CN103575813B - 阿维莫泮或其有关物质的高效液相色谱分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种阿维莫泮或其有关物质的高效液相色谱分析方法。本发明的方法为对含有阿维莫泮和/或阿维莫泮有关物质的混合物用高效液相色谱法进行成分分析的方法。本发明的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：本方法的方法简便快速，既可有效检出各已知有关物质，又能根据其响应因子准确检测上述已知有关物质的含量，可全面控制阿维莫泮及其制剂中的有关物质，提高药品安全性，为制定阿维莫泮原料药和制剂的质量标准提供依据。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，特别是涉及一种阿维莫泮或其有关物质的高效液相色谱测定方法。
背景技术
阿维莫泮（Alvimopan，又称爱维莫潘），化学名称：2-([(2S)-2-([(3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基哌啶-1-基]甲基)-3-苯基丙酰]氨基)乙酸二水合物，化学结构式如下式I所示：
式I
作为一种新型的外周μ型阿片受体拮抗剂，阿维莫泮临床上用于手术以及使用阿片类药物导致的胃肠功能紊乱，特发性便秘以及肠易激综合症等。阿维莫泮常用的合成路线如下：
上述合成路线可具体参见以下文献：“Prather,D.E.;Werner,J.A.;Wad,J.A.;Frank,S.A.(Eli Lilly and Company),Trisubstd.-piperidinyl-N-alkylcarboxylatesas opioid antagonists,EP0984004”；“Pohland,R.C.;Franklin,R.B.;Cantrell,B.E.;Means,J.R.;Leander,J.D.;Parli,C.J.;Francis,P.C.;Zimmerman,D.M.;Gidda,J.S.;Werner,J.A.，LY246736 Dihydrate，Drugs Fut 1994,19(12),1078”；“Werner,J.A.;Cerbone,L.R.,Selective"cis-dehydration"of3-methyl-4-piperidinols via thermalelimination of carbonates and its application in synthesis，203rd ACS NatlMeet(April 5-10,San Francisco)1992,Abst ORGN 409”；“Copley-Merriman,C.R.;Maki,J.;Barnett,C.J.,Synthesis of picenadol via metalloenamine alkylationmethodology,J Org Chem 1989,544795-800”；“Robey,R.L.;Evans,D.A.;Zimmerman,D.M.;Mitch,C.H.;Thomas,R.C.,Application of metalated enamines to alkaloidsynthesis.An expedient approach to the synthesis of morphine-basedanalgesics,J Am Chem Soc1980,1025955-6”。
到目前为止，未见到文献报道对阿维莫泮合成过程中涉及的中间体或其有关物质以及阿维莫泮进行测定的方法。
发明内容
为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种阿维莫泮或其有关物质的高效液相色谱测定方法。
具体而言，本发明提供：
（1）一种高效液相色谱分析方法，其中所述的方法为对含有阿维莫泮和/或阿维莫泮有关物质的混合物用高效液相色谱法进行成分分析的方法，
其中，所述的阿维莫泮有关物质包括：阿维莫泮有关物质A、B、C、D、E、F，溴化苄及丙烯酸甲酯中的一种或多种，其中所述的阿维莫泮有关物质A为甘氨酸异丁酯对甲基磺酸盐；所述的阿维莫泮有关物质B为(3R,4R)-3-(3,4二甲基-4-哌啶基)苯酚；所述的阿维莫泮有关物质C为(3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-哌啶基丙酸甲酯；所述的阿维莫泮有关物质D为(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸；所述的阿维莫泮有关物质E为(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸甲酯盐酸盐；所述的阿维莫泮有关物质F为阿维莫泮异丁酯；
其中，所述的方法包括：
1）对照品溶液的制备
选择所述的阿维莫泮或阿维莫泮有关物质作为对照物质，采用稀释液溶解，配制成每1ml含1-100μg的所述的阿维莫泮或阿维莫泮有关物质的溶液作为对照品溶液，其中所述的稀释液为磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液；
2）供试品溶液的制备
取所述的含有阿维莫泮和/或阿维莫泮有关物质的混合物，采用稀释液溶解，配制成每1ml含0.1-1mg的所述的混合物的溶液作为供试品溶液，其中所述的稀释液为磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液；
3）色谱条件
高效液相色谱仪，所用的色谱柱为反相色谱柱，所述的反相色谱柱的填充剂为烷基键合硅胶；以磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液为流动相，所述的有机相为甲醇和/或乙腈；采用梯度洗脱方法，流速为0.6-1.2ml/min；柱温为20-45℃；检测波长为205-210nm；
4）测定方法
分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
（2）根据（1）所述的方法，其中，所述的反相色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，优选为十八烷基硅烷键合硅胶。
（3）根据（2）所述的方法，其中，所述的反相色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm。
