CN103487577B - 一种铅离子快速检测金标试纸条或卡 - Google Patents

一种铅离子快速检测金标试纸条或卡 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于快速检测铅离子的金标试纸条/卡，包括底层支撑板(1)、样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫。本发明可以实现对环境、土壤、水、食品、药物、化妆品中铅离子污染残留的快速检测。

Description

一种铅离子快速检测金标试纸条或卡
技术领域：
本发明涉及的是一种用于快速检测铅离子的金标试纸条/卡及其制备方法与应用，属于免疫学和卫生检验学技术领域。
背景技术：
铅(Pb)是一种青灰色重金属，是我们所熟知的环境毒物之一，它在自然界中分布广泛，而且又是在现代社会中具有多种用途的有色金属之一。早在夏商时期，我们的祖先就利用铜与铅冶炼出具高硬度与韧性的青铜，广泛用于兵器、工具、礼器与食器制作，青铜器铅含量最高可达40％左右。随着工农业的发展，铅的用途也越来越广泛，以致在空气、土壤、食品、餐具、玩具中都能寻其身影，觅其踪迹。在我国，铅和精炼铅产量居世界第三位，主要用于蓄电池制造、颜料、合金等行业。1923年开始在汽油中加入铅用作抗爆剂以后，更加速了全球性铅的污染。铅污染状况已不容忽视。铅是全身性毒物，具有高蓄积性与多亲和性，可通过消化、呼吸等途径被机体吸收，对人体无任何生理功能。急性铅中毒多表现为胃疼，头痛，颤抖，神经性烦躁，严重时，昏迷，直至死亡。慢性铅中毒大多表现为神经毒性，对血液系统、免疫系统、肾脏等造成一定损害。铅是对儿童威胁最大的环境污染物之一，儿童对铅元素较成人敏感。由于血脑屏障没有发育完整，婴幼儿的血铅水平在达到100μg/L时便可以引起认知功能障碍或发育延迟。
由于铅的污染和危害性较大，我国制定了土壤、食品、水体、玩具、用具等涉铅领域中的国家限量标准，农产品安全质量无公害水产品安全要求(GB18406.4-2001)中对铅含量都有限定量≤0.5mg/kg，地下水质量标准(GB/T14848-93)中规定，主要适用于集中式生活饮用水水源及工农业用水的铅离子限量≤0.05mg/L，熟肉制品(GB2726-2005)要求铅含量≤0.5mg/kg。欧盟、日本、韩国等对我国的出口物资的重金属含量标准也越来越严格。
目前，检测环境铅离子的方法主要有：
(1)物理和化学分析方法：包括紫外分光光度法(UV)、电化学分析法(EC)、原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)、氢化物发生-原子荧光光谱法(HG-AFS)、中子活化分析法(NAA)等。这些方法各有自己优缺点，紫外分光光度法操作简单，快速，干扰小，但其灵敏度不高；电化学分析法具有灵敏、简便等特点，对操作人员的技术要求高；原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法、电感耦合等离子体原子发射光谱法、氢化物发生-原子荧光光谱法具有选择性好、测定精度高、简单、快速等优点，但所用仪器比较昂贵，只能在实验室进行检测，且对操作人员技术要求较为严格，限制了其广泛使用；中子活化分析法是一种以核反应为基础的分析方法，具有微量、快速、准确和非破坏性且同时可分析多元素的优点，但所需的设备不易为一般实验室所具备，很难得到广泛应用。
(2)免疫学分析方法：包括酶联免疫吸附法(ELISA)，和胶体金免疫层析法。酶联免疫吸附法(ELISA)以竞争性酶联免疫反应为检测原理，反应显色后用酶标仪测定吸光值(OD)值进行结果判定。缩短了检测时间，可以对残留药物进行定性定量检测。但ELISA方法需要配套的酶标仪和配套试剂，操作过程仍较复杂，而且国内现处在研发阶段，进口国外产品价格昂贵，因而ELISA方法的应用受到了较大限制。胶体金免疫层析法(GICA)，其检测原理是当待检样本与吸附在在膜上的胶体金标记物(抗体或单克隆抗体)结合后，通过层析，与固定在膜上的特异性的抗原或抗体发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到胶体金标记物的显色结果。胶体金免疫层析技术因具有携带方便、操作简便、快速、特异性强、敏感性高、影响因素少、无需特殊仪器和标本不易污染等优点，适合对大批量样品进行现场初筛，从而被广泛用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等众多领域。但对于铅离子快速检测金标试纸条/卡研制的有关文献和专利目前尚未见报道。
