CN103520242A

CN103520242A - 超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法

Info

Publication number: CN103520242A
Application number: CN201310490396.8A
Authority: CN
Inventors: 朱晓伟; 陈建平; 王来兵; 布仁; 郭晓宇; 杜艳青
Original assignee: Inner Mongolia Medical University
Current assignee: Inner Mongolia Medical University
Priority date: 2013-10-18
Filing date: 2013-10-18
Publication date: 2014-01-22
Anticipated expiration: 2033-10-18
Also published as: CN103520242B

Abstract

本发明公开了一种超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法，具体包括步骤：称取蒙药漏芦花粉末，加入石油醚加热回流，过滤，干燥至无石油醚味，加入蒸馏水，浸泡30min，超声处理，过滤，滤液用水饱和正丁醇萃取。

Description

超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法

技术领域

本发明属于药物有效成分提取领域，特别地，涉及漏芦花总皂苷提取。

背景技术

漏芦花，蒙名为洪古乐-珠日，是祁州漏芦的干燥花。祁州漏芦Rhaponticum unifLorum（L.）DC属于菊科管状花亚科祁州漏芦属植物。祁州漏芦的根为常用中药，具有清热解毒、消痈肿、下乳汁的功效。蒙医用祁州漏芦的干燥花，认为其具有杀“粘”，止刺痛、清热、解毒、解表等功效，主治感冒、心热痢疾、血热、麻疹及传染性热症等，在蒙医临床中有较长的使用历史。药理研究发现皂苷具有广泛的心血管药理活性，表现为提高浆膜的渗透性、正性肌力、抗心律失常、舒张血管、降低血压、止痛、抗高胆固醇和保护毛细血管等作用；抗微生物作用；抗真菌作用；免疫调节作用；有些还有去痰作用及促子宫收缩作用；抗炎、抗肿瘤、抗凝血等重要药理活性。此外，皂苷还具有镇静、抗病毒、免疫调节、提高学习记忆能力、保护脑损伤及心肌缺血损伤、抗衰老及抗疲劳等多方面的功能。因此,对蒙药漏芦花皂苷的开发与利用具有十分重要的现实意义。超声提取法是利用超声波的空化作用、机械作用、热效应等以增大物质分子的运动频率和速度,增加溶剂穿透力,从而提高目标成分的浸出率，该法适用于对热敏感、在较高温度易被酶水解破坏的有效成分的提取，并以提取温度低、提取率高、提取时间短、设备廉价等特点广泛应用于中蒙药材和各种动植物有效成分的提取中。

发明内容

本发明提供了一种超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法，具体包括步骤：称取蒙药漏芦花粉末，按重量体积比1：10加入石油醚于50℃水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，按重量体积比1：40（料液比）加入蒸馏水，浸泡30min，超声温度60℃，超声功率140W，超声15min，过滤，滤液用水饱和正丁醇以等体积萃取。

本发明提供了一种新的高效的漏芦花总皂苷的提取方法，同时发明人发现，料液比、超声功率、超声时间、超声温度四个因素对提取效率有着重大的影响，因此创造性的确定了最佳的提取工艺，同时发明人还发现，发明也发现石油醚回流、缓冲液浸泡等工艺步骤对于提取效率也有一定的影响，也同时确定了最佳的技术参数。

附图概要说明

图1，对照品与供试品光谱叠加图

图2，标准曲线图

图3，超声功率对漏芦花总皂苷提取率的影响

图4，超声时间对漏芦花总皂苷提取率的影响

图5，超声温度对漏芦花总皂苷提取率的影响

图6，料液比对漏芦花总皂苷提取率的影响

具体实施方式

实施例1

精密称取蒙药漏芦花粉末1.0g，加10mL石油醚于50℃水浴加热回流2h,过滤，干燥至无石油醚味，将其置于锥形瓶中，加入蒸馏水40mL（即料液比1:40），浸泡30min，超声温度60℃，超声功率140W，超声15min。过滤，滤液与水饱和正丁醇以等体积萃取，萃取三次，合并滤液，挥干，用无水乙醇洗出，定容至25mL。

