CN103570790A - 原人参二醇衍生物及其制备方法、包含该衍生物的组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及通式I表示的原人参二醇衍生物及其制备方法、包含该衍生物的组合物及其用途，具体涉及以原人参二醇为母体结构进行改造的衍生物，其制备方法，包含该衍生物的组合物及其在制备肿瘤细胞多药耐药逆转剂中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及原人参二醇衍生物及其制备方法、包含该衍生物的组合物及其用途，具体涉及以原人参二醇为母体结构进行改造的衍生物，其制备方法，包含该衍生物的组合物及其在制备肿瘤细胞多药耐药逆转剂中的应用。
背景技术
化疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一，然而肿瘤细胞多药耐药（multidrugresistance,MDR）往往会导致化疗的失败。据统计，90％以上化疗失败的病例，都是由于肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药性所导致的。MDR产生的机制非常复杂，其中研究较多的几种机制认为：①药物摄入减少或者药物外排增加（主要通过P-gp蛋白、mdr及mrp蛋白介导）；②药物作用的靶分子改变；③药物灭活酶表达增加；④药物代谢障碍；⑤DNA修复机制障碍或DNA多聚酶活性改变等；⑥表遗传的改变使得药物靶点在细胞内的活性和表达发生改变，从而产生耐药；⑦其它机理。在MDR的形成中，这些耐药机制可能单独或联合起作用。近几年来，如何克服MDR成为国内外研究热点，针对不同的耐药机制，药物学家已经研发出一系列逆转剂，如维拉帕米、奎尼丁、环孢霉素等。然而在临床上，这些化合物在人体耐受剂量下，不能达到有效的逆转浓度，而一旦加大剂量使其血药浓度达到体外试验中具有逆转活性的浓度时，就会产生严重毒副作用。此外，有些逆转剂与抗肿瘤药物联合用药时，会改变抗肿瘤药物的药代动力学参数，从而产生不可预见的毒副反应，这大大限制了其在临床上的使用。所以，开发作用强且毒副作用小的多药耐药逆转剂成为医药界十分迫切的任务。
人参是我国传统名贵中药，其主要成分为人参皂苷，各种人参皂苷的抗肿瘤活性已被广泛研究【Leung K.W.,et al.,Protopanaxadiol andprotopanaxatriol bind to glucocorticoid and oestrogen receptors in endothelialcells.British Journal of Pharmacology.156,626-637(2009);Qi L.W.,et al.,Ginsenoside from American ginseng:chemical and pharmacological diversity.Phytochemistry.72,689-699(2011)】。Rg3是人参中含量较高的皂苷成分之一，是国内销售较好的参一胶囊中的化学成分。参一胶囊在临床上已被用作配合化疗用药，能提高原发性肺癌、肝癌的疗效，改善肿瘤患者的气虚症状，提高机体免疫功能。据报道，人参皂苷Rg3在体外对P-gp蛋白具有抑制作用【Kim S.W.,et al.,Reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance byginsenoside Rg3.Biochemical Pharmacology.65,75-82(2003)】，近一步研究表明人参皂苷是通过在体内经过一系列肠道菌代谢为次级代谢产物或苷元而起作用【Kobashi K.,et al.,Relation of intestinal bacteria to pharmacological effectsof glycosides.Bioscience Microflora.16,1-7(1997);Bae E.A.,et al.,Metabolism of ginsenoside Rc by human intestinal bacteria and its relatedantiallergic activity.Biol Pharm Bull.25,743-747(2002)】。在格鲁吉亚共和国，由人参皂苷水解而得到的苷元，原人参二醇(20-S-Protopanxadio1,PPD)和原人参三醇(20-S-Protopanxatrio1,PPT)，已被研制成达玛烷苷元注射液。该注射剂与化疗药物、或放疗联合使用，也用于化疗、或放疗引起的白细胞减少症。因此，设计、合成原人参二醇的衍生物，进行逆转肿瘤多药耐药构效关系研究，发现新的具有作用强且毒副作用小的原人参二醇类衍生物具有重要意义。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种通式I所示的肿瘤细胞多药耐药(MDR)逆转剂-原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐。这种MDR逆转剂可与抗肿瘤药物或其他肿瘤细胞多药耐药逆转剂药物共同使用，提高肿瘤治疗效果。
本发明的另一目的为提供通式I所示的原人参二醇衍生物的制备方法。
本发明的再一目的为提供包含治疗有效量的本发明的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。所述药物组合物任选可以进一步包含药学上可接受的载体、佐剂或辅料。优选地，所述组合物进一步包含安全有效量的抗肿瘤药物。
本发明的又一目的是提供了通式I所示的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物的增敏剂中的用途。
在本发明的第一方面，提供了一类具有下面通式I所示结构的原人参二醇衍生物，或其药学上可接受的盐：
式中：
R1为H、C1-C6直链或支链的烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基或杂芳基；优选为H、C1-C4直链或支链的烷基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C2烷基；最优选为H、甲基、苄基、3-甲氧基苄基或4-氟苄基；
在R1的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C4烷基和在芳环上取代的芳基C1-C2烷基中的取代基为选自C1-C4的烷氧基、羟基和卤素中的1~4个取代基；
R2为H、C1-C6直链或支链的烷基、羟基C1-C6直链或支链的烷基、C3-C7环烷基、用C3-C7环烷基取代的C1-C4烷基、用3-7元杂环烷基取代的C1-C4烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、在杂芳环上取代或未取代的杂芳基C1-C4烷基、
优选为H、C1-C4直链或支链的烷基、羟基C1-C4直链或支链的烷基、C3-C5环烷基、用5-6元杂环烷基取代的C1-C2烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、杂芳基C1-C4烷基、
最优选为氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基、叔丁基、3-羟基-1-丙基、4-甲氧基苯基、1-苯乙基、苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-氟苄基、3,4-二甲氧基苄基、2-苯乙基、2-(4-氯苯基)乙基、2-(4-硝基苯基)乙基、2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基、2-(3,4-亚甲二氧基苯基)乙基、3-苯基-1-丙基、2-吡啶甲基、3-吡啶甲基、4-吡啶甲基、环丙基、3-(1-咪唑基)-1-丙基、2-(1-哌嗪基)乙基、3-甲氧基苄基、4-甲氧基苯甲酰基、或苯甲氧基羰基；
其中，●表示连接到通式I中的位点。
X为O或S；优选为O；
Y为O或S；优选为O；
Z为O或NH；优选为O；
在R2的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C4烷基、在杂芳环上取代的杂芳基C1-C4烷基中的取代基选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟基C1-C4烷基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基；或者其中两个取代基与和它们连接的芳基或杂芳基上的原子形成5-8元环；
