CN103476769A - 新型抗癌剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供式（I）的化合物或其药学上可接受的衍生物、盐或前药。进一步提供的是在受试者中治疗癌症的方法，包括对所述受试者施用有效量的式（I）的化合物、或其药学上可接受的衍生物、盐或前药。进一步提供的是式（I）的化合物、或其药学上可接受的衍生物、盐或前药在制备用于治疗癌症的药物中的用途。此外，本发明还提供一种药物组合物，其包括式I的化合物、或其药学上可接受的衍生物、盐或前药。

Description

新型抗癌剂
技术领域
本发明涉及一类可用于治疗癌症例如结肠癌、肺癌、脑癌和乳腺癌的化合物。
背景技术
癌症是一种重大疾病，其是全球死亡的主要原因。治疗癌症的主要方面是使用抗癌剂进行化疗。然而，使用化疗来治疗癌症很少是直接的而且总体需要开发通过不同机制和通路起作用的新的且改进的抗癌剂。
发明内容
在第一方面，本发明提供式I的化合物或其药学上可接受的衍生物、盐或前药，其中：
Figure BDA00003339445500011
式I
E和G各自独立地选自-C1-4烷基-、-NH-、-N(C1-4烷基)-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-、任一取向的-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；并且
Figure BDA00003339445500012
是单键或双键；
当
Figure BDA00003339445500013
是单键时，K独立地选自CH和N，且J独立地选自NH和CH2；或者
当
Figure BDA00003339445500014
是双键时，K是C，且J独立地选自N和CH；
R1是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R4)2、-C1-4烷基N(R4)2、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和CF3；
各个R4独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R5，条件是如果一个R4是-OH，则另一个R4不能是-OH；或者
-N(R4)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R8，条件是如果一个R6是-OH，则另一个R6不能是-OH；或者
-N(R6)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和-苯基；
R3选自H、-C1-4烷基、芳基和烷基芳基；并且
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
在第二方面，本发明提供一种在受试者中治疗癌症的方法，包括对所述受试者施用有效量的本发明化合物或其药学上可接受的衍生物、盐或前药。
在第三方面，本发明提供本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物、盐或前药在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
在第四方面，本发明提供一种药物组合物，其包括本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物、盐或前药，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
附图说明
图1：经G2/M阻滞剂处理的细胞中稳定vs可溶微管蛋白的确定。在NP-40中溶解经媒介物、Taxol（紫杉醇）或化合物3（198-02）处理的LIM1215细胞。通过SDS/PAGE和使用β-微管蛋白抗体的免疫印迹法分析等体积的上清液和重悬的不可溶材料。S=可溶微管蛋白且P=聚合微管蛋白。在BaF/3细胞系中获得相似的结果。
图2：本发明的化合物对“体外”微管蛋白聚合的作用。在添加缓冲液（A）、Taxol（B）、0.5mM三嗪（C）或2mM三嗪（D），（箭头）之前在Cary50分光光度计的小杯中使微管蛋白（在PIPES/MgCl2/GTP缓冲液中，1mg/ml）预平衡。以5s间隔进行OD[340]读取，30min。
图3：提取的小鼠血浆的代表性色谱图。A：使用HC的正常小鼠血浆。B：加有化合物2（156-01）和HC的正常小鼠血浆，用于标准曲线。C：注射化合物2（156-01）之后2小时获得的血浆显示出回收的化合物2（156-01）峰以及3个其它推定代谢物峰。
图4：推定代谢物峰的谱分析。A.血浆（虚线）以及注射小鼠的血浆（实线）中的标准化合物2（156-01）的重叠色谱图。B.纯化峰的UV光谱。
图5：从注射化合物2之后的小鼠血浆中回收的代谢物的抗有丝分裂作用。将BaF/3细胞与增加量的各个重建峰物质一起孵育24小时。使用碘化丙啶通过FACS分析来评估细胞周期分布。使用ModFi确定细胞周期G2/M期的细胞的百分数。
图6：皮下单剂量50mg/kg后的小鼠中化合物2的血浆浓度图。各个点与各个小鼠对应。A：峰1值的计算浓度的半对数图。B：包括所有代谢物峰的值的半对数图。C：仅峰1与所有峰的平均和se值比较。
图7：裸鼠中的LIM2537肿瘤生长。每三天使用外部卡尺测量肿瘤直径，并使用式π/6x（LxW2）计算肿瘤体积。经媒介物对照处理的动物（黑色曲线）与经15mg/kg化合物2从实验第3天开始每周三天处理的动物（红色曲线）之间有明显的差异。
图8：裸鼠中的U87MG（Δ2-7）肿瘤生长。每三天使用外部卡尺测量肿瘤直径，并使用式π/6x（LxW2）计算肿瘤体积。经媒介物对照处理的动物（黑色曲线）和经20mg/kg化合物2从实验第5天开始每周三次处理的动物之间有明显的差异。
图9：经化合物2（标记为“156-01”）（绿条）处理的动物在其肝或脾重量方面没有表现出与媒介物对照处理的动物（红色）显著的差异，而肿瘤的重量大大降低。
图10：裸鼠中的H1437肿瘤生长。每三天使用外部卡尺测量肿瘤直径，并使用式π/6x（LxW2）计算肿瘤体积。经媒介物对照处理的动物（黑色曲线）和经20mg/kg化合物2从实验第5天开始每周三次处理的动物之间有明显的差异。
图11：从媒介物对照处理的动物（上面三行）和末行化合物2处理（20mg/kg，每周三次）的动物中移除的H1437异种移植肿瘤的照片。可见尺寸有明显差异。
具体实施方式
Naamidine A是一种从Leucetta海绵中提取的咪唑生物碱，其已被报道为在使用很大程度地过表达EGF受体的人癌细胞系的小鼠异种移植模型中选择性地抑制表皮生长因子（EGF）信号通路并且抑制肿瘤生长（Copp等人，J.Med.Chem.1998,41:3909）。
Naamidine A
在搜索EGF受体特异的小分子抑制剂时，本发明的发明人合成了大量的Naamidine A类似物并评估了其生物活性。
另人惊讶的是，本发明的发明人识别出一类与Naamidine A有关的分子，其显示出细胞抑制活性和/或细胞毒性，并且不通过EGF信号通路起作用。这类三嗪化合物显示出作为在纳摩尔范围具有抗癌活性的抗癌药物的前景。
因此，在第一方面，本发明提供式I的化合物或其药学上可接受的衍生物、盐或前药，其中：
式I
E和G各自独立地选自-C1-4烷基-、-NH-、-N(C1-4烷基)-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-、任一取向的-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；并且
Figure BDA00003339445500052
是单键或双键；
当
Figure BDA00003339445500053
是单键时，K独立地选自CH和N，且J独立地选自NH和CH2；或者
当
Figure BDA00003339445500054
是双键时，K是C，且J独立地选自N和CH；
R1是0-2个取代基（意指0、1或2个取代基或包括这些整数中的任意两个的范围），其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R4)2、-C1-4烷基N(R4)2、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
各个R4独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R5，条件是如果一个R4是-OH，则另一个R4不能是-OH；或者
-N(R4)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基（意指0、1或2个取代基或包括这些整数中的任意两个的范围），其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R8，条件是如果一个R6是-OH，则另一个R6不能是-OH；或者
-N(R6)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和-苯基；
R3选自H、-C1-4烷基、-芳基和-烷基芳基；并且
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
在一个实施方式中，
Figure BDA00003339445500061
是单键，且（i）K是CH，J是NH，或者（ii）K是N，J是CH2。
在另一个实施方式中，
Figure BDA00003339445500062
是双键，且K是CH，J是NH。
优选地，R3选自氢、甲基、丙基、丁基和苯基。
在一个实施方式中，E选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-和-O-C1-4烷基-；其中E的杂原子与三嗪环键合。
在一个实施方式中，G选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-和-O-C1-4烷基-；其中G的杂原子与三嗪环键合。
优选地，E是-NHC1-4烷基，更优选地，E是-NH-CH2-。
优选地，G是-NHC1-4烷基，更优选地，G是-NH-CH2-。
在一个实施方式中，R1是-N(R4)2，其形成下式的被-C1-4烷基取代的哌嗪基。
Figure BDA00003339445500063
优选地，R1和R2各自独立地为1-2个取代基，更优选地，R1和R2各自是1个取代基。
在一个实施方式中，R1和R2的各个是至少一个对位取代基。
优选地，各个R1取代基独立地选自-OH、-O-C1-4烷基和-C1-4烷基，更优选地，各个R1取代基独立地选自-OH、-OMe和-CH3。
优选地，各个R2取代基独立地选自-OH、-O-C1-4烷基和-C1-4烷基N(R6)2。
更优选地，各个R2取代基独立地选自-OH、-OMe、-CH2NH2和-CH2NH-C(O)O(t-Bu)。
在一个优选实施方式中，本发明提供式II的化合物或其药物衍生物、盐或前药，其中：
式II
E和G各自独立地选自-C1-4烷基-、-NH-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；并且
R1是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R4)2、-C1-4烷基N(R4)2、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
各个R4独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R5，条件是如果一个R4是-OH，则另一个R4不能是-OH；或者
-N(R4)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R8，条件是如果一个R6是-OH，则另一个R6不能是-OH；或者
-N(R6)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和-苯基；
R3选自-H、-C1-4烷基和-芳基；
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
在一个实施方式中，E选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-和-O-C1-4烷基-；其中E的杂原子与三嗪环键合。
在一个实施方式中，G选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-和-O-C1-4烷基-；其中G的杂原子与三嗪环键合。
优选地，E是-NHC1-4烷基，更优选地，E是-NH-CH2-。
