CN103142720B

CN103142720B - 黑树莓提取物在制备抗糖尿病药物中的应用

Info

Publication number: CN103142720B
Application number: CN201310061475.7A
Authority: CN
Inventors: 毕秀丽; 赵余庆; 夏希纯; 刘威
Original assignee: Liaoning University
Priority date: 2013-02-27
Filing date: 2013-02-27
Publication date: 2015-09-09
Anticipated expiration: 2033-02-27
Also published as: CN103142720A

Abstract

本发明涉及黑树莓提取物在制备抗糖尿病药物中的应用。黑树莓提取物在防治以糖代谢紊乱，β胰岛细胞损伤及胰岛素抵抗为主要特征的II型糖尿病中的用途。本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，以黑树莓提取物为有效成分，其总有效剂量为1-100mg/kg/d。本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，黑树莓提取物可与目前市场上的糖尿病治疗药物包括磺酰脲类、双胍类或噻唑烷二酮类复配制备成复方制剂。黑树莓提取物能够促进胰岛细胞增殖，抑制PTP1B活力，同时体内研究发现黑树莓提取物能够改善四氧嘧啶引发的小鼠的血糖水平升高，具有明显的降糖作用。本发明通过验证，黑树莓果实或叶片提取物的降血糖作用均优于所选用的阳性药降糖灵。

Description

黑树莓提取物在制备抗糖尿病药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，主要涉及黑树莓提取物（包括黑树莓成熟果实，黑树莓叶片提取物）在制备治疗糖尿病药物中的应用。

背景技术

糖尿病是由于胰腺的功能失调导致胰岛素相对或绝对不足，或靶细胞对胰岛素的敏感性降低而引起的一系列全身性代谢紊乱疾病。根据导致疾病的原因和在不同人群中的分布不同，临床常将糖尿病分为I型糖尿病、II型糖尿病。全世界有3.46亿人患有糖尿病。如果不采取有效措施，随着病程的进展，糖尿病会出现多种并发症，可能损害心脏、血管、眼睛、肾脏和神经。糖尿病及其并发症给个人、家庭、国家带来巨大的负担。世卫组织估计，在2006-2015年期间，仅因糖尿病及其并发症，中国就将损失5580亿美元。

II型糖尿病，也称非胰岛素依赖型糖尿病，其胰岛素分泌正常或者增高，但肝脏、脂肪组织和骨骼肌对胰岛素敏感性降低，即胰岛素抵抗，患者多为成年。II型糖尿病发病机理主要有：（1）大多数II型糖尿病的发病原因是因位于胰岛素靶细胞的细胞膜上受体缺陷导致胰岛素与受体结合敏感性降低，使细胞外葡萄糖不能被人体充分摄取利用导致血糖升高。（2）胰岛素受体底物缺陷。胰岛素受体底物属于细胞质中的适配蛋白，主要连接胰岛素受体等多种效应分子，介导细胞对胰岛素等的反应。（3）胰岛素信号转导缺陷。在胰岛素分泌和传递信号的过程中，胰岛素信号传递是一系列过程，涉及多种信号蛋白。在我国II型糖尿病患者占糖尿病患者约95%。因此开发治疗糖尿病的药物是本领域不断研发的方向。

黑树莓是蔷薇科悬钩子属的多年生落叶半灌性果树，因其成熟果实为黑色而得名，作为第三代水果，其营养丰富而齐全，含有多种易被人体吸收和人体不可缺少的营养元素。如维生素C的含量是苹果的5倍，氨基酸及铁、锌、磷等含量高于苹果和葡萄，特别是含有的生物活性的化学物质种类繁多。

现有技术中，并未有黑树莓或其提取物在治疗糖尿病中的相关的报道。

发明内容

本发明的目的是提供黑树莓提取物在防治以糖代谢紊乱，β胰岛细胞损伤及胰岛素抵抗为主要特征的II型糖尿病中的用途。

本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，以黑树莓提取物为有效成分，其总有效剂量为1-100mg/kg/d。

本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，黑树莓提取物可与目前市场上的糖尿病治疗药物包括磺酰脲类、双胍类或噻唑烷二酮类复配制备成复方制剂。

