CN103451314A - 检测idh1、idh2基因多态突变位点的引物、方法和试剂盒 - Google Patents
检测idh1、idh2基因多态突变位点的引物、方法和试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了检测IDH1、IDH2基因多态突变热点的引物、方法和试剂盒，其中所用引物包括：(ⅰ)扩增IDH1基因包含第132位氨基酸序列的引物；(ⅱ)扩增IDH2基因包含第140、172位氨基酸序列的引物；采用普通PCR技术，可用于快速检测急性粒细胞白血病（AML）患者体内IDH1、IDH2基因多态热点的突变情况。本发明有效地提高自动化程度，省去了以往对于IDH1和IDH2进行全外显子测序的繁琐流程和大量检测费用，有助于快速、准确地诊断患者预后，且费用低。
Description
技术领域
本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测IDH1、IDH2基因多态突变热点的引物，采用普通PCR技术，可用于快速检测急性粒细胞白血病（AML）患者体内IDH1、IDH2基因多态位点的突变情况。
背景技术
造血组细胞的获得性遗传和表观遗传学的改变是急性髓系白血病（AML）的发病因素之一，这些变化改变了造血组细胞的生长、增殖和分化的正常机制。AML发病时骨髓原始细胞隐藏着一种或以上的染色体变异，这些变异不仅是AML的诊断标志，更是评价完全缓解率(CR)，复发风险（RR）)及总生存(OS)的指标。然而，国外资料表明，AML的染色体核型异常检出率为60-80%。因此，仍有一大部分AML患者没有发现染色体变异，这组患者所患的疾病为核型正常的AML (CN-AML)，是AML中占比例最多的亚型，按细胞遗传学分析，它们归为预后中等组。
异柠檬酸脱氢酶(IDH)家族包括以NAD或NADP为辅助因子，催化异柠檬酸的氧化脱酸反应生成α-酮戊二酸的酶类，同时分别生成NADH或NADPH。在哺乳动物细胞中，IDH同工酶有以下三种形式：依赖NAD的线粒体IDH，依赖NADP的线粒体IDH，依赖NADP的胞质IDH。编码依赖NADP的人IDH 1酶的IDH 1基因位于染色体2q33.3，并且定位于细胞质和过氧化物酶体中；编码依赖NADP的线粒体IDH2酶的IDH2基因位于染色体15q26.1。尽管IDH1和IDH2都参与了细胞内氧化损伤的防御机制，但IDH1在脂质的代谢机制中起了重要作用。
近年来，更多的研究发现，IDH1和IDH2突变存在于急性髓系白血病（AML）、急性淋巴性白血病（ALL）、骨髓增殖性疾病（MPD）中，在慢性粒细胞白血病(CML)中尚未检测到突变。文献报道IDH 1和IDH2热点突变在CN-AML患者中的发生率分别为5.5-9.6%和3-11%，并认为具有IDH 1和IDH2热点突变的AML患者具有较低的CR，较高的RR和较短的OS。目前对于IDH1和IDH2的检测主要采用全外显子测序的方法，该方法流程繁琐和检测费用高。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测IDH1、IDH2基因多态突变热点的引物，采用PCR技术，可用于快速检测急性粒细胞白血病（AML）患者体内IDH1、IDH2基因多态位点的突变情况。所述检测IDH1、IDH2基因多态热点突变情况的引物，其特征在于，包括：
(ⅰ) 扩增IDH1基因的引物，其碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA（SEQ NO1）
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT（SEQ NO2）
(ⅱ) 扩增IDH2基因的引物，其碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT（SEQ NO3）
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG（SEQ NO4）。
进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：
(ⅰ) 检测IDH1基因的测序引物碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA（SEQ NO1）
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT（SEQ NO2）
(ⅱ) 检测IDH2基因的测序序列的引物碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT（SEQ NO3）
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG（SEQ NO4）。
进一步地，引物序列IDH1-132-F和IDH1-132-R是扩增IDH1基因包含第132位氨基酸序列的引物。
进一步地，引物序列IDH2-140/172-F和IDH2-140/172-R是扩增扩增IDH2基因包含第140、第172位氨基酸序列的引物。
本发明还提供了检测IDH1、IDH2基因多态热点突变情况的方法，包括以下步骤：
1.抽提血液中的组织DNA；
2.用PCR扩增步骤1中提取的DNA；
3.对步骤2中的扩增产物进行测序；