（4）根据（1）所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液中的缓冲盐为三乙胺-磷酸、磷酸二氢钠-磷酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸钠-磷酸、磷酸二氢钾-磷酸或磷酸氢二钾-磷酸；优选为磷酸二氢钠-磷酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸二氢钾-磷酸或磷酸氢二钾-磷酸；更优选为磷酸二氢钠-磷酸；所述的醋酸盐缓冲溶液中的缓冲盐为醋酸铵-醋酸。
（5）根据（1）所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的浓度为0.005-0.02mol/L；优选为0.01-0.02mol/L；更优选为0.01mol/L。
（6）根据（1）所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的pH值为2.0-5.0，优选为2.0-3.0，更优选为2.5。
（7）根据（1）所述的方法，其中，所述的有机相为乙腈。
（8）根据（1）所述的方法，其中，所述的流动相为磷酸盐缓冲溶液-乙腈-甲醇，以及所述的磷酸盐缓冲溶液、所述的乙腈与所述的甲醇的体积比为(80-40%):(15-30%):(5-30%)。
（9）根据（1）所述的方法，其中，所述的有机相为乙腈或甲醇，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液与所述的有机相的体积比为(92-30%):(8-70%)。
（10）根据（1）所述的方法，其中，所述有机相为乙腈，以及所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液与所述的乙腈的体积比为(83-50%):(17-50%)。
（11）根据（10）所述的方法，其中，所述的梯度洗脱的程序为：
| 时间（分钟） | 磷酸盐缓冲溶液(体积%) | 乙腈(体积%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
（12）根据（1）所述的方法，其中，所述的柱温为25-35℃，优选为30℃。
（13）根据（1）所述的方法，其中，所述的流速为1.0ml/min。
（14）根据（1）所述的方法，其中，所述的稀释液为0.01mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈的混合液；所述磷酸二氢钠溶液的pH为2.5；以及所述的磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为83:17。
（15）根据（1）所述的方法，其中，所述的反相色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；采用梯度洗脱，所述的流动相为0.01mol/L的磷酸二氢钠溶液-乙腈的混合液，所述的磷酸盐缓冲溶液与乙腈的体积比为(83-50%):(17-50%)，以及所述磷酸二氢钠溶液的pH为2.5；检测波长为210nm；柱温为30℃；以及流速为1ml/min。
（16）根据（15）所述的方法，其中，所述的梯度洗脱的程序为：
| 时间（分钟） | 磷酸盐缓冲溶液(体积%) | 乙腈(体积%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
（17）根据（1）所述的方法，其中，所述的阿维莫泮存在于以下剂型中：缓释型、控释型或普通型的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、膜剂、气雾剂、滴眼液或注射剂。
本发明的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：
1.本方法的方法简便快速，能在同一个高效液相色谱条件下分离阿维莫泮及其有关物质，监控反应进度，避免了在生产监控中频繁更换液相条件，可用于生产过程中反应中间体的监控和成品中有关物质检查，提高了工作效率，适合工业大生产的要求。
2.本发明的方法既可有效检出各已知有关物质，又能根据其响应因子准确检测上述已知有关物质的含量，各有关物质采用相对保留时间定位准确，各有关物质与阿维莫泮、以及各有关物质之间均有较好分离，为控制阿维莫泮原料药及其制剂的质量提供一个有效准确的检测方法。
3.本发明方法能够用于对阿维莫泮合成过程中的中间体和合成副产物进行质量控制，又能用于对合成的终产品进行质量控制，即可控制整个合成反应过程。本发明能够对存在于缓释型、控释型及普通型的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、膜剂、气雾剂或注射剂的各类剂型中的阿维莫泮进行有关物质检查，为今后制定阿维莫泮的有关物质测定标准提供依据。此外，本发明可通过用液质联用色谱法（HPLC-MS）法进行比对验证试验结果，两种方法所能观察的杂质数目基本相同，且两种方法检出杂质在相对保留时间上基本相同，由此证明了本发明的HPLC检测方法能够有效地检测到合成副产物。
4.本发明的方法耐用性好，容易实现，所用仪器设备及试剂均是常规用品，试验参数也是常规参数，无苛刻条件，成本低，大多数实验室的条件均能满足。
综上所述，本发明的方法可全面控制阿维莫泮及其制剂中的有关物质，提高药品安全性，为制定阿维莫泮原料药和制剂的质量标准提供依据。
附图说明
图1为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件1）；
图2为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件2）；
图3为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件3）；
图4为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件4）；
图5为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件5）；
图6为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件6）；
图7为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件7）；
图8为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件8）；
图9为有关物质流动相选择HPLC图谱（条件9）；
图10为样品配制用稀释剂选择HPLC图谱（条件1）；
图11为样品配制用稀释剂选择HPLC图谱（条件2）；
图12为样品配制用稀释剂选择HPLC图谱（条件3）；
图13为杂质A杂质定位的HPLC图谱；
图14为杂质B杂质定位的HPLC图谱；