R3为H、C1-C6直链或支链的烷基、C3-C7环烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、杂芳基、在杂芳环上取代或未取代的杂芳基C1-C4烷基；优选为C1-C4直链或支链的烷基、C3-C5环烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C2烷基；最优选为乙基、环丙基、苯基、4-甲氧基苯基；
在R3的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C4烷基、在杂芳环上取代的杂芳基C1-C4烷基、在芳环上取代的芳基C1-C2烷基中的取代基为选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基；
R4为C1-C6直链或支链的烷基、C3-C7环烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、杂芳基、在杂芳环上取代或未取代的杂芳基C1-C4烷基；优选为取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C2烷基；最优选为苄基；
在R4的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C4烷基、在杂芳环上取代的杂芳基C1-C4烷基、在芳环上取代的芳基C1-C2烷基中的取代基为选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基；
在本发明中，术语“芳基”是指不含杂原子的芳香族环基，优选为碳原子数为6~14个的芳基，更优选为碳原子数为6~10个的芳基，如苯基、萘基、联苯基。术语“杂芳基”为环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的5-7元芳族杂环基，非限制性地包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、吡唑基和吡啶基；优选吡咯基、咪唑基和吡啶基。
术语“杂环烷基”为环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的饱和杂环基，非限制性地包括哌嗪基、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、和吗啉基。
本发明中的术语“药学上可接受的盐”是指与磷酸、硫酸、盐酸等无机酸，或醋酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸等有机酸，或天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成的盐，或与上述酸成酯或酰胺后再与无机碱形成的盐，如钠盐、钾盐、钙盐、铝盐和铵盐。
所述抗肿瘤药物选自：阿霉素；长春新碱；紫杉醇；顺铂；放线菌素；博来霉素；白消安；卡培他滨；卡铂；卡莫司汀；苯丁酸氮芥；环磷酰胺；阿糖胞苷；柔红霉素；表阿霉素；依托泊苷；足叶乙苷；鬼臼乙叉苷；氟阿糖腺苷酸；氟尿嘧啶；吉西他滨；赫赛汀；羟基脲；伊达比星；异环磷酰胺；伊立替康；洛莫司汀；环己亚硝脲；美法仑；左旋苯丙氨酸氮芥；巯基嘌呤；氨甲喋呤；丝裂霉素；米托蒽醌；二羟基蒽酮；奥沙利铂；丙卡巴肼；甲苄肼；美罗华；类固醇；链佐星；链脲霉素；紫杉醇；泰索帝；硫鸟嘌呤；噻替哌；硫替哌；三胺硫磷；雷替曲塞；拓扑替康；曲奥舒凡；尿嘧啶；长春碱；长春花碱；长春地辛；长春瑞宾；格列卫；羟基喜树碱；及其衍生物或混合物。
在另一优选例中，所述的抗肿瘤药物用于治疗选自下组的肿瘤：非小细胞肺癌、前列腺癌、肠癌、肝癌、白血病、骨髓瘤、淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、食管癌、结肠癌或肉瘤。
根据本发明的第二方面，提供了通式I化合物的制备方法，通式I的化合物通过选自如下的方法制备：
方法一：
其中，R2如上所定义；
步骤1)：使原人参二醇(PPD)中的碳碳双键发生臭氧化反应；
步骤2)：接着使步骤1)中的产物与胺发生还原胺化反应(鲍奇反应)得到通式I-1的化合物。
方法二：
R1和R2的定义如上相同，
所述方法包括如下步骤：
步骤1)：原人参二醇(PPD)中的碳碳双键发生臭氧化反应；
步骤2)：步骤1)中的产物与羟胺发生缩合反应得到化合物II；
步骤3)：化合物II经还原反应得到化合物I-2；
步骤4)：化合物I-2与醛或酮经还原胺化反应、或酰化反应、或与羰基二咪唑和胺发生亲核反应、或与硫代羰基二咪唑和胺发生亲核反应得到通式I所示的化合物。
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的通式I所示的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐，以及任选的药学上可接受的载体。
所述组合物还进一步包含安全有效量的抗肿瘤药物。
所述优选的抗肿瘤药物选自：阿霉素；长春新碱；紫杉醇；顺铂；放线菌素；博来霉素；白消安；卡培他滨；卡铂；卡莫司汀；苯丁酸氮芥；环磷酰胺；阿糖胞苷；柔红霉素；表阿霉素；依托泊苷；足叶乙苷；鬼臼乙叉苷；氟阿糖腺苷酸；氟尿嘧啶；吉西他滨；赫赛汀；羟基脲；伊达比星；异环磷酰胺；伊立替康；洛莫司汀；环己亚硝脲；美法仑；左旋苯丙氨酸氮芥；巯基嘌呤；氨甲喋呤；丝裂霉素；米托蒽醌；二羟基蒽酮；奥沙利铂；丙卡巴肼；甲苄肼；美罗华；类固醇；链佐星；链脲霉素；紫杉醇；泰索帝；硫鸟嘌呤；噻替哌；硫替哌；三胺硫磷；雷替曲塞；拓扑替康；曲奥舒凡；尿嘧啶；长春碱；长春花碱；长春地辛；长春瑞宾；格列卫；羟基喜树碱；及其衍生物或混合物。
在本发明的第四方面，提供了通式I所示的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐在制备抑制P-gp表达的药物，即，抗肿瘤药物的增敏剂中的用途。
由P-gp活性增加引起多药耐药性的肿瘤包括：人皮肤癌、人甲状腺癌、人乳腺癌、人胃癌、人结直肠癌、人肝癌、人肺癌、人卵巢癌、人头颈癌、人肾癌、人膀胱癌、人肉瘤（骨、软骨、横纹肌等）、人恶性淋巴瘤、人白血病、人前列腺癌、人恶性胶质瘤、人宫颈癌、人食道癌、人睾丸癌、人恶性畸胎瘤等。
本发明中，作为通式I所表示的化合物，具体优选的化合物为：
其中，●表示连接到通式I中的位点。
附图说明
图1为不同化合物对DOC抑制活性的影响；
图2为化合物1、9和15在KB/VCR细胞中对DOC的增敏作用；
图3为化合物1、9和15在MCF-7/ADM细胞中对DOC的增敏作用；
图4为化合物9和VER对P-gp酶活性的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。本发明的实验操作具有通用性，不限于发明中提到的化合物。
下述制备例中，1H-NMR用Varian Mercury AMX300型仪测定。MS用VG ZAB-HS或VG-7070型以及Esquire3000plus-01005测定。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得。除说明外，所有反应均是在氮气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸钠干燥过程。产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)的柱色谱法，所使用的硅胶包括200-300目，GF254为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。
制备实施实例
化合物1-26的制备：
以下化合物制备时采用的起始原料均为化合物原人参二醇（PPD），它由氧气和过氧化叔丁醇协同氧化碱解人参总皂苷得到【CN200510100735】。如反应式1所示，在-78℃条件下，将化合物PPD通过臭氧断双键，然后在-3℃条件下加入胺和NaBH(OAc)3，还原胺化得到目标化合物。
反应式1
实施例1化合物1的制备
在50ml三口反应瓶中，将PPD（200mg，0.435mmol）溶于15ml CH2Cl2中，-78℃条件下搅拌10min后，通入O3反应2min。然后升温至-3℃，加入甲胺（0.1ml）、NaBH(OAc)3（368.8mg,1.7mmol）和CH3OH（8ml），搅拌过夜，反应完全后，加入15ml水，用CH2Cl2（30ml）萃取2次，无水硫酸钠干燥、减压浓缩CH2Cl2，经硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，40:1:0.5），得到产物1，产率为85%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.12(m,1H),3.52(td,J=13.0,6.2Hz,1H),3.21(dd,J=10.9,5.0Hz,1H),2.94(m,1H),2.62(m,1H),2.47(s,3H),1.13(s,3H),0.99(s,3H),0.98(s,3H),0.88(s,6H),0.78(s,3H),0.73(d,J=11.0Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.24-2.10;ESI-MS 450.7[M+H]+。
