CN103520270A - 芪参益气滴丸在对抗抗癌药物心脏毒性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了芪参益气滴丸在对抗抗癌药物的心脏毒性中的应用。芪参益气滴丸可以改善抗癌药物引起的心肌损失和心功能损伤。芪参益气滴丸能够改善多柔比星引起的大鼠心肌ATP的降解、过氧化物酶体增殖物激活受体α的降低、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α的降低，减轻心肌的远心性肥大和心肌损伤，增加心脏表面血流量，改善心功能。

Description

芪参益气滴丸在对抗抗癌药物心脏毒性中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其是涉及芪参益气滴丸在对抗抗癌药物心脏毒性中的应用。

背景技术

癌症和心血管疾病(cardiovascular diseases，CVD)已成为中国成人主要死亡原因，而70％以上的老年癌症患者合并有CVD。有CVD的癌症患者增加了抗肿瘤化疗药物的心血管毒性，提高了化疗风险。研究抵抗化疗药物的心血管毒性对癌症的治疗具有重要的临床意义。

多柔比星(DOX)属蒽环类抗生素，是目前最有效的抗肿瘤药物之一，但是持续使用可以导致充血性心力衰竭，其严重的剂量依赖性心脏毒性限制了其临床应用。DOX引起心肌损伤与自由基、铁离子代谢失衡、钙超载、线粒体损伤和细胞凋亡等相关。新近的研究表明DOX还可引起心肌ATP降低，引起过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activatedreceptor-α，PPARα)的下调和抑制AMP激活的蛋白激酶(AMP-activatedprotein kinase，AMPK)的磷酸化。

PPARα的激活是调节心脏脂肪酸氧化(fatty acid oxidation，FAO)酶类基因表达的关键因素之一。过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(peroxi-some proliferator-activated receptor-γcoactivator-1α，PGC-1α)是心脏代谢和做功必不可少的调控子，PGC-1α与PPARα共活化可调节FAO，对心肌能量代谢和心肌损伤有重要调控作用。激活AMPK可增加葡萄糖和脂肪酸的代谢来维持ATP水平从而减轻心肌损伤，保护心脏功能；但AMPK的活化增强了脂肪酸氧化，导致葡萄糖氧化降低，增加了糖酵解的有害副产品的堆积，使ATP利用度降低，从而使心脏功能和效率降低。总体上AMPK的激活调控心肌代谢尚存在争议。上述研究提示，通过调控心肌能量代谢，有可能改善DOX引起的心肌结构和心功能损伤。但是，目前临床上缺少调控心肌能量代谢，改善心肌结构和心功能损伤的药物。

芪参益气滴丸(QSYQ)是由黄芪、丹参、三七和降香油组成的中药复方制剂。于2003年经中国国家食品药品监督管理局批准用于治疗冠心病、心绞痛，具有剂量小、服用方便、溶出速度快、可直接经粘膜吸收入血、生物利用度高、疗效高及无胃肠刺激、无明显毒副作用的特点。

临床前药效学试验表明，QSYQ可以使心肌梗塞犬的梗塞范围缩小，缺血性心电图改善，血清酶CK和LDH活性降低，血浆ET和TXB2水平降低，6-Keto-PGF1α活性和6-Keto-PGF1α/TXB2比值升高；可使心肌缺血再灌注损伤大鼠的梗塞范围缩小，SOD活性增加。QSYQ可使大鼠体外血栓长度缩短，重量减轻，并可使血浆及全血粘度降低；可使高脂血症家兔的TC、TG、LDL-C、VLDL-C水平降低，HDL-C水平升高，使主动脉TC含量和肝脏TG及MDA含量降低；并可使花生四烯酸和胶原诱导的血小板聚集率降低；犬血流动力学试验表明，QSYQ可通过扩张冠脉血管使冠脉流量增加，使心肌耗氧指数降低；在不增加左室做功情况下，使心搏出量和心输出量增加等。

但是，QSYQ能否有改善抗癌药物所引起的大鼠心肌结构和心功能损伤，能否调控心肌能量代谢等尚不清晰。

为解决上述技术问题，本发明对芪参益气滴丸进行了研究，发现其具有对抗抗癌药物的心脏毒性的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供芪参益气滴丸在对抗抗癌药物的心脏毒性中的应用。