本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，黑树莓提取物可与任何法定药用配合剂和赋形剂制成各种药用剂型的制剂。

本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，药用剂型为口服剂型、或局部用药剂型。

本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，口服剂型包括片剂、粉剂、悬浊液、乳浊液、胶囊、颗粒剂、糖衣片、药丸、液体、糖浆和柠檬水剂等。

本发明所提供的新型抗糖尿病药物制剂，局部用药剂型包括软膏、固体、悬浊液、水剂、粉剂、糊剂、栓剂、泥敷剂、和乳剂等。

本发明的有益效果是：所用黑树莓提取物是从黑树莓成熟果实或叶片中提取。本发明通过对体外大、小鼠胰岛细胞增殖作用，PTP1B活力实验研究中发现，黑树莓提取物能够促进胰岛细胞增殖，抑制PTP1B活力，同时体内研究发现黑树莓提取物能够改善四氧嘧啶引发的小鼠的血糖水平升高，具有明显的降糖作用。本发明通过验证，黑树莓果实或叶片提取物的降血糖作用均优于所选用的阳性药降糖灵。

附图说明

图1是红树莓成熟果实提取物中的成分分离鉴定。

图2是黑树莓成熟果实提取物中的成分分离鉴定。

具体实施方式

实施例1：树莓成熟果实提取物（BRBFE）及树莓叶片提取物（BRBlE）的制备及成分分析

本实施例提供两种方法制备树莓成熟果实提取物。

(1) 树莓成熟果实（黑树莓或红树莓）经捣碎机捣碎，然后过0.02英寸孔径筛网,过滤去籽，制成果泥。过滤残留果实进一步重复此操作，共三次，确保充分榨汁。榨汁率为97%。制备好的果泥倒入于表面涂布聚乙烯薄膜的1英寸的冷冻干燥盘中，在通风的冷冻室中保存。进一步通过升华器进行冷冻干燥，得黑树莓果实冻干粉（或红树莓果实冻干粉）。将黑树莓果实冻干粉（或红树莓果实冻干粉）加入乙醇：水（80:20）溶剂，浸泡提取，温度25 ℃；时间10h；乙酸乙酯萃取去除果实中脂肪类成分，减压回收溶剂后得到黑树莓成熟果实提成取物（BRBFE）或红树莓成熟果实提取物（RRBFE）。

(2) 树莓冻果（黑树莓或红树莓）200g，微波解冻后打浆，得果浆。精确称取果浆4.0g于150ml锥形瓶中，加入乙醇：水（45:55）溶剂，料液比1:30，进行超声提取，超声频率25 kHz，提取温度为40 ℃，提取时间为25min；提取完成后，4000rpm/min离心10 min，取上清液，减压蒸干后得到黑树莓成熟果实提成取物（BRBFE）或红树莓成熟果实提取物（RRBFE）。

采用高效液相色谱法对获得的黑树莓成熟果实提成取物（BRBFE）和红树莓成熟果实提取物（RRBFE）的成分进行分离鉴定，结果如图1和图2所示。其色谱条件如下：

Kromasil C18(4.6mm×150mm)色谱柱，流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱0-21min，19%A；24min，25%A；32min，30%A；39 min，40%A；44 min，50%A；55 min，60%A；60 min，80%A；65-70min，100%A。

从图1和图2可见，树莓的品种不同，其化学成分种类及含量差异较大。通过与混标找共有峰，发现黑树莓35%乙醇冲下的流分中7种标准品都含有，其中鞣花酸含量是红树莓的2-5倍，同时，红树莓中的几种指标性成分与黑树莓相比较，含量都较低，而且在红树莓中未发现白藜芦醇、原花青素B2及表儿茶素几种活性成分。

本实施例提供1种方法制备树莓叶片提取物。

（3）采摘生长果实成熟后的树莓叶（黑树莓或红树莓），清洗晾干粉碎40-60目后用80％乙醇（含3％的乙酸)溶液，料液比1：12，40 ℃，浸提l h，浸提2次。合并提取液，4000rpm/min离心10 min，取上清液，减压蒸干后得到黑树莓叶片提取物（BRBlE）或红树莓叶片提取物（RRBLE）。