优选地，G是-NHC1-4烷基，更优选地，G是-NH-CH2-。
在一个实施方式中，本发明提供式II的化合物，其中R1是1-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-OH、-O-C1-4烷基、和-C1-4烷基NHR4；并且R2是1-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-OH、-O-C1-4烷基和-C1-4烷基NHR6。
其中R4选自-H、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基；
其中R6选自-H、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基；
优选地，各个R1取代基独立地选自-OH、-OMe、-CH3，并且各个R2取代基独立地选自-OH、-O-C1-4烷基、-C1-4烷基NHR6；
其中R6选自-H、-C1-4烷基和-C(O)OC1-4烷基。
更优选地，R2选自-OH、-OMe、-CH2NH2、和-CHNH-C(O)O(t-Bu)。
在另一个实施方式中，本发明提供式II的化合物，其中R3选自-H、甲基、丙基、丁基和苯基。
在一个实施方式中，R3是直链烷基链。
在一个实施方式中，本发明提供式III的化合物或其药物衍生物、盐或前药，其中：
Figure BDA00003339445500081
式III
E和G各自独立地选自-C1-4烷基-、-NH-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；
R1是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R4)2、-C1-4烷基NHR4、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
其中各个R4独立地选自-H、-OH、C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7、和-C(O)R5，条件是如果一个R4是-OH，则另一个R4不能是-OH；或者
-N(R4)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7、和-C(O)R8，条件是如果一个R6是-OH，则另一个R6不能是-OH；或者
-N(R6)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和-苯基；
R3选自-H、-C1-4烷基和-芳基；并且
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
在一个实施方式中，E选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-、和-O-C1-4烷基-；其中E的杂原子与三嗪环键合。
在一个实施方式中，G选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-、和-O-C1-4烷基-；其中G的杂原子与三嗪环键合。
优选地，E是-NHC1-4烷基，更优选地，E是-NH-CH2-。
优选地，G是-NHC1-4烷基，更优选地，G是-NH-CH2-。
在一个实施方式中，本发明提供式III的化合物，其中R1是1-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-O-C1-4烷基、和-C1-4烷基N(R4)2；并且R2是1-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-O-C1-4烷基、和-C1-4烷基N(R6)2；
其中各个R4独立地选自-H、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基；
其中各个R6独立地选自-H、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基；优选地，R1是-OMe且R2选自-O-C1-4烷基、和-C1-4烷基N(R6)2；
其中各个R6独立地选自-H、-C1-4烷基、和-C(O)OC1-4烷基。
更优选地，R2选自-OMe、-CH2NH2、和-CHNH-C(O)O(t-Bu)。
优选地，R3是氢。
在一个实施方式中，本发明提供式IV的化合物或其药物衍生物、盐或前药，其中：
Figure BDA00003339445500101
式IV
E和G各自独立地选自-C1-4烷基、-NH-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；
R1是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、N(R4)2、-C1-4烷基NHR4、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
其中各个R4独立地选自-H、-OH、C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R5；或者
-N(R4)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和-CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7、和-C(O)R8，条件是如果一个R6是-OH，则另一个R6不能是-OH；或者
-N(R6)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和-苯基；
R3选自-H、-C1-4烷基和-芳基；并且
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
在一个实施方式中，E选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-、和-O-C1-4烷基-；其中E的杂原子与三嗪环键合。
在一个实施方式中，G选自-NH-C1-4烷基-、-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-、和-O-C1-4烷基-；其中G的杂原子与三嗪环键合。
优选地，E是-NHC1-4烷基，更优选地，E是-NH-CH2-。
优选地，G是-NHC1-4烷基，更优选地，G是-NH-CH2-。
在一个实施方式中，本发明提供式IV的化合物，其中R1是1-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-O-C1-4烷基、和-C1-4烷基N(R4)2；并且R2是1-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-O-C1-4烷基、和-C1-4烷基N(R6)2；
其中各个R4独立地选自-H、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基；
其中各个R6独立地选自-H、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基；优选地，R1是-OMe且R2选自-O-C1-4烷基、和-C1-4烷基N(R6)2；
其中各个R6独立地选自-H、-C1-4烷基、和-C(O)OC1-4烷基。更优选地，R2选自-OMe、-CH2NH2和-CHNH-C(O)O(t-Bu)。
在另一个实施方式中，本发明提供式IV的化合物，其中R3选自-H、甲基、丙基、丁基和苯基。优选地，R3是氢。
在一个实施方式中，本发明提供选自以下的化合物：
Figure BDA00003339445500121
Figure BDA00003339445500131
Figure BDA00003339445500141
Figure BDA00003339445500151
优选地，化合物选自：
Figure BDA00003339445500152
Chang等人（US 2004/0122009）已合成了抗增殖作用类似于肌基质蛋白（myoseverin）的三嗪化合物。Chang化合物的结构不同于本发明的化合物，且对癌细胞系的活性低多个数量级。此外，Chang等人公开的化合物具有与本发明化合物显著不同的生物活性。在他们的研究中，Chang等人发现他们的化合物在微管蛋白聚合所需的IC50值与U937人白血病细胞的生长抑制所需的IC50值之间显示出密切相关（参见第25页表1）。与此相反，本发明的发明人已经发现，对于本发明的化合物，微管蛋白聚合所需的浓度比细胞增殖检定中的IC50大1000倍以上。
如本文所用的术语“卤代”或“卤素”是指氟（氟代）、氯（氯代）、溴（溴代）或碘（碘代）。
如本文所用的单独使用或在复合项例如NH(烷基)或N(烷基)2中使用术语“烷基”，是指一价直链或支链烃基。例如，合适的烷基包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。
如本技术领域的技术人员所理解的，术语“C1-4烷基”是指具有1、2、3或4个碳原子或包括这些整数中任何两个的范围的直链或支链。
如本文所用的术语“芳基”是指C6-C10芳族烃基，例如苯基或萘基。
如本文所用的术语“环烷基”是指环烃基。合适的环烷基包括，但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如本技术领域的技术人员所理解的，术语“C3-6环烷基”是指具有3、4、5或6个碳原子或包括这些整数中任何两个的范围的环烷基。
术语“烷基芳基”包括，例如苄基。
胺氮（amine nitrogens）可以由合适的氮保护基保护（参见“ProtectiveGroups in Organic Synthesis（有机合成中的保护基）”，Theodora Greene和Peter Wuts，第三版，Wiley Interscience，1999年）。
式I的化合物的盐优选为药学上可接受的，但应理解的是，非药学上可接受的盐也落在本发明的范围内，因为这些可以在药学上可接受盐的制备中用作中间体。
术语“药学上可接受的衍生物”可以包括任何药学上可接受的盐、水合物或前药，或任何其它化合物，其在对受试者施用时能够提供（直接或间接）式I的化合物或其抗菌活性的代谢物或残基。
合适的药学上可接受的盐包括，但不限于，药学上可接受的无机酸的盐，无机酸例如为盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸，或药学上可接受的有机酸的盐，有机酸例如为乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、天门冬氨酸、谷氨酸、依地酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗坏血酸和戊酸。
碱盐包括，但不限于，与药学上可接受的阳离子形成的碱盐，例如钠、钾、锂、钙、镁、锌、铵；烷基铵（例如由三乙胺形成的盐）和烷氧基铵（如与乙醇胺形成的那些）。碱盐还包括由乙二胺、胆碱和氨基酸（例如精氨酸、赖氨酸或组氨酸）形成的盐。药学上可接受的盐及其形成的类型的一般信息对本领域技术人员而言是已知的，且描述在一般的文本中，例如“Handbook of Pharmaceutical Salts”P.H.Stahl,C.G.Wermuth，第1版，2002，Wiley-VCH。
可以使用如下试剂使碱性含氮基团季铵化，例如低级烷基卤化物（如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物）；二烷基硫酸酯，如硫酸二甲酯和硫酸二乙酯；及其它。
可以使用包括低级烷基羧酸例如乙酸和2,2-二甲基丙酸的基团使羟基酯化，使用包括烷基磺酸例如甲基磺酸的基团使羟基磺化，或者使羟基糖基化以形成葡糖苷酸衍生物。
本发明还包括含有式I化合物的前药的药物组合物。本发明还包括通过施用式I的化合物的前药来在受试者中治疗或预防癌症的方法。具有游离氨基、酰氨基（amido）、羟基或羧基的式I化合物可以被转化成前药。
前药包括如下化合物，其中氨基酸残基、或两个或更多个（例如，两个、三个或四个）氨基酸残基的多肽链与式I的化合物的游离氨基、羟基和羧基的共价结合。氨基酸残基包括20个天然出现的通常由三个字母符号指定的氨基酸，且还包括4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链赖氨酸（demosine）、异锁链赖氨酸（isodemosine）、3-甲基组氨酸，norvlin、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和蛋氨酸砜。前药还包括如下化合物，其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通过羰基碳前药侧链与式I的上述取代基共价结合。前药还包括通过磷-氧键与式Ⅰ化合物的游离羟基结合的式I化合物的磷酸（盐）酯衍生物（例如酸、酸的盐、或酯）。