图15为杂质C杂质定位的HPLC图谱；
图16为杂质D杂质定位的HPLC图谱；
图17为杂质E杂质定位的HPLC图谱；
图18为杂质F杂质定位的HPLC图谱；
图19为阿维莫泮定位的HPLC图谱；
图20为溴化苄定位的HPLC图谱；
图21为丙烯酸甲酯定位的HPLC图谱；
图22为系统的耐用性试验HPLC图谱（条件1）；
图23为系统的耐用性试验HPLC图谱（条件2）；
图24为系统的耐用性试验HPLC图谱（条件3）；
图25为中间体盐酸盐的HPLC图谱；
图26为苄酸的HPLC图谱；
图27为异丁酯的HPLC图谱；
图28为阿维莫泮（粗品）的HPLC图谱；
图29为阿维莫泮（精制1）的HPLC图谱；
图30为阿维莫泮（精制2）的HPLC图谱。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述并参照附图对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
在本发明中，所述的阿维莫泮有关物质是指阿维莫泮合成过程中用到的化学试剂、起始原料和中间产物，其中，化学试剂包括：甘氨酸异丁酯对甲基磺酸盐（以下简称：有关物质A，又称杂质A）、溴化苄、丙烯酸甲酯；起始原料包括：(3R,4R)-3-(3,4二甲基-4-哌啶基)苯酚（以下简称：有关物质B，又称杂质B）；中间产物包括：(3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-哌啶基丙酸甲酯（以下简称：有关物质C，又称杂质C）、(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸（以下简称：有关物质D，又称杂质D）、(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸甲酯盐酸盐（以下简称：有关物质E，又称杂质E）；阿维莫泮异丁酯（以下简称：有关物质F，又称杂质F）。
本发明人根据中间体及化学试剂的毒性，对起始原料、中间产物、终产品及化学试剂等九个化合物进行相对保留时间及响应因子研究，对其它化学试剂进行定位研究，以确保本方法能有效的检测合成过程中带来的可知的有关物质，并对其它未知有关物质进行检测。
具体而言，本发明公开了一种阿维莫泮的高效液相色谱测定方法（HPLC），使用反相色谱柱，以磷酸盐缓冲液与另外一种或两种有机溶剂按一定配比组成二元或三元溶液为流动相，采用梯度洗脱的方法。可以快速有效的分离分析阿维莫泮及其有关物质。
本发明公开了一种高效液相色谱分析方法，其中所述的方法为对含有阿维莫泮和/或阿维莫泮有关物质的混合物用高效液相色谱法进行成分分析的方法，
其中，所述的阿维莫泮有关物质包括：阿维莫泮有关物质A、B、C、D、E、F，溴化苄及丙烯酸甲酯中的一种或多种，其中所述的阿维莫泮有关物质A为甘氨酸异丁酯对甲基磺酸盐；所述的阿维莫泮有关物质B为(3R,4R)-3-(3,4二甲基-4-哌啶基)苯酚；所述的阿维莫泮有关物质C为(3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-哌啶基丙酸甲酯；所述的阿维莫泮有关物质D为(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸；所述的阿维莫泮有关物质E为(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸甲酯盐酸盐；所述的阿维莫泮有关物质F为阿维莫泮异丁酯；
其中，所述的方法包括：
1）对照品溶液的制备
选择所述的阿维莫泮或阿维莫泮有关物质作为对照物质，采用稀释液溶解，配制成每1ml含1-100μg的所述的阿维莫泮或阿维莫泮有关物质的溶液作为对照品溶液，其中所述的稀释液为磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液；
2）供试品溶液的制备
取所述的含有阿维莫泮和/或阿维莫泮有关物质的混合物，采用稀释液溶解，配制成每1ml含0.1-1mg的所述的混合物的溶液作为供试品溶液，其中所述的稀释液为磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液；
3）色谱条件
高效液相色谱仪，所用的色谱柱为反相色谱柱，所述的反相色谱柱的填充剂为烷基键合硅胶；以磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液为流动相，所述的有机相为甲醇和/或乙腈；采用梯度洗脱方法，流速为0.6-1.2ml/min；柱温为20-45℃；检测波长为205-210nm，优选为210nm；
4）测定方法
分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
所述的反相色谱柱填充剂优选的为，十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶。进一步优选的，反相色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。
所述的反相色谱柱优选的规格为：250mm×4.6mm，5μm。
优选的所述的缓冲液中的缓冲盐优选的为，三乙胺-磷酸、醋酸铵-醋酸、磷酸二氢钠-磷酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸钠-磷酸、磷酸二氢钾-磷酸或磷酸氢二钾-磷酸。进一步优选的，缓冲盐为磷酸二氢钠-磷酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸二氢钾-磷酸或磷酸氢二钾-磷酸。最优选的，缓冲盐为磷酸二氢钠-磷酸。
优选的所述的磷酸盐缓冲溶液浓度为0.005～0.02mol/L。进一步优选的，磷酸盐缓冲溶液浓度为0.01～0.02mol/L。最优选的，磷酸盐缓冲溶液浓度为0.01mol/L。
优选的所述的磷酸盐缓冲溶液pH值为2.0～5.0。进一步优选的，磷酸盐缓冲溶液pH值为2.0～3.0。最优选的，磷酸盐缓冲溶液pH值为2.5。
优选的所述的测定方法，所述的流动相为磷酸盐缓冲溶液-乙腈-甲醇，按体积比计，磷酸盐缓冲溶液-乙腈-甲醇的比例为(80-40%):(15-30%):(5-30%)。进一步优选的，所述的测定方法，所述的磷酸盐缓冲溶液-有机相，按体积比计，磷酸盐缓冲溶液-有机相的比例为(92-30%):(8-70%)；所述有机相为乙腈或甲醇。最优选的，所述的测定方法，其中，所述有机相为乙腈，按体积比计，磷酸盐缓冲溶液-乙腈的比例为(83-50%):(17-50%)。
优选的，所述的测定方法，梯度洗脱程序为：