因此，铅离子污染已对人类健康构成了严重威胁，研制快速、简便、敏感、特异、经济、筛检量大的铅离子快速检测金标试纸产品，对于减少环境污染、提高食品质量、保障食品安全具有重要意义。
发明内容：
本发明的目的：研制出一种能够快速、简便、敏感、特异的检测铅离子污染残留的快速检测铅离子金标试纸条和试纸卡。
一种用于快速检测铅离子的金标试纸条/卡，包括底层支撑板(1)、样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫(5)、包被膜(6)和外卡(7)等部分。其特征在于：所述试纸条是以底层支撑板为底部支撑，将样品垫、金标抗体结合垫、纤维素膜、吸水垫和包被膜依次粘贴于底层支撑板上。所述试纸卡是以试纸条为基础，加上外卡制成。所述底层支撑板和外卡均由硬质塑料制成，所述样品垫与金标抗体结合垫由玻璃纤维棉制成；所述金标抗体结合垫包被有胶体金标记的能识别铅离子的单克隆抗体；所述纤维素膜中部依次平行排列有隐形检测线(T线)和质控线(C线)，检测线包被有铅离子与载体蛋白形成的偶联物，质控线包被有兔抗鼠IgG(RaMIgG)。所述的铅离子金标试纸条/卡，其特征是：所述的检测抗原铅-异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸-鸡卵清白蛋白(Pb2+-ITCBE-OVA)，其制备步骤：
(1)称取20mg卵清蛋白(OVA)溶于1mL pH9.0的HEPES缓冲液(10mM/L)中形成20mg/mL的载体蛋白溶液。
(2)称取10mg1-(4-异硫氰根苯基)-乙二胺四乙酸(ITCBE)溶于1mL二甲基亚砜(DMSO)中形成金属螯合剂溶液；
(3)将0.5mL金属螯合剂溶液逐滴加到OVA载体蛋白溶液中，混匀后，加入100ul三正丁胺(1.5M)，摇床室温反应24h，制成OVA-ITCBE溶液。
(4)取11.25mg硝酸铅(Pb(NO3)2)溶于100ul蒸馏水中，形成均匀的Pb2+溶液；
(5)将Pb2+溶液加入到OVA-ITCBE溶液中，调节pH值至7.4，在室温下，摇床孵育4h，然后移入透析袋中PBS透析10d，即形成Pb2+-ITCBE-OVA，收集分装，一20℃冻存。
所述的重金属铅离子金标试纸条/卡制备步骤：
(1)胶体金溶液制备：采用柠檬酸盐还原法制备，取1000mL三角烧瓶，加入975mL双蒸水煮沸，加入15mL柠檬酸三钠继续加热5min，加入10mL1％氯金酸，继续加热至溶液呈现橘红色，冷却至室温后，4℃保存备用。
(2)单克隆抗体制备：采用权利要求3所述的Pb2+-ITCBE-OVA免疫6周雌性BALB/C小鼠5只，剂量为50μg/0.2mL/只，背部皮下分点注射。采用细胞融合技术无菌取脾脏制备脾细胞，在聚乙二醇-1500作用下与NS0骨髓瘤细胞进行融合；用间接ELISA法和阻断ELISA法进行阳性孔筛选，，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行有限稀释克隆化，扩大培养、冻存并鉴定，获得一株杂交瘤细胞株；之后采用体内诱生腹水法制备Pb2+-ITCBE-OVA mAb；
(3)金标抗体制备：将待标单克隆抗体溶液10000r/min离心30min，用0.1mol/L K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2；根据聚沉现象，确定Pb2+-ITCBE-OVA mAb与胶体金溶液最适标记浓度，为0.175mg/mL。取胶体金溶液10mL，用0.1mol/L K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2。取等量的浓度为0.175mg/mL单克隆抗体溶液，磁力搅拌下混合，室温孵育15min，10000r/min离心30min，弃上清，沉淀物用0.02mol/L Na2B4O7溶液(含10g/LOVA、0.5g/L叠氮钠)稀释，4℃保存备用。