4.对测序结果进行判断，确定IDH1、IDH2基因是否发生突变；
其中PCR扩增引物为：
(ⅰ) 扩增IDH1基因的引物，其碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 扩增IDH2基因的引物，其碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
进一步地，测序引物碱基序列为：
(ⅰ) 检测IDH1基因的测序引物碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 检测IDH2基因的测序序列的引物碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
本发明还提供了一种检测IDH1、IDH2基因多态突变位点的试剂盒，包括
(i) 组织DNA抽提试剂；
(ii) 检测体系PCR扩增反应液；
(iii) 测序体系试剂；
(iv)阳性对照品和阴性对照品；
其中PCR扩增反应液引物为：
(ⅰ) 扩增IDH1基因的引物，其碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 扩增IDH2基因的引物，其碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
进一步地，测序引物碱基序列为：
(ⅰ) 检测IDH1基因的测序引物碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 检测IDH2基因的测序序列的引物碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
进一步地，阳性对照品：分别为含有IDH1第132位氨基酸序列和IDH2第140位、172位氨基酸序列的溶液；阴性对照品：无IDH1第132位氨基酸序列和IDH2第140位、172位氨基酸序列的溶液。
有益效果：本发明设计了扩增IDH1第132位，IDH2第140位、172位氨基酸序列的引物。采用普通PCR技术，构建了稳定的扩增体系。通过调整引物浓度、退火温度等反应条件，可使扩增效率达到最佳。本发明利用PCR技术检测患者IDH1和IDH2突变热点的方法，可有效地提高自动化程度，省去了以往对于IDH1和IDH2进行全外显子测序的繁琐流程和大量检测费用，有助于快速、准确的诊断患者预后，对于临床上急性粒细胞白血病（AML）患者的治疗和用药有极大的指导意义。
附图说明
图1样本1 IDH1 R132测序图谱。
图2样本2 IDH1 R132测序图谱。
图3样本3 IDH1 R132测序图谱。
图4样本5 IDH2 R140测序图谱。
图5样本5 IDH2 R172测序图谱。
图6样本6 IDH2 R140测序图谱。
图7样本6 IDH2 R172测序图谱。
图8样本8 IDH2 R140测序图谱。
图9样本8 IDH2 R172测序图谱。
具体实施方式
实施例1
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应当注意的是，实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法：譬如，奥斯柏和金斯顿主编的《精编分子生物学实验指南》第四版，或者按照制造厂商所建议的步骤和条件。
一种检测IDH1、IDH2基因多态突变位点的引物，该引物的设计是针对IDH1和IDH2突变热点所设计的特异性扩增引物，包括：
(ⅰ) 扩增IDH1基因包含第132位氨基酸序列的引物，其碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 扩增IDH2基因包含第140、第172位氨基酸序列的引物，其碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG
一种检测IDH1、IDH2基因多态突变位点的试剂盒，包括
(i) 组织DNA抽提试剂；
(ii) 检测体系PCR反应液；。
(iii) 测序体系试剂；
(iv)阳性对照品和阴性对照品。
其中，组织DNA抽提试剂可购自天根DNA抽提试剂盒等商品化试剂。
检测体系PCR扩增反应液包括：10×PCR Buffer；2mM dNTPs；KOD FX DNA Polymerase(1U/μl)；检测IDH1基因第132位氨基酸序列的上、下游引物IDH1-132-F (10μm)、IDH1-132-R (10μm)；检测IDH2基因第140、172位氨基酸序列的上、下游引物IDH2-140/172-F(10μm)、IDH2-140/172-R(10μm)。
测序体系试剂包括：测序纯化液(ExoI:0.6U，CIP:1.2U)、EDTA(125mmol)、无水乙醇、75%乙醇、HIDI（高度去离子甲酰胺）、测序引物：检测IDH1基因第132位氨基酸序列的上、下游引物分别为IDH1-132-F (3.2μm)、IDH1-132-R (3.2μm)；检测IDH2基因第140、172位氨基酸序列的上、下游引物分别为IDH2-140/172-F(3.2μm)、IDH2-140/172-R(3.2μm)。
阳性对照品：分别为含有IDH1第132位氨基酸序列和IDH2第140位、172位氨基酸序列的溶液。
阴性对照品：无IDH1第132位氨基酸序列和IDH2第140位、172位氨基酸序列的溶液。
实施例2