| 时间(min) | 磷酸盐缓冲溶液(%) | 乙腈(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
优选的，所述的测定方法，所述柱温为25～35℃。进一步优选的，所述的测定方法，所述柱温为30℃。最优的，所述的测定方法，所述的流速为1.0ml/min。
优选的，所述的测定方法，所述的稀释液为0.01mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈的混合液；进一步优选的，所述的测定方法，所述磷酸二氢钠溶液用磷酸调pH2.5；所述的磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为1：1。最优的，所述的测定方法，所述的磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为83：17。
优选的，所述的测定方法，所述的阿维莫泮存在于缓释型、控释型或普通型的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、膜剂、气雾剂、滴眼液或注射剂的各类剂型中。
优选的，所述的测定方法，其中，所述的反相色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；所述的流动相为：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈，所述磷酸二氢钠溶液用磷酸调pH至2.5；采用梯度洗脱；磷酸盐缓冲溶液-乙腈的比例为83～50%：17～50%；检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：1ml/min。
优选的，所述的测定方法，所述梯度洗脱程序为：
以下通过实施例的方式进一步解释或说明本发明内容，但这些实施例不应被理解为对本发明保护范围的限制。
试验例1流动相条件筛选
实验目的：选用0.01mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH2.5)为水相，有机相为乙腈，两者分别按不同比例混合，采取等度或梯度洗脱的方式，对样品进行分析。选取合适的条件作为有关物质检查的HPLC条件。
仪器设备：液相色谱仪：Agilent 1100，二极管阵列检测器（DAD）或紫外可变波长检测器（VWD），Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相A：缓冲盐溶液；流动相B：乙腈或甲醇，A与B按下表中的比例混合，采取等度或梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：20～40℃；流速：1ml/min；进样量10μl。
样品配制：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液，在上述条件下进样分析，记录色谱图。结果见下表。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH2.5)：乙腈=83：17。
表1流动相条件选择条件及结果
试验结论：通过试验可知，在液相条件1、2的色谱图中，杂质间未达到完全分离，条件不适用于阿维莫泮及其中间体杂质的分离和分析。在液相条件3、5、8的色谱图中，阿维莫泮和各杂质能够得到较好的分离，各杂质间虽然未能达到完全分离，但是也能够得到分离，因此也可用于阿维莫泮与其中间体杂质的分离和分析。在液相条件4、6、7、9的色谱图中，杂质间均达到完全分离，均可用于阿维莫泮及其中间体杂质的分离和分析。其中，液相条件9为最佳液相条件。
试验例2：样品稀释液的选择。
实验目的：选择适合的样品稀释液。由于不同杂质存在极性上差别，不同极性溶剂所能溶解杂质不同，因此对样品稀释溶剂进行研究，确保样品中杂质全部溶解，以充分了解样品中杂质情况。
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，采取梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μl。具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
样品配制：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，分别用下表中的稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液，在上述条件下进样分析，记录色谱图。结果见下表。
表2稀释液选择条件及结果
试验结论：三种溶剂所检测杂质数目和杂质大小，无明显差异，见图10-12；溶剂①溶解性不好，不能完全将主药溶出。考虑到本品的流动相梯度程序初始比例与溶剂②一致，故选择②作为样品溶剂。
试验例3：杂质定位研究
试验目的：对起始原料、中间产物、及杂质F等九个化合物进行相对保留时间及响应因子研究，对其它化学试剂进行定位研究。以确保本方法能有效的检测合成过程中带来的可知的相关物质，并对其它未知杂质进行检测。
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，采取梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μl。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
样品配制：
①杂质定位研究样品配制：取各步中间体、化学试剂及阿维莫泮，加稀释液制成每1ml含0.5mg的溶液作为样品溶液。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH2.5)－乙腈（83：17）。
②分离度研究样品配制：取杂质定位项下，各样品溶液1ml，分别置于25ml量瓶中，加稀释液至刻度，配制成每1ml含各个杂质或阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为杂质及阿维莫泮对照品溶液。
表3杂质定位研究结果
试验结论：对起始原料、合成中间体及所用试剂进行定位、分离度、及通过对起始原料、合成中间体及有毒化学试剂进行相对保留时间和响应因子研究，各杂质与阿维莫泮及各杂质间均有较好分离。结果该方法即可有效检出各已知杂质，并能更有效准确检测上述已知杂质A、B、C、D、E、F，为控制阿维莫泮原料药的质量提供一个有效准确的检测方法。其它化学试剂只在研究中做定位研究，确保其能在该色谱条件中有效检出。
试验例4：色谱系统耐用性考察
试验目的：在流动相和梯度洗脱程序不变的条件下，采取微调pH值、更换不同厂家色谱柱、更换色谱仪、改变温度、改变流速等手段，以已知杂质与主峰的相对保留时间为指标，评价本色谱条件的耐用性。