本发明所述应用是芪参益气滴丸能改善抗癌药物所致大鼠的心肌结构损伤和心功能的降低。

本发明所述应用是芪参益气滴丸能够改善多柔比星所致的大鼠肌肉损伤和心功能障碍。

本发明所述应用是芪参益气滴丸能够改善多柔比星引起的大鼠心肌的远心性肥大。

本发明所述应用是芪参益气滴丸能够增加心脏表面血流量。

本发明所述应用是芪参益气滴丸能够上调过氧化物酶体增殖物激活受体α/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α蛋白水平，抑制AMP激活的蛋白激酶磷酸化。

本发明所述应用是芪参益气滴丸能够降低游离脂肪酸，增加ATP含量。

本发明所述芪参益气滴丸，属于现有技术，在市场上可以购买得到。也可按照现有技术制备得到，本发明所述芪参益气滴丸，其中药材各组分的重量百分比如下：

黄芪22.2％-66.8％，

丹参11.6％-33.4％，

三七2.5％-13.5％，

降香14.5％-44.3％。

优选地，所述组分的含量：黄芪44.7％、丹参26.7％、三七6.3％、降香22.3％。

或

黄芪41.2％、丹参23.8％、三七4.5％、降香30.5％。

本发明的芪参益气滴丸制备方法为：取丹参、三七药材，用水煎煮，滤过，滤液浓缩后用乙醇沉淀，上清液回收乙醇，浓缩成浸膏，即丹参三七浸膏；另取黄芪，水煎煮，滤过，滤液浓缩后用乙醇沉淀，上清液回收乙醇，浓缩成浸膏，即黄芪浸膏；取降香，加水回流提取，收集降香挥发油；将以上丹参三七浸膏，黄芪浸膏，及降香挥发油和滴丸辅料混合均匀后，按照制剂学常规技术，制成滴丸剂。

本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

试验例一

1材料和方法

1.1动物

Sprague-Dawley大鼠，雄性，体重(189土12)g，购于北京大学医学部动物中心，合格证号：SCXK(京)2006-0008。动物饲养在温度为22±2℃，湿度为40±5％的条件下，自由饮食、饮水，12h光照/黑暗交替。实验前动物禁食12h，但自由饮水。实验操作规程按欧委会指南(2010/63/EU)、北京大学动物研究委员会指南执行。实验草案获北京大学医学部实验动物伦理委员会批准(LA2011-67)。

1.2主要试剂

芪参益气滴丸(QSYQ，批号：110708)由天津天士力制药股份有限公司提供(tianjin，China)，规格：每袋0.5g；注射用盐酸多柔比星速溶型(Doxorubicin Hydrochloride for Inijection，DOX，批号：9QL0161)购于意大利辉瑞制药有限公司(Latina，Italy)，规格：每瓶冻干粉末含盐酸多柔比星10mg，乳糖50mg，对羟基苯甲酸甲酯1mg；异氟烷购于河北九派制药有限公司(Shijiazhuang，China)；TEMED和过硫酸铵APS均购于Sigma-Aldrich公司(St Louis，USA)；ECL发光液购于Pierce Biotechnology公司(Rockford，USA)；组织裂解液RIPA购于CST公司(Vermont，USA)，蛋白酶抑制剂购自Merck(Darmstadt，German)，蛋白marker购于Fermentas(Burlington，Canada)；全蛋白提取试剂盒购于Bio-Rad公司(California，USA)；5×蛋白上样缓冲液和脱脂奶粉均购于北京普利莱基因技术有限公司(Beijing，China)；BCA蛋白定量试剂盒购于Bio-Rad(California，USA)；牛血清白蛋白(BSA)购于Amresco公司(Pennsylvania，USA)；PVDF膜购于millipore公司(Billerica，USA)；PBS粉剂、EDTA抗原修复缓冲液(50×)、DAB显色试剂盒(20×)均购于北京中杉金桥生物技术有限公司(Beijing，China)；大鼠三磷酸腺苷(ATP)、大鼠一磷酸腺苷(AMP)、大鼠游离脂肪酸(FFA)酶联免疫分析ELISA测试盒购于R&D Systems公司(Minneapolis，USA)；PPARα、PGC-1α抗体购于Abcam公司(Cambridge，USA)；AMPKα、p-AMPKα(Thr172)抗体购于CST公司(Vermont，USA)。