血液/细胞/组织基因组DNA抽提试剂盒（天根生物）的操作流程：
（1）抽提血液中的组织DNA： 1)抽取500uL血液加入1000uL红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置5 分钟，期间再颠倒混匀几次。3000rpm离心5min，吸去上清，留下白细胞沉淀，加200uL缓冲液GA，振荡至彻底混匀。2)加入20 μl蛋白酶K 溶液，混匀。3)加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。4)加入200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 秒，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。5）将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3 中（吸附柱放入收集管中），12，000 rpm (13，400×g)离心30 秒，倒掉废液，将吸附柱CB3 放回收集管中。6）向吸附柱CB3 中加入500 μl 缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12，000 rpm (13，400×g)离心30 秒，倒掉废液，将吸附柱CB3 放入收集管中。7）向吸附柱CB3 中加入700 μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12，000 rpm (13，400×g)离心30 秒，倒掉废液，将吸附柱CB3 放入收集管中。8）向吸附柱CB3 中加入500 μl 漂洗液PW，12，000 rpm (13，400×g)离心30秒，倒掉废液。9）将吸附柱CB3 放回收集管中，12，000 rpm(13，400×g)离心2 分钟，倒掉废液。将吸附柱CB3 置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10）将吸附柱CB3 转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 分钟，12，000 rpm (13，400×g)离心2 分钟，将溶液收集到离心管中。
（2）试剂配置：按检测人份数配置检测体系PCR反应液各X μl，每人份18μl分装：
X=18μl 反应液×（n份标本+1份阳性对照+1份阴性对照+1份空白对照）
n为检测标本数。
（3）加样：加入检测体系PCR反应液中2μl DNA；阳性对照和阴性对照直接加2μl阳性对照品和阴性对照品；空白对照加2μl生理盐水或不加任何物质。
（4）扩增：检测在常规PCR仪上进行，可用仪器包括ABI veriti（美国Applied Biosystems公司）等。反应条件如下：
PCR扩增试剂配制方法如下
IDH1：
| 试剂名称 | 用量 |
| 2*Buffer | 10μl |
| dNTP（2mM） | 4μl |
| IDH1-132-F(10μm) | 0.5μl |
| IDH1-132-R(10μm) | 0.5μl |
| KOD FX DNA Polymerase(1U/μl) Polymerase(1U/μl) | 0.5μl |
| ddH20 | 3.5μl |
| 抽提的DNA | 1μl |
| 总计 | 20μl |
IDH2：
| 试剂名称 | 用量 |
| 2*Buffer | 10μl |
| dNTP（2mM） | 4μl |
| IDH2-140/172-F(10μm) | 0.5μl |
| IDH2-140/172-R(10μm) | 0.5μl |
| KOD FX DNA Polymerase(1U/μl) | 0.5μl |
| ddH20 | 3.5μl |
| 抽提的DNA | 1μl |
| 总计 | 20μl |
其中，引物序列为：
| 引物名称 | 引物序列 | Tm |
| IDH1-132-F | GATGAGAAGAGGGTTGAGGA | 52℃ |
| IDH1-132-R | GTTGGAAATTTCTGGGCCAT | 53℃ |
| IDH2-140/172-F | CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT | 55℃ |
| IDH2-140/172-R | CAAGAGGATGGCTAGGCGAG | 56℃ |
（5）Sanger测序：
取9μl PCR产物与2μl纯化体系。按照以下程序进行纯化：
| 反应阶段 | 反应条件 |
| 纯化 | 37℃ 50min |
| 变性 | 95℃ 5min |
| 保存 | 4℃ ∞ |
将1μl纯化产物分别与上、下测序引物按照如下体系进行混合：（其中上、下游引物分别为IDH2-140/172-F、IDH2-140/172-R）。
测序反应程序：
沉淀环节：
向完成测序反应的产物中加入2μl 125mmol的EDTA，静置5min；加入15ml无水乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心30min；倒置离心15sec，加入50ml70%乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心15min；倒置离心15sec，置于95℃金属浴上；加入10μl HIDI后进行变性试验。变性程序：