实施例2化合物2的制备
除了用乙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物2；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，45:1:0.5），产率为86%。1H NMR (300MHz,CDCl3)δ3.55(td,J=12.9,6.3Hz,1H),3.19(dd,J=10.9,4.9Hz,1H),2.93(m,1H),2.72(m,1H),2.58(m,1H),2.48(m,1H),2.09(m,1H),1.15(s,3H),1.11(t,J=7.2Hz,3H),0.99(s,3H),0.98(s,3H),0.89(s,3H),0.88(s,3H),0.78(s,3H),0.73(d,J=10.7Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.10;ESI-MS464.7[M+H]+。
实施例3化合物3的制备
除了用丙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物3；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为87%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.55(td,J=12.7,6.2Hz,1H),3.20(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),2.94(m,1H),2.67(m,1H),2.52(m,2H),2.11(m,1H),1.14(s,3H),0.99(s,3H),0.97(s,3H),0.93(t,J=7.3Hz,3H),0.89(s,3H),0.88(s,3H),0.78(s,3H),0.73(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.01-2.00;ESI-MS478.7[M+H]+。
实施例4化合物4的制备
除了用丁胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物4；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为88%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.54(td,J=12.6,6.1Hz,1H),3.20(dd,J=10.7,5.3Hz,1H),2.95(m,1H),2.66(m,4H),1.14(s,3H),0.97(s,3H),0.95(s,3H),0.90(t,J=7.3Hz,3H),0.87(s,3H),0.86(s,3H),0.76(s,3H),0.73(d,J=10.5Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.01-2.20;ESI-MS492.6[M+H]+。
实施例5化合物5的制备
除了用异丙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物5；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺,50:1:0.5），产率为88%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.57(td,J=12.5,6.0Hz,1H),3.19(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),2.95(d,J=12.6Hz,1H),2.85(m,1H),2.50(m,1H),2.10(m,1H),1.14(s,3H),1.13(d,J=7.2Hz,6H),0.97(s,3H),0.95(s,3H),0.87(s,3H),0.86(s,3H),0.76(s,3H),0.73(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.00;ESI-MS478.6[M+H]+。
实施例6化合物6的制备
除了用叔丁胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物6；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为88%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.30(s,1H),3.57(td,J=12.3,6.1Hz,1H),3.19(dd,J=10.7,5.3Hz,1H),2.93(d,J=10.8Hz,1H),2.44(t,J=11.5Hz,1H),2.09(m,1H),1.13(s,12H),0.97(s,6H),0.88(s,6H),0.77(s,3H),0.72(d,J=10.8Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.01-2.20;ESI-MS492.7[M+H]+。
实施例7化合物7的制备
除了用正丙醇胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物7；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，40:1:0.5），产率为80%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.74(t,J=5.7Hz,2H),3.54(td,J=12.6,5.8Hz,1H),3.20(dd,J=10.8,5.4Hz,1H),2.89(m,2H),2.77(m,1H),2.60(m,1H),1.15(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.88(s,3H),0.86(s,3H),0.78(s,3H),0.72(d,J=10.7Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.01-2.20;ESI-MS494.4[M+H]+。
实施例8化合物8的制备
除了用对甲氧基苯胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物8；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为90%。1H NMR(CD3OD,300MHz)δ6.76(d,J=9.0Hz,2H),6.68(d,J=9.0Hz,2H),3.71(s,3H),3.54(td,J=12.8,6.3Hz,1H),3.14(dd,J=11.0,5.2Hz,1H),3.05(t,J=6.4Hz,2H),2.04(m,1H),1.14(s,3H),0.99(s,3H),0.96(s,3H),0.91(s,6H),0.78(s,3H),0.75(d,J=10.6Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.00;ESI-MS542.6[M+H]+。
实施例9化合物9的制备
除了用苄胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物9；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为90%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.32(m,5H),3.74(s,2H),3.57(td,J=12.9,6.0Hz,1H),3.20(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),2.97(d,J=12.3Hz,1H),2.78(dd,J=12.3,7.2Hz,1H),2.52(t,J=11.0Hz,1H),2.12(m,1H),1.15(s,3H),0.99(s,3H),0.97(s,3H),0.90(s,3H),0.89(s,3H),0.78(s,3H),0.73(d,J=10.7Hz,1H),其他高场H信号重叠于0.99-1.96;ESI-MS 526.8[M+H]+。