仪器设备：A：不同厂家的C18柱
柱1：Akasil C18，250×4.6mm，5μm
柱2：Diamonsil C18，250×4.6mm，5μm
B：不同液相色谱仪
色谱仪1：Agilent 1100，DAD检测器
色谱仪2：Agilent 1100，VWD检测器
色谱条件：流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；进样量10μl。稀释液：流动相A：流动相B=83：17。柱温、流速、液相色谱仪、色谱柱按照下表中条件。稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH2.5)－乙腈（83:17）。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
样品配制：取杂质A、B、C、D、E、F及阿维莫泮混合，加稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液，在上述条件下进样分析，记录色谱图。结果见下表。
表4系统的耐用性试验结果
试验结论：在流动相和梯度洗脱程序不变的条件下，采取微调pH值、更换不同厂家色谱柱、更换色谱仪、改变温度、改变流速等手段的情况下，已知杂质与主峰的相对保留时间相同，系统耐用性良好。
试验例5：合成副产物研究
试验目的：为验证该方法是否能够有效检出合成中所有副产物，并验证该方法是否能够监测合成副产物去除情况。采用HPLC方法及HPLC-MS联合测定方式，对合成中间体粗品进行杂质定性及简单归属研究。
①HPLC色谱条件：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm。流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，A与B按表1中条件9所述的比例混合，采取梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μl。
②HPLC-MS色谱条件：色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μl。流动相：流动相A：0.03%三氟乙酸；流动相B：乙腈，梯度0-35分钟，A由83%降至40%，并保持至60分钟。
样品配制：取中间体盐酸盐、苄酸、异丁酯、阿维莫泮（粗品）、阿维莫泮（精制1）阿维莫泮（精制2）样品，分别用稀释液（0.01mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH2.5)：乙腈=83：17）溶解，配制成每1ml含各个杂质或阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。
试验方法：取中间体盐酸盐、苄酸、异丁酯、阿维莫泮（粗品）、阿维莫泮（精制1）阿维莫泮（精制2）样品溶液在上述两种条件下检测，记录色谱图。对合成副产物进行杂质定性归属及杂质数目的对比研究。结果见下表。图谱见图25-30。
表5HPLC与HPLC-MS对比研究结果
试验结论：通过对HPLC-MS方法检测杂质进行一定波长的全扫描所能观察的杂质数目与HPLC法检测杂质数目基本相同，且两种方法检出杂质在相对保留时间上基本相同，可辅助证明HPLC检测方能够有效地检测到合成副产物。
实施例1
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图（见图9）。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，是所选条件中最佳的条件。
实施例2
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C8，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.01mol/L醋酸铵溶液(醋酸调pH5.0)；流动相B：甲醇，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：20℃；流速：0.6ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 70 | 30 |
| 15 | 70 | 17 |
| 70 | 30 | 70 |
| 110 | 30 | 70 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图(见图4)。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例3
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.02mol/L三乙胺溶液(磷酸调pH4.0)；流动相B：甲醇，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：35℃；流速：1.2ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 92 | 8 |
| 5 | 92 | 8 |
| 60 | 40 | 60 |
| 110 | 40 | 60 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图。结果见图6。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例4
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：kromasil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至2.0）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：20℃；流速：1ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 84 | 16 |
| 13 | 84 | 16 |
| 60 | 50 | 50 |
| 110 | 50 | 50 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图（见图7）。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例5
