CN103536663B

CN103536663B - 一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法

Info

Publication number: CN103536663B
Application number: CN201310532329.8A
Authority: CN
Inventors: 陈欢; 陈照荣; 黄绳武
Original assignee: ZHEJIANG BAICAO TRADITIONAL CHINESE MEDICINE PIECES CO Ltd
Current assignee: Zhejiang Zuo Libaicao prepared slices of Chinese crude drugs company limited
Priority date: 2013-10-30
Filing date: 2013-10-30
Publication date: 2015-08-19
Anticipated expiration: 2033-10-30
Also published as: CN103536663A

Abstract

一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，属于中药制剂技术领域。其包括以下工艺步骤：1）头花蓼浸膏粉制备；2）配料；3）制粒、整粒；4）压片。上述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，设计合理，通过对头花蓼醇提后水提后得到的混合药液经过合理的参数、步骤控制制成片剂，使得患者使用方便，便于吸收，显著提高了头花蓼药材的降糖功能。

Description

一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法

技术领域

本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法。

背景技术

随着人类生活水平的提高、生活方式的改变、环境污染的加剧，糖尿病患病机率逐年增高，西医虽治糖尿病针对性强，降糖作用显著，但西医治疗存在副作用及胰岛素使用难控制性等问题。近年来，从传统药和植物药中筛选天然活性成分是一种新途径。

GCP（头花蓼）原为民间草药，也是传统苗族药物。主要功效为清热，利尿，通淋，止痢。主治膀胱炎，肾盂肾炎，痢疾。对其的研究大多针对于抗炎活性方面，且临床药物数量较少。另外，GCP治疗糖尿病方面的功效尚未有报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法的技术方案。

所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）取干燥后的头花蓼加入乙醇，浸泡，回流提取，过滤浓缩，得到醇提浓缩液；醇提后药渣进行水煎煮，煎液过滤浓缩，得到水提浓缩液；合并醇提浓缩液和水提浓缩液，再进行浓缩至稠膏，烘干，粉碎，得到头花蓼浸膏粉；

2）按照下述重量配比称取各原料：头花蓼浸膏粉70～90%、微晶纤维素10～30%、糊精0～10%和低取代羟丙基纤维素（批号：MAYA-CR-203439 玛雅试剂）0～5%；

3）将步骤2）中的各原料混合，再加入乙醇，制粒，干燥，整粒；

4）取步骤3）得到的颗粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，即得到头花蓼降糖提取物片剂。

所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中头花蓼加入22～26倍量的55～65%乙醇，浸泡20～40分钟，提取3次，每次1～2小时，合并提取液，过滤浓缩，得到醇提浓缩液；醇提后药渣进行两次水煎煮，第一次加入10～14倍量水，提取1～2小时，第二次加入8～12倍量水，提取0.5～1小时，合并两次煎液，过滤浓缩，得到水提浓缩液，合并醇提浓缩液和水提浓缩液，再进行浓缩至稠膏，烘干，粉碎，得到头花蓼浸膏粉。

所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中醇提浓缩液浓缩过程中浓缩至相当药材量0.8～1.2g/ml，所述的水提浓缩液浓缩过程中浓缩至相当药材量0.8～1.2g/ml，所述的醇提浓缩液和水提浓缩液混合液浓缩过程中浓缩至相当药材量0.8～1.2g/ml。

所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤2）中按照下述重量配比称取各原料：头花蓼浸膏粉75～82%、微晶纤维素15～22%、糊精2～8%和低取代羟丙基纤维素1～4%。

所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中乙醇浓度为50～60%，加入量为原料总重量的15～20%

所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤4）中加入占颗粒总重量0.8～1.2%的硬脂酸镁。

本发明中干燥后的头花蓼通过以下干燥方式制得：新鲜头花蓼在冷冻干燥仪中温度-55～-45℃、压强15～25Pa下连续干燥18小时以上得到；或新鲜头花蓼在电热鼓风干燥箱中温度40～50℃下连续干燥36小时以上得到。

上述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，设计合理，通过对头花蓼醇提后水提后得到的混合药液经过合理的参数、步骤控制制成片剂，使得患者使用方便，便于吸收，显著提高了头花蓼药材的降糖功能。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步说明本发明。