(4)金标抗体结合垫制备：裁取规格为20×4mm的玻璃纤维棉，将金标抗体用X-only单向喷点仪均匀喷洒于玻璃纤维棉上，37℃干燥1h，密封，4℃保存备用。
(5)硝酸纤维素膜上检测线、质控线制备：将浓度为1mg/ml的Pb2+-ITCBE-OVA放于X-only单向喷点仪贮存池A，浓度为1mg/ml的RaMIgG放于贮存池B，开机分别点射于膜中央，形成间距0.5cm的检测线和质控线，自然干燥，密封，4℃保存备用。
(6)金标试纸条组装：将样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫按顺序依次粘贴于支撑板上，并在样品垫与金标抗体结合垫表面粘贴MAX线，在切槽机上切割成宽度4mm的金标试纸。
(7)金标试纸卡组装：将制备好的金标试纸条加上外卡制成。
所述的铅离子金标试纸条/卡检测线上Pb2+-ITCBE-OVA的包被量为1μL/cm，OVA浓度为1mg/mL；所述质控线上RaMIgG的包被量为1μL/cm，RaMIgG的浓度为1mg/mL。
一种快速检测铅离子的金标试纸条/卡，其检测步骤：
(1)样品预处理方法：样品包括土壤、水、食品、饲料、动物组织、血液、尿液、器物(如玩具、油漆等)。固体待检物研磨捣碎，进行硝酸-高氯酸湿消化(a)或微波消解(b)。液体待检物直接加入硝酸消化(c)。
a硝酸-高氯酸湿消化法：分别取0.5g样品放入玻璃消化管中，加15ml浓硝酸，置于通风窗过夜；然后加入5ml浓高氯酸，恒温下缓缓加热至高氯酸白色烟雾逸尽，同时溶液澄清透明为止，冷却后转移到25ml容量瓶中待用。
b微波消解法：分别称取0.5g样品，放入体积为20m1密闭的聚四氟乙烯微波消化管中，加入12ml硝酸，浸泡过夜；然后，将装有样品的微波消化管放人微波炉中，按程序消解。消解完成后，冷却，倒入烧杯，置于198℃恒温电热板中，体积浓缩至2-3ml时，冷却后用2.5％硝酸，定容到25ml容量瓶中待用。
c硝酸消化法：液体待检物直接加入15ml硝酸，室温静置2h，恒温电热板中，体积浓缩至2-3m1时，冷却后用2.5％硝酸，定容到25ml容量瓶中待用。
按照1：1体积将样品消化液与10％ITCBE螯合剂混匀，使铅离子与ITCBE充分螯合，形成样品待测液。
(2)检测步骤：取100μL待测样品，将所述的铅离子金标试纸条插入待测样品中，室温反应5min，水平放置，观察结果，10min以后结果无效。或用滴管吸取待测样品100μL，滴加于试纸卡的样品孔上，反应5min，观察结果，10min以后结果无效。
(3)分析检测结果：T线、C线均显色，判为阴性，表示样品中铅离子浓度小于2ng/mL或样品中不含铅离子；仅C线显色，而T线不显色，判为阳性，表示样品中铅离子浓度大于2ng/mL；若C线不显色，无论T线是否显色，均判为金标试纸失效。
所述的铅离子金标试纸的检测灵敏度为2ng/mL；所述的铅离子金标试纸可应用于环境、土壤、水、食品、器物中铅离子污染残留快速检测中。
附图说明：
图1，3为铅离子快速检测金标试纸条/卡的结构示意图。
图2为铅离子快速检测金标试纸的显色结果示意图。
具体实施方式：
实施例一、铅离子人工免疫抗原制备
采用采用异硫氰酯法制备人工免疫抗原Pb2+-ITCBE-OVA。称取20mg卵清蛋白OVA溶于1mL pH9.0的HEPES缓冲液(10mM/L)中形成20mg/mL的载体蛋白溶液。称取10mg ITCBE溶于1mL二甲基亚砜(DMSO)中形成金属螯合剂溶液；将0.5mL金属螯合剂溶液逐滴加到OVA载体蛋白溶液中，混匀后，加入100ul三正丁胺(1.5M)，摇床室温反应24h，制成OVA-ITCBE溶液。取11.25mg硝酸铅(Pb(NO3)2)溶于100ul蒸馏水中，形成均匀的Pb2+溶液；将Pb2+溶液加入到OVA-ITCBE溶液中，调节pH值至7.4，在室温下，摇床孵育4h，然后移入透析袋中PBS透析10d，即形成Pb2+-ITCBE-OVA，收集分装，-20℃冻存。制备出人工免疫抗原Pb2+-ITCBE-OVA。