1.3DOX所致大鼠心肌结构和心功能损伤模型建立和实验分组

取24只SD大鼠，按2.5mg/kg的给药量，隔日腹腔注射DOX，3次/周，连续2周，总剂量为15mg/kg。在DOX注射6次(第12日)后，用超声心动图检测左室射血分数，将左室射血分数降低10％者列入DOX所致心功能降低大鼠。取符合上述条件的DOX所致心功能降低大鼠14只，按完全随机法分为DOX所致心功能降低+生理盐水组(DOX 4W+NS，n＝7)和DOX所致心功能降低+QSYQ治疗组(DOX 4W+QSYQ，n＝7)。DOX 4W+NS组，从第12日起，每日灌胃给予等量的生理盐水1ml，连续2周。DOX 4W+QSYQ组，按0.2g/mL的给药量，每日灌胃给予QSYQ1ml，连续2周。另取部分大鼠，隔日腹腔注射等量生理盐水1ml，3次/周，连续2周。从第12日后，停止注射生理盐水，每日灌胃给予生理盐水1ml，连续2周，为正常对照组(Control 4W，n＝6)。

1.4大鼠左心室壁厚度和心功能的测定

在实验开始前、实验2周末、实验4周末，用高频超声诊断仪(Vevo770，Visual Sonics，Toronto，Canada)，17.5MHz高频率探头，测定大鼠左室舒张末期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张期后壁厚度(LVPWd)、左室收缩期后壁厚度(LVPWs)、左室射血分数(％EF)和左室短轴缩短率(％FS)。

1.5心脏表面血流量的测定

在给予QSYQ治疗2周末，用20％(w/v)乌拉坦，按1ml/100g的给药量，行肌肉麻醉，开胸，暴露心脏，将心脏平行放置于激光多普勒血流量图像仪(PeriScan PIM3，Perimed，Stockholm，Sweden)激光探头下，通过PeriScan PIM 3系统(Perimed，Stockholm，Sweden)测定大鼠心脏表面血流量。

1.6大鼠心脏与体重的比值

在QSYQ治疗2周末，用电子天平(CP64，Sartorius AG，Germany)称体重(BW)。开胸取出心脏，用生理盐水将血洗净，用吸纸吸去水分，用天平(CP64，Sartorius AG，Germany)称取全心质量(HW)。计算大鼠心脏与体重的比(HV//BW)。

1.7心肌形态学观察

在QSYQ治疗2周末，取心脏，4％多聚甲醛固定24h，常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，伊红-苏木精染色，体示显微镜(SZ-40，Olympus，Tokyo，Japan)下观察大体形态，光学显微镜(Digital Sight DS-5M-U1，Nikon，Tokyo，Japan)下观察心肌形态学的变化。

1.8心肌组织ATP、AMP、FFA的测定

在QSYQ治疗2周末，用ELISA法，检测大鼠心肌ATP、AMP、FFA的含量。根据ATP、AMP、FFA的ELISA检测试剂盒说明书操作。ATP按150ng/ml，100ng/ml，50ng/ml，25ng/ml，12.5ng/ml的标准品；AMP按900nmol/L，600nmol/L，300nmol/L，150nmol/L，75nmol/L；FFA按480μmol/L，320μmol/L，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L；各取50μl依次加入一排6孔中，2孔加样品稀释液的作为零孔，剩下孔加已用样品稀释液稀释的样品50μl，酶标板加盖，37℃孵育30min，稀释20倍的浓缩洗涤液洗5次，拍干，空白孔除外每孔加入酶标试剂50μl，37℃孵育30min，上述洗涤液洗5次，拍干，每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15min，每孔加终止液50μl，终止反应，用酶标仪(MULTISKAN MK3，Thermo，USA)450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，根据标准曲线计算ATP、AMP、FFA浓度。

