CN103509104A - 一种规模化收集人尿蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种规模化收集人尿蛋白的方法。该方法包括如下步骤:将分装好的用于吸附尿蛋白的吸附剂放置在尿液流经处,使得吸附剂可以吸附尿液中的尿蛋白;收集吸附尿蛋白的吸附剂;并进行预处理;预处理后的吸附剂冷藏储存;批量运至加工厂进行尿蛋白解吸处理,生产相应的尿蛋白原料或尿蛋白制品。采用该技术方案收集人尿蛋白的方法,适合规模化、产业化生产尿蛋白,提高了尿蛋白的处理批量,减少了吸附剂的运输成本和尿蛋白的生产成本,在吸附有尿蛋白的吸附剂储存之前进行相应的预处理,保存了尿蛋白的活性,减少了尿蛋白的降解,减少了微生物的滋生,提高了尿蛋白产品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种规模化收集人尿蛋白的方法,主要应用于人尿胰蛋白酶抑制剂、人尿激肽原酶、人尿白蛋白、人尿激酶等尿蛋白原料粗制品的生产。
背景技术
人尿是人体蛋白一种重要的来源。人尿中含有数百种蛋白质,已经探明的具有重要药用价值的也有数十种。目前仅人尿胰蛋白酶抑制剂((Human Urinary Trypsin Inhibitor)、人尿激肽原酶(Urinary Kallidinogenase)、尿激酶(Urokinase)、HMG(尿促性素)、FSH(促卵泡生成素)、HCG(绒促性素)等少数几种功能性尿蛋白产品得到成功开发,并分别在治疗急性胰腺炎、休克和急性脑梗、心梗等临床危重症、人工辅助生殖等领域发挥了非常重要的作用。
尿蛋白除了用于临床治疗外,在动物细胞培养基、诊断和检测试剂、化妆品等方面也有很大的应用空间。在基因工程药物和疫苗生产等方面,无血清培养基中往往需要外加一些重要的人源蛋白质,如白蛋白(Human serum albumin)、转铁蛋白(Serum Transferrin)、EGF(Epidermal Growth Factor)等,而尿液中也有这些蛋白,如能开发并产业化生产,将具有很好的市场前景。
尿液中有很多具有开发价值的功能性尿蛋白,目前无论在种类还是在规模上均很局限,使这种宝贵的人体蛋白资源白白浪费。限制尿蛋白的开发和产业化的最重要因素在于尿蛋白来源的限制。
目前,国内外生产尿蛋白,均需先收集尿液,再提取尿蛋白,成本高、对环境有影响,加上城市卫生化改造,尿液收集的难度越来越大,这严重影响了尿蛋白产品的开发和市场发展。因此,尿蛋白原料的制备方法亟待突破,克服目前的限制。
采用离子交换树脂作为尿蛋白吸附剂,放置在尿槽或者尿斗中,吸附流经该树脂的尿液或者稀释尿液中的尿蛋白。该方法在大量冲水的环境中也能有效吸附尿蛋白,收集过程对周围环境没有明显影响,因此,在对环境卫生要求较高的场所也可以放置,进行尿蛋白的吸附,因此,尿蛋白可收集范围大幅度扩大。
由于尿蛋白不稳定,容易变性失活、甚至降解,且吸附尿蛋白的树脂,也很容易出现微生物的大量滋生,所以,树脂必须在收集后尽快解吸,而时间对处理的批量有极大的相关性。从收集到处理的时间短,就需要将刚收集的吸附剂及时运输到加工厂,运输的批量小,单次处理批量小,蛋白变性或降解较少、微生物滋生较轻,但运输成本和生产成本极高,规模也严重受限;从收集到处理的时间跨度长,需要将收集后的吸附剂积累到一定数量后运输到加工厂,单次处理批量大,运输成本和生产成本低,但蛋白变性或降解严重、微生物滋生严重,难以生产出合格的产品。