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：Akasil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：40℃；流速：1ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图（见图22）。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例6
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1200，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：Diamonsil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.0）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：0.6ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图（见图23）。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例7
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：Diamonsil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至3.0）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：20℃；流速：1.2ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图（见图24）。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例8
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：Diamonsil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.005mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，流动相C：甲醇，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：45℃；流速：1.0ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) | 流动相C(%) |
| 0 | 80 | 15 | 5 |
| 12 | 80 | 15 | 5 |
| 55 | 40 | 30 | 30 |
| 80 | 40 | 30 | 30 |
| 80.1 | 80 | 15 | 5 |
| 90 | 80 | 15 | 5 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例9
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：Diamonsil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.01mol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH至2.5）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
| 时间（min） | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
| 0 | 83 | 17 |
| 10 | 83 | 17 |
| 60 | 50 | 50 |
| 80 | 50 | 50 |
| 80.1 | 83 | 17 |
| 90 | 83 | 17 |
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
实施例10
仪器设备：高效液相色谱仪：Agilent 1100，DAD（或VWD）检测器，Agilent 1100色谱工作站；色谱柱：Diamonsil C18，250×4.6mm，5μm。
色谱条件：流动相：流动相A：0.005mol/L磷酸氢二钾溶液（用磷酸调pH至3.0）；流动相B：乙腈，采用梯度洗脱。检测波长：210nm；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；进样量10μl。
稀释液：0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）：乙腈=83：17。
具体梯度洗脱程序如下：
实验方法：取杂质A、B、C、D、E、F、溴化苄、丙烯酸甲酯及阿维莫泮混合，用稀释液溶解，配制成每1ml含各个杂质及阿维莫泮分别为约20μg的溶液，作为供试品溶液。在上述条件下进样分析，记录色谱图。
试验结果：在此液相色谱条件下，各杂质与主峰均能完全分离，且各杂质之间分离度良好，方法较适合。
Claims (23)
1.一种高效液相色谱分析方法，其中所述的方法为对含有阿维莫泮和阿维莫泮有关物质的混合物用高效液相色谱法进行成分分析的方法，
其中，所述的阿维莫泮有关物质包括：阿维莫泮有关物质A、B、C、D、E、F，溴化苄及丙烯酸甲酯中的一种或多种，其中所述的阿维莫泮有关物质A为甘氨酸异丁酯对甲基磺酸盐；所述的阿维莫泮有关物质B为(3R,4R)-3-(3,4二甲基-4-哌啶基)苯酚；所述的阿维莫泮有关物质C为(3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-哌啶基丙酸甲酯；所述的阿维莫泮有关物质D为(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸；所述的阿维莫泮有关物质E为(αs,3R,4R)-4-(3-羟基苯基)-3,4-二甲基-α-苄基-1-哌啶基丙酸甲酯盐酸盐；所述的阿维莫泮有关物质F为阿维莫泮异丁酯；
其中，所述的方法包括：
1)对照品溶液的制备
选择所述的阿维莫泮或阿维莫泮有关物质作为对照物质，采用稀释液溶解，配制成每1ml含1-100μg的所述的阿维莫泮或阿维莫泮有关物质的溶液作为对照品溶液，其中所述的稀释液为磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液；
2)供试品溶液的制备