还要认识到的是，式I的化合物可以具有不对称中心，因此能够以一个以上的立体异构体形式存在。因此，本发明还涉及在一个或多个不对称中心基本上纯的异构体形式，例如大于约90%ee（如约95%或97%ee）或大于99%ee，以及包括其外消旋混合物的混合物。
这些异构体可以通过不对称合成制备，例如，使用手性中间体，或通过手性拆分。
在一个实施方式中，本发明提供一种在受试者治疗癌症的方法，包括对所述受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物、盐或前药。
在另一实施方式中，本发明提供本发明的化合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
在另一实施方式中，本发明提供用于治疗癌症的化合物。
优选地，癌症是结肠癌、非小细胞肺癌、脑癌或乳腺癌。
本发明的发明人发现，本发明的三嗪以其最佳浓度在诱导G2/M阻滞中至少与Taxol一样有效。然而，Taxol是通过使微管蛋白聚合稳定来起作用，而进一步的实验显示，三嗪诱导的微管蛋白聚合是很小的，且出现时的剂量远超过其作为有丝分裂阻滞剂的效力的剂量。
因此，在一个实施方式中，癌症耐受紫杉烷类，例如，紫杉醇，多西他赛（docetaxel）和卡巴他赛（carbazitaxel）。
在一个实施方式中，癌症耐受有丝分裂抑制剂，其中有丝分裂抑制剂直接干扰微管蛋白的组装和分解。
在一个实施方式中，本发明提供一种药物组合物，其包括本发明的化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的组合物可以含有如下文所述的其它治疗药物，并且可以根据如药物制剂领域中公知的技术，例如通过采用常规的固体或液体媒介物或稀释剂，以及适合于期望的给药模式的类型的药物添加剂（例如，赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等）进行配制。
可通过任何合适的方式施用本发明的化合物，例如，肠胃外，如通过皮下、静脉、肌内或脑池内注射或输注技术（例如，作为无菌可注射的水性或非水性溶液或混悬液）。
药物制剂包括用于口服、直肠、鼻、局部（包括颊和舌下）、阴道或肠胃外（包括肌内、皮下和静脉内）给药的那些，或为适用于通过吸入或吹入给药的形式的那些。因此，本发明的化合物以及常规的佐剂、载体或稀释剂可被放置为药物组合物和其单位剂型的形式，且以这样的形式可被用作固体（例如片剂或填充胶囊），或液体（作为溶液、混悬剂、乳剂、酏剂或填充有这些的胶囊剂），所有都用于口服使用；以用于直肠给药的栓剂形式；或以用于肠胃外（包括皮下）使用的无菌注射液的形式。
除灵长类动物例如人之外，根据本发明的方法还可治疗多种其它哺乳动物。例如，可以治疗哺乳动物包括，但不限于，牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、鼠或其它牛、羊、马、犬、猫、啮齿或鼠物种。然而，也可以在其它物种例如鸟类物种（例如，鸡）中实施该方法。
上述方法中治疗的受试者是哺乳动物，包括，但不限于牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、鼠或其它牛、羊、马、犬、猫、啮齿或鼠物种，且优选人类，男性或女性。
术语“有效量”是指由研究者、兽医、医生或其他临床医师所寻求的会引发组织、系统、动物或人的生物或医学响应的主题组合物的量。
如癌症治疗领域的技术人员所理解的，术语“治疗”并不必然是指癌症完全治愈。术语“治疗”包括接受治疗的受试者中癌症细胞复制的任何抑制和/或肿瘤尺寸的减小。
如本文所用的术语“组合物”意在包括包含特定量的特定成分的产品，以及直接或间接地由特定量的特定成分的组合得到的任何产品。“药学上可接受”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中的其它成分相容且对其接受者无害。
术语“给药”和或“施用”化合物应理解为是指向需要治疗的个体提供本发明的化合物。
用于施用本发明化合物的药物组合物可方便地以剂量单位的形式存在，并可以通过药学领域中公知的任何方法来制备。所有的方法都包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体联合的步骤。通常，通过使活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者均匀且紧密地联合，然后如果需要将产物成型为需要的制剂，来制备药物组合物。在药物组合物中，以在疾病的过程或病症中足以产生期望的效果的量包含活性目标化合物。如本文所用的术语“组合物”意在包括包含特定量的特定成分的产品，以及直接或间接地由特定量的特定成分的组合得到的任何产品。
该药物组合物可以是无菌可注射的水性或油质混悬液的形式。可根据已知技术使用上面提到的适当的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬液，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的媒介物和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油通常被用作溶剂或助悬介质。为此目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包括合成的单或二甘油酯。此外，脂肪酸例如油酸可用于注射制剂中。
本发明的药物组合物和方法还可包括通常用于治疗上述的病理病症的其它治疗活性化合物。可由本领域的普通技术人员根据常规的药物原则选择用于联合治疗的合适药物。治疗药物的组合可协同地起作用，以实现上述的各种障碍的治疗或预防。使用这种方法，能够使用较低剂量的各个药物来实现治疗效力，由此减少潜在的不良副作用。
当其它治疗药物与本发明的化合物组合使用时，它们可以例如以医生案头参考（PDR）中所指出的或以另外由本领域普通技术人员确定的量进行使用。
在治疗或预防需要抑制癌细胞复制和/或减小肿瘤尺寸的病症中，适当的剂量水平通常为每天每千克患者体重约0.01～500mg，其可以以单个或多剂量施用。优选地，剂量水平是每天每千克约0.1至约250mg；更优选地为每天每千克约0.5至约100mg。适当的剂量水平可以是每天约0.01～250mg/kg，每天约0.05～100mg/kg，或每天约0.1～50mg/kg。在此范围内，剂量可以是每天0.05～0.5、0.5～5或5～50mg/kg。对于口服给药，优选以含有1.0～1000毫克的活性成分的片剂的形式提供组合物，特别是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克的活性成分，用于对要治疗的患者对症调整剂量。可以以每天1至4次，优选每天一次或两次的方案施用化合物。
然而，应理解的是，对于任何特定患者的具体剂量水平和剂量频率可以改变，且其取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时长、年龄、体重、总体健康、性别，饮食、给药模式和时间、排泄速度、药物组合、特定病症的严重程度、和经受治疗的宿主。
贯穿本说明书，词语“包括”或其变形（comprise、comprises或comprising）应理解为意指包括所述元素、整数或步骤、或元素、整数或步骤组，但不排除任何其它元素、整数或步骤或元素、整数或步骤组。
本说明书中包括的文件、行为、材料、装置、物品等的任何讨论不应因为它存在于本发明的各个权利要求的优先权日之前而被视为承认任何或所有的这些事项构成现有技术基础的一部分，或者是与本发明相关的领域内的公知常识。
为了可以更清楚地理解本发明的本质，现在将通过参考下面的非限制性实施例描述其优选形式。
实施例
实施例1合成化学
开发了一种迅速、高收率的合成方案，其允许对1,3,5-三嗪支架（scaffold）进行修饰以产生一系列三嗪取代的衍生物。
实施例1.1-用于制备1-[4,6-双-(4-甲氧基苄基氨基)-{1,3,5}-三嗪-2- 基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮（化合物1）的合成方法
A部分制备1-(4,6-二氯-[1,3,5]-三嗪-2-基-氨基)-咪唑啉-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500211
在氮氛下将1-氨基乙内酰脲盐酸盐（457mg，3.0mmol）、氰尿酰氯（500mg，2.73mmol）和碳酸氢钠（505mg，6mmol）于乙腈（5mL）中的冰冷混悬液搅拌2h，然后将其在室温下搅拌20h。将反应混合物在减压下蒸发至干，并使用乙酸乙酯对剩余物进行提取，分离并干燥（MgSO4）乙酸乙酯。粗产物（770mg）在薄层色谱[二氧化硅；CH2Cl2/MeOH（10:1）]上得到单点，并用于下一步骤而不经进一步的纯化。1H NMR（CD3CN）：δ=4.11（s，2H）；8.71（s，1H）；8.85（s，1H）。
B部分制备1-[4,6-双-(4-甲氧基苄基氨基)-{1,3,5}-三嗪-2-基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮（化合物1）
Figure BDA00003339445500221
室温下向1-(4,6-二氯-[1,3,5]-三嗪-2-基-氨基)-咪唑啉-2,4-二酮（770mg，2.93mmol）和碳酸钾（2.42g，17.6mmol）在乙腈（20mL）中的搅拌混悬液中添加4-甲氧基苄基胺（0.96mL，7.32mmol）。将反应混合物在氮氛下室温搅拌24h，然后在减压下去除溶剂。使用乙酸乙酯提取残余物，干燥（MgSO4）并蒸发乙酸乙酯以提供粗产物，使用CH2Cl2/MeOH（50:1→10:1）作为洗脱剂在二氧化硅上由快速色谱法对粗产物进行纯化。纯产物被分离为无色固体（587mg，43%）。1H NMR（d6DMSO）：δ=3.67（s，6H）；3.96和4.05（2s，总共2H）；4.20和4.32（2s，总共4H）；6.80（bs，4H）；7.13-7.39（m，6H）；8.67、8.85和8.99（2s，总共1H）；11.0（bs，1H）。质谱（ES+）465（M+H）。
实施例1.2-用于制备1-[4-(4-氨基甲基-苄基氨基)-6-(4-甲氧基苄基 氨基)-{1,3,5}-三嗪-2-基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮，HCl盐（化合物2）的 合成方法
A部分制备1-[4-氯-6-(4-N-Boc-氨基甲基)-苄基氨基-{1,3,5}-三嗪-2-基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500222
向1-(4,6-二氯-[1,3,5]-三嗪-2-基-氨基)-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.1，A部分）（590mg，2.24mmol）和碳酸钾（681mg，4.94mmol）在无水二甲基甲酰胺（DMF，10mL）的搅拌混悬液中添加4-(N-Boc-氨基甲基)-苄基胺（582mg，2.47mmol）。将混合物在室温下搅拌20h，然后将其倾倒到水和乙酸乙酯的混合物中。过滤所得乳液，然后将有机层分离、干燥并蒸发以提供粗产物，其为黄色固体（576mg，55%）。质谱（ESI+）：946（2M+Na），924（2M+H）。
B部分制备1-[4-(4-氨基甲基-苄基氨基)-6-(4-甲氧基苄基氨基)-{1,3,5}-三嗪-2-基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮，HCl盐（化合物2）
Figure BDA00003339445500231
向1-[4-氯-6-(4-N-Boc-氨基甲基)-苄基氨基-{1,3,5}-三嗪-2-基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.2，A部分）（200mg，0.43mmol）和碳酸钾（131mg，0.95mmol）在DMF（5mL）的搅拌混悬液中添加4-甲氧基苄基胺（0.06mL，0.48mmol）。将反应混合物在35°搅拌18h，然后将其倾倒到水中并用乙酸乙酯提取。过滤所得乳液，将乙酸乙酯层分离并蒸发以提供N-Boc产物，其为油性残余物（90mg，37%）。质谱（ESI+）：1127（2M+H），564（M+H）。将N-Boc材料（90mg）溶解在二氯甲烷/三氟乙酸（1:1，3mL）中，并在氮气下在室温搅拌2h。在减压下去除溶剂和过量的TFA，并将残余物溶解在甲醇（5mL）中并用氯化氢在乙醚中的溶液（0.08mL的2M溶液）进行处理。在减压下去除甲醇，并从甲醇/乙腈中重结晶该残余物以提供粗盐酸盐，其为乳白色固体（49mg，62%）。1H NMR（d6DMSO）：δ=3.72（s，3H）；3.96-4.12（m，6H）；4.32-4.52（m，4H）；6.84（brs，2H）；7.16-7.51（m，6H）；8.4和8.5（brd，6H）；11.3（s，1H）。质谱（ES+）：464（M+H）。