实施例1：头花蓼降糖提取物片剂的制备

1）取干燥后的头花蓼加入24倍量的60%乙醇，浸泡30分钟，提取3次，每次1.5小时，合并提取液，过滤浓缩至相当药材量1g/ml，得到醇提浓缩液；醇提后药渣进行两次水煎煮，第一次加入12倍量水，提取1.5小时，第二次加入10倍量水，提取1小时，合并两次煎液，过滤浓缩至相当药材量1g/ml，得到水提浓缩液，合并醇提浓缩液和水提浓缩液，再进行浓缩至相当药材量1g/ml，烘干，粉碎，得到头花蓼浸膏粉；

2）按照下述重量配比称取各原料：头花蓼浸膏粉80%、微晶纤维素10%、糊精5%和低取代羟丙基纤维素5%；

3）将步骤2）中的各原料混合，再加入浓度为55%的乙醇，乙醇加入量为原料总量的18%，制粒，干燥，整粒；

4）取步骤3）得到的颗粒，加入占颗粒总重量1%的硬脂酸镁，混匀，压片，即得到头花蓼降糖提取物片剂。

实施例2：头花蓼降糖提取物片剂的制备

1）取干燥后的头花蓼加入22倍量的65%乙醇，浸泡20分钟，提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤浓缩至相当药材量0.8g/ml，得到醇提浓缩液；醇提后药渣进行两次水煎煮，第一次加入10倍量水，提取1小时，第二次加入8倍量水，提取0.5小时，合并两次煎液，过滤浓缩至相当药材量0.8g/ml，得到水提浓缩液，合并醇提浓缩液和水提浓缩液，再进行浓缩至相当药材量0.8g/ml，烘干，粉碎，得到头花蓼浸膏粉；

2）按照下述重量配比称取各原料：头花蓼浸膏粉70%、微晶纤维素20%、糊精8%和低取代羟丙基纤维素2%；

3）将步骤2）中的各原料混合，再加入浓度为60%的乙醇，乙醇加入量为原料总量的15%，制粒，干燥，整粒；

4）取步骤3）得到的颗粒，加入占颗粒总重量0.8%的硬脂酸镁，混匀，压片，即得到头花蓼降糖提取物片剂。

实施例3：头花蓼降糖提取物片剂的制备

1）取干燥后的头花蓼加入26倍量的55%乙醇，浸泡40分钟，提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤浓缩至相当药材量1.2g/ml，得到醇提浓缩液；醇提后药渣进行两次水煎煮，第一次加入14倍量水，提取2小时，第二次加入12倍量水，提取0.8小时，合并两次煎液，过滤浓缩至相当药材量1.2g/ml，得到水提浓缩液，合并醇提浓缩液和水提浓缩液，再进行浓缩至相当药材量1.2g/ml，烘干，粉碎，得到头花蓼浸膏粉；

2）按照下述重量配比称取各原料：头花蓼浸膏粉90%和微晶纤维素10%；

3）将步骤2）中的各原料混合，再加入浓度为50%的乙醇，乙醇加入量为原料总量的20%，制粒，干燥，整粒；

4）取步骤3）得到的颗粒，加入占颗粒总重量1.2%的硬脂酸镁，混匀，压片，即得到头花蓼降糖提取物片剂。

试验例1：头花蓼降糖提取物（头花蓼浸膏粉）的降糖药效比较

1、实验方法

1.1 细胞培养

3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞，来源于中国科学院生命科学研究院。将3T3-L1前脂肪细胞种入25cm²细胞培养板，加入正常培养液6ml，置37℃，5%CO₂条件下培养，隔天换液。细胞融合80%后进行传代或冻存。

1.2 细胞诱导分化

将3T3-L1前脂肪细胞以5×10³的密度接种于24孔培养板，待细胞生长至接触抑制，将细胞培养液换成诱导分化液A（0.5mmol/L IBMX, 0.1umol/L DEX, 10mg/L INS)培养48h,换以诱导分化液B（10mg/L)培养48h，换正常培养液继续培养，2天换液一次，诱导分化6-8天的细胞90%以上呈成熟细胞表形。