1.9心肌组织PPARα、PGC-1α、AMPKα和p-AMPKα蛋白含量的测定

在QSYQ治疗2周末，麻醉大鼠下，取大鼠心脏，用Western blotting方法检测PPARα、PGC-1α、AMPKα和p-AMPKα蛋白含量。每100mg组织加入1ml蛋白裂解液，冰上匀浆。4℃，13000rpm，离心30min，取上清，用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。进行SDS-PAGE电泳，用12％分离胶胶检测GADPH(37kd)、PPARα(42kd)和AMPKα(62kd)；8％胶检测p-AMPKα(62kd)和PGC-1α(130kd)，加入5％浓缩胶。蛋白上样量分别为GADPH(50μg)、PPARα(50μg)、AMPKα(50μg)、p-AMPKα(300μg)和PGC-1α(300μg)，电泳，浓缩胶80V，分离胶120V，待溴酚蓝电泳至胶底时终止电泳。湿法电转移至PVDF膜，220mA转90-120min，将转完的PVDF膜封闭(AMPKα和PPARα用5％脱脂奶粉，p-AMPKα和PGC-1α用3％BSA溶液)，室温振摇封闭1小时。分别加入一抗GADPH 1∶3000，AMPKα、PPARα1∶1000，PGC-1α1∶500，pAMPK-α1∶200，4℃过夜。TBS-T洗3次，每次10min。用封闭液稀释HRP标记的二抗，GADPH、AMPK-α、PPAR-α为1∶5000，AMPK-α和PGC-1α为1∶2000，与膜共同孵育1h。TBS-T洗3次，每次10min，ECL(Pierce，Rockfor，USA，)曝光，将底片照相，LabWorks软件对图像进行灰度分析。

1.10统计方法

所有实验结果以平均值±标准误(mean±SEM)表示，用GraphPadPrism软件分析，作图。组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，并用Tukey′s honestly进一步进行组间两两比较。p＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1QSYQ对DOX引起的大鼠左心室壁厚度和心功能降低的改善作用

图1是对照4周组(Control 4W)(A1)、DOX注射2周末(DOX 2W)(A2)、DOX 4W+NS(A3)、DOX 4W+QSYQ(A4)组大鼠心脏超声心动图的图像。与Control 4W相比，DOX 2W(A2)大鼠的左室收缩末期内径(LVID)增大、左室后壁厚度(LVPW)显著变薄。DOX 4W+NS没有恢复。QSYQ投予2周后(A4)，左室收缩末期内径(LVD)、左室后壁厚度(LVPW)明显好转，该结果提示QSYQ可以改善由DOX引起的大鼠远心性心肌肥大。

表1是Control 2W、DOX 2W、Control 4W、DOX 4W+NS、DOX4W+QSYQ组大鼠心脏LVIDd、LVIDs、LVPWd、LVPWs、EF％和FS％的比较。与Control 2W相比，DOX 2W大鼠LVIDs显著升高，LVPWd、LVPWs、EF％和FS％显著下降。与Control 2W相比，DOX 4W+NS除LVIDs有所恢复外，其余均无明显改变。QSYQ治疗2周后(DOX 4W+QSYQ)，LVIDs、LVPWd、LVPWs、EF％和FS％显著地恢复。该结果提示QSYQ可以改善由DOX引起的大鼠心功能降低。

表1  QSYQ对DOX所致大鼠心脏功能的超声心动图数据

注：Control 2W表示正常对照组2周后，DOX 2W表示投入DOX 2周后，Control 4W表示正常对照组4周后，DOX 4W+NS表示模型组4周后，DOX 4W+QSYQ表示模型组给药2周后。LVIDd表示左室舒张末期内径、LVIDs表示左室收缩末期内径、LVPWd表示左室舒张期后壁厚度、LVPWs表示左室收缩期后壁厚度、左室射血分数(％EF)和左室短轴缩短率(％FS)。数值以平均值±标准误(mean±SEM)表示，^*P＜0.05vs.Control 2W，^#P＜0.05vs.DOX 4W+NS，^▲P＜0.05vs.Control4W。

2.2QSYQ对DOX引起的大鼠心脏表面血流量降低的改善作用

图2A是Control 4W(A1)、DOX 4W+NS(A2)、DOX 4W+QSYQ(A3)组大鼠心脏表面血流量的图像。与Control 4W(A1)相比，DOX 4W+NS(A2)组大鼠心脏表面血流量明显地地降低，DOX 4W+QSYQ(A3)明显地地恢复了大鼠心脏表面血流量。其定量分析结果如图2B所示。DOX 4W+NS(A2)组大鼠心脏表面血流量显著地低于Control 4W组，DOX 4W+QSYQ(A3)显著地恢复了大鼠心脏表面血流量。

2.3QSYQ对DOX引起的大鼠HW/BW的改善作用

图3A是QSYQ对DOX引起的大鼠各组HW/BW的统计结果。与Control4W相比，DOX 4W+NS大鼠的HW/BW显著升高，DOX 4W+QSYQ组大鼠的HW/BW显著地恢复。