实施例1.3-用于制备三嗪-咪唑啉-二酮的合成方法
制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物3）
A部分制备1-甲基-咪唑啉-2,4,5-三酮
Figure BDA00003339445500241
在氮氛下向1-甲基脲（200mg，2.70mmol）于无水四氢呋喃（6mL）的冰冷溶液中逐滴添加草酰氯（0.26mL，2.97mmol）。将反应混合物在0-5°搅拌2h，然后在用水稀释之前使其温热至室温持续1h。用乙酸乙酯提取产物，并将提取物用水洗涤、干燥并蒸发以提供产物，其为乳白色固体（326mg，94%），mp146-149℃（lit.145-148℃）。
B部分制备5-苄基氨基-3-甲基-咪唑-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500242
在室温在氮氛下向1-甲基-咪唑啉-2,4,5-三酮（实施例1.3，A部分）（800mg，6.25mmol）、咪唑（467mg，6.87mmol）、N,N-二甲基氨基吡啶（cat.）和三乙胺（1.82mL，13.1mmol）于氯仿（13mL）中的溶液中逐滴添加三甲基氯硅烷（1.67mL，13.1mmol），并且将反应混合物搅拌2h。添加苄基胺（0.75mL，6.87mmol），并且将反应混合物另外搅拌22.5h。用氯仿和水稀释反应混合物，并且干燥和蒸发氯仿提取物。通过柱层析（PS梯度洗脱至DCM:EtOAc3:1）纯化粗产物以提供产物，其为无色固体（838mg，62%），mp152-154℃。δH（300MHz，CD3CN）7.95（v br s，1H，NH），7.41-7.27（m，5H，PhH），4.64（s，2H，CH2），2.95（s，3H，CH3）。质谱（ESI）m/z218（M+H）。
C部分制备5-氨基-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500251
向5-苄基氨基-3-甲基-咪唑-2,4-二酮（实施例1.3，B部分）（400mg，1.84mmol）于乙醇/乙酸乙酯（50mL，1:1）中的溶液中添加10%Pd/C催化剂（195mg，0.18mmol）。抽空烧瓶并用氢填充三次，然后在室温下搅拌23h。在这段时间之后，通过硅藻土过滤反应混合物，并蒸发过滤物以提供产物，其为无色固体（214mg，90%），mp122-125℃。δH（300MHz，CD3CN）6.31（br s，1H，NH），4.68（d，J1.5Hz，1H，CH），2.87（s，3H，CH3）。δH（300MHz，D2O）4.95（s，1H，CH），2.96（s，3H，CH3）。δC（75MHz，D2O）175.6，158.5，64.0（CH），24.3（CH3）。
D部分制备5-(4,6-二氯-[1,3,5]三嗪-2-基氨基)-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500252
将5-氨基-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.3，C部分）（266mg，2.06mmol）、氰尿酰氯（415mg，2.27mmol）和碳酸氢钠（191mg，2.27mmol）于乙腈（15mL）中的冰冷悬浮液在冰浴上于氮氛下搅拌1h，然后将其在室温搅拌22h。蒸发溶剂，并用乙酸乙酯提取粗产物。干燥并蒸发有机层，并通过柱层析（PS梯度洗脱至DCM:EtOAc1:1）纯化粗产物以提供产物，其为膏状固体（448mg，78%）。δH（300MHz，CD3CN）7.50（br s，1H，NH），6.56（br s，1H，NH），5.60（dd，J7.8，1.8Hz，1H，CH），2.97（s，3H，CH3）。质谱（ESI）m/z259[M+H（OH，对于Cl交换的离子）].
E部分制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物3）
Figure BDA00003339445500261
在5°向5-(4,6-二氯-[1,3,5]三嗪-2-基氨基)-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.3，部分D）（193mg，0.70mmol）和碳酸钾（212mg，1.53mmol）于乙腈（15mL）的搅拌混悬液中逐滴添加4-甲氧基苄基胺（0.10mL，0.77mmol）。将混悬液在冰温度下搅拌1h，然后在室温搅拌24h。将水添加到反应混合物，然后用乙酸乙酯提取反应混合物。将粗产物应用到二氧化硅柱并进行洗脱，从二氯甲烷:乙酸乙酯（10:1）的混合物开始，然后5:1且最终二氯甲烷:甲醇（20:1）。早期部分产生中间体即单取代的5-[4-氯-6-(4-甲氧基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（133mg，51%），并且稍后的部分提供二苄基氨基产物（112mg，34%）（发现：C，55.46；H，4.66；N，18.39%。C21H20N6O6需要C，55.75；H，4.46；N，18.58）。δH（300MHz，CD3CN）：7.19（br d，4H，Ar），6.84（br d，4H，Ar），6.35（br s，1H，NH），5.9-5.8（br，3H，NH），5.46（br d，1H，CH），4.36（s，4H，CH2），3.74（s，6H，OMe），2.9-2.8（br，3H，NMe）。质谱（ESI）m/z479[M+H]。
实施例1.4-制备5-[4-(4-氨基甲基-苄基氨基)-6-(4-甲氧基苄基氨 基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物4）
A部分5-[4-氯-6-(N-Boc-{4-氨基甲基}-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500262
在室温向5-(4,6-二氯-[1,3,5]三嗪-2-基氨基)-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.3，部分D）（300mg，1.08mmol）和碳酸钾（329mg，2.38mmol）于二甲基甲酰胺（5mL）的搅拌混悬液中添加N-Boc-(4-氨基甲基)-苄基胺（281mg，1.19mmol）。将反应混合物在室温搅拌4h，然后用水和乙酸乙酯稀释。将乙酸乙酯层分离、干燥并蒸发以提供粗产物，其直接用于下一步骤。
B部分制备5-[4-{(N-Boc-4-氨基甲基)-苄基氨基}-6-(4-甲氧基苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物4（B））
Figure BDA00003339445500271
在30°向5-[4-氯-6-(N-Boc-{4-氨基甲基}-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.4，A部分）（377mg，0.79mmol）和碳酸钾（240mg，1.74mmol）于二甲基甲酰胺（5mL）的搅拌混悬液中添加4-甲氧基苄基胺（0.12mL，0.95mmol）。将反应混合物在30°搅拌18h，然后用水稀释并用乙酸乙酯进行提取。用稀盐酸洗涤乙酸乙酯层，然后将其分离、干燥和浓缩以提供粗产物，通过二氧化硅凝胶层析来对该粗产物进行纯化，其中使用二氯甲烷作为初始洗脱剂并逐渐增加极性至二氯甲烷:甲醇（20:1）。获得产物为白色固体（71mg，16%）。NMR谱δH（300MHz，CD3CN）：7.16（br s，6H，Ar），6.82（brd，2H，Ar），6.5（br s，1H，NH），6.1-5.7（br m，4H，NH），5.47（brd，1H，CH），4.5-4.3（br，4H，CH2），4.15（d，2H，CH2）3.73（s，3H，OMe），2.9-2.7（br，3H，NMe），1.39（s，9H，Boc）。
部分C制备5-[4-(4-氨基甲基-苄基氨基)-6-(4-甲氧基苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物4）
Figure BDA00003339445500281
在室温将三氟乙酸（2mL）添加到5-[4-{(N-Boc-4-氨基甲基)-苄基氨基}-6-(4-甲氧基苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.4，B部分）（63mg，0.11mol）于二氯甲烷（2mL）的搅拌溶液中。3h之后，通过减压下的蒸发去除TFA和溶剂，并且添加额外的二氯甲烷并再次去除以帮助去除任何残留的过量TFA。将粗产物溶解在无水甲醇中，并添加氯化氢于醚中的溶液（2M，0.05mL）。将反应混合物在室温搅拌15分钟，然后对其进行浓缩，并且在冰冷却下通过使用甲醇/乙腈研磨来使残余物结晶。通过过滤收集所得的浅粉固体以提供作为HCl盐的产物（48mg，86%）。NMR谱δH（300MHz，d6-DMSO）：8.9-8.2（br m，6H，NH），7.4-7.1（br m，6H，Ar），6.85（d，2H，Ar），5.6（br，1H，CH），4.5-4.2（br，4H，CH2），3.95（br s，2H，CH2）3.70（s，3H，OMe），2.8-2.6（br，3H，NMe）；质谱（ESI）m/z478[M+H]。
实施例1.5-制备5-[4-(4-甲基-苄基氨基)-6-(4-甲氧基苄基氨 基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物5）
A部分制备5-[4-氯-6-(4-甲基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮
在室温向5-(4,6-二氯-[1,3,5]三嗪-2-基氨基)-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.3，部分D）（200mg，0.72mmol）和碳酸钾（219mg，1.59mmol）于二甲基甲酰胺（5mL）的搅拌混悬液中添加4-甲基-苄基胺（0.1mL，0.79mmol）。将反应混合物在35o搅拌24h，然后用水和乙酸乙酯稀释。将乙酸乙酯层分离、干燥并蒸发以提供粗产物，其直接用于下一步骤。
B部分制备5-[4-(4-甲基-苄基氨基)-6-(4-甲氧基苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物5）
Figure BDA00003339445500291
在35°向5-[4-氯-6-(4-甲基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.5，A部分）（80mg，0.22mmol）和碳酸钾（67mg，0.49mmol）于二甲基甲酰胺（5mL）的搅拌混悬液中添加4-甲氧基苄基胺（0.03mL，0.24mmol）。将反应混合物在35°搅拌20h，然后用水稀释并用乙酸乙酯提取。将乙酸乙酯层干燥并浓缩以提供粗产物，其为泡沫（79mg，77%）。NMR谱δH（300MHz，CD3CN）：7.2-7.0（br m，7H，Ar+NH），6.8（br d，2H，Ar），6.5（br，1H，NH），6.1-5.8（br m，2H，NH），5.45（br d，1H，CH），4.5-4.3（br，4H，CH2），4.15（d，2H，CH2）3.74（s，3H，OMe），2.9-2.7（br，3H，NMe），2.3（s，3H，Me）。质谱（ESI）m/z463[M+H]。
实施例1.6-制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨 基]-3-正丁基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物6）
Figure BDA00003339445500292