将上述从尿液中收集尿蛋白方法用于尿蛋白原料的生产,为了实现规模化、产业化生产,就需要积累足够批量的吸附剂集中运往加工厂进行处理,在积累足够数量的吸附剂的时候,必须解决在保存吸附剂的时候尿蛋白的活性降低,蛋白降解,控制微生物生长的问题。该问题也是本申请人亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术存在的不足,提供一种规模化收集人尿蛋白的方法,该方法适合规模化、产业化生产尿蛋白,提高了尿蛋白的处理批量,减少了吸附剂的运输成本和尿蛋白的生产成本,在吸附有尿蛋白的吸附剂储存之前,进行相应的预处理,保证了尿蛋白的活性,减少了尿蛋白的降解,减少了微生物的滋生,提高了尿蛋白产品的质量。
为实现上述目的,本发明规模化收集人尿蛋白的方法的技术方案是:
一种规模化收集人尿蛋白的方法,包括如下步骤:
a) 将分装好的用于吸附尿蛋白的吸附剂放置在尿液流经处,用于吸附尿液中的尿蛋白;
b) 收集吸附尿蛋白的吸附剂;
c) 对吸附尿蛋白的吸附剂进行预处理,防止吸附剂内的尿蛋白变性失活或降解,减少微生物的滋生;
d) 预处理后的吸附剂冷藏储存;
e) 将吸附尿蛋白的吸附剂批量运至加工厂进行尿蛋白解吸处理,生产相应的尿蛋白原料或尿蛋白制品。
在将吸附有尿蛋白的吸附剂储存之前,对吸附剂进行预处理,防止尿蛋白变性失活、降解,减少了微生物的滋生,便于将吸附剂积累到足够数量时再运往加工厂,减少了运输成本,同时也提高了生产设备的单次生产批量,降低了生产成本,提高了生产效率,实现了从人尿中生产尿蛋白的规模化和产业化,解决了尿蛋白无法规模化生产和生产成本较高的难题。
步骤c)吸附尿蛋白的吸附剂预处理方法为:用清水对吸附剂进行浸泡清洗和脱水,用于去除吸附剂表面和内部的残留尿液、微生物以及尿垢。清水浸泡可以使清水进入吸附剂的内部,脱水可以将吸附剂内部的液体甩出,即将尿液、微生物、尿垢等有可能破坏尿蛋白产品质量的物质甩出,对吸附剂可以采用脱水机或者离心机进行脱水;脱水后的吸附剂冷藏保存,在低温环境中防止尿蛋白变性降解,减少了微生物的滋生,提高了吸附剂内尿蛋白的储存时间,便于收集足够多的吸附剂后一起运输至加工厂,减少了运输成本,保证了尿蛋白的质量。
进行多次重复清水浸泡和脱水,用于彻底去除吸附剂内部的尿液、微生物以及尿垢。多次重复清水浸泡清洗和脱水,便于较彻底清除尿液、微生物和尿垢,提高了吸附有尿蛋白的吸附剂的储藏时间。
在清水浸泡清洗之前进行高压水流冲洗用于冲洗尿垢。采取一般的水流冲洗,很难去除附着在树脂表面的尿垢,更难去除大孔型树脂内部网状结构中残留的尿液,高压水流冲洗,可以对吸附剂上的尿垢产生足够多的冲击力和振动力,提高了尿垢的清除,同时可以使水更好的进入吸附剂的内部,有利于将残留尿液、微生物和尿垢的去除。
在环境温度大于25℃时加冰冷却。加冰冷却可以抑制微生物的生长,抑制尿蛋白的变性失活和降解,保证了尿蛋白的质量。
步骤d)的冷藏温度不高于10℃,步骤e)在运输吸附剂时采用冷藏运输,运输温度不高于20℃。采用冷藏运输可以抑制微生物的生长,抑制尿蛋白的变性失活和降解,保证了尿蛋白的质量。
在收集吸附尿蛋白的吸附剂时,环境温度大于25℃通过加冰进行冷却。加冰冷却可以抑制微生物的生长,抑制尿蛋白的变性失活和降解,保证了尿蛋白的质量。
所述的吸附剂为树脂,为阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、阴阳离子混合树脂或者同时具有阳离子交换基团和阴离子交换基团的两性树脂。作为优选采用大孔型树脂。
树脂骨架为聚苯乙烯、聚丙烯酸、酚醛树脂、琼脂糖任意一种或几种;配基为磺酸基、羧酸基、磷酸基阳离子交换基团和伯胺、仲胺、叔胺和季胺基阴离子基团。作为优选采用大孔型树脂。