2.4QSYQ对DOX引起的大鼠心肌损伤的改善作用

图3B、C表示Control 4W组(B1、C1)、DOX 4W+NS组(B2、C2)、DOX 4W+QSYQ组(B3、C3)大鼠心肌组织学检查结果。与Control 4W组比较，DOX 4W+NS组心脏左室内径明显增大，左室后壁变薄(B2)，出现了水肿以及纤维断裂(C2)。DOX 4W+QSYQ组的上述变化均明显地恢复。

2.5QSYQ对DOX损伤大鼠的心肌组织ATP、AMP、FFA含量和AMP/ATP比的影响

图4显示的是QSYQ对DOX损伤大鼠ATP、AMP和FFA含量，以及AMP/ATP比的影响。与Control 4W比较，DOX 4W+NS组大鼠的心肌组织ATP含量显著地降低(4A)、AMP的含量(4B)、FFA的含量(4D)，以及AMP/ATP的比显著地升高(4C)。DOX 4W+QSYQ组大鼠心肌组织的ATP含量显著地恢复，AMP、FFA含量和AMP/ATP比也显著地恢复。

2.6QSYQ对DOX损伤大鼠心肌组织PPARα、PGC-1α、AMPKα及p-AMPKα蛋白表达的影响

图5显示的是QSYQ对DOX损伤大鼠心肌组织PPARα、PGC-1α、AMPKα及p-AMPKα蛋白表达的影响。DOX 4W+NS组大鼠心肌组织PPARα和PGC-1α蛋白表达显著地降低，DOX 4W+QSYQ可显著第提高大鼠心肌组织PPARα和PGC-1α蛋白的表达(5A)。

5B是大鼠心肌组织PPARα蛋白表达的统计结果，DOX 4W+NS组大鼠心肌组织PPARα蛋白表达显著地降低，DOX 4W+QSYQ可显著第提高大鼠心肌组织PPARα蛋白的表达。

5C是大鼠心肌组织PGC-1α蛋白表达的统计结果，DOX 4W+NS组大鼠心肌组织PGC-1α蛋白表达显著地降低，DOX 4W+QSYQ可显著第提高大鼠心肌组织PGC-1α蛋白的表达。

图6显示的是QSYQ对DOX损伤大鼠心肌组织AMPKα和p-AMPKα蛋白表达的影响。DOX 4W+NS大鼠心肌组织AMPKα的表达无显著变化，但心肌组织p-AMPKα蛋白表达显著地升高(6A)，p-AMPKα/AMPKα的比显著升高。DOX 4W+QSYQ组大鼠心肌组织p-AMPKα蛋白表达显著地恢复，p-AMPKα/AMPKα的比也显著地恢复(6A、6B和图6C)。

3讨论

本研究证实了腹腔注射DOX2周可引起大鼠出现LVIDS增大，LVPWD和LVPWS变薄，EF和FS明显下降，HW/BW升高。给予QSYQ治疗2周后，可明显地改善多柔比星引起的大鼠心肌的远心性肥大，包括大鼠LVIDS增大，LVPWD和LVPWS变薄，HW/BW升高；改善DOX引起的大鼠心功能异常，包括改善EF和FS。同时，本研究还证实了QSYQ可升高DOX2损伤大鼠心肌的PPARα和PGC-1α水平，抑制AMPK活化，促进脂肪酸氧化，降低心肌游离脂肪酸，增加ATP含量。

以往的研究已经证实腹腔注射DOX可引起大鼠左室内径增大，左室壁及右室壁均变薄。本研究也模拟出了DOX引起的大鼠心功能降低的模型。在此基础上，本研究证实了在DOX引起大鼠心功能障碍发生后，连续给予QSYQ 2周的后给药，可明显地恢复心功能。形态学的结果也显示，QSYQ的后给药可以改善，DOX引起大鼠肌肉损伤。QSYQ是补气活血的复方中药制剂，以往的研究已经证实了QSYQ可以减轻压力负荷引起的大鼠心肌损伤、心肌纤维化、改善心脏灌流量和心脏功能，可以减轻缺血再灌注引起的大鼠心肌损伤、心肌纤维化有改善作用。本研究进一步证实了QSYQ可以改善DOX引起的心肌损伤和心功能障碍。心脏毒性是限制DOX临床应用的关键问题。本研究的结果可以为解决DOX临床应用的毒副反应提供潜在的可能。