变性程序结束后，上测序仪（ABI3730）测序。
（7）结果判断：分别将测序结果与IDH1野生型参考序列（Genbank accn： NG_023319.2）和IDH2野生型参考序列（Genbank accn：NG_023302.1）进行比对，根据实际突变情况对结果进行报告。
实施例3
采用本发明核酸检测试剂和方法检测临床标本。
取送检急性粒细胞白血病（AML）患者抗凝血标本20例，按实施例2所述方法提取基因组DNA、配制试剂并检测。
每份标本加入检测体系PCR反应液中2μl。同时做阳性，阴性，空白对照，一台96孔的普通PCR仪可同时检测46份样品，每个样本2次重复，一份阳性对照，一份阴性对照和一份空白对照。检测时间为160分钟。
每个样本经2次测序后，比对突变的情况，对于结果不统一的样本将进行第三次测序。最后，根据测序结果对于预后进行判断。检测结果如下表：
从上表可以看出，20例样本中，本试剂盒检测出IDH1和IDH2基因一共8例突变，而全外显子测序法测序法仅检出6例突变。经克隆测序确认，这两例未被市面上的同类检测试剂盒测出的病例，的确发生了突变。因此，相比于市面上同类产品，本发明检测试剂盒具有检测结果准确性高等突出特点。能让医生能准确判断患者预后情况，控制患者的病情。本发明利用PCR技术检测患者IDH1和IDH2突变热点的方法，省去了以往对于IDH1和IDH2进行全外显子测序的繁琐流程和大量检测费用，
实施例4
取AML患者临床样品6份，按实施例2所述方法提取基因组、配制试剂并检测。每份样品加入检测体系PCR反应液中2μl。同时做阳性，阴性，空白对照各一份。用普通PCR仪检测，时间为160分钟。其中前4例进行IDH1突变检测，后4例进行IDH2检测。
样品1经融合基因筛查检测，发现AML-ETO融合基因表达活跃，临床诊断预后良好。本试剂盒的检测结果的检测结果图如图1所示，R132未发生突变，为IDH1野生型，预后与临床结果吻合，建议维持当前治疗方案。
样品2经融合基因筛查检测，发现MLL-ENL融合基因表达活跃，临床诊断预后不佳。本试剂盒的检测结果图如图2所示，395G/A杂合，导致产生IDH1 132R、H杂合，该突变预后不良，预后判断与临床结果吻合，建议尽快进行异基因移植。
样品3经融合基因筛查检测，发现MLL-AF4融合基因表达活跃，临床诊断预后不佳。本试剂盒的检测结果图如图3所示，394C→A，导致产生IDH1 R132S，该突变预后不良，预后判断与临床结果吻合，建议尽快进行异基因移植。
样品4经融合基因筛查检测，发现MLL-AF9融合基因表达活跃，临床诊断预后不佳。本试剂盒的的检测结果图如图4-5所示，419G→A，导致产生IDH2 R140Q；R172无突变，该类型预后不良，预后判断与临床结果吻合，建议尽快进行异基因移植。
样品5经融合基因筛查检测，未发现标志性融合基因转录本，临床诊断预后一般。本试剂盒的的检测结果图如图6-7所示，R140和R172均未发生突变，为IDH2野生型，该类型预后良好，预后判断与临床结果吻合，建议维持当前治疗方案。
样品6经融合基因筛查检测，发现MLL-ELL融合基因表达活跃，临床诊断预后不佳。本试剂盒的检测结果图如图8-9所示，R140无突变；515G→A，导致产生IDH2 R172K，该突变预后不良，预后判断与临床结果吻合，建议尽快进行异基因移植。
序列表
<110> 南京艾迪康医学检验所有限公司
<120>检测IDH1、IDH2基因多态突变位点的引物、方法和试剂盒
<130>
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 1
gatgagaaga gggttgagga 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 2
gttggaaatt tctgggccat 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 3
ctgtgttgtt gcttggggtt 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 4
caagaggatg gctaggcgag 20
序列表
<110> 南京艾迪康医学检验所有限公司
<120>检测IDH1、IDH2基因多态突变位点的引物、方法和试剂盒
<130>
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 1
gatgagaaga gggttgagga 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 2
gttggaaatt tctgggccat 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 3
ctgtgttgtt gcttggggtt 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 4
caagaggatg gctaggcgag 20
Claims (9)
1.检测IDH1、IDH2基因多态热点突变情况的引物，其特征在于，包括：