1.3 IR模型的制备

取对数生长期的3T3-L1细胞计数后以每孔5×10³的密度接种于24孔培养板将培养板移入CO₂培养箱中，在37℃、5%CO₂及饱和湿度条件下培养至生长抑制，诱导分化至成熟脂肪细胞。加入以下处理因素：对照组继续给予正常培养液（含10%FBS的DMEM高糖培养液）培养；模型组给予1umolDEX正常培养液培养；其他细胞用于各个给药组实验。

1.4 对3T3-L1前脂肪细胞的增殖的影响(MTT 法)

收集对数生长期3T3-L1前脂肪细胞，调整细胞悬液浓度，以每孔5×10³的密度接种于96孔培养板，每孔加入100ul。将细胞置于37℃、5%CO₂饱和湿度的CO₂培养箱内培养至80%细胞融合，加入高中低三个浓度的药物（通过本发明步骤制得的提取物）每孔100ul，设4个复孔，同时设置空白对照与正常对照，平行3块版。继续培养48h后，倒置显微镜下观察。每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml），继续孵育4h。终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入150ulDMSO，置于摇床上低俗震荡10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪490nm波长处测定各孔吸光度OD值。计算3T3-L1前脂肪细胞增殖变化率。

细胞存活率=（OD测试组-OD空白组)/(OD对照组-OD空白组）×100%。当存活率的值大于80%时，表明药物对细胞的增殖不存在抑制作用。

1.5 对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗( IR )模型葡萄糖利用的影响

取对数生长期的3T3-L1细胞计数后以每孔5×10³个细胞密度接种于24孔培养板中。按照1.3中IR模型的制备方法，将诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞，分正常培养组和模型组，模型组又分为模型对照组和各个给药组。模型组给予1umolDEX作用48h。造好模后，按实验分组和给药浓度给药，平行3块板。分别于24h、48h观察细胞形态并取上清液与半自动生化仪检测，按试剂盒说明书测定培养液中葡萄糖（GLU）含量。

2、实验结果

本实验中新鲜头花蓼在冷冻干燥仪中温度-55～-45℃、压强15～25Pa下连续干燥18小时以上得到的干燥后头花蓼称为鲜头花蓼；新鲜花蓼在电热鼓风干燥箱中温度40～50℃下连续干燥36小时以上得到干燥后头花蓼称为干头花蓼。水提取液通过以下步骤制得：干燥后的头花蓼在水中浸泡30min，加水煎煮两次，第一次为药材量的12倍，微沸1.5小时，第二次为药材量的10倍，微沸1小时，合并滤液，浓缩至所需浓度。醇提取液通过以下步骤制得：干燥后的头花蓼在24倍60%乙醇中浸泡30min，水浴回流提取3次，每次2小时，合并滤液，浓缩至所需浓度。醇加水提取液通过实施例1的步骤1）制得并浓缩至所需浓度。

2.1 对3T3-L1前脂肪细胞的增殖的影响，见表1

表1：对3T3-L1细胞增值影响

由表1可知细胞存活率基本都在80%以上，说明各浓度药物对细胞的增殖没有显著地抑制作用。100ug/ml, 25ug/ml, 6.25ug/ml可分别作为高中低浓度进一步考察不同组分降糖作用。

2.2 对3T3-L1脂肪细胞IR 模型葡萄糖利用的影响，见表2

表2：对脂肪细胞IR模型葡萄糖利用的影响

由表2可知，对鲜GCP、干GCP药材水提、醇提、醇加水提提取物降糖作用进行比较，相同提取方法下，鲜GCP降糖作用高于干GCP。同时，醇水提部位糖作用优于醇提部位，醇提部位降糖作用优于水提部位。

试验例2：头花蓼降糖提取物片剂的药效试验

1实验方法

头花蓼降糖提取物片剂的药效试验

1.1实验药物

通过实施例1、2或3制得的头花蓼降糖提取物片剂

1.2.动物实验

1.2.1建模

取体重(20±2)g KM小鼠，80只，雌雄各半，适应环境7天，随机抽取雌雄性各6只做为空白对照组，禁食不禁水18h，用生理盐水配制1.1%四氧嘧啶，保存在冰水浴中，按110 mg /kg腹腔注射，对照组注射等剂量生理盐水，1h后恢复饮食，第二天以同法第二次建模。3天后（72h，正常饮食），禁食12h，断尾取血数滴，用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖，血糖值大于11.1mmol/L者为造模成功的小鼠。