心肌线粒体脂肪酸β-氧化(FAO)产生的能量是心肌能量代谢的主要来源，PPARα/PGC-1α复合体是调节脂肪酸氧化酶基因表达的主要因子。PGC-1在心肌线粒体数量和功能的调控上起着重要作用。Arany Z的研究已经证实了DOX可引起心肌的FFA含量升高、ATP含量下调，提示DOX可引起心肌能量代谢异常。本研究的重要发现是QSYQ连续给药2周后给药可以显著地上调DOX损伤大鼠心肌的PPARα和PGC-1α蛋白表达。同时恢复心肌组织中FFA的含量、提高心肌组织中ATP的含量。该结果提示QSYQ可能通过PPARα/PGC-1α的调节作用，促进脂肪酸氧化，增加ATP含量，改善心肌能量代谢，恢复心肌损伤和心功能。

以往的研究表明DOX不激活AMPK路径，甚至减少了AMPK的磷酸化。在心脏缺血缺氧状态下，AMP/ATP比值显著增高使AMPK激活，AMPKα亚基172位苏氨酸发生磷酸化。AMPK的活化增强了脂肪酸氧化，导致葡萄糖氧化降低，增加了糖酵解的有害副产品的堆积，使ATP利用度降低，从而使心脏功能和效率降低。本研究的结果是DOX可以引起AMPK的磷酸化增加，QSYQ连续给药2周后给药可以抑制AMPK的磷酸化增加，该结果可能与QSYQ增加ATP含量，减少AMP/ATP比相关。

心肌能量和心肌结构维持了心脏的射血功能。心脏的射血功能是血液灌注的动力。本研究发现，DOX损伤大鼠心肌能量和心肌结构，引发了心功能低下后，心脏的灌流量也明显降低。而QSYQ在恢复了心肌能量代谢、心肌结构和心功能的同时，也改善了心脏的灌流量。心脏灌流量的改善又有助于心肌能量代谢、心肌结构和心功能的恢复。

综上所述，QSYQ能改善DOX所致大鼠的心肌结构损伤，远心性心肌肥厚和心功能，具有抗DOX心肌毒性的作用。该作用可能与其上调PPARα/PGC-1α水平，促进脂肪酸氧化，降低心肌游离脂肪酸，增加ATP，改善AMP/ATP比，改善心肌能量代谢，改善心脏灌流量相关。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从下面结合附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1是QSYQ对DOX所致大鼠心脏超声心动图的图像。A1：Control4W，A2：DOX 2W，A3：DOX 4W+NS，A4：DOX 4W+QSYQ。LVID是左室内径，LVPWd是左室后壁厚度。

图2是QSYQ对DOX所致大鼠心脏表面血流量的影响。A是Control4W组(A1)、DOX 4W+NS组(A2)和DOX 4W+QSYQ组(A3)的心脏表面血流量图像，红色表示高流量，蓝色表示低流量。B是QSYQ对DOX所致大鼠各组心脏表面血流量的定量分析结果。数值以平均值±标准误(mean±SEM)表示，^*P＜0.05vs.Control 4W，#P＜0.05vs.DOX4W+NS。

图3是QSYQ对DOX所致大鼠心肌损伤的影响。A是各组大鼠HW/BW统计学结果，数值以平均值±标准误(mean±SEM.)表示，^*P＜0.05vs.Control 4W，#P＜0.05vs.DOX4W+NS。B：心肌组织HE染色图像。C是心肌组织HE染色高倍图像。1表示Control 4W组、2表示DOX4W+NS组、3表示DOX 4W+QSYQ组、E表示水肿、FB表示肌纤维断裂、Bar＝20μm。

图4表示QSYQ对DOX引起的大鼠心肌组织ATP、AMP、FFA以及AMP/ATP的影响。A、B、C和D是各组心肌组织ATP、AMP、AMP/ATP和FFA的ELISA统计结果。数值以平均值±标准误(mean±SEM)表示，^*P＜0.05vs.Control 4W，#P＜0.05vs.DOX4W+NS。

图5表示QSYQ对DOX引起的大鼠心肌组织PPARα和PGC-1α蛋白的影响。A是QSYQ对DOX引起的大鼠心肌组织PPARα和PGC-1α的Western Blott图像。B和C是PPARα和PGC-1αWestern Blott统计结果。数值以平均值±标准误(mean±SEM)表示，^*P＜0.05vs.Control 4W，^#P＜0.05vs.DOX4W+NS。