取所述的含有阿维莫泮和阿维莫泮有关物质的混合物，采用稀释液溶解，配制成每1ml含0.1-1mg的所述的混合物的溶液作为供试品溶液，其中所述的稀释液为磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液；
3)色谱条件
高效液相色谱仪，所用的色谱柱为反相色谱柱，所述的反相色谱柱的填充剂为烷基键合硅胶；以磷酸盐缓冲溶液-有机相的混合液或醋酸盐缓冲溶液-有机相的混合液为流动相，所述的有机相为甲醇和/或乙腈；采用梯度洗脱方法，流速为0.6-1.2ml/min；柱温为20-45℃；检测波长为205-210nm，
其中，所述的梯度洗脱的程序为：
4)测定方法
分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；并且
所述方法在同一个高效液相色谱条件下分离阿维莫泮及其有关物质。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的反相色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的反相色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。
4.根据权利要求2或3任一项所述的方法，其中，所述的反相色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液中的缓冲盐为三乙胺-磷酸、磷酸二氢钠-磷酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸钠-磷酸、磷酸二氢钾-磷酸或磷酸氢二钾-磷酸；所述的醋酸盐缓冲溶液中的缓冲盐为醋酸铵-醋酸。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液中的缓冲盐为磷酸二氢钠-磷酸、磷酸氢二钠-磷酸、磷酸二氢钾-磷酸或磷酸氢二钾-磷酸。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液中的缓冲盐为磷酸二氢钠-磷酸。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的浓度为0.005-0.02mol/L。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的浓度为0.01-0.02mol/L。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的浓度为0.01mol/L。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的pH值为2.0-5.0。
12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的pH值为2.0-3.0。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液的pH值为2.5。
14.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的有机相为乙腈。
15.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的流动相为磷酸盐缓冲溶液-乙腈-甲醇，以及所述的磷酸盐缓冲溶液、所述的乙腈与所述的甲醇的体积比为(80-40％):(15-30％):(5-30％)。
16.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的有机相为乙腈或甲醇，所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液与所述的有机相的体积比为(92-30％):(8-70％)。
17.根据权利要求1所述的方法，其中，所述有机相为乙腈，以及所述的磷酸盐缓冲溶液或所述的醋酸盐缓冲溶液与所述的乙腈的体积比为(83-50％):(17-50％)。
18.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的柱温为25-35℃。
19.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的柱温为30℃。
20.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的流速为1.0ml/min。
21.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的稀释液为0.01mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈的混合液；所述磷酸二氢钠溶液的pH为2.5；以及所述的磷酸二氢钠溶液与乙腈的体积比为83:17。
22.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的反相色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；采用梯度洗脱，所述的流动相为0.01mol/L的磷酸二氢钠溶液-乙腈的混合液，所述的磷酸盐缓冲溶液与乙腈的体积比为(83-50％):(17-50％)，以及所述磷酸二氢钠溶液的pH为2.5；检测波长为210nm；柱温为30℃；以及流速为1ml/min。
23.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的阿维莫泮存在于以下剂型中：缓释型、控释型或普通型的片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、针剂、膜剂、气雾剂、滴眼液或注射剂。
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| CN201210258342.4A CN103575813B (zh) | 2012-07-24 | 2012-07-24 | 阿维莫泮或其有关物质的高效液相色谱分析方法 |
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| The Effects of a Short Course of Antibiotics on Alvimopan and Metabolite Pharmacokinetics;Virginia D. Schmith等;《Journal of Clinical Pharmacology》;20101231;第50卷;338-349 * |
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