实施例10化合物10的制备
除了用(S)-1-苯乙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物10；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为86%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.29(m,5H),3.82(q,J=6.7Hz,1H),3.56(td,J=12.8,5.9Hz,1H),3.19(dd,J=10.8,5.3Hz,1H),2.69(m,1H),2.40(m,1H),2.11(m,1H),1.40(d,J=6.7Hz,3H),1.18(s,3H),0.97(s,3H),0.96(s,3H),0.89(s,3H),0.87(s,3H),0.77(s,3H),0.77(d,J=10.8Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.01-1.97;ESI-MS 540.9[M+H]+。
实施例11化合物11的制备
除了用对甲氧基苄胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物11；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为91%。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.21(dd,J=8.6,4.2Hz,2H),6.87(dd,J=8.6,4.2Hz,2H),3.80(s,3H),3.79(s,2H),3.69(s,1H),3.57(td,J=12.8,6.1Hz,1H),3.20(dd,J=10.8,5.3Hz,1H),2.96(d,J=12.0Hz,1H),2.52(t,J=11.0Hz,1H),2.11(m,1H),1.14(s,3H),0.99(s,3H),0.98(s,3H),0.90(s,3H),0.89(s,3H),0.78(s,3H),0.73(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.01-2.00;ESI-MS556.6[M+H]+。
实施例12化合物12的制备
除了用对氯苄胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物12；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为87%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.29(d,J=6.1Hz,2H),7.20(d,J=6.1Hz,2H),3.84(s,1H),3.71(s,2H),3.56(td,J=12.9,5.9Hz,1H),3.19(dd,J=10.9,5.3Hz,1H),2.94(m,1H),2.52(t,J=10.1Hz,1H),2.10(m,1H),1.13(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.89(s,3H),0.87(s,3H),0.77(s,3H),0.74(d,J=10.7Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.00-1.98;ESI-MS560.7[M+H]+。
实施例13化合物13的制备
除了用对氟苄胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物13；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为88%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.32(dd,J=8.6,5.4Hz,2H),7.03(dd,J=8.6,5.4Hz,2H),5.30(s,1H),3.84(s,2H),3.53(td,J=12.9,6.0Hz,1H),3.20(dd,J=11.0,5.2Hz,1H),2.98(m,1H),2.65(m,1H),2.09(m,1H),1.12(s,3H),0.98(s,6H),0.88(s,6H),0.78(s,3H),0.73(d,J=10.8Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.00-1.99;ESI-MS544.6[M+H]+。
实施例14化合物14的制备
除了用3,4-二甲氧基苄胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物14；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为92%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.93(s,1H),6.86(d,J=8.4Hz,1H),6.84(d,J=8.4Hz,1H),5.30(s,1H),3.89(s,3H),3.87(s,3H),3.82(s,2H),3.53(td,J=12.8,6.0Hz,1H),3.20(dd,J=10.8,5.3Hz,1H),2.96(m,1H),2.69(m,1H),2.08(m,1H),1.12(s,3H),0.98(s,6H),0.88(s,6H),0.78(s,3H),0.71(d,J=10.8Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.00-1.99;ESI-MS586.6[M+H]+。
实施例15化合物15的制备
除了用苯乙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物15；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为90%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.23(m,5H),3.56(td,J=13.1,6.1Hz,1H),3.20(dd,J=10.9,4.9Hz,1H),2.83(m,5H),2.54(m,1H),2.07(m,1H),1.13(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.89(s,3H),0.88(s,3H),0.77(s,3H),0.71(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.00-1.99;ESI-MS540.8[M+H]+。
实施例16化合物16的制备
除了用对氯苯乙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物16；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为84%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.29(d,J=6.2Hz,2H),7.17(d,J=6.2Hz,2H),3.58(td,J=12.7,5.9Hz,1H),3.19(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),2.73(m,4H),2.38(m,1H),2.11(m,1H),1.16(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.88(s,3H),0.87(s,3H),0.77(s,3H),0.72(d,J=10.9Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.01-1.99;ESI-MS574.7[M+H]+。
实施例17化合物17的制备
除了用对硝基苯乙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物17；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为83%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.16(d,J=8.8Hz,2H),7.40(d,J=8.8Hz,2H),3.47(m,2H),3.18(m,2H),3.08(m,4H),2.80(m,1H),1.10(s,3H),1.00(s,3H),0.97(s,3H),0.88(s,6H),0.77(s,3H),0.72(d,J=11.0Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.00-2.2;ESI-MS585.9[M+H]+。