实施例2：树莓提取物在体外促进大鼠胰岛样细胞生长分化作用

选用大鼠胰岛样（INS-1）细胞系，采用MTT法测定了树莓提取物（BRBFE，BRBLE， RRBFE，RRBLE）体外促进细胞增殖的活性，测定浓度为0-100 μg/ml，处理时间为72小时。BRBFE，BRBLE对于胰岛样具有明显的促进生长、分化作用。T-test进行统计学分析，p<0.05具有显著性差异，结果见表1。

结果表明:黑树莓提取物（BRBFE及BRBLE）对胰岛样细胞INS-1的增殖具有明显的促进作用, 且作用明显优于研究中的红树莓提取物（RRBFE及RRBLE）。与空白对照组比较， **p＜0.01，*p＜0.05。

实施例3：树莓提取物对PTP1B酶活力的抑制作用

蛋白质酪氨酸磷酸酯酶（PTP1B）能够水解特异性底物对硝基苯酚磷酸二钠（pNPP）的磷酯键，发生颜色反应，得到的产物对硝基苯酚钠在410nm处有很强的光吸收，通过酶标仪直接检测410nm处光吸收的变化以观察酶的活性变化以及化合物对酶活力的抑制情况。阳性对照化合物为磷酸酯酶抑制剂钒酸钠（Na₃VO₄）。其中对照组为试剂对照组。结果见表2。

测定在不同浓度下对基因重组PTP1B的相对抑制率的计算公式如下：

结果表明：黑树莓果实及叶片提取物( BRBFE， BRBLE)对PTP1B酶活力均具有显著的抑制作用，优于红树莓提取物( RRBFE， RRBLE)，同时也优于所选阳性化合物Na₃VO_4，与空白对照组比较， **p＜0.01，*p＜0.05。

实施例4：黑树莓提取物对四氧嘧啶引起小鼠糖尿病模型的降糖试验

取雄性小鼠80只，体重22—24g，测正常血糖值。禁食32小时，以200mg/kg剂量腹腔注射四氧嘧啶生理盐水溶液，72小时后测定血糖值，选高血糖造型成功者60只分组，另设空白对照组，共计5组：1、空白对照组；2、模型组；3、降糖灵（市购降糖药）组80mg/kg；4、BRBFE 30mg/kg；5、BRBLE 30mg/kg；每天灌胃给药1次，连续给药14天，禁食后测血糖值。结果见表3。

结果表明:黑树莓果实提取物BRBFE及叶片提取物BRBLE对四氧嘧啶引发的血糖升高具有明显的降低作用，抑制作用优于选用的阳性对照药降糖灵，与空白对照组比较， **p＜0.01。

Claims

1.黑树莓提取物在制备促进胰岛样细胞INS-1的增殖和抑制PTP1B酶活力药物中的应用，其特征在于：所述的黑树莓提取物的制备方法是：将黑树莓冻果200g，微波解冻后打浆，得果浆，精确称取果浆4.0g于150ml锥形瓶中，加入按体积比，乙醇：水=45:55的溶剂，料液比1:30，进行超声提取，超声频率25 kHz，提取温度为40 ℃，提取时间为25min；提取完成后，4000rpm/min离心10 min，取上清液，减压蒸干后得到黑树莓成熟果实提取物；所述的黑树莓提取物的成分包括没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、原花青素B2、表儿茶素、鞣花酸和白藜芦醇。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：黑树莓提取物的总有效剂量为1-100mg/kg/d。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：黑树莓提取物与磺酰脲类药物、双胍类药物或噻唑烷二酮类药物复配制备成复方制剂。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的制剂是黑树莓提取物与磺酰脲类药物、双胍类药物或噻唑烷二酮类药物的复配物和药学上可接受的配合剂或赋型剂混合制成药用剂型。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的药用剂型为口服剂型或局部用药剂型。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述口服剂型是片剂、粉剂、悬浊液、乳浊液、胶囊、颗粒剂、药丸、糖浆或柠檬水剂。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的局部用药剂型是软膏、悬浊液、水剂、粉剂、糊剂、泥敷剂、涂抹剂、乳剂。