₂₆H₂₈N₉O₈NaP为648.1696。

实施例2

4’-叠氮基腺苷5’-O-[萘-1-基(苄基氧基-L-苯丙氨酰基)]磷酸酯

M.W.728.66C₃₅H₃₃N₆O₁₀P

标题化合物(I-9)是以McGuigan,Christopher等人在Journal of MedicinalChemistry(2007),50(8),1840-1849中描述的类似方法制备的。

实施例3

4’-叠氮基腺苷5’-O-[萘-1-基(乙基氧基-L-苯丙氨酰基)]磷酸酯

M.W.666.58C₃₀H₃₁N₆O₁₀P

标题化合物(I-10)是以McGuigan,Christopher等人在Journal of MedicinalChemistry(2007),50(8),1840-1849中描述的类似方法制备的。

生物学实施例

Huh7细胞抗病毒分析

将人肝细胞瘤细胞系Huh-7(Mainz大学，德国)在不含酚红的DMEM(CellgroMediatech，Cat#10-013-CV，含有4.5g/L葡萄糖、L-谷氨酰胺&丙酮酸钠)中培养。培养基进一步补充10%(v/v)FBS(ATLAS Cat#F-0500-A,lot#850114A)和1%(vlv)青霉素/链霉素(Cellgro Mediatech#30-022-CI)。将细胞维持在37℃潮湿的5%CO₂气氛中，四种血清型DENV-1(Th-Sman)、DENV-2(Th-36)、DENV-3(H-87)和DENV-4(H-241)的登革热病毒代表性株全部获自ATCC(Manassas,VA)。病毒价是在BHK-21细胞上用标准菌斑试验方法测定的。对于确定核苷在抗病毒分析中的EC₅₀，将Huh-7细胞铺在含有补充有10%FBS和1%青霉素/链霉素的MEM培养基的白色96-孔板中。温育24小时后，细胞以0.5的感染复数在37℃下感染2小时。10个三倍稀释的化合物配制在补充有1%DMSO的相同培养基中。2小时吸附相后，吸取病毒并且向四孔中各自加入稀释的化合物。将Huh-7细胞如上述铺板，并且暴露于相同浓度范围的化合物。未处理的细胞作为对照。在37℃温育3天后，用Cell-titer Glo^TM试剂(Promega,Madison,WI)测定细胞活力，将所述的试剂加入到每孔中并且温育5分钟。用ThermoLuminoskan读板器(Waltham，MA)分析板。

树突细胞感染分析

冷藏保存的衍生自单个供体的人未成熟单核细胞衍生的树突细胞(iDC)获自Stemcell Technologies(CAT#PB-DC001F)。计数iDC并且在开始试验前在含有10%(v/v)胎牛血清(FBS)、1%(v/v)青霉素/链霉素(Invitrogen^TM)的RPMI1640培养基中以15,000个细胞/孔浓度(96孔板)在37℃、90%潮湿的5%CO₂气氛下温育48小时。

在96孔平底板中，来自单个供体的15000iDC用登革热病毒以2的感染复数(MOI)在50μL体积中感染2小时。感染后洗涤iDC，并且在完全RPMI培养基中在系列稀释的化合物的存在下培养。每种病毒/药物组合试验一式两份或一式三份(取决于来自单个供体的iDC的可用性)。将板在37℃、90%潮湿的5%CO₂气氛下温育24小时。24小时后洗涤细胞并且分离细胞RNA。病毒RNA和内源性18S rRNA对照(Applied Bio Systems)是通过实时PCR分析定量。模拟感染的和感染的iDC的活力是在描述的时间点用CellTiter(promega)分析根据商家推荐监测的。

细胞RNA是通过PerfectPure^TM RNA96细胞试剂盒(5PRIME)根据商家推荐分离的。Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit(Roche)用于产生cDNA，应用随机六聚体引物。5μL产生的cDNA用于实时PCR分析(Roche)，应用靶向登革热3’UTR的引物和下列引物：

登革热反向(所有血清型通用)：5’-GATCTCTGGTCTTTCCC AGCGTCAA-3’，登革热正向血清型1：5’-GAGCCCCGTCCAAGG ACGTAAAATGAA-3’，登革热正向血清型2或3：5’-GAGCCCCGTCCAAGGACGTTAAAAGAA-3’，登革热正向血清型4：5’-TATTGAAGTCAGGCCACTTGTGCC-3’，和登革热探针(所有血清型通用)：5’-/56FAM/AAGGACTAGAGGTTAGAGGAGACCCCCCG C/3BHQl/-3’。所有引物获自Integrated DNA Technologies。Taqman是一式两份进行。应用下列计算获得抑制百分数。首先通过用登革热RNA CT值减去18S rRNA CT值计算出ΔCt。将一式两份的taqman分析的ΔCt计算平均值。然后用处理的样品的平均ΔCt减去未处理的样品的平均ΔCt获得ΔΔCt。应用下列公式计算相对定量。相对定量=2^{-平均ΔΔCT}。应用MicrosoftXLfit中的S形剂量-响应模型计算50%抑制浓度(IC₅₀)。

代表性分析数据可以在下表II中找到：

表II.

已经通过举例说明和实施例的方式比较详细地描述了上述发明，以用于澄清和理解的目的。对于本领域技术人员显而易见的是，可以在所附权利要求的范围内进行改变和修饰。因此，应该理解上述描述意在是举例说明性的而不是限制性的。因此，本发明的范围不应该参考上述描述而确定，而应该参考下列所附的权利要求以及由权利要求授权的等价物的全部范围而确定。

将本申请中引用的全部专利、专利申请和出版物的全部内容通过引用并入本文以满足全部目的到这样的程度，就如同每个专利，专利申请或出版物是分别指明的一样。

Claims (10)

1.式I化合物或其可药用盐在制备用于治疗登革热的药物中的用途，

其中：

R¹是苯基或萘基；

R^2a是氢；

R^2b选自C_1-10烷基和苄基；

R³是C_1-10烷基或芳基-C_1-3烷基，其中所述的芳基是苯基；

R⁴是氢；

R⁶是A或C，其中R⁸是氢；且

R⁵和R⁷都是H。

2.权利要求1的用途，其中：

R¹是苯基或萘基；

R^2a是氢；

R^2b是甲基或苄基；

R³是甲基、乙基或苄基；并且

R⁶是A。

3.权利要求2的用途，其中：

R¹是苯基或萘基；

R^2b是甲基；并且

R³是乙基或苄基。

4.权利要求3的用途，其中：

R¹是萘基；并且

R³是苄基。

5.权利要求2的用途，其中：

R¹是萘基；

R^2b是苄基；并且

R³是乙基。

6.权利要求2的用途，其中：

R¹是萘基；

R^2b是苄基；并且

R³是苄基。

7.权利要求1的用途，其中：

R¹是苯基；

R^2b是甲基；

R³是苄基；并且

R⁶是C。

8.化合物或其可药用盐在制备用于治疗登革热的药物中的用途，其中所述化合物选自下列的化合物：

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-嘌呤-9-基)-2-叠氮基-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-丙酸乙酯；

(S)-2-{[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-嘌呤-9-基)-2-叠氮基-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-苯氧基-磷酰基氨基}-丙酸苄酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-丙酸苄酯；

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸苄酯；和

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸乙酯。

9.权利要求1的用途，其中所述化合物与至少一种其它抗病毒剂联合。

10.化合物，其选自：

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸苄酯；和

(S)-2-[[(2R,3S,4R,5R)-2-叠氮基-5-(2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3,4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧基]-(萘-1-基氧基)-磷酰基氨基]-3-苯基-丙酸乙酯。