实施例18化合物18的制备
除了用3,4-二甲氧基苯乙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物18；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为93%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.80(d,J=8.2Hz,1H),6.73(d,J=8.2Hz,1H),6.71(s,1H),5.30(s,1H),3.86(s,3H),3.85(s,3H),3.56(td,J=12.8,6.0Hz,1H),3.20(dd,J=10.9,5.3Hz,1H),2.80(m,5H),2.52(t,J=9Hz,1H),1.13(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.90(s,3H),0.89(s,3H),0.77(s,3H),0.73(d,J=11.0Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.00-2.2;ESI-MS600.7[M+H]+。
实施例19化合物19的制备
除了用胡椒乙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物19；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为92%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.72(d,J=7.8Hz,1H),6.65(d,J=1.6Hz,1H),6.61(dd,J=7.8,1.6Hz,1H),5.91(s,2H),3.56(td,J=12.8,5.8Hz,1H),3.19(dd,J=10.9,5.3Hz,1H),2.78(m,6H),2.47(m,1H),2.09(m,1H),1.13(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.89(s,3H),0.87(s,3H),0.77(s,3H),0.73(d,J=10.7Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.01-1.98;ESI-MS584.9[M+H]+。
实施例20化合物20的制备
除了用苯丙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物20；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为90%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.22(m,5H),3.53(td,J=13.1,6.5Hz,1H),3.19(dd,J=10.8,5.3Hz,1H),2.90(m,1H),2.66(m,6H),2.07(m,1H),1.10(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.88(s,3H),0.87(s,3H),0.72(s,3H),0.72(d,J=10.7Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.00-2.25;ESI-MS554.4[M+H]+。
实施例21化合物21的制备
除了用2-氨甲基吡啶代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物21；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为82%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.53(d,J=4.9Hz,1H),7.64(t,J=4.9Hz,1H),7.20(d,J=4.9Hz,1H),7.16(t,J=4.9Hz,1H),3.85(s,1H),3.83(s,1H),3.55(d,J=12.8,5.9Hz,1H),3.19(dd,J=11.0,5.1Hz,1H),2.92(m,1H),2.47(m,1H),2.06(m,1H),1.15(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.88(s,6H),0.77(s,3H),0.73(d,J=10.9Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.01-1.95;ESI-MS527.8[M+H]+。
实施例22化合物22的制备
除了用3-氨甲基吡啶代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物22；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为81%。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.43(d,J=4.7Hz,1H),7.85(d,J=7.4Hz,1H),7.41(dd,J=7.4,4.7Hz,1H),3.79(s,2H),3.53(d,J=13.1,5.7Hz,1H),3.14(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),2.63(m,2H),2.02(m,1H),1.14(s,3H),1.00(s,3H),0.96(s,3H),0.91(s,6H),0.77(s,3H),0.74(d,J=10.7Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.00-1.95;ESI-MS527.8[M+H]+。
实施例23化合物23的制备
除了用4-氨甲基吡啶代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物23；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为81%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.56(dd,J=4.4,1.6Hz,2H),7.23(dd,J=4.4,1.6Hz,2H),3.77(s,2H),3.58(td,J=12.9,5.8Hz,1H),3.21(dd,J=11.0,5.3Hz,1H),2.96(m,1H),2.56(m,1H),2.13(m,1H),1.17(s,3H),0.99(s,3H),0.98(s,3H),0.89(s,3H),0.87(s,3H),0.78(s,3H),0.78(d,J=10.8Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.01-1.94;ESI-MS527.8[M+H]+。
实施例24化合物24的制备
除了用环丙胺代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物24；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为80%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.54(td,J=12.6,6.2Hz,1H),3.20(dd,J=10.7,5.3Hz,1H),3.05(m,1H),2.95(dd,J=11.0,7.2Hz,1H),2.56(t,J=11.0Hz,1H),2.11(m,1H),2.07(m,1H),1.11(s,3H),0.97(s,3H),0.96(s,3H),0.87(s,6H),0.76(s,3H),0.72(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-1.99;ESI-MS476.6[M+H]+。
实施例25化合物25的制备