紫外分光光度法扫描可见OVA的最大吸收峰在280nm处，偶联物在浓度与OVA浓度相同的情况下的紫外扫描光谱中表现出了各自光谱图的迭加性质；SDS-PAGE电泳法结果可见OVA的泳动速度大于偶联物，说明偶联物Pd2+-ITCBE-OVA的分子量大于OVA，证明偶联成功。
实施例二、铅离子人工免疫抗原鉴定
采用二喹啉甲酸法测定Pb2+-ITCBE-OVA中载体蛋白OVA浓度。以OVA作为标准蛋白，配成0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL的浓度梯度，用二喹啉甲酸法构建浓度检测标准曲线。OVA浓度标准曲线的线性方程为：y=0.0022x+0.008，R2=0.9987，其中y为样品在波长为562nm处吸光度，x为样品蛋白浓度。
采用ICP-AES法测定Pb2+-ITCBE-OVA中Pb2+的浓度。将100μg/mL的Pb2+-ITCBE-OVA中Pb2+标准储备液用2％的硝酸稀释成0μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.3μg/mL、0.4μg/mL、0.5μg/mL的浓度梯度，仪器软件自动绘制标准曲线，并得出线性回归方程Y=0.27X+0.0045，相关系数0.9998；在283nm波长的最佳优化实验条件下进行测定，仪器软件自动分析结果。
实施例三、抗铅离子单克隆抗体制备
用Pb2+-ITCBE-OVA免疫6周雌性BALB/C小鼠5只，剂量为50μg/0.2mL/只，背部皮下分点注射。选择细胞融合备用小鼠，间接ELISA检测抗血清中Pb2+螯合物pAb效价，阻断ELISA检测Pb2+-ITCBE pAb对Pb2+-ITCBE的IC50，挑选效价最高、IC50最低的小鼠，超免用于细胞融合。采用细胞融合技术无菌取脾脏制备脾细胞，在50％PEG(pH8.0)作用下与NS0骨髓瘤细胞进行融合；用间接ELISA和阻断ELISA进行阳性杂交瘤细胞株的筛选，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行3次有限稀释克隆化。分别于冻存15d、30d和60d后复苏杂交瘤细胞，培养后取上清液，间接ELISA测定抗体效价，考察杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的稳定性，获得一株杂交瘤细胞株；之后采用体内诱生腹水法制备Pb2+-ITCBE-OVA mAb，取8周龄健康Balb/c雌性小鼠，腹腔注射FIA0.5mL/只，10～15天后使用。将培养的阳性杂交瘤细胞1000rpm离心10min弃上清，收集细胞沉淀。用灭菌的PBS将细胞沉淀悬浮、混匀，将细胞数调至106/mL，腹腔注射Balb/C小鼠0.5mL/只。接种细胞7-10天后产生腹水，进行收集，于37℃水浴30min，4℃放置过夜，12000rpm离心5min，弃去上层的脂肪、IFA和下层的沉淀，饱和硫酸铵盐析法提纯后测定IgG含量和效价，-20℃保存备用。
实施例四、抗铅离子单克隆抗体鉴定
腹水效价测定。给腹腔注射液体石蜡10d后的小鼠腹腔注射克隆化细胞株107个细胞，7d后抽取腹水，饱和硫酸铵盐析法提纯，间接ELISA测定效价。测定结果，单克隆抗体腹水效价为1：7.2×105。
亲和力鉴定。饱和ELISA测定亲和常数(Ka)，用浓度分别为3.4μg/mL和1.7μg/mL的Pb2+-ITCBE-OVA包被，加入倍比稀释的Pb2+-ITCBE mAb，再加入GaMIgG-HRP，TMB显色测A450nm值，以Pb2+-ITCBE mAb浓度为横坐标，以A450nm值为纵坐标，绘出相应的2条反应曲线，以每条曲线上部平坦段的A450nm值作为100％，在曲线上算出50％A450nm值时对应的Pb2+-ITCBE mAb浓度，按照公式Kaff=(n-1)/2(n[Ab′]t-[Ab]t)计算Ka。单克隆抗体的Ka为1.87×1010L/mol。
敏感性鉴定。用阻断ELISA测定Pb2+-ITCBE mAb对不同浓度Pb2+-ITCBE的抑制率，以抑制率B/B0为纵坐标，以不同浓度Pb2+-ITCBE的对数值为横坐标，绘制标准抑制曲线，进行相关回归分析，计算Pb2+-ITCBE mAb对Pb2+-ITCBE的IC50。鉴定结果，IC50为25.25μg/L。