在吸附等电点低于6.0的蛋白时,采用配基为季胺基的大孔型聚苯乙烯树脂和聚丙烯酸树脂;在吸附等电点高于7.0的蛋白时,采用配基为-SO3 -的大孔型聚丙烯酸树脂和聚苯乙烯树脂;同时吸附等电点低于6.0的蛋白和等电点高于7.0的蛋白时可采用阴阳离子混合树脂或者同时具有阳离子交换基团和阴离子交换基团的两性树脂。如人尿胰蛋白酶抑制剂、人尿激肽原酶为等电点低于6.0的蛋白,在尿液中容易与季胺基结合;尿激酶为等电点高于7.0的蛋白在尿液中容易与-SO3 -结合。
选用50-150目的尼龙滤布制作的袋子作为分装树脂的滤袋。
作为优选,50目的尼龙滤布制作的滤袋,透水性好且保证了树脂不流失。
树脂在厕所的放置时间一般可以根据情况而定,如果放置时间短,吸附的蛋白量较少,如果放置时间较长,蛋白可能变性、降解等,作为优选,放置在厕所中的时间为24小时。
树脂从收集、高压水冲洗、清水浸泡清洗到脱水这一阶段,需要全程温度控制,控制在25℃以下,在气温高于25℃时,可以使用冰块来降低树脂的温度。
收集的吸附尿蛋白的树脂预处理后放置在10℃以下冷库中冷藏,积累到一定数量后,再冷藏运输到尿蛋白生产工厂进行后续的加工处理,生产相应的尿蛋白产品,如人尿胰蛋白酶抑制剂原料、尿激酶原料、人尿激肽原酶原料等产品。
本发明与现有技术相比,具有以下优点:
较以尿液收集为核心的传统的尿蛋白生产工艺,本发明可实现规模化尿蛋白的在线吸附,无需收集尿液,直接吸附尿蛋白。对收集环境无明显影响,可大幅度扩展尿蛋白的收集范围;
在将吸附有尿蛋白的吸附剂储存之前,对吸附剂进行预处理,防止尿蛋白变性失活、降解,减少了微生物的滋生,保证了最后生产出来的尿蛋白的质量,便于将吸附剂积累到足够数量时再运往加工厂,减少了运输成本,同时也提高了生产设备的单次生产批量,降低了生产成本,提高了生产效率,实现了从人尿中生产尿蛋白的规模化和产业化,解决了尿蛋白无法规模化生产和生产成本较高的难题,为尿蛋白药品的售价降低提供有力的基础;
由于采取高压水流清洗,结合清水浸泡、脱水,实现离子交换树脂内外有效的清洁,可更好的抑制微生物的生长;
全程的温度控制,尿蛋白处于比较洁净的状态,抑制微生物的活性和生长,避免了尿蛋白的变性和活性丧失;
整个过程以较低的成本,实现了尿蛋白活性的有效保存和微生物生长的有效抑制,工艺容易放大,从而为规模化操作奠定了基础;
由于实现规模化操作,质量的可控制更强,产品质量更稳定;
经大量的研究,对吸附尿蛋白的吸附剂经过预处理后,收集的吸附剂达到一定量后,冷藏运输到加工厂集中处理,生产相应的尿蛋白原料粗制品。吸附有尿蛋白的吸附剂在超过10天的保存期内,尿胰蛋白酶抑制剂等尿蛋白无明显变性或降解,微生物的滋生也得到明显抑制,大幅度延长了从收集到处理的时间跨度,从而大大提高树脂处理的规模,大幅度降低了处理成本,且质量符合要求,为规模化生产尿蛋白原料奠定了基础。
附图说明
图1是实施例1 中A分人尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图2是实施例1 中B分人尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图3是实施例1中C分人尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图4是实施例2中人尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图5是实施例3中人尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图6是实施例4中人尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图7是实施例5中人尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图8 是实施例6中A分中尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图9是实施例6中B分中尿胰蛋白酶抑制剂的高效液相色谱图。