除了用1-(3-氨基丙基)咪唑代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物25；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为90%。1H NMR(CDCl3,300MHz):δ7.49(s,1H),7.05(s,1H),6.92(s,1H),4.00(m,2H),3.55(td,J=12.7,6.0Hz,1H),3.19(dd,J=11.0,5.2Hz,1H),2.88(m,1H),2.68(m,1H),2.52(m,2H),1.13(s,3H),0.98(s,3H),0.97(s,3H),0.89(s,6H),0.78(s,3H),0.72(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.20;ESI-MS544.7[M+H]+。
实施例26化合物26的制备
除了用N-氨乙基哌嗪代替甲胺之外，与实施例1相同的方式制备化合物26；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，50:1:0.5），产率为80%。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ5.31(d,J=1.4Hz,1H),3.57(td,J=13.0,5.6Hz,1H),3.20(dd,J=10.9,5.3Hz,1H),2.80(t,J=6.0Hz,2H),2.47(m,12H),1.14(s,3H),0.98(s,6H),0.89(s,6H),0.78(s,3H),0.73(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.20;ESI-MS548.3[M+H]+。
实施例27化合物27的制备
反应式2
在50ml圆底烧瓶中加入PPD（700mg，1.52mmol）和20ml CH2Cl2，搅拌溶解后，在-78℃条件下通入O3反应4min，反应完全后加入NH2OH-HCl（213mg，3.04mmol）和CH3ONa（300mg,5.5mmol），并在室温下搅拌3h。反应完全后加入20ml水，再用60ml CH2Cl2萃取3次，无水硫酸钠干燥、减压浓缩CH2Cl2，得到白色固体500mg。把白色固体500mg用10ml甲醇溶解在50ml圆底烧瓶中，加入NaBH3CN（1.450g，0.023mol），NH4OAc（1.345g，0.017mol），在氮气保护下，慢慢滴加TiCl3溶液（2.4ml），反应6h，反应结束后用5N NaOH溶液中和至pH=7，过滤，滤渣用甲醇淋洗，滤液经减压浓缩后，用大量乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥、和减压浓缩后，经硅胶柱层析，得到白色固体化合物27（120mg，30%）。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ3.46(td,J=13.0,7.0Hz,1H),3.12(dd,J=10.7,5.5Hz,1H),2.91(t,J=7.0Hz,2H),1.13(s,3H),1.00(s,3H),0.94(s,3H),0.90(s,3H),0.89(s,3H),0.75(s,3H),0.72(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.20;ESI-MS436.5[M+H]+。
化合物28-31的制备：
以下化合物制备时采用的起始原料均为化合物27。如反应式3所示，在室温条件下，化合物27、醛和三乙酰氧基硼氢化钠通过还原胺化反应，得到目标化合物。
反应式3
其中，R5CHO表示在化合物28-31中所对应的醛。
实施例28化合物28的制备
将化合物27（70mg，0.16mmol）溶于4ml甲醇溶液中，加入0.4ml甲醛溶液、NaBH(OAc)3(67.84mg，0.32mmol)搅拌过夜，反应完全后，加入15ml水，然后用30ml CH2Cl2萃取2次，收集有机相，无水硫酸钠干燥、减压浓缩CH2Cl2，经硅胶柱层析，得到化合物28，产率为90%。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ3.53(td,J=13.0,6.0Hz,1H),3.19(dd,J=11.0,5.2Hz,1H),2.71(m,2H),2.50(s,6H),1.11(s,3H),1.01(s,3H),0.97(s,3H),0.88(s,3H),0.77(s,3H),0.71(s,3H),0.70(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.20;ESI-MS464.6[M+H]+。
实施例29化合物29的制备
除了使用苯甲醛代替甲醛之外，与实施例28相同的方式制备化合物29；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，70:1:0.5），产率为95%。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.39(m,10H),4.06(d,J=7.1Hz,2H),3.89(d,J=7.1Hz,2H),3.55(td,J=12.7,6.1Hz,1H),3.19(dd,J=10.6,5.1Hz,1H),1.16(s,3H),1.00(s,3H),0.98(s,3H),0.89(s,6H),0.79(s,3H),0.71(d,J=10.8Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.26;ESI-MS616.5[M+H]+。
实施例30化合物30的制备
除了使用3-甲氧基苯甲醛代替甲醛之外，与实施例28相同的方式制备化合物30；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，80:1:0.5），产率为94%。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.36(t,J=8.0Hz,2H),7.26(s,2H),6.96(d,J=8.0Hz,4H),5.30(s,1H),4.12(d,J=7.1Hz,2H),3.93(dd,J=7.1Hz,2H),3.84(s,6H),3.51(d,J=12.9Hz,1H),3.20(dd,J=10.8,5.3Hz,1H),1.18(s,3H),1.06(s,3H),0.89(s,3H),0.88(s,6H),0.78(s,3H),0.72(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.20;ESI-MS676.6[M+H]+。
实施例31化合物31的制备
除了使用对氟苯甲醛代替甲醛之外，与实施例28相同的方式制备化合物31；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇/三乙胺，75:1:0.5），产率为93%。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ7.26(t,J=6.8Hz,4H),7.05(t,J=6.8Hz,4H),5.30(s,1H),4.77(s,1H),3.66(d,J=7.2Hz,2H),3.60(d,J=7.2Hz,2H),3.51(m,2H),3.20(dd,J=10.9,5.1Hz,1H),2.09(m,1H),1.15(s,3H),0.98(s,6H),0.89(s,6H),0.78(s,3H),0.71(d,J=10.9Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.02-2.00;ESI-MS 652.3[M+H]+。
化合物32-35的制备：
以下化合物制备时采用的起始原料均为化合物27。如反应式4所示，在室温下，化合物27和酰氯反应，得到目标化合物。
反应式4
其中，R6COCl表示化合物32-36中所对应的酰氯。
实施例32化合物32的制备
将化合物27（60mg，0.138mmol）加到25ml圆底烧瓶中，在氮气保护下加入3ml CH2Cl2和0.1ml三乙胺，最后加入0.2ml丙酰氯，搅拌5min，反应完全后加水淬灭。用10ml CH2Cl2萃取2次，收集有机相，无水硫酸钠干燥、减压浓缩CH2Cl2，经硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇，70:1），得到产物32，产率为90%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.96(br s,1H),3.60(td,J=13.2,6.5Hz,1H),3.37(dd,J=10.9,5.0Hz,1H),3.20(m,2H),2.21(q,J=7.6Hz,2H),2.05(m,1H),1.15(s,3H),1.14(t,J=7.6Hz,3H),0.98(s,6H),0.88(s,6H),0.78(s,3H),0.72(d,J=10.6Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.03-2.00;ESI-MS 492.3[M+H]+。
