CN103536903B - Metrnl蛋白在制备降血脂药物方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域。本发明提供了Metrnl蛋白在制备降血脂药物或保健食品中的应用。本发明经体外实验显示，在正常型小鼠和Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠给予甘油三酯灌胃，发现Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠的血脂水平明显比正常型小鼠要低，说明Metrnl蛋白有降低血脂的作用。Metrnl蛋白本身是一种人体的内源性蛋白质，作为潜在药物的安全性很高。

Description

Metrnl蛋白在制备降血脂药物方面的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及Metrnl蛋白在制备降血脂药物方面的应用。

背景技术

Metrnl蛋白是一个非常新的蛋白，由metrnl基因编码，大小为30kDa左右，人Metrnl蛋白的氨基酸序列见NP_001004431.1，该蛋白的表达、生理功能近于未知状况。

中国专利申请CN200980137344.4，发明名称为“生长因子METRNL的治疗用途”，申请公布号:CN102164611A，公开了METRNL是一种具有神经元保护和/或神经发生作用的神经生存和生长因子，METRNL蛋白可用于治疗神经系统的疾病、疾患或损害。

大量证据表明高脂血症与胰岛素抵抗有高度相关性，是引发2型糖尿病、糖耐量异常、高血压及动脉粥样硬化等代谢性疾病的重要因素。因此，找到新的降血脂药物，有可能对于高脂血症的治疗提供新的药物或干预靶点。

目前国内外尚无有关Metrnl蛋白在制备降血脂药物方面的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供Metrnl蛋白的新用途。

本发明提供了Metrnl蛋白在制备降血脂药物或保健食品中的应用。

本发明经体外实验显示：在正常型小鼠和Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠给予甘油三酯灌胃，发现Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠的血脂水平明显比正常型小鼠要低，说明Metrnl蛋白有降低血脂的作用。

本发明中，所述的Metrnl蛋白是一种蛋白质，大小为30kDa，人Metrnl蛋白的氨基酸序列见NP_001004431.1。

本发明所述的Metrnl蛋白在制备降血脂药物或保健食品中的应用，所述的药物是由药物活性成分Metrnl蛋白和药学上可接受的辅料组成的药物组合物。

所述的药学上可接受的辅料是指药学领域常规的药物辅料，其中，稀释剂、赋形剂如水等；粘合剂如纤维素衍生物、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂如淀粉等；崩裂剂如碳酸钙或碳酸氢钠；也可以在组合物中加入其他辅助剂如香味剂和/或甜味剂。

所述的药物组合物可采用医学领域常规的方法，将Metrnl蛋白作为活性成分，与药学上可接受的辅料制成各种剂型。当用于口服时，可将其制备成常规的固体制剂如片剂、粉剂或胶囊剂等；用于注射时，可将其制备成注射液。在各种制剂中，活性成分的重量含量为0.1%～99.9%，优选的重量含量为0.5～90%。

所述的药物组合物可以用于降低高脂血症的血脂水平。可以按剂型通过口服、腹腔注射、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、淋巴结内注射、粘膜用药等途径应用于需要治疗的个体。个体可以是人或动物。剂量一般为1～1000mg/公斤体重/天，具体可根据个体的年龄、病情等进行变化。

相比于现有技术，本发明的有益效果如下：本发明提供了Metrnl蛋白在制备降血脂药物方面的应用，Metrnl蛋白可以明显降低因口服髙脂食物导致的血脂升高。这对于高脂血症的治疗可能具有重大意义。并且Metrnl蛋白本身是一种人体的内源性蛋白质，从目前的资料来对人体可能的副作用很小，因此作为潜在药物的安全性很高。

附图说明

图1是Metrnl过表达组（B）和对照组（A）脂肪细胞脂滴形成的照片，白色箭头处即为脂滴，脂滴越多，说明分化越好；

图2是Metrnl过表达组（Metrnl）和对照组（Control）脂肪分化基因的表达，分化基因表达越高，说明分化越好。

图3是正常小鼠和Metrnl过表达小鼠甘油三酯灌胃后的血脂变化情况。

具体实施方式

现结合实施例和附图，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。

正常型小鼠购自上海南方模式动物中心。

本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：Metrnl过表达可以促进脂肪细胞脂滴形成

脂肪细胞培养，过程如下：

脂肪前体细胞系3T3-L1培养于DMEM高糖加10%的胎牛血清的培养液中，细胞达到80%的融合后传代，转染病毒后开始分化，分化过程为：细胞融合后继续培养2天，而后加入脂肪细胞分化液，即：DMEM高糖培养基中加入10%胎牛血清，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX，总浓度为0.115mg/mL），地塞米松（DEX，总浓度为1μM），胰岛素（insulin，总浓度为1μg/mL），培养两天后换液，培养液为DMEM高糖加10%胎牛血清加总浓度为1μg/mL的胰岛素，继续分化6天，其间每两天换一次液。随后检测脂滴形成情况和脂肪细胞分化情况。本实施例中所用的试剂全部来自于美国Sigma-Aldrich公司。