使用与实施例1.3，B～E部分中所描述的基本相同的反应顺序和条件来制备标题化合物，但使用1-正丁基-咪唑啉-2,4,5-三酮代替1-甲基-咪唑啉-2,4,5-三酮。通过层析纯化来自最终步骤的产物，并通过NMR谱和质谱进行表征。NMR谱δH（300MHz，CD3CN）：7.19（br d，4H，Ar），6.84（br d，4H，Ar），6.38（br s，1H，NH），6.0-5.7（br，3H，NH），5.5（br d，1H，CH），4.36（s，4H，CH2），3.74（s，6H，OMe），3.38（t，2H，NCH2）；1.52（m，2H，CH2）；1.28（m，2H，CH2）；0.89（d，3H，Me）。质谱（ESI）m/z521[M+H]。
实施例1.7-制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨 基]-3-正丙基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物7）
使用与实施例1.3，B～E部分中所描述的基本相同的反应顺序和条件来制备标题化合物，但使用1-正丙基-咪唑啉-2,4,5-三酮代替1-甲基-咪唑啉-2,4,5-三酮。通过层析纯化来自最终步骤的产物，并通过NMR谱和质谱进行表征。NMR谱δH（300MHz，d6DMSO）：8.31（s，1H，NH）；7.5（br，1H，NH）；7.1-7.3（br，6H，Ar+NH），6.83（br d，4H，Ar），5.5（br d，1H，CH），4.32（s，4H，CH2），3.78（s，6H，OMe），3.34（br，2H，NCH2）；1.46（m，2H，CH2）；0.79（br，3H，Me）。质谱（ESI）m/z507[M+H]。
实施例1.8-制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苄基氨基)-[1,3,5]-三嗪-2-基氨 基]-3-苯基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物8）
使用与实施例1.3，B～E部分中所描述基本上相同的反应顺序和条件来制备标题化合物，但使用1-苯基-咪唑啉-2,4,5-三酮代替1-甲基-咪唑啉-2,4,5-三酮。通过层析纯化来自最终步骤的产物，并通过NMR谱和质谱进行表征。NMR谱δH（300MHz，CD3CN）：8.07（s，1H，NH）；7.4-7.0（br，9H，Ar+NH）；6.9-6.6（br，5H，Ar+NH），6.2-5.5（br，3H，NH+CH），5.5（br d，1H，CH），4.38（s，4H，CH2），3.73（s，6H，OMe）。质谱（ESI）m/z541[M+H]。
实施例1.9-制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苯氧基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨 基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物9）
Figure BDA00003339445500311
将5-氨基-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.3，部分C）（80mg，0.29mmol），p-甲氧基苯酚（39mg，0.32mmol）和碳酸钾（88mg，0.64mmol）于乙腈（5mL）中的混悬液在室温在氮氛下搅拌18h。用乙酸乙酯和水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯提取粗产物。干燥并蒸发有机层，并通过柱层析纯化粗产物（二氧化硅；二氯甲烷:乙酸乙酯，溶剂比从10:1增加到1:2），然后从乙腈中重结晶以提供标题化合物，其为无色固体（17mg，13%）。（发现：C，55.5；H，4.7；N，18.4%。C21H20N6O6需要C，55.8；H，4.5；N，18.6%）。δH（300MHz，(CD3)2CO）7.81（d，J8.1Hz，1H，NH），7.40（s，1H，NH），7.08（d，J9.0Hz，2H，ArH（与OPh邻位连接）），7.07（d，J9.0Hz，2H，ArH（与OPh邻位连接）），6.92（d，J9.0Hz，4H，ArH（与OCH3邻位连接）），5.73（d，J8.4Hz，1H，CH），3.81（s，6H，OCH3），2.77（s，3H，NCH3）。质谱（ESI）m/z453（72%，MH+）。
实施例1.10-制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苯基氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨 基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物10）
A部分制备5-[4-氯-6-(4-甲氧基-苯基氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500321
将5-氨基-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.3，部分C）（228mg，0.82mmol），p-甲氧基苯胺（111mg，0.90mmol）和碳酸氢钠（76mg，0.90mmol）于乙腈(7mL）中的混悬液在室温于氮氛下搅拌25h。蒸发溶剂，并用乙酸乙酯提取粗产物。干燥并蒸发有机层并通过柱层析纯化粗产物（二氧化硅；二氯甲烷:乙酸乙酯，以10:1的溶剂比开始并增加极性至二氯甲烷:甲醇，10:1）以提供标题化合物，其为膏状固体（288mg，96%）。δH（300MHz，(CD3)2CO）8.88（br s，0.5H，NH），8.84（br s，0.5H，NH），7.87和7.70（2br s，1H，NH），7.61（br s，1H，NH），7.51（d，J9.0Hz，2H，ArH（与NH邻位连接）），6.91和6.89（2d，J8.7，6.6Hz，2H ArH（与O邻位连接）），5.82（br d，J7.8Hz，1H，CH），3.79（s，3H，OCH3），2.95（s，1.4H，NCH3），2.73（s，1.6H，NCH3）。质谱（ESI）m/z364（100%，MH+）。
B部分制备5-[4,6-双-(4-甲氧基-苯基氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物10）
Figure BDA00003339445500322
将5-[4-氯-6-(4-甲氧基-苯基氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.10，A部分）（50mg，0.14mmol）、对甲氧基苯胺（25mg，0.21mmol）和碳酸钾（48mg，0.34mmol）于无水DMF（5mL）中的混悬液于氮氛下搅拌18.5h。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯提取粗产物。干燥并蒸发有机层，并通过柱层析纯化粗产物（二氧化硅；二氯甲烷:乙酸乙酯，以10:1的溶剂比开始并增加极性至二氯甲烷:甲醇，10:1）以提供产物，其为浅黄色固体（36mg，58%）。δH（300MHz，(CD3)2CO）8.14（br s，2H，NH），7.60（br s，4H，ArH（与NH邻位连接）），7.43（br s，1H，NH），6.91（d，J8.7Hz，1H，NH），6.85（d，J9.0Hz，4H，ArH（与O邻位连接）），5.91（d，J7.8Hz，1H，CH），3.77（s，6H，OCH3），2.86（br s，2.0H，NCH3），2.73（br s，1.0H，NCH3）。质谱（ESI）m/z451（37%，MH+）。
实施例1.11-制备5-[4-(4-羟基-苯基氨基)-6-(4-甲氧基-苯基氨 基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物11）
Figure BDA00003339445500331
将5-[4-氯-6-(4-甲氧基-苯基氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.10，A部分）（76mg，0.05mmol）、对氨基苯酚（50mg，0.46mol）和醋酸钾（25mg，0.25mmol）于无水DMF（3mL）中的混悬液于氮氛下在35℃的油浴上搅拌22h。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯提取粗产物。干燥并蒸发有机层，并通过柱层析纯化粗产物（二氧化硅；二氯甲烷:乙酸乙酯，以10:1的溶剂比开始并并增加极性至二氯甲烷:甲醇，10:1）以提供产物，其为淡黄褐色固体（24mg，33%）。（发现：C，54.1；H，4.9；N，24.3%。C20H20N8O4.MeOH需要C，53.8；H，5.2；N，23.9%）。δH（300MHz，CD3CN）7.49（br d，J8.7Hz，2H，ArH（与NH邻位连接）），7.37（br s，4H，NH和ArH（与NH邻位连接）），6.87（d，J9.0Hz，2H，ArH（与O邻位连接）），6.75（d，J9.0Hz，2H，ArH（与O邻位连接）），6.70（br s，1H，OH），6.48（s，1H，NH），6.10（br d，J7.8Hz，1H，NH），5.67（d，J7.8Hz，1H，CH），3.78（s，3H，OCH3），2.88（br s，3H，NCH3）。质谱（ESI）m/z437（36%，MH+）。
实施例1.12-制备5-[4-(4-苄氧基-苯基氨基)-6-(4-甲氧基-苯基氨 基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（化合物12）
Figure BDA00003339445500341
将5-[4-氯-6-(4-甲氧基-苯基氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基氨基]-3-甲基-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.10，A部分）（93mg，0.26mmol）、对苄氧基苯胺盐酸盐（132mg，0.56mmol）和碳酸铯（184mg，0.56mmol）于无水DMF（5mL）中的混悬液于氮氛下在30℃油浴上搅拌19h。用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯提取粗产物。干燥并蒸发有机层，并通过柱层析纯化粗产物（二氧化硅；二氯甲烷:乙酸乙酯，以10:1的溶剂比开始并增加极性至二氯甲烷:甲醇，20:1）。从PS/DCM/EtOAc重结晶提供产物，其为膏状固体（90mg，62%）。（发现：C，61.5；H，5.1；N，21.2%。C27H26N8O4需要C，61.6；H，5.0；N，21.3%）。δH（300MHz，CD3CN）7.58-7.30（m，11H，ArH（与NH邻位连接），PhH和2NH），6.94（d，J8.7Hz，2H，ArH（与O邻位连接）），6.87（d，J8.7Hz，2H，ArH（与O邻位连接）），6.49（br s，1H，NH），6.14（m，1H，NH），5.67（d，J7.2Hz，1H，CH），5.09（s，2H，CH2），3.78（s，3H，OCH3），2.88（br s，3H，NCH3）。质谱（ESI）m/z527（100%，MH+）。
实施例1.13-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(哌啶-1-基甲基) 苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物13）
A部分制备1-[4-氯-6-(4-甲氧基苄基)氨基-{1,3,5}-三嗪-2-基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮
Figure BDA00003339445500351
在0℃向1-(4,6-二氯-[1,3,5]-三嗪-2-基-氨基)-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.1，A部分）（3.84g，14.6mmol）和K2CO3（4.4g，31.8mmol）于CH3CN（50mL）的混合物中逐滴添加(4-甲氧基苯基)-甲胺（2.0g，14.6mmol）。将混合物在室温搅拌过夜。TLC显示反应完成。过滤混合物，并且滤饼分配在水与EtOAc之间。分离有机层，并用EtOAc提取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在真空中浓缩以提供期望的化合物（3.50g，收率：66%），其为白色固体。将其用于下一步骤而不经进一步的纯化。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.30-11.23（m，1H），10,06-9.83（m，1H），8.67-8.60（m，1H），7.24-7.13（m，2H），6.90-6.83（m，2H），4.40-4.35（m，2H），4.26-4.05（m，2H），3.73（s，3H）。质谱（ESI）m/z364（100%，MH+）。