实施例33化合物33的制备
除了使用环丙酰氯代替丙酰氯之外，与实施例32相同的方式制备化合物33；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇，80:1），产率为88%。1H NMR (300MHz,CDCl3)δ6.18(s,1H),5.30(s,1H),3.58(td,J=12.8,6.1Hz,1H),3.39(dd,J=10.9,5.0Hz,1H),3.19(m,2H),2.05(m,1H),1.15(s,3H),0.98(s,6H),0.88(s,6H),0.78(s,3H),0.71(m,4H),其他高场H信号重叠于1.03-2.00;ESI-MS504.3[M+H]+。
实施例34化合物34的制备
除了使用苯甲酰氯代替丙酰氯之外，与实施例32相同的方式制备化合物34；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇，90:1），产率为87%。1H NMR (300MHz,CDCl3)δ7.80(m,2H),7.43(m,3H),6.92(s,1H),5.30(s,1H),3.60(m,2H),3.36(td,J=12.8,6.0Hz,1H),3.20(dd,J=11.0,5.1Hz,1H),2.09(m,1H),1.17(s,3H),0.98(s,3H),0.95(s,3H),0.88(s,3H),0.86(s,3H),0.78(s,3H),0.72(d,J=10.8Hz,1H),其他高场H信号重叠于1.03-2.00;ESI-MS540.6[M+H]+。
实施例35化合物35的制备
除了使用甲氧基苯甲酰氯代替丙酰氯之外，与实施例32相同的方式制备化合物35；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇，100:1），产率为89%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.77(d,J=8.7Hz,2H),6.91(d,J=8.7Hz,2H),6.78(br s,1H),5.30(s,1H),3.84(s,3H),3.62(m,2H),3.33(td,J=12.6,5.9Hz,1H),3.20(dd,J=10.6,5.3Hz,1H),2.09(m,1H),1.17(s,3H),0.98(s,3H),0.95(s,3H),0.88(s,3H),0.87(s,3H),0.78(s,3H),0.71(d,J=10.9Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.03-2.00;ESI-MS570.7[M+H]+。
实施例36化合物36的制备
除了使用氯甲酸苄酯代替丙酰氯之外，与实施例32相同的方式制备化合物36；硅胶柱层析（二氯甲烷/甲醇，90:1），产率为79%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.35(m,5H),5.12(s,2H),3.60(td,J=13.1,6.2Hz,1H),3.22(m,3H),2.06(m,1H),1.15(s,3H),0.99(s,6H),0.89(s,6H),0.79(s,3H),0.73(d,J=10.8Hz,1H)，其他高场H信号重叠于1.00-2.00;ESI-MS570.4[M+H]+。
实施例37化合物9·HCl的制备
反应式5
将化合物9(1mmol)溶于30mL1%的稀盐酸中，室温搅拌2h，反应结束后，经过滤得到的粗产品，出产品用乙醇重结晶，得到白色固体化合物9·HCl，产率80%。
所有其它化合物的盐酸盐，均可以用实施例37的方法将相应的化合物与稀盐酸反应进行制备。
本发明所提及的化合物的有机酸和无机酸盐均可用与实施例37类似的方法将所述化合物与相应的有机酸或无机酸反应进行制备。
试验实施例
试验实施例1体外逆转肿瘤细胞MDR活性实验
1.试剂及仪器
阿霉素(adriamycin,ADM)、多烯紫杉醇(docetaxel,DOC)、维拉帕米(verapamil,VER)、二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)、MTT液及其他化学试剂购自Sigma公司。含10％胎牛血清的DMEM培养液购自Gibco公司。可调波长式微孔板酶标仪购自美国Bio-Rad Laboratories。
2.细胞系与细胞培养
人乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/ADM，人口腔癌细胞KB和KB/VCR细胞购自美国ATCC保藏。在37℃，用含10％胎牛血清的DMEM培养5％二氧化碳条件下培养。
3.MTT法测试细胞增殖
肿瘤细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养，测定时将对数生长期的细胞配成细胞悬液，接种于96孔培养板上。实验组每孔分别加入不同浓度的待测化合物，空白对照组加等体积含最高浓度溶剂（即10-4M的DMSO）的DMEM培养液，在37℃，5％二氧化碳条件下培养72小时后，每孔加入MTT液至终浓度1mg/ml再培养4h，吸去未结合的MTT，每孔加入150μl DMSO溶解结晶，用自动分光光度仪读数计测定490nm处的OD值。以不加药物的肿瘤细胞组为空白对照，计算药物对该肿瘤细胞的生长抑制率。
抑制率=[(对照组OD值－给药组OD值)/对照组OD值]×100%
使用GraphPad软件拟合化合物半数抑制浓度IC50；拟合药物发挥增敏作用的半数有效浓度EC50。
4.实验结果
如图1所示，在MCF-7/ADM细胞中，不同的通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐对DOC抑制活性的提高作用。
在细胞增殖实验中，以10μM不同化合物与多西他赛(DOC)孵育耐药细胞株MCF-7/ADM，以DMSO处理组作为阴性对照，在孵育72h后加入MTT液并检测吸光度以检测反应活细胞数量。以半数抑制浓度(IC50)作为评价化合物提高多西他赛抑制活性能力的标准。如图所示，本发明的化合物具有不同程度的增敏作用，其中化合物9、10、11、12、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23和36的增敏活性强于阳性对照药维拉帕米(VER)。
在细胞增殖实验中，以不同浓度的化合物与多西他赛(DOC)孵育耐药细胞株KB/VCR，在孵育72h后加入MTT液并检测吸光度并拟合半数抑制浓度(IC50)。再以化合物增敏作用的半数有效浓度作为评价化合物提高多西他赛抑制活性能力的标准。如图2所示，化合物9和15具有与维拉帕米（Verapamil）相近的增敏作用。
在细胞增殖实验中，以不同浓度的化合物与多西他赛(DOC)孵育耐药细胞株MCF-7/ADM，在孵育72h后加入MTT液并检测吸光度并拟合半数抑制浓度(IC50)。再以化合物增敏作用的半数有效浓度作为评价化合物提高多西他赛抑制活性能力的标准。如图3所示，化合物9和15具有与维拉帕米（Verapamil）相近的增敏作用。
试验实施例2化合物影响P-gp ATPase活性测试
1.试剂及仪器
P-gp ATPase活性测试试剂盒Pgp-Glo assay system购自美国Promega公司，荧光检测仪Wallac Victor1420multilabel counter购自意大利PerkinElmer公司。
2.P-gp ATPase活性测试
Pgp-GloTM Assay Systems(其中含有昆虫细胞重组表达的含有P-gp的细胞膜)购自美国Promega公司用以检测化合物对P-gp的ATPase活性的影响。矾酸钠(Na3VO4)作为P-gp ATPase的阳性抑制剂、Verapamil作为阴性抑制剂。不同浓度的化合物溶于测试缓冲液(5mmol/L Mg2+ATP,25μg重组P-gp细胞膜)37℃孵育40min。其后加入ATP检测缓冲液室温孵育20min，于荧光检测仪(美国Molecular Devices公司)。被化合物孵育释放的无机磷酸盐含量与矾酸钠处理的释放的无机磷酸盐含量相比较表示化合物对P-gp ATPase活性的影响。
在重组人P-gp活性测试中，维拉帕米(verapamil)和化合物9与含有重组的人源P-gp共同孵育后检测体系内ATP消耗量以显示P-gp活性。如图4所示，维拉帕米和化合物9都能剂量依赖地增加P-gp水解ATP的活性，显示化合物9和维拉帕米一样都是P-gp的底物。