实施例2，工艺优选参数的确定

1仪器与试剂

1.1仪器

电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；电子恒温不锈钢水浴锅（余姚市上通温控仪表厂）；AB135-S分析天平（Made inSwitzerland)；恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)；旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司)；循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；TU-1901型双光束紫外分光光度计（北京普析通用有限责任公司）；LX-07A多功能粉碎机（上海江信科技有限公司)；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KH5200DE型高功率数控超声清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；BSA124S型电子天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司)

1.2药材及试剂

漏芦花（采自呼和浩特市大青山，经内蒙古医科大学药学院药用植物教研室乔俊缠教授鉴定为菊科管状花亚科祁州漏芦属植物的干燥花），石油醚、无水乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋酸，以上试剂均为分析纯，薯蓣皂苷元标准品(中国药品生物制品检定所,批号：111539-200001)

2方法

2.1对照品溶液的制备

精密称取薯蓣皂苷元5.0mg，置于25mL容量瓶中，用无水乙醇溶解，定容，摇匀，即得浓度为200μg/mL的薯蓣皂苷元对照品溶液，避光放置备用。

2.2供试品溶液的制备

精密称取漏芦花粉末1.0g，加10mL石油醚于50℃水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，将其置于锥形瓶中，超声，过滤，滤液用水饱和正丁醇以等体积萃取，萃取三次，合并滤液，挥干，用无水乙醇洗出，定容至25mL，在提取工艺研究中改变相应参数。

2.3测定波长的选择

精密量取对照品及供试品溶液0.5mL于10mL具塞试管中，挥干溶剂，加入新配制的5%香草醛-冰醋酸0.2mL，高氯酸0.8mL，于60℃水浴下反应20min，冷却后加入冰醋酸定容至10mL，于200-600nm进行波长扫描，结果显示对照品和供试品均410nm处有最大吸收，故选择410nm为测定波长。结果见图1。

2.4标准曲线的制备

精密量取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL对照品溶液于10mL具塞试管中，按2.3项下显色，在410nm处测量吸光度，以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=0.025X+0.004(r=0.9999,n=6)，浓度在4.176-20.88μg/mL内与吸光度呈良好的线性关系。结果见表1及图2。

表1回归方程表

2.5单因素试验及正交实验

2.5.1超声功率的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声时间30min，料液比1:30，温度为30℃的条件下，超声功率分别为120W,140W,160W,180W,200W,按2.2项下操作及2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。结果见表2

表2超声功率单因素试验结果

2.5.2超声时间的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声功率200W，料液比1:30，温度为30℃的条件下，超声时间分别为15min,20min,25min,30min,35min,按2.2项下操作及2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。结果见表3

表3超声时间单因素试验结果

2.5.3温度的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声功率200W，超声时间为30min，料液比1:30的条件下，温度分别为30℃,40℃,50℃,60℃,70℃，按2.2项下操作及2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。结果见表4

表4温度单因素试验结果

2.5.4料液比的单因素试验

精密称取蒙药漏芦花1.0g，在超声功率200W，超声时间为30min的条件下，料液比分别为1:25,1:30,1:35,1:40,1:45,按2.2项下操作及2.3项下显色方法，测其吸光度，计算总皂苷含量。结果见表5

表5料液比单因素试验结果

2.5.5正交试验

由单因素试验图3—图6可知，随着超声功率的增加，蒙药漏芦花总皂苷的提取率呈上升趋势，但当超声提取功率上升到140W后，皂苷提取率随着提取功率上升反而下降，故选定超声功率120W,140W,160W三个较优的水平做正交试验；随着超声时间的增加，蒙药漏芦花总皂苷的提取率呈上升趋势，但当超声时间增加到20min后，总皂苷提取率随着提取时间上升反而下降，故选定超声时间15min,20min,25min三个较优的水平做正交试验；随着超声温度的增加，蒙药漏芦花总皂苷的提取率呈上升趋势，但当超声温度上升到

50℃后，皂苷提取率随着提取温度上升反而下降，故选定超声温度

40℃,50℃,60℃三个较优的水平做正交试验；随料液比的增加，蒙药

漏芦花总皂苷含量增大，且料液比为1∶35时所测得的总皂苷含量与

料液比为1∶40时相差不大，因此选择料液比1:30,1:35,1:40作为正

交试验较优的3个水平，平行做3份，取平均值，结果见表6、7、8。

表6因素水平表

表7L9(34)正交试验结果表（1）

表8正交试验结果表（2）

表9方差分析表

由表9方差分析可知，料液比和超声温度对结果影响较大，而提取时间和超声功率的影响较小。超声提取工艺正交试验结果表明，各因素在所选水平上对漏芦花总皂苷提取效果的影响为：超声温度（D）>料液比（A）>超声功率（B）>超声时间（C）。其提取工艺最优组合为A3B2C1D3，即料液比1:40，超声功率140W，超声时间15min，超声温度60℃。