图10是实施例7中SDS-PAGE凝胶电泳检测结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式,进一步阐明本发明,应理解这些实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围,在阅读了本发明之后,本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
一种规模化收集人尿蛋白的方法,包括如下步骤:
a) 将分装好的用于吸附尿蛋白的吸附剂放置在尿液流经处,用于吸附尿液中的尿蛋白;
b) 收集吸附尿蛋白的吸附剂,在收集吸附剂的过程中,环境温度大于25℃时加冰冷却;
c) 在对吸附尿蛋白的吸附剂储存之前,进行预处理,预处理方法是对吸附剂进行高压水流冲洗、清水浸泡清洗和脱水,用于去除吸附剂中残留的尿液、微生物以及尿垢。用于防止吸附剂内的尿蛋白变性失活,甚至降解,减少微生物的滋生,根据情况可以对高压水流冲洗后的吸附剂进行多次清水浸泡清洗和脱水,在预处理的过程中,环境温度大于25℃时加冰冷却;
d) 预处理后的吸附剂冷藏储存,用于积累吸附剂的数量,冷藏温度不高于10℃;
e) 将预处理后的吸附剂批量运至加工厂进行尿蛋白解吸处理,生产相应的尿蛋白原料或尿蛋白制品,在运输吸附剂时采用冷藏运输,运输温度不高于20℃。
所述的尿蛋白包括尿胰蛋白酶抑制剂、人尿激肽原酶、人尿白蛋白、尿激酶。
所述的吸附剂为树脂,为阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、阴阳离子混合树脂或者同时具有阳离子交换基团和阴离子交换基团的两性树脂,树脂骨架为聚苯乙烯、聚丙烯酸、酚醛树脂、琼脂糖任意一种或几种;配基为磺酸基、羧酸基、磷酸基阳离子交换基团和伯胺、仲胺、叔胺和季胺基阴离子基团,在吸附等电点低于6.0的蛋白时,采用配基为季胺基的大孔型聚苯乙烯树脂和聚丙烯酸树脂;在吸附等电点高于7.0的蛋白时,采用配基为-SO3 -的大孔型聚丙烯酸树脂和聚苯乙烯树脂;同时吸附等电点低于6.0的蛋白和等电点高于7.0的蛋白时可采用阴阳离子混合树脂或者同时具有阳离子交换基团和阴离子交换基团的两性树脂。
实施例1
24小时实验气温16~22℃,将150Kg大孔型阴离子树脂(配基为季胺基(-N+R3)的聚苯乙烯树脂)经酸、碱再生,再按0.5~5Kg/袋的量分装于50目滤袋中,然后置尿槽或尿斗中进行尿蛋白的在线吸附,24小时后收集,运回加工点后混匀,将混合均匀的树脂分成A、B、C三份,每份50Kg。其中A,清水浸洗、离心脱水后置冷库储存10天;B清水漂洗后置冷库储存10天;C清水漂洗后立即用1mol/L氯化钠溶液洗脱,再经超滤浓缩,硫酸铵沉淀,硅藻土过滤,吹干,得到215g尿蛋白粗制品,含尿胰蛋白酶抑制剂4.15万U/g,人尿激肽原酶1.20PNAU/g。
10天后取A、B树脂分别用1mol/L氯化钠溶液洗脱,再经超滤浓缩,硫酸铵沉淀,硅藻土过滤,吹干制成尿蛋白粗制品。其中“A”制得粗制品210g,含尿胰蛋白酶抑制剂4.02万U/g,人尿激肽原酶1.30PNAU/g;“B”制得粗制品190g,含尿胰蛋白酶抑制剂2.85万U/g,人尿激肽原酶0.60PNAU/g。