化合物9和化合物15在体外有较好的增敏作用，并与维拉帕米（Verapamil）的增敏作用相近，因此，该类化合物有望成为一类新的增敏剂。
Claims (10)
1.一种具有下面通式I所示结构的原人参二醇衍生物，或其药学上可接受的盐：
式中：
R1为H、C1-C6直链或支链的烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基或杂芳基；在R1的定义中，所述取代的芳基和在芳环上取代的芳基C1-C4烷基中的取代基为选自C1-C4的烷氧基、羟基和卤素中的1~4个取代基；
R2为H、C1-C6直链或支链的烷基、羟基C1-C6直链或支链的烷基、C3-C7环烷基、用C3-C7环烷基取代的C1-C4烷基、用3-7元杂环烷基取代的C1-C4烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、在杂芳环上取代或未取代的杂芳基C1-C4烷基、
其中，●表示连接到通式I中的位点；
X为O或S；Y为O或S；Z为O或NH；
在R2的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C4烷基和在杂芳环上取代的杂芳基C1-C4烷基中的取代基选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟基C1-C4烷基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基；或者其中两个取代基与和它们连接的芳基或杂芳基上的原子形成5-8元环；
R3为H、C1-C6直链或支链的烷基、C3-C7环烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、杂芳基、或者在杂芳环上取代或未取代的杂芳基C1-C4烷基；
在R3的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C4烷基和在杂芳环上取代的杂芳基C1-C4烷基中的取代基为选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基；
R4为C1-C6直链或支链的烷基、C3-C7环烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、杂芳基、在杂芳环上取代或未取代的杂芳基C1-C4烷基；
在R4的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C4烷基、在杂芳环上取代的杂芳基C1-C4烷基中的取代基为选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基；
所述“芳基”是指不含杂原子的芳香族环基，其具有6~14个碳原子；所述“杂芳基”为环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的5-7元芳族杂环基；所述“杂环烷基”为环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的饱和杂环基。
2.根据权利要求1所述的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中，
R1为H、C1-C4直链或支链的烷基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C2烷基；在R1的定义中，所述在芳环上取代的芳基C1-C2烷基中的取代基为选自C1-C4的烷氧基、羟基和卤素中的1~4个取代基；
R2为H、C1-C4直链或支链的烷基、羟基C1-C4直链或支链的烷基、C3-C5环烷基、用5-6元杂环烷基取代的C1-C2烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基、杂芳基C1-C4烷基、
在R2的定义中，所述取代的芳基和在芳环上取代的芳基C1-C4烷基中的取代基选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟基C1-C4烷基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基，或者其中两个取代基与和它们连接的芳基、或杂芳基上的原子形成5-8元环；
R3为C1-C4直链或支链的烷基、C3-C5环烷基、取代或未取代的芳基、或在芳环上取代或未取代的芳基C1-C2烷基；在R3的定义中，所述取代的芳基、在芳环上取代的芳基C1-C2烷基中的取代基为选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基；
R4为取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C2烷基；在R4的定义中，所述在芳环上取代的芳基C1-C2烷基中的取代基为选自卤素、C1-C6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羧基和C1-C4烷氧基中的1~4个取代基。
3.根据权利要求1或2所述的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中，
X为O；Y为O；Z为O。
4.根据权利要求1所述的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中，
R1为H、甲基、苄基、3-甲氧基苄基或4-氟苄基；
R2为氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、异丙基、叔丁基、3-羟基-1-丙基、4-甲氧基苯基、1-苯乙基、苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、4-氟苄基、3,4-二甲氧基苄基、2-苯乙基、2-(4-氯苯基)乙基、2-(4-硝基苯基)乙基、2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基、2-(3,4-亚甲二氧基苯基)乙基、3-苯基-1-丙基、2-吡啶甲基、3-吡啶甲基、4-吡啶甲基、环丙基、3-(1-咪唑基)-1-丙基、2-(1-哌嗪基)乙基、3-甲氧基苄基、4-甲氧基苯甲酰基或苯甲氧基羰基；
R3为乙基、环丙基、苯基或4-甲氧基苯基；
R4为苄基。
5.根据权利要求1所述的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐，其中，所述原人参二醇衍生物具有如下结构：
其中，●表示连接到通式I中的位点。
6.一种根据权利要求1所述的原人参二醇衍生物的制备方法：
方法一：
其中，R2的定义与权利要求1中的定义相同；
步骤1)：使原人参二醇PPD中的碳碳双键发生臭氧化反应；
步骤2)：接着使步骤1)中的产物与胺发生还原胺化反应得到通式I-1的化合物；
方法二：
R1和R2的定义与权利要求1中的定义相同，
所述方法包括如下步骤：
步骤1)：原人参二醇PPD中的碳碳双键发生臭氧化反应；
步骤2)：步骤1)中的产物与羟胺发生缩合反应得到化合物II；
步骤3)：化合物II经还原反应得到化合物I-2；
步骤4)：化合物I-2与醛或酮经还原胺化反应、或酰化反应、或与羰基二咪唑和胺发生亲核反应、或与硫代羰基二咪唑和胺发生亲核反应得到通式I所示的化合物。
7.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1至5中任一项所述的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐，以及任选的药学上可接受的载体。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其进一步包含安全有效量的抗肿瘤药物。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的原人参二醇衍生物或其药学上可接受的盐在制备抑制P-gp表达的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其中，由P-gp活性增加引起多药耐药性的肿瘤为人皮肤癌、人甲状腺癌、人乳腺癌、人胃癌、人结直肠癌、人肝癌、人肺癌、人卵巢癌、人头颈癌、人肾癌、人膀胱癌、人肉瘤、人恶性淋巴瘤、人白血病、人前列腺癌、人恶性胶质瘤、人宫颈癌、人食道癌、人睾丸癌或人恶性畸胎瘤。
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160601 Termination date: 20200807 |