B部分制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(哌啶-1-基甲基)苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物13）
Figure BDA00003339445500352
在回流下过夜加热1-[4-氯-6-(4-甲氧基苄基)氨基-{1,3,5}-三嗪-2-基-氨基]-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.13，A部分）（150mg，0.41mmol），4-哌啶基亚甲基-苄基胺（101mg，0.49mmol）和K2CO3（171mg，1.24mmol）于THF（8.0mL）中的混合物。TLC显示反应完成。将混合物冷却至室温并倾倒到水中，重复地用EtOAc提取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在真空中浓缩。通过快速色谱法（二氧化硅凝胶，CH2Cl2:MeOH=20:1，v/v）纯化残余固体以提供化合物13（65mg，收率：30%），其为乳白色固体。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.13（br，1H），9.03-8.74（m，1H），7.66-6.77（m，10H），3.91（s，1H），3.72-3.45（m，4H），2.38（s,2H），1.53-1.24（m，6H）。质谱（ESI）m/z532.3（100%，MH+）。
实施例1.14-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(吗啉代甲基)苄 基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物14）
Figure BDA00003339445500361
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物14。δH（400MHz，DMSO-d6）：11,14-11,04（m，1H），7.50-5.50（m，10H），4.41-3.80（m，6H），3.72（s，3H），3.56（s，2H），3.41（s，4H），2.33（s，4H）。质谱（ESI）m/z534.2（100%，MH+）。
实施例1.15-制备1-((4-((4-((二乙基氨基)甲基)苄基)氨基)-6-((4-甲 氧基苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物15）
Figure BDA00003339445500371
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物15。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.12-11.04（m，1H），9.02-8.92（m，1H），7.62-6.77（m，10H），4.42-4.23（m，4H），4.09，3.92（m，2H），3.72（s，3H），3.53（s，2H），3.55-3.52（m，4H），0.99（br s.，6H）。质谱（ESI）m/z520.3（100%，MH+）。
实施例1.16-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-((4-甲基哌嗪-1- 基)甲基)苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物16）
Figure BDA00003339445500372
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物16。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.07（br s，1H），9.04-8.89（m，1H），7.49-6.72（m，10H），4.42-4.21（m，4H），4.09-3.94（m，2H），3.72（s，3H），3.40（s，2H），2.34（br s，8H），1.92（s，3H）。质谱（ESI）m/z547.3（100%，MH+）。
实施例1.17-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(哌啶-1-基)苄基) 氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物17）
Figure BDA00003339445500381
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物17。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.14-11.03（m，1H），8.90-8.70（m，1H），7.56-6.84（m，10H），4.35-4.02（m，6H），3.72（s，3H），3.07（s，4H），1.60-1.51（m，6H）。质谱（ESI）m/z518.3（100%，MH+）。
实施例1.18-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-吗啉代苄基)氨 基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物18）
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物18。δH（400MHz，DMSO-d6）：10.94（br s，1H），8.89-8.70（m，1H），7.75-6.77（m，10H），4.34-4.06（m，6H），3.74-3.72（m，7H），3.04（s，4H）。质谱（ESI）m/z520.2（100%，MH+）。
实施例1.19-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1- 基)苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物19）
Figure BDA00003339445500391
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物19。δH（400MHz，DMSO-d6）：8.89-8.70（m，1H），7.40-6.81（m，10H），4.35-4.01（m，6H），3.72（s，3H），3.39（br s，4H），3.10（s，4H），2.27（s，3H）。质谱（ESI）m/z533.3（100%，MH+）。
实施例1.20-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((3-(哌啶-1-基)苄基) 氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物20）
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物20。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.12-11.04（m，1H），9.03-8.71（m，1H），7.59-6.60（m，10H），4.37-3.98（m，6H），3.71（s，3H），3.09（s，4H），1.59-1.51（m，6H）。质谱（ESI）m/z518.3（100%，MH+）。
实施例1.21-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((3-吗啉代苄基)氨 基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物21）
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物21。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.13-11.03（m，1H），9.04-8.72（m，1H），7.58-6.66（m，10H），4.37-3.98（m，6H），3.72（s，7H），3.07（s，4H）。质谱（ESI）m/z520.2（100%，MH+）。
实施例1.22-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((3-(4-甲基哌嗪-1- 基)苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物22）
Figure BDA00003339445500402
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物22。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.07（br s，1H），9.03-8.71（m，1H），7.56-6.61（m，10H），4.36-3.98（m，6H），3.72（br s，7H），3.12（s，4H），2.27（s，3H）。质谱（ESI）m/z533.3（100%，MH+）。
实施例1.23-制备1-((4-((4-(2-(二乙基氨基)乙氧基)苄基)氨 基)-6-((4-甲氧基苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合 物23）
Figure BDA00003339445500411
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物23。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.07（br s，1H），9.03-8.71（m，1H），7.57-6.77（m，10H），4.35-3.98（m，8H），3.72（s，3H），2.81（s，2H），2.60-2.51（m，4H），0.99（t，J=7.2Hz，6H）。质谱（ESI）m/z550.3（100%，MH+）。
实施例1.24-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(2-吗啉代乙氧 基)苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物24）
Figure BDA00003339445500412
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物24。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.16-11.06（m，1H），9.03-8.72（m，1H），7.57-6.81（m，10H），4.35-3.99（m，8H），3.72（s，3H），3.58（s，4H），2.67（s，2H），2.52-2.46（m，4H）。质谱（ESI）m/z564.3（100%，MH+）。
实施例1.25-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(2-(吡咯烷-1-基) 乙氧基)苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物25）
Figure BDA00003339445500421
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物25。δH（400MHz，DMSO-d6）：10.78（br s，1H），9.03-8.73（m，1H），7.65-6.77（m，10H），4.41-3.95（m，6H），3.72（s，3H），3.60（s，2H），2.55（br s，4H），1.71（s，4H）。质谱（ESI）m/z518.3（100%，MH+）。
实施例1.26-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(((2-甲氧基乙基) 氨基)甲基)苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物26）