分别对三份粗制品进行组分分析,其A产品中尿胰蛋白酶抑制剂成分为单峰(见图1,保留时间11.665min),而B产品中尿胰蛋白酶抑制剂成分降解十分严重,其尿胰蛋白酶抑制剂有效成分几乎没有(见图2),C产品中尿胰蛋白酶抑制剂成分也为单峰(见图3,保留时间11.782min),但峰形拖尾较严重,有较明显的降解物。
分别取上述“A、B、C”三份经不同预处理方法处理后的吸附剂,进行菌落检查,其“A”的菌落总数为360CFU/g,“B”的菌落总数为9600CFU/g,“C”的菌落总数为950CFU/g。很明显,针对A份吸附剂的预处理方法能够更有效的降低微生物数量,有利于较长时间的储存。
从上述实施例可见,本发明的树脂清水浸洗、脱水预处理方式明显减少了产品中微生物的数量,对尿蛋白的降解有明显的抑制,能够提高吸附尿蛋白树脂的保存时间。
实施例2
24小时实验气温22~31℃ ,将100Kg大孔型阴离子树脂(配基为季胺基(-N+R3)的聚苯乙烯树脂)经酸、碱再生,再按0.5~5Kg/袋的量分装于50目滤袋中,然后置尿槽或尿斗中进行尿蛋白的在线吸附,24小时后收集运输至加工点,用高压清洗机产生高压水流进行清洗,置冷库储存10天,用1mol/L氯化钠溶液洗脱,再经超滤浓缩,硫酸铵沉淀,硅藻土过滤,吹干制成尿蛋白粗制品390g,含人尿胰蛋白酶抑制剂3.50万U/g。通过对该粗品的组分分析,虽然有尿胰蛋白酶抑制剂主成分峰(见图4,保留时间11.540min),但降解依然非常严重(见图4,保留时间12.190min峰)。
由此可知,只采用高压水流清洗,难以较彻底清除树脂内部的微生物,残留的微生物会导致尿蛋白的降解。
实施例3
24小时实验气温22~32℃ ,将100Kg大孔型阴离子树脂(配基为季胺基(-N+R3)的聚苯乙烯树脂)经酸、碱再生,再按0.5~5Kg/袋的量分装于50目滤袋中,然后置尿槽或尿斗中进行尿蛋白的在线吸附,24小时后收集运输至加工点,用高压清洗机产生高压水流清洗,离心脱水,置冷库储存10天后,按照实施例2的方法制得尿蛋白粗制品410g,含人尿胰蛋白酶抑制剂3.80万U/g。通过对该粗品的组分分析,虽然已有明显的尿胰蛋白酶抑制剂主成份峰(见图5,保留时间11.648min),但降解依然比较严重。
实施例4
24小时实验气温30~40℃ ,将100Kg大孔型阴离子树脂(配基为季胺基(-N+R3)的聚苯乙烯树脂)经酸、碱再生,再按0.5~5Kg/袋的量分装于50目滤袋中,然后置尿槽或尿斗中进行尿蛋白的在线吸附,24小时后收集并采取加冰块方法降低吸附剂温度,运输至加工点,用高压清洗机产生高压水流进行清洗,清水浸泡清洗,离心脱水,置冷库储存10天后,按照实施例2的方法制得尿蛋白粗制品430g,含尿胰蛋白酶抑制剂活性为4.26万U/g,含人尿激肽原酶1.6PNAU/g。通过对该粗品的组分分析,其尿胰蛋白酶抑制剂主成份峰(见图6,保留时间11.648min)已是明显的单峰。
采用降温措施,高压水流冲洗,清水浸泡清洗,离心脱水可以有效的去除树脂中的微生物和尿液,有效抑制微生物的生长,大大降低了尿蛋白因微生物的分解而失去活性的风险,提高了吸附有尿蛋白的树脂的储藏时间,为尿蛋白的工业化、规模化生产提供可靠的方法。
实施例5
实验气温29~39℃ ,加大吸附剂规模,将5000Kg大孔型阴离子树脂(配基为季胺基(-N+R3)的聚苯乙烯树脂)经酸、碱再生,按实施例4的方法进行尿蛋白吸附和解吸后制得尿蛋白粗制品17.5Kg,含尿胰蛋白酶抑制剂5.2万U/g,人尿激肽原酶1.5PNAU/g。