1.2.2造模结果

80只KM小鼠其中12只为空白组，其余小鼠进行造模，造模结束后测得血糖值大于11.1mmol/L的小鼠模型小鼠，实验设计过程中每组为12只，实验造模结果中雌性小鼠数量较多，故若干剂量雌性小鼠设计为6-8只（8只具有统计学意义），雄性模型小鼠个别几只尾巴受损，不利于下次取血，故未设于本实验分组中，。实际造模成功率为48.03%，死亡率1.75%。

1.2.3实验分组

取模型小鼠，随机分成6组。即片剂组（高、中、低）剂量组、模型组，阳性组、空白组（正常小鼠），每组雌雄各半，各6只。见表一

1.2.4测血糖

用手术剪剪去小鼠尾端2～3mm，压迫取数滴血置于EP管中，先加15g/L的乙二胺四乙酸二钾溶液12μＬ，高速离心（10000r/min）5min，待血液分层后取上层血清10μＬ，加30μL生理盐水，摇匀；从稀释的血清中取10μＬ于EP管中，加１mL葡萄糖（Glu）氧化酶，摇匀，37℃恒温15min，样品（u）待测．另取生理盐水和校准品（c）10μＬ，分别加１mL葡萄糖氧化酶，摇匀，37℃恒温15min，用505nm波长以空白对照管调零后测定吸光度（A）。

样品Glu（mmol/L）＝Au/Ac×Cc

1.2.5.实验结果与讨论

造模成功后分别测定给药后7d、14d、21d、28d的空腹血糖值。表3为片剂各组分对高血糖模型小鼠血糖浓度的影响。

四氧嘧啶对胰岛β细胞具有特殊的破坏作用，造成胰岛素分泌低下，而引起动物实验性四氧嘧啶糖尿病。本实验采用GOD-POD法检测血清葡萄糖浓度，该方法的原理为血清中的POD葡萄糖在GOD的作用下被氧化成D-葡萄糖酸,并生成H2O2;后者与4-氨基安替比林和苯酚在过氧化物酶(POD)的作用下生成红色的苯酮亚胺, 生成的酮类化合物颜色的深浅与葡萄糖的含量成正比,分别测定标准管和样本管的吸光度值,计算葡萄糖的含量。

表3：片剂各组分对高血糖模型小鼠血糖浓度影响

注：与模型组相比，*P≤0.05，具有显著性差异。

由上表可知，片剂高、中、低剂量、阳性组均表现出降血糖作用。

Claims

1.一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）取新鲜头花蓼在冷冻干燥仪中温度-55～-45℃、压强15～25Pa下连续干燥18小时以上得到的干燥后头花蓼，取干燥后的头花蓼加入22～26倍量的55～65%乙醇，浸泡20～40分钟，提取3次，每次1～2小时，合并提取液，过滤浓缩，得到醇提浓缩液；醇提后药渣进行两次水煎煮，第一次加入10～14倍量水，提取1～2小时，第二次加入8～12倍量水，提取0.5～1小时，合并两次煎液，过滤浓缩，得到水提浓缩液，合并醇提浓缩液和水提浓缩液，再进行浓缩至稠膏，烘干，粉碎，得到头花蓼浸膏粉；

2）按照下述重量配比称取各原料：头花蓼浸膏粉75～82%、微晶纤维素15～22%、糊精2～8%和低取代羟丙基纤维素1～4%；

2.如权利要求1所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤1）中醇提浓缩液浓缩过程中浓缩至相当药材量0.8～1.2g/ml，所述的水提浓缩液浓缩过程中浓缩至相当药材量0.8～1.2g/ml，所述的醇提浓缩液和水提浓缩液混合液浓缩过程中浓缩至相当药材量0.8～1.2g/ml。

3.如权利要求1所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤3）中乙醇浓度为50～60%，加入量为原料总重量的15～20%。

4.如权利要求1所述的一种头花蓼降糖提取物片剂的制备方法，其特征在于所述的步骤4）中加入占颗粒总重量0.8～1.2%的硬脂酸镁。