Figure BDA00003339445500422
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物26。δH（400MHz，DMSO-d6）：9.03-8.73（m，1H），7.52-6.77（m，10H），4.40-4.09（m，6H），3.72（s，3H），3.67（s，2H），3.39（m，2H），3.23（s，3H），2.63（s，2H）。质谱（ESI）m/z522.2（100%，MH+）。
实施例1.27-制备1-((4-((4-((二甲基氨基)甲基)苄基)氨基)-6-((4-甲 氧基苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮（化合物27）
使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物27。δH（400MHz，DMSO-d6）：11.07（br s，1H），9.04-8.75（m，1H），7.66-6.74（m，10H），4.44-3.91（m，6H），3.72（s，5H），2.34（s，6H）。质谱（ESI）m/z492.2（100%，MH+）。
实施例1.28-制备1-((4-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-((4-(哌嗪-1-基甲基) 苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)咪唑啉-2,4-二酮2,2,2-三氟乙酸酯(化 合物28）
通过对使用实施例1.13，A和B部分中所述的合成步骤产生的对应的Boc-保护的4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)氨基衍生物去保护来获得化合物28。δH（400MHz，CD3OD）：7.42-6.83（m，8H），4.64-4.47（m，4H），4.20-3.93（m，4H），3.79（s，3H），3.34-3.32（m，4H），3.12-3.01（m，4H）。质谱（ESI）m/z533.3（100%，MH+）。
实施例1.29-制备叔丁基4-(((4-((2,4-二氧代咪唑烷-1-基)氨 基)-6-((4-甲氧基苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)甲基)苄基氨基甲酸酯 （化合物29）
Figure BDA00003339445500441
使用1-(4,6-二氯-[1,3,5]-三嗪-2-基-氨基)-咪唑啉-2,4-二酮（实施例1.1，A部分）作为起始材料，使用实施例1.4，A和B部分中所述的合成步骤产生化合物29。
实施例1.30-制备5-((4,6-双((4-羟基苄基)氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)-3-甲基咪唑啉-2,4-二酮（化合物30）
Figure BDA00003339445500442
调整上述的合成步骤来产生化合物30。
实施例2-生物测试
实施例2.1-癌细胞系中的增殖抑制和抑制持续时间
本发明的三嗪化合物已显示在G2/M处阻滞细胞周期。测试三嗪物质对肿瘤细胞系“体外”生长的抑制活性。对初始研究，使用两种结肠癌细胞系（LIM1215和SW480）和两种乳腺癌细胞系（MDA-MB-231和MCF-7）。在这些实验中使用Taxol作为对照（表1）。
所有测试的三嗪在其最适浓度时在诱导G2/M阻滞中至少与Taxol一样有效（表1）。
表1：三嗪对癌细胞系的抗有丝分裂作用。向对数生长24小时的细胞添加抑制剂。通过DNA染色和ModFit分析来监测细胞周期的期分布。（a）对于细胞周期中进展的IC50，且（b）暴露于1μM Taxol之后的G2/M细胞比例被用作标准；三嗪效能表示为G2M中的细胞比例（测试）/G2M中的细胞比例（Taxol）。在这些实验中G2/M细胞的最大数目为：LIM1215=78.5%；SW480=72%；MDA-MB-231=55%；MCF-7=62%。NT=未测试。
Figure BDA00003339445500451
实施例2.2-三嗪对体外癌细胞生长的作用
还通过MTT检定在肿瘤细胞系板（panel）中测量增殖抑制（一般方案，参见实施例2.6）。通过该测定细胞增殖的检定所确定的IC50与根据G2/M阻滞的FACS分析计算出的值密切相配，表明G2/M阻滞确实防止细胞增殖。细胞与药物孵育之后的冲洗实验（wash-out experiment）导致乳腺癌细胞系中增殖的恢复和一个结肠直肠癌细胞系中的完全阻滞，表明药物在至少一些细胞类型中是具有细胞毒性的。
实施例2.3.1-三嗪对肿瘤细胞生长的生物作用
对一系列细胞系测试化合物2以确定其活性和选择性（表2）。在与抑制剂一起孵育3天之后使用MTT检定来测定细胞增殖（方案参见实施例2.6）。
表2：化合物2对肿瘤细胞系的增殖抑制：（a）鼠B祖细胞系；（b）人结肠直肠癌；和（c）人乳腺癌。
Figure BDA00003339445500452
Figure BDA00003339445500461
不同细胞系的IC50非常相似，表明化合物2靶向G2/M完成所需的共同通路。
实施例2.3.2-三嗪对“体外”和“体内”微管蛋白聚合的作用
测试三嗪对“体外”和“体内”微管蛋白聚合的作用。这些实验显示，三嗪诱导的微管蛋白聚合是最小限度的且发生剂量远超过作为有丝分裂阻滞剂的药效剂量。
为监测三嗪对微管蛋白的作用，本发明的发明人测试了完整细胞中的微管蛋白聚合，之后使其暴露于药物。
在含有0.5%NP-40的低渗缓冲液中裂解经Taxol或化合物3处理的细胞，并且高速离心细胞提取物。聚合的微管蛋白在洗涤剂中不可溶：因此，在该处理之后，在上清液中回收可溶的微管蛋白（S），并且在细胞球粒中回收聚合的微管蛋白（P）。通过SDS/PAGE和使用微管蛋白特异性抗体的免疫印迹来监测这两种形式的相对比例。
在该测试中，Taxol以剂量依赖的方式较强地使微管蛋白稳定，而三嗪即使在高浓度下也显示出可忽略的作用（图1）。
在尝试检测三嗪与微管蛋白的直接相互作用时，使用“体外”微管蛋白聚合检定（图2）。在这些检定中，三嗪引起微管蛋白聚合较小但显著的增加。然而，微管蛋白聚合所需的三嗪浓度比细胞增殖检定中的IC50大1000倍以上。
实施例2.3.4-小鼠中的剂量增加
初始在小鼠中测试化合物1的耐受性和毒性。用溶于恒定体积的DMSO中的剂量逐渐上升的化合物1对C57Bl/6小鼠（8-12周大）进行皮下注射。注射后24小时处死小鼠。在这段时间内高达80mg/kg的剂量没有不利作用。因此，化合物在远超过“体外”观察到的IC50的剂量下被很好地耐受。
持续4天高达64.5mg/kg剂量的化合物2在外在健康或行为方面没有显示出不良作用。在21.5和64.5mg/kg下，在一些小鼠的注射侧有皮肤变薄的症状。在BALB/c裸鼠中，化合物2在20mg/kg下引起一些皮肤损伤。这些较小的皮肤损伤在2-3天内容易愈合。
实施例2.4-药物动力学
在注射化合物2到小鼠中之后，确定其药物动力学参数。
当以水溶液中50mg/kg的剂量输送时，药物在血液流中达到60μM的坪浓度并且在高达6μM的水平保持6-10小时。消除半衰期为约1.5小时。在血浆中还检测到至少两种“体外”诱导G2/M细胞周期阻滞的活性代谢物，并且通过质谱确认其结构。当在药物动力学计算中包括该活性代谢物时，活性药物的总浓度在其开始从血浆中消除之前平均为30μM且持续高达6小时。
实施例2.4.1-从小鼠血液中提取并定量三嗪
下面描述所开发的用于从小鼠血浆中提取活性三嗪、对提取的药物进行RP-HPLC定量以及表征代谢物和化合物的药物动力学性质的方案。
实施例2.4.1.1-从小鼠血浆中提取三嗪
在通过CO2气体麻醉之后通过心脏穿刺收集小鼠血液。随后使小鼠安乐死。将血液转移到EDTA管以防止凝固，并且在通过离心分离之后收集血浆。对于各个样品，将25μl血浆添加到75μl的冷0.1%TFA（v/v），以5μM氢化可的松（HC）为内标。在需要之前将这些处理的样品储存在-20°C。在融化后，通过离心使其澄清并且经RP-HPLC来分析提取物。
实施例2.4.1.2-对小鼠血浆中三嗪的定量
在Zorbax SB-C18，2.1X150mm，5μ柱上，使用线性50min梯度的乙腈于0.1%（v/v）TFA中的溶液，以0.1ml/min的流速和45°C的柱温分离各个100μl血浆提取物。在250nm进行检测。代表性色谱图示于图3中。
实施例2.4.1.3-化合物2代谢物的分析
注射有化合物2的小鼠而非对照小鼠的血浆的色谱图含有较小峰。这些峰在注射化合物2之后的晚些时间出现，且被推测为代谢物。为证实这些峰的本性（identity），将其吸收光谱与化合物2标准品的吸收光谱进行比较。
如从图4中可见，所有的峰具有特征的250nm吸收且看似为相关的化合物。通过RP-HPLC对小鼠血浆进行分级，并且收集上示的出峰物。通过冻干浓缩合并的峰样品。在用于生物检定的培养介质中重建一部分各个峰样品（图5）。通过LC-MS分析残余物以确证质量并识别结构。
回收的化合物2（峰1）、峰2和峰3的IC50分别为0.1μM、0.2μM和>1μM。尽管由于量非常小而难以对回收的峰物质的浓度进行精确的定量，但检定确实显示所有的回收峰物质具有一些生物活性。
所回收化合物的LC-MS分析结果示于表3中。
表3在化合物2注射之后从小鼠血浆中回收的代谢物的LC-MS分析结果
样品 质量（Da）
化合物2 464.2（M+1）
峰1 464.1（M+1）
峰2 655.0（M+1）
峰3 479.1（M+1）
对起始材料化合物2的分析证实游离基础化合物的分子量为464Da。峰1具有相同的质量，这证实其为从血浆中回收的相同的化合物。峰3的质量为479Da，表明为羟基衍生物。峰2是质量为655Da的大得多的化合物。其它的质量表明其为羟基衍生物的葡糖苷酸衍生物。
这些结果证实回收的化合物为化合物2的活性代谢物并且应包括在血浆中活性药物水平以及化合物的消除半衰期的计算中。
实施例2.4.1.4-化合物2的药物动力学分析
通过相对于已知标准品比较药物与HC峰面积的比率，由校准的内标法确定血浆中的药物浓度。一个药物动力学实验中小鼠中的化合物2的血浆浓度绘制于图6中。
这些结果表明，可以在血清中达到化合物2的治疗有效的浓度，并其可保持高达10小时。
实施例2.5-作为抗肿瘤药物在异种移植实验中的效力
已使用异种移植实验来确定化合物2在减少肿瘤生长中的效力。在初始的实验中，使用由结肠直肠癌细胞系LIM2537建立的肿瘤模型，化合物2显著地降低了肿瘤的生长率。
实施例2.5.1-使用LIM2537细胞（结肠癌细胞系）的肿瘤异种移 植研究
方法：
选择结肠癌细胞系LIM2537用于BALB/c裸鼠中的肿瘤异种移植研究，因其生长显示出受化合物2抑制（参见“三嗪对肿瘤细胞生长的生物作用”）。
以每个肿瘤3x106细胞（于100μl PBS中）接种小鼠，各个肋皮下（SC）接种一个肿瘤。在接种之后的第三天使用媒介物对照（VC）或于100μl水溶液中的3mg/ml的药物（提供15mg/kg的剂量）开始治疗。在腹部皮下注射小鼠，在实验期间每周三次。监测小鼠的体重、肿瘤体积和外观以及任何对药物的不良反应。33天之后终止实验并且使对照组安乐死，因为该组的肿瘤负担已达允许的最大量。然后让剩余的小鼠不进行处理9天，以监测肿瘤生长的恢复。
结果：
小鼠体重不受药物处理的影响。对照组与药物组之间肿瘤大小的差异在12天之后较显然，且到第33天，当使对照组安乐死时，该差异明显。在各组内，在对照中有一个缓慢生长的肿瘤，且在处理组中有一个快速生长的肿瘤。这些异常肿瘤是较大标准偏差的原因（图7）。
从该实验可以得出结论，治疗计划（以15mg/kg的剂量每周注射3次化合物2）可成功地减慢LIM2537细胞的生长。在该剂量和剂型下对药物没有长期不良反应。
实施例2.5.2-使用U87MG（Δ2-7）–（脑癌细胞系）的肿瘤异种移植研究。
方法：
小鼠：Balb/c nu/nu雄性；8对照和8处理。
接种的细胞：U87MG（Δ2-7），2.13x106细胞/肿瘤；每只小鼠两个肿瘤。
剂量：化合物2，20mg/kg=每只20g的小鼠，100μl的注射用水中为4mg/ml。使用100μl注射用水注射对照小鼠。
处理和监测：在接种之后的第5天开始处理。在腹部交替侧每周三次地皮下注射小鼠（周一、周三、周五）。对小鼠称重，在两个维度上测量肿瘤直径，并且监测小鼠的健康。
在处死小鼠之后：解剖肿瘤并对其称重；还对脾和肝称重。
结果：
肿瘤在动物间迅速且不断地生长。在接种之后的第14天终止实验，因为大多数对照小鼠已达到最大的肿瘤负担，而且一些肿瘤开始溃烂。在实验结束时，在对照肿瘤与处理肿瘤的体积之间存在显著差异（图8）。
死后还对肝和脾称重。在图9中，比较这些器官的平均重量以及肿瘤的平均重量。
与媒介物对照注射的小鼠中的肿瘤相比，每周三次地以20mg/kg的化合物2处理U87MG（Δ2-7）肿瘤减小了肿瘤的生长。