1、通过对该粗品的组分分析,其尿胰蛋白酶抑制剂主成份峰(见图7,保留时间11.607min)依然是明显的单峰,加大规模后依然保持了很好的收集效果。
2、取该批预处理后的吸附剂进行菌落检查,其菌落总数为380CFU/g,微生物同样得到有效的控制。
由此可知,本发明的方法适合于大规模生产。
实施例6
24小时实验气温-5~3℃,100Kg大孔型阴离子树脂(配基为季胺基(-N+R3)的聚丙烯树脂)经酸、碱再生,再按0.5~5Kg/袋的量分装于50目滤袋中,然后置尿槽或尿斗中进行尿蛋白的在线吸附,24小时后收集并混匀,将混合均匀的树脂分成A、B两份,每份50Kg。将“A”运回加工点,清水漂洗后置冷库储存10天;将“B”运回加工点,用高压水流清洗、清水浸洗、离心脱水后置冷库储存10天。
10天后按实施例2的方法对尿蛋白进行解吸制成尿蛋白粗制品。其中“A”制得粗制品205g,含尿胰蛋白酶抑制剂3.96万U/g,人尿激肽原酶1.20PNAU/g;“B”制得粗制品218g,含尿胰蛋白酶抑制剂4.20万U/g,人尿激肽原酶1.35PNAU/g。
分别对两份粗制品进行组分分析,其A产品中尿胰蛋白酶抑制剂成分为单峰,但峰形拖尾较严重,有较明显的降解(见图8,保留时间11.515min);B产品中尿胰蛋白酶抑制剂成分峰为明显单峰(见图9,保留时间11.432min)。
实施例7
24小时实验气温3~12℃ ,50Kg阳离子交换树脂(配基为-SO3 -的大孔型聚丙烯酸树脂)经酸、碱再生,按实施例4的方法进行尿蛋白吸附和解吸后制得尿蛋白粗制品180g,含尿激酶4.50万U/g。对该粗品进行组分分析,采用SDS-PAGE凝胶电泳进行大小分子鉴别,其中高分子量尿激酶约占80%以上(见图10,2号电泳条带,1号条带为Marker)。
实施例8
24小时实验气温9~22℃,取配基为季胺基的聚苯乙烯树脂、聚丙烯酸树脂、酚醛树脂、琼脂糖吸附树脂各10Kg,分别经酸、碱再生,再按实施例4的方法分别进行尿蛋白吸附和解吸,其中聚苯乙烯树脂、聚丙烯酸树脂分别制得41克、36克尿蛋白粗制品,其尿胰蛋白酶抑制剂总活性分别为155.3万单位和129.5万单位,含人尿激肽原酶总活性分别为37.5PNA单位和29.6PNA单位,其它吸附剂所得尿胰蛋白酶抑制剂总活性均低于60万单位,人尿激肽原酶低于11PNA。
实施例9
24小时实验气温10~25℃,取配基为磺酸基的聚苯乙烯树脂、聚丙烯酸树脂、酚醛树脂、琼脂糖吸附树脂各10Kg,分别经酸、碱再生,按实施例4的方法分别进行尿蛋白吸附和解吸,其聚苯乙烯树脂、聚丙烯酸树脂分别得到33克、31.5克尿蛋白粗制品,尿激酶总活性分别为151.6万单位和132.9万单位,其它吸附剂所得尿胰蛋白酶抑制剂总活性均低于70万单位。
实施例10
24小时实验气温20~32℃,取两性树脂(配基为季胺基和磺酸基的聚苯乙烯树脂)10Kg,经碱再生处理,水冲洗至中性,按实施例4的方法进行尿蛋白吸附和解吸,得到尿蛋白粗制品32g,其中含尿胰蛋白酶抑制剂总活性为77.6万单位,含尿激酶总活性为65.2万单位,含人尿激肽原酶总活性为7.0PNA单位。
实施例11
24小时实验气温21~30℃,取大孔弱酸性阳离子交换树脂(配基为羧酸基和磷酸基)10Kg,经酸碱再生处理,水冲洗至中性,按实施例4的方法进行尿蛋白吸附和解吸,得到尿蛋白粗制品42g, 含尿激酶总活性为56.7万单位。
实施例12
24小时实验气温18~28℃,取大孔弱碱性阴离子交换树脂(配基为伯胺基、仲胺基等)10Kg,经弱碱溶液再生处理,水冲洗至中性,按实施例4的方法进行尿蛋白吸附和解吸,得到尿蛋白粗制品34g,含尿胰蛋白酶抑制剂总活性为51.6万单位。