给药组给予携带metrnl基因的慢病毒，购自vectorbiolabs公司，货号AAV-292403。

对照组给予对照慢病毒，购自vectorbiolabs公司。

结果表明，Metrnl过表达可以明显地促进脂肪细胞脂滴形成，脂肪细胞分化率见表1；详细图片可见图1，Metrnl过表达可以促进脂肪细胞脂滴形成，白色箭头处即为脂滴。

表1.Metrnl过表达可以促进脂肪细胞脂滴形成

**表示Metrnl过表达组和对照组相比较，有显著的统计学差异（P<0.01）。

实施例2：Metrnl过表达可以促进脂肪细胞的分化基因表达

脂肪细胞培养，过程如下：

脂肪前体细胞系3T3-L1培养于DMEM高糖加10%的胎牛血清的培养液中，细胞达到80%的融合后传代，转染病毒后开始分化，分化过程为：细胞融合后继续培养2天，而后加入脂肪细胞分化液，即：DMEM高糖培养基中加入10%胎牛血清，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX，总浓度为0.115mg/mL），地塞米松（DEX，总浓度为1μM），胰岛素（insulin，总浓度为1μg/mL），培养两天后换液，培养液为DMEM高糖加10%胎牛血清加总浓度为1μg/mL的胰岛素，继续分化6天，其间每两天换一次液。随后检测脂滴形成情况和脂肪细胞分化情况。本实施例中所用的试剂全部来自于美国Sigma-Aldrich公司。

给药组给予携带metrnl基因的慢病毒，购自vectorbiolabs公司，货号AAV-292403。

对照组给予对照慢病毒，购自vectorbiolabs公司。

给药10天后，使用real time-PCR技术对脂肪分化基因进行检测。结果表明，Metrnl过表达可以促进脂肪细胞的分化基因表达，详见图2。

实施例3：Metrnl脂肪特异性过表达小鼠的制备

首先制备Metrnl过表达病毒载体，制备方法如下：克隆获得Metrnl基因的开放性阅读框，将获得的序列插入慢病毒穿梭质粒的多克隆位点，将穿梭质粒与其他包装质粒共转染HEK293细胞，随后收集培养上清，并过滤离心纯化和浓缩病毒。

上述的Metrnl过表达病毒载体，也可以使用直接市购的商品制得，如Metrnl基因的开放性阅读框可购自Thermo公司，货号MMM1013-202763251。病毒包装质粒可购自invitrogen公司，货号K5325-20。

构建Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠，培养方法如下：构建包含脂肪特异性表达基因Fabp4上游启动子区域与Metrnl基因开放性阅读框的质粒Fabp4-Metrnl，测序正确后，酶切线性化，注射受精卵，移植到假孕母鼠的子宫内，对后代小鼠进行基因组鉴定。挑选转基因成功的子鼠与C57BL6小鼠交配，下一代小鼠中基因组中携带Fabp4-Metrnl的为实验组，未携带的为对照组。

Metrnl脂肪特异性过表达小鼠也可委托上海南方模式动物中心构建。

实施例4：Metrnl过表达可以降低因口服髙脂食物导致的血脂升高

对约12周龄的正常型小鼠和Metrnl脂肪特异性过表达小鼠均使用相同剂量的甘油三酯灌胃，具体方法如下：

12周龄的正常型小鼠和Metrnl脂肪特异性过表达小鼠，禁食3小时后，给予20%的中/长链脂肪乳注射液（商品名为“力保肪宁”，德国贝朗医疗有限公司）灌胃，剂量为10ul/g体重，在不同的时间点尾静脉取血，血液离心后取10ul血清用于检测甘油三酯的含量，甘油三脂检测所用试剂盒为北京普利莱基因技术有限公司销售的甘油三酯(血液)酶法测定试剂盒，货号E1003。

结果表明，甘油三酯灌胃在Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠上导致的血脂升高要显著低于在正常小鼠上的作用，详见表2与图3。

表2.Metrnl抑制血中甘油三脂的升高

*表示Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠+甘油三酯灌胃和对照组相比较，有统计学差异（P<0.05）；**表示Metrnl脂肪细胞特异性过表达小鼠+甘油三酯灌胃和对照组相比较，有显著的统计学差异（P<0.01）。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (1)

1.Metrnl蛋白在制备降血脂药物或保健食品中的应用。