特异性鉴定。采用交叉反应试验鉴定其特异性。交叉反应试验选择汞、铬、铅、锌、铜、铯、钴、钼、铁与ITCBE的鳌合物(鳌合方法同上)和ITCBE溶液。做为抑制剂，用阻断ELISA测定各抑制物的IC50，以Pb2+-ITCBE mAb对Pb2+-ITCBE的IC50和Pb2+-ITCBE mAb对各竞争物的IC50之比的百分数为其交叉反应率(cross-reactivity，CR％)。鉴定结果，与其它重金属离子交叉反应小于0.01％。
实施例五、铅离子金标试纸条/卡制备
(1)胶体金溶液制备：采用柠檬酸盐还原法制备，取1000mL三角烧瓶，加入975mL双蒸水煮沸，加入15mL柠檬酸三钠继续加热5min，加入10mL1％氯金酸，继续加热至溶液呈现橘红色，冷却至室温后，4℃保存备用。
(2)金标抗体制备：将待标单克隆抗体溶液10000r/min离心30min，用0.1mol/L K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2；根据聚沉现象，确定Pb2+-ITCBE-OVA mAb与胶体金溶液最适标记浓度，为0.175mg/mL。取胶体金溶液10mL，用0.1mol/L K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2。取等量的浓度为0.175mg/mL单克隆抗体溶液，磁力搅拌下混合，室温孵育15min，10000r/min离心30min，弃上清，沉淀物用0.02mol/L Na2B4O7溶液(含10g/LOVA、0.5g/L叠氮钠)稀释，4℃保存备用。
(3)金标抗体结合垫制备：裁取规格为20×4m的玻璃纤维棉，将金标抗体用X-only单向喷点仪均匀喷洒于玻璃纤维棉上，37℃干燥1h，密封，4℃保存备用。
(4)硝酸纤维素膜上检测线、质控线制备：将浓度为1mg/ml的Pb2+-ITCBE-OVA放于X-only单向喷点仪贮存池A，浓度为1mg/ml的RaMIgG放于贮存池B，开机分别点射于膜中央，形成间距0.5cm的检测线和质控线，自然干燥，密封，4℃保存备用。
(5)金标试纸条组装：将样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫按顺序依次粘贴于支撑板上，并在样品垫与金标抗体结合垫表面粘贴MAX线，在切槽机上切割成宽度4m的金标试纸。
(6)金标试纸卡组装：将制备好的金标试纸条加上外卡制成。
实施例六、铅离子金标试纸条/卡性能测定
(1)本发明铅离子金标试纸条/卡的敏感度试验
用铅离子金标试纸测定浓度分别为0、2、4、8、16、32、64、128、256、512ng/mL的铅离子标准品，每个浓度设6个重复，根据试验结果判断其敏感性。结果见表1，由表1可知，铅离子金标试纸的目测检测限为2ng/mL。
判定方法为：显色区出现两条线，且T线颜色明显浅于C线颜色；或者显色区只出现一条C线，而T线不显色，判为阳性。阳性结果表示含量汞离子≥1ng/mL；显色区出现检测线(T线)和对照线(C线)两条线，且T线颜色不浅于C线颜色，判为阴性。无效：显色区两条线(T线和C线)均不出现，表明操作有误或试纸失效，判为无效。
表1测定金标试纸敏感度试验(n=6)
铅离子浓度(ng/mL) 0 2 4 8 16 32 64 128 256 512
结果 - + + + + + + + + +
(2)本发明铅离子金标试纸条/卡的特异性试验
以交叉反应率为指标判定该试纸的特异性。采用交叉反应试验，选择汞、钼、镉、铜、锌、铬、钴、铁等金属离子与ITCBE的螯合物、ITCBE为抑制物。用铅离子金标试纸测定终浓度分别为0、2、4、8、16、32、64、128、256、512ng/mL重金属离子标准品，每个浓度设6个重复，以此判断其特异性。结果见表2，铅离子金标试纸与铅离子特异性结合，与其它重金属离子无交叉反应，交叉反应为2ng/mL。
表2测定金标试纸特异性试验(n=6)
(3)本发明铅离子金标试纸条/卡的重复性试验