图6表示QSYQ对DOX引起的大鼠心肌组织AMPKα和p-AMPKα蛋白的影响。A是QSYQ对DOX损伤大鼠心肌组织AMPKα和p-AMPKα蛋白表达的Western Blott图像。B和C是p-AMPKα和AMPKα表达的统计结果。数值以平均值±标准误(mean±SEM.)表示，^*P＜0.05vs.Control 4W，^#P＜0.05vs.DOX4W+NS。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能解释为对本发明的限制。

实施例一

取黄芪86.5g、丹参21.3g、三七3.5g、降香20.6g、辅料聚乙二醇-600030g。将经粉碎的丹参、三七，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至900ml，加入95％乙醇，使醇浓度达到70％，静置12～24小时，滤过，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.32～1.38(50～60℃)的浸膏；将经粉碎的黄芪，加水煎煮2次，每次加6倍量水，依次提取2小时、1小时，合并滤液，浓缩至1500ml左右时，加95％乙醇使醇浓度为60％，静置12～24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至400ml左右时，加95％乙醇使醇浓度为80％，静置12～24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成相对密度为1.32～1.38(50～60℃)的浸膏；取降香，加5倍量水，回流提取5小时，收集挥发油；取上述丹参三七浸膏、黄芪浸膏及聚乙二醇-6000，水浴溶化，化匀后，加入降香挥发油，混匀，移至滴丸机中，制成1000粒滴丸。

实施例二

取黄芪40.6g、丹参44.8g、三七11.2g、降香38.6g，辅料聚乙二醇-600030g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

实施例三

取黄芪77.3g、丹参22.8g、三七4.8g、降香30.5g、辅料聚乙二醇-600028g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

实施例四

取黄芪42.3g、丹参39.2g、三七8.2g、降香46.8g、辅料聚乙二醇-600025g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

实施例五

取黄芪65.2g、丹参38.9g、三七9.3g、降香32.5g、辅料聚乙二醇-600040g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

实施例六

取黄芪56.2g、丹参32.5g、三七6.2g、降香41.6g、辅料聚乙二醇-600022g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

实施例七

取黄芪36.5g、丹参32.4g、三七6.2g、降香41.7g、辅料聚乙二醇-600022g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

实施例八

取黄芪65.6g、丹参25.8g、三七9.5g、降香46.4g，辅料聚乙二醇-600035g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

实施例九

取黄芪35.5g、丹参50.8g、三七16.3g、降香52.3g、辅料聚乙二醇-600035g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.芪参益气滴丸在对抗抗癌药物的心脏毒性中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于芪参益气滴丸能改善抗癌药物所致大鼠的心肌结构损伤和心功能的降低。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于芪参益气滴丸能够改善多柔比星所致的大鼠心肌损伤和心功能障碍。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于芪参益气滴丸能够改善多柔比星引起的大鼠心肌的远心性肥大。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于芪参益气滴丸能够增加心脏表面血流量。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于芪参益气滴丸能够上调过氧化物酶体增殖物激活受体α/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α蛋白水平。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于芪参益气滴丸能够降低游离脂肪酸，增加ATP含量。

8.根据权利要求1所述应用，其特征在于所述芪参益气滴丸由以下重量配比的中药原料药制备而成

黄芪22.2％-66.8％，

丹参11.6％-33.4％，

三七2.5％-13.5％，

降香14.5％-44.3％。

9.根据权利要求1所述应用，其特征在于所述芪参益气滴丸由以下重量配比的中药原料药制备而成，黄芪41.2％、丹参23.8％、三七4.5％、降香30.5％；芪参益气滴丸制备方法为：取丹参、三七药材，用水煎煮，滤过，滤液浓缩后用乙醇沉淀，上清液回收乙醇，浓缩成浸膏，即丹参三七浸膏；另取黄芪，水煎煮，滤过，滤液浓缩后用乙醇沉淀，上清液回收乙醇，浓缩成浸膏，即黄芪浸膏；取降香，加水回流提取，收集降香挥发油；将以上丹参三七浸膏，黄芪浸膏，及降香挥发油和滴丸辅料混合均匀后，按照制剂学常规技术，制成滴丸剂。

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