2.6含量测定（工艺验证性试验）

按2.2项下的方法以最佳提取工艺（超声温度60℃，超声时间15min,超声功率140W，料液比1:40）提取蒙药漏芦花总皂苷，按2.3项下的方法显色，在410nm处测定吸光度，由回归方程计算总皂苷含量为0.8712%，RSD为0.32％。验证试验的结果表明该工艺稳定可行。结果见表10。

表10含量测定结果

3方法学考察

3.1稳定性试验

精密量取供试品溶液0.4mL，按2.3项下方法显色，在410nm处每15min测定一次吸光度，测定2h。RSD为1.35%，结果表明供试品溶液在2h内稳定性较好。

3.2精密度试验

精密量取同一供试液溶液6份,每份0.4ml，按2.3项下的显色方法显色，以相应试剂为空白,于410nm处测定吸光度，计算总皂苷含量。RSD为0.52%，表明精密度良好。

3.3重复性试验

精密称取蒙药漏芦花粉末1.0g，6份,按2.2项下方法操作，按2.3项下方法显色，在410nm处测定吸光度，计算总皂苷含量，RSD为0.32%，结果表明该方法重复性良好。

3.4加样回收试验

精密称取蒙药漏芦花粉末0.5g,6份,分别加入80%、100%、120%的薯蓣皂苷元对照品各2份，按2.2项下供试品溶液的制备和2.3项下显色方法,在410nm处测定吸光度,计算加样回收率,平均回收率为97.19％，RSD为1.32％，结果表明本实验的加样回收率良好，结果见表11。

表11加样回收率试验结果

4工艺放大试验

精密称取蒙药漏芦花6份，每份20g，按2.2项下方法以最佳的提取工艺（超声温度60℃，超声时间15min,超声功率140W，料液比1:40）提取总皂苷，按2.3项下方法显色，410nm处测定吸光度，总皂苷含量分别为0.8741%，0.8725%，0.8693%，0.8721%，0.8684%，0.8698%，平均含量为0.8710%，RSD为0.25%，结果表明该方法适合于放大生产。结果见表12

表12工艺放大性试验结果

5、石油醚回流、缓冲液浸泡的影响

表13最佳工艺条件下，经石油醚回流、缓冲液浸泡含量结果

由以上最佳工艺条件下，经石油醚回流、缓冲液浸泡含量与未经石油醚回流、缓冲液浸泡含量比较，前者为0.8712%后者为0.6770%。

6讨论

为使蒙药漏芦花总皂苷的提取更完全，在提取之前，必须首先破坏脂类与其他非脂成分的结合，因此实验前须将药材用石油醚进行脱脂处理。超声提取蒙药漏芦花皂苷时，若提取温度太高或功率过大将增加各种杂质的溶出，也可能引起皂苷的热敏损失，反而不利于皂苷的提取，超声在短时间内就可达到最大效率，提取次数对总皂苷的提取率影响很小，故本试验未考虑提取次数。皂苷类化合物为蒙药漏芦花中的主要成分之一，亦是其活性成分，若提取方法不当，会使测定结果偏离真实值，影响对蒙药漏芦花质量的真实评价，而超声提取法具有效率高、价格低、无污染、易获得等优点，在提取效果上具有产量高，纯度好等特点。本试验采用超声提取蒙药漏芦花总皂苷，可保证较高的提取效率，是目前较好的选择，为漏芦花总皂苷的提取研究提供了理论指导，也为今后的研究奠定了基础。

Claims

1.一种超声提取蒙药漏芦花总皂苷的方法，其特征在于包括步骤：称取蒙药漏芦花粉末，按重量体积比1：10加入石油醚于50℃水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，按重量体积比1：40（料液比）加入蒸馏水，浸泡30min，超声温度60℃，超声功率140W，超声15min，过滤，滤液用水饱和正丁醇以等体积萃取。