取不同批次的6批铅离子金标试纸，分别在6d对铅离子浓度为0、2、4、8ng/mL的油漆制备样、水样、鸡腿肌肉制备样进行检测，每个浓度设6个重复，检验其重复性。结果见表3，检测结果完全一致，证明不同批次生产的金标试纸检测结果稳定可靠，具有良好的重复性。
表3CAP-Strip重复性试验(n=6)
(4)本发明铅离子金标试纸条/卡的保存期试验
保存期检验：将不同批次的铅离子金标试纸分别保存于普通冰箱(2～8℃)12个月和室温干燥保存6个月，研究不同保存时间的检测结果，确定其保存期。结果表明，铅离子金标试纸在保存期内其外观、准确性、敏感性、特异性等均未发生变化，与新制备试纸的测试结果完全相同，其的有效期为2～8℃12个月，室温干燥条件下6个月。
实施例七、动物实验
健康昆明鼠20只，雌雄各半，5-6周龄，适应性饲养一周后，雌雄各随机分为2组，对照组和实验组。实验组饮用含9.6mol/L醋酸铅的蒸馏水，对照组自由饮水，10d后，采用摘眼球法采血，收集血清。处死小鼠，采集肝脏组织，做石蜡切片，HE染色。同一份样品分别采用SOLAAR-M6型原子吸收光谱仪和本发明的试纸条进行测定，测定结果见表4。
肝脏HE染色结果：与对照组比较，铅中毒组小鼠肝脏组织病变为：肝小叶结构紊乱，肝索排列混乱且有断裂现象，窦状隙扩张，肝细胞大小不均匀，细胞有空泡化现象。
表4本发明的试纸条和试制卡的适用性试验
注：“丄”表示可疑，肉眼可见颜色，但比对照显色弱；“+”表示阳性，完全不显色；“—”表示阴性，显色很强。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (7)

1.一种用于快速检测铅离子的金标试纸条，包括底层支撑板(1)、样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫(5)，其特征在于：所述试纸条是以底层支撑板(1)为底部支撑，将样品垫(2)、金标抗体结合垫(3)、纤维素膜(4)、吸水垫(5)和包被膜依次粘贴于底层支撑板(1)上，所述底层支撑板(1)和外卡均由硬质塑料制成，所述样品垫(2)与金标抗体结合垫(3)以玻璃纤维棉为基质，所述金标抗体结合垫(3)包被有胶体金标记的能识别铅离子的单克隆抗体；所述纤维素膜(4)中部依次平行排列有隐形检测线(T线)和质控线(C线)，检测线包被有铅离子与载体蛋白通过螯合剂形成的偶联物，质控线包被有兔抗鼠IgG(RaMIgG)；
所述的螯合剂选自异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、还原谷胱甘肽(GSH)中的一种；所述载体蛋白选自鸡卵清白蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)、匙孔血蓝蛋白(KLH)中的一种；
所述的偶联物为Pd2+-ITCBE-OVA，
所述的金标试纸条通过包括如下步骤在内的方法制备得到：
(1)称取20mg OVA溶于1mL pH9.0的10mM/L的HEPES缓冲液中形成20mg/mL的载体蛋白溶液；
(2)称取10mg ITCBE溶于1mL二甲基亚砜(DMSO)中形成金属螯合剂溶液；
(3)将0.5mL金属螯合剂溶液逐滴加到OVA载体蛋白溶液中，混匀后，加入100μL 1.5M的三正丁胺，摇床室温反应24h，制成OVA-ITCBE溶液；
(4)取11.25mg硝酸铅(Pb(NO3)2)溶于100μL蒸馏水中，形成均匀的Pb2+溶液；
(5)将Pb2+溶液加入到OVA-ITCBE溶液中，调节pH值至7.4，在室温下，摇床孵育4h，然后移入透析袋中PBS透析10d，即形成Pb2+-ITCBE-OVA，收集分装，-20℃冻存；
(6)胶体金溶液制备：采用柠檬酸盐还原法制备，取1000mL三角烧瓶，加入975mL双蒸水煮沸，加入15mL柠檬酸三钠继续加热5min，加入10mL1％氯金酸，继续加热至溶液呈现橘红色，冷却至室温后，4℃保存备用；