实施例2.5.3-使用H1437（非小细胞肺癌系）的肿瘤异种移植研究。
方法：
小鼠：Balb/c nu/nu雄性；8对照和8处理；5周龄。
接种的细胞：H1437（非小细胞肺癌细胞系），2x106细胞/肿瘤；每只小鼠两个肿瘤。
剂量：20mg/kg的化合物2=每只20g的小鼠，100μl的注射用水中为4mg/ml。使用100μl注射用水注射对照小鼠。
处理和监测：在接种之后的第5天开始处理。在腹部交替侧每周三次地皮下注射小鼠。对小鼠称重；在两个维度上测量肿瘤直径，并且监测小鼠的健康。注射与图中的数据点相应，而且在不进行测量的第14天进行额外的处理。
结果：
对照组中的肿瘤迅速生长，但动物间有一些变化。测量的肿瘤体积在21之后稳定，并且生长速度没有如之前实验中的细胞系那样增加。这些肿瘤通常生长为较高的圆球而不是延动物的肋铺展。在接种之后的第26天终止实验，因为大多数对照小鼠已达到最大的肿瘤负担。留在皮下的肿瘤没有溃烂，且看起来不是特别有血管。相比之下，处理组的肿瘤贯穿26天仍非常小且硬。在实验结束时，在对照肿瘤与处理肿瘤的体积之间存在显著差异（图10）。
在处死小鼠之后，解剖肿瘤并对其称重。在解剖之后，比较来自两个组的肿瘤。在两个组的观察肿瘤大小之间存在显著差异（图11）。
本领域技术人员能够理解，在不脱离概括描述的本发明的范围的情况下，可以如具体实施方式中所示地对本发明进行多种变化和/或修改。因此，本实施方式在所有方面被认为是示例说明性的且不是限制性的。
实施例2.6
用于所有细胞和抑制剂的MTT和MTS检定的方案
实施例2.6.1-综合概要
·细胞以在100μl介质+5%FCS（+添加剂1）中以104/孔铺板
·细胞孵育过夜：
·在新鲜板中在150μl介质中滴定抑制剂
·将100μl滴定的化合物转移到细胞板的匹配孔中。
·另外孵育4天：
·添加10μl MTS2或MTT31.5～2小时，并在Multiscanner（波长492/690）上读取
1用于培养LIM细胞系的添加剂：10μM硫代甘油、0.025U/ml胰岛素，1μg/ml氢化可的松。23-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑。33-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物。
实施例2.6.2-在MTS检定中使用的细胞系
·LIM2537人结肠癌细胞系，在RPMI+添加剂1+5%FCS中生长
实施例2.6.3-细胞铺板：每板一个细胞系
使细胞胰蛋白酶化并在介质+5%FCS中洗涤两次，并以每孔104细胞铺板100μl。
37°C+5%-10%CO2孵育箱中孵育细胞板
实施例2.6.4-抑制剂
在DMSO中溶解抑制剂以制作10mM储备液并一式两份滴定到96孔板中，以用作测试板用储备液。滴定范围以倍半稀释从40μM降至0.01μM，且100μl的各个稀释液被转移到测试板的含有细胞（也为100μl）的合适孔中，导致抑制剂的终浓度跨经一式两份的行从20μM降到0.01μM。每板测试三种抑制剂（A-F行）。
各个板具有布置：
行A、B：抑制剂1稀释液，每孔200μl
行C、D：抑制剂2稀释液，每孔200μl
行E、F：抑制剂3稀释液，每孔200μl
对照行G1-6：介质+5%FCS（用于最大量生长）
对照行G7-12：Taxol（250nM，用于最大抑制）
对照行H：从细胞中去除介质并且用200μl无血清介质替换，用于获得无血清生长速度。
实施例2.6.5-孵育
在孵育箱中孵育各板4天。如下概述地进行MTS或MTT的过程。
实施例2.6.6-MTS检定
向各孔添加10μl MTS（Sigma）溶液。孵育MTS1.5～2小时且孵育MTT4小时。通过向各孔添加10μl10%SDS来停止反应。在Multican（492/690）板读取器上进行读取，绘制颜色变化vs抑制剂浓度以确定IC50。
实施例2.6.7-MTT检定
MTT溶液
MTT（Sigma M-2128）-5g溶解于PBS中，5mg/ml，过滤灭菌且储存在-20℃。需要时融化。
MTT溶剂（酸化异丙醇）
a.1M HCl：
在500ml DDW中混合44.6ml浓缩的HCl（11.2M）
b.酸化异丙醇（具有0.04N HCl的异丙醇）：
将20ml1M HCl与480ml异丙醇（丙-2-醇、异-丙醇）混合MTT添加
向各孔中添加10μl MTT溶液并在37℃的孵育箱中孵育4小时。
以1500rpm旋转板5min，并小心地去掉介质，而不搅乱所得结晶。每孔添加200μl酸化异丙醇（MTT溶剂）。
放置于板振动器上，室温，速度6.5，持续10min-30min。
在Thermo Multiskan Ex上在560/690nm处读取板的OD。
实施例2.6.8-使用LIM2537人结肠癌细胞系对本发明的所选化合 物进行MTS检定的结果
表4使用LIM2537人结肠癌细胞系对本发明的所选化合物进行MTS检定的结果
化合物号 IC50范围（μM）
13 >0.1-1
14 >10
15 1-10
16 ≤0.1
17 ≤0.1
18 >0.1-1
19 >0.1-1
20 >0.1-1
21 1-10
22 >10
23 1-10
24 >0.1-1

Claims (16)

1.一种式I的化合物，或其药学上可接受的衍生物、盐或前药，其中：
式I
E和G各自独立地选自C1-4烷基、-NH-、-N(C1-4烷基)-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-、任一取向的-N(C1-4烷基)-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；并且
Figure FDA00003339445400012
是单键或双键；
当
Figure FDA00003339445400013
是单键时，K独立地选自CH和N，且J独立地选自NH和CH2；或者
当
Figure FDA00003339445400014
是双键时，K是C，且J独立地选自N和CH；
R1是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、N(R4)2、-C1-4烷基N(R4)2、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和CF3；
各个R4独立地选自H、OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R5，条件是如果一个R4是OH，则另一个R4不能是OH；或者
-N(R4)2形成任选被C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R8，条件是如果一个R6是OH，则另一个R6不能是OH；或者
-N(R6)2形成任选被C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和苯基；
R3选自H、-C1-4烷基、芳基和烷基芳基；并且
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其为式II的化合物或其药物衍生物、盐或前药，其中：
Figure FDA00003339445400021
式II
E和G各自独立地选自C1-4烷基、-NH-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；并且
R1是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、N(R4)2、-C1-4烷基N(R4)2、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和CF3；
各个R4独立地选自H、OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R5，条件是如果一个R4是OH，则另一个R4不能是OH；或者
N(R4)2形成任选被C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R8，条件是如果一个R6是OH，则另一个R6不能是OH；或者
-N(R6)2形成任选被C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和苯基；
R3选自H、C1-4烷基和芳基；
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其为式III的化合物或其药物衍生物、盐或前药，其中：
Figure FDA00003339445400031
式III
E和G各自独立地选自C1-4烷基、-NH-、-O-以及任一取向的-NH-C1-4烷基-和任一取向的-O-C1-4烷基-；
R1是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R4)2、-C1-4烷基NHR4、-O-C1-4烷基-N(R4)2、-C3-6环烷基-N(R4)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和CF3；
其中各个R4独立地选自-H、-OH、C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R5，条件是如果一个R4是OH，则另一个R4不能是OH；或者
-N(R4)2形成任选被C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
R2是0-2个取代基，其中各个取代基独立地选自-C1-4烷基、-C3-6环烷基、-OH、-O-C1-4烷基、-N(R6)2、-C1-4烷基N(R6)2、-O-C1-4烷基-N(R6)2、-C3-6环烷基-N(R6)2、-邻苯基、-邻苄基、-NO2、卤素和CF3；
各个R6独立地选自-H、-OH、-C1-4烷基、-C(O)OC1-4烷基、-C1-4烷基-OR7和-C(O)R8，条件是如果一个R6是OH，则另一个R6不能是OH；或者
-N(R6)2形成任选被-C1-4烷基取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉代基；
其中R5和R8中的各个独立地选自-C1-4烷基和苯基；
R3选自H、C1-4烷基和芳基；并且
其中R7选自-H和-C1-4烷基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中E和G中的各个均独立地选自-NHC1-4烷基。
5.根据权利要4所述的化合物，其中E和G的杂原子均与三嗪环键合。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中R1和R2各自独立地为1-2个取代基。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R1和R2中的各个为至少一个对位取代基。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中各个R1取代基独立地选自-OH、-O-C1-4烷基和-C1-4烷基。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中各个R2取代基独立地选自-OH、O-C1-4烷基和-C1-4烷基N(R6)2。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中R3选自H、甲基、丙基、丁基和苯基。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R3是氢。
12.根据权利要求1所述的化合物，其选自：
Figure FDA00003339445400051
Figure FDA00003339445400071
Figure FDA00003339445400081
13.根据权利要求12所述的化合物，其选自：
Figure FDA00003339445400082
14.一种在受试者中治疗癌症的方法，包括对所述受试者施用有效量的根据权利要求1-13中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的衍生物、盐或前药。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述癌症是结肠癌、非小细胞肺癌、脑癌或乳腺癌。
16.一种药物组合物，包括根据权利要求1-13中任一项所述的化合物或药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
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