Claims (11)
1.一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,包括如下步骤:
将分装好的用于吸附尿蛋白的吸附剂放置在尿液流经处,用于吸附尿液中的尿蛋白;
收集吸附尿蛋白的吸附剂;
对吸附尿蛋白的吸附剂进行预处理,防止吸附剂内的尿蛋白变性失活或降解,减少微生物的滋生;
预处理后的吸附剂冷藏储存;
将吸附尿蛋白的吸附剂批量运至加工厂进行尿蛋白解吸处理,生产相应的尿蛋白原料或尿蛋白制品。
2.根据权利要求1所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,步骤c)吸附尿蛋白的吸附剂预处理方法为:用清水对吸附剂进行浸泡清洗和脱水,用于去除吸附剂表面和内部的残留尿液、微生物以及尿垢。
3.根据权利要求2所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,进行多次重复清水浸泡和脱水,用于彻底去除吸附剂内部的尿液、微生物以及尿垢。
4.根据权利要求2所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,在清水浸泡清洗之前进行高压水流冲洗用于冲洗尿垢。
5.根据权利要求2、3或4所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,在环境温度大于25℃时加冰冷却。
6.根据权利要求1所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,步骤d)的冷藏温度不高于10℃,步骤e)在运输吸附剂时采用冷藏运输,运输温度不高于20℃。
7.根据权利要求1所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,在收集吸附尿蛋白的吸附剂时,环境温度大于25℃通过加冰进行冷却。
8.根据权利要求1所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于:所述的吸附剂为树脂,为阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、阴阳离子混合树脂或者同时具有阳离子交换基团和阴离子交换基团的两性树脂。
9.根据权利要求8所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,树脂骨架为聚苯乙烯、聚丙烯酸、酚醛树脂、琼脂糖任意一种或几种;配基为磺酸基、羧酸基、磷酸基阳离子交换基团和伯胺、仲胺、叔胺和季胺基阴离子基团。
10.根据权利要求9所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于:在吸附等电点低于6.0的蛋白时,采用配基为季胺基的大孔型聚苯乙烯树脂和聚丙烯酸树脂;在吸附等电点高于7.0的蛋白时,采用配基为-SO3 -的大孔型聚丙烯酸树脂和聚苯乙烯树脂;同时吸附等电点低于6.0的蛋白和等电点高于7.0的蛋白时可采用阴阳离子混合树脂或者同时具有阳离子交换基团和阴离子交换基团的两性树脂。
11.根据权利要求1所述的一种规模化收集人尿蛋白的方法,其特征在于,所述的尿蛋白包括尿胰蛋白酶抑制剂、人尿激肽原酶、人尿白蛋白、尿激酶。
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