(7)单克隆抗体制备：用铅离子-螯合剂-载体蛋白免疫小鼠，以Pb2+-ITCBE-OVA为例，说明如下：用Pb2+-ITCBE-OVA免疫6周雌性BALB/C小鼠5只，剂量为50μg/0.2mL/只，背部皮下分点注射；选择细胞融合备用小鼠，间接ELISA检测抗血清中Pb2+螯合物pAb效价，阻断ELISA检测Pb2+-ITCBEpAb对Pb2+-ITCBE的IC50，挑选效价最高、IC50最低的小鼠，超免用于细胞融合，采用细胞融合技术无菌取脾脏制备脾细胞，在pH8.0的50％PEG作用下与NS0骨髓瘤细胞进行融合；用间接ELISA和阻断ELISA进行阳性杂交瘤细胞株的筛选，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行3次有限稀释克隆化；分别于冻存15d、30d和60d后复苏杂交瘤细胞，培养后取上清液，间接ELISA测定抗体效价，考察杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的稳定性，获得一株杂交瘤细胞株；之后采用体内诱生腹水法制备Pb2+-ITCBE-OVA mAb，取8周龄健康Balb/c雌性小鼠，腹腔注射FIA0.5mL/只，10～15天后使用；将培养的阳性杂交瘤细胞1000rpm离心10min弃上清，收集细胞沉淀；用灭菌的PBS将细胞沉淀悬浮、混匀，将细胞数调至106/mL，腹腔注射Balb/C小鼠0.5mL/只；接种细胞7-10天后产生腹水，进行收集，于37℃水浴30min，4℃放置过夜，12000rpm离心5min，弃去上层的脂肪、IFA和下层的沉淀，饱和硫酸铵盐析法提纯后测定IgG含量和效价，-20℃保存备用；
(8)金标抗体制备：将待标单克隆抗体溶液10000r/min离心30min，用0.1mol/L K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2；根据聚沉现象，确定铅离子-螯合剂-载体蛋白mAb与胶体金溶液最适标记浓度，Pb2+-ITCBE-OVAmAb为0.175mg/mL；取胶体金溶液10mL，用0.1mol/L K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值至8.2；取等量的浓度为0.175mg/mL单克隆抗体溶液，磁力搅拌下混合，室温孵育15min，10000r/min离心30min，弃上清，沉淀物用含10g/L OVA、0.5g/L叠氮钠的0.02mol/L Na2B4O7溶液稀释，4℃保存备用；
(9)金标抗体结合垫制备：裁取规格为20×4mm的玻璃纤维棉，将金标抗体用X-only单向喷点仪均匀喷洒于玻璃纤维棉上，37℃干燥1h，密封，4℃保存备用；
(10)硝酸纤维素膜上检测线、质控线制备：将浓度为1mg/ml的铅离子-螯合剂-载体蛋白放于X-only单向喷点仪贮存池A，浓度为1mg/ml的RaMIgG放于贮存池B，开机分别点射于膜中央，形成间距0.5cm的检测线和质控线，自然干燥，密封，4℃保存备用；
(11)金标试纸条组装：将样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫按顺序依次粘贴于支撑板上，并在样品垫与金标抗体结合垫表面粘贴MAX线，在切槽机上切割成宽度4mm的金标试纸。
2.根据权利要求1所述的快速检测铅离子金标试纸条，检测线上铅离子-螯合剂-载体蛋白的包被量为1μL/cm，载体蛋白浓度为1mg/mL。
3.根据权利要求1所述的快速检测铅离子金标试纸条，其特征是：所述质控线上RaMIgG的包被量为1μL/em，RaMIgG的浓度为1mg/mL。
4.根据权利要求1所述的快速检测铅离子金标试纸条，其特征是；所述的胶体金溶液中金颗粒的粒径为30nm，标记量为1mL胶体金：3ng单克隆抗体。
5.用于检测铅离子的金标试纸卡，其特征在于：所述试纸卡是以权利要求1-4任意一项所述的快速检测铅离子金标试纸条为基础，加上外卡制成。
6.一种如权利要求1～4任意一项所述的快速检测铅离子金标试纸条或权利要求5所述的用于检测铅离子的金标试纸卡在环境、食品、化妆产品或药物中铅离子污染残留快速检测中的应用，所述的检测用于检测铅离子含量在10ng/mL的样品。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征是：样品预处理方法是样品消解后，采用10％EDTA作为螯合剂处理溶液，离心取上清液用于检测。
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