(ⅰ) 扩增IDH1基因的引物，其碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 扩增IDH2基因的引物，其碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括测序引物，其碱基序列为：
(ⅰ) 检测IDH1基因的测序引物碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 检测IDH2基因的测序序列的引物碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，引物序列IDH1-132-F和IDH1-132-R是扩增IDH1基因包含第132位氨基酸序列的引物。
4.如权利要求1所述的引物，其特征在于，引物序列IDH2-140/172-F和IDH2-140/172-R是扩增扩增IDH2基因包含第140、第172位氨基酸序列的引物。
5.检测IDH1、IDH2基因多态热点突变情况的方法，包括以下步骤：
抽提血液中的组织DNA；
用PCR扩增步骤1中提取的DNA；
对步骤2中的扩增产物进行测序；
对测序结果进行判断，确定IDH1、IDH2基因是否发生突变；
其中PCR扩增引物为：
(ⅰ) 扩增IDH1基因的引物，其碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 扩增IDH2基因的引物，其碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，测序引物碱基序列为：
(ⅰ) 检测IDH1基因的测序引物碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 检测IDH2基因的测序序列的引物碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
7.一种检测IDH1、IDH2基因多态突变位点的试剂盒，包括
(i) 组织DNA抽提试剂；
(ii) 检测体系PCR扩增反应液；
(iii) 测序体系试剂；
(iv)阳性对照品和阴性对照品；
其中PCR扩增反应液引物为：
(ⅰ) 扩增IDH1基因的引物，其碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 扩增IDH2基因的引物，其碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，测序引物碱基序列为：
(ⅰ) 检测IDH1基因的测序引物碱基序列为：
IDH1-132-F： GATGAGAAGAGGGTTGAGGA
IDH1-132-R： GTTGGAAATTTCTGGGCCAT
(ⅱ) 检测IDH2基因的测序序列的引物碱基序列为：
IDH2-140/172-F： CTGTGTTGTTGCTTGGGGTT
IDH2-140/172-R： CAAGAGGATGGCTAGGCGAG。
9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，阳性对照品：分别为含有IDH1第132位氨基酸序列和IDH2第140位、172位氨基酸序列的溶液；阴性对照品：无IDH1第132位氨基酸序列和IDH2第140位、172位氨基酸序列的溶液。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105154547A (zh) * | 2015-09-09 | 2015-12-16 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 一种检测idh1和idh2基因突变的引物与方法 |
| CN105238871A (zh) * | 2015-11-13 | 2016-01-13 | 北京泛生子基因科技有限公司 | 一种检测人idh1基因突变的探针法及其试剂盒 |
| CN107002131A (zh) * | 2014-11-12 | 2017-08-01 | 尼欧基因组学实验室股份有限公司 | 作为确认骨髓增生异常综合征诊断的可靠测试的外周血血浆dna深度测序 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102177251A (zh) * | 2008-09-03 | 2011-09-07 | 约翰·霍普金斯大学 | 恶性神经胶质瘤的异柠檬酸脱氢酶和其他基因的遗传改变 |
| CN102329885A (zh) * | 2011-10-26 | 2012-01-25 | 李艳 | 一种用于检测vkorc1和cyp2c9基因多态性的试剂盒 |
| KR20120127679A (ko) * | 2011-05-11 | 2012-11-23 | 주식회사 파나진 | Ｐｎａ 기반의 실시간 ｐｃｒ 클램핑을 이용한 ｉｄｈ1, ｉｄｈ2 돌연변이 검출 방법 및 키트 |
-
2013
- 2013-09-30 CN CN2013104592193A patent/CN103451314A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102177251A (zh) * | 2008-09-03 | 2011-09-07 | 约翰·霍普金斯大学 | 恶性神经胶质瘤的异柠檬酸脱氢酶和其他基因的遗传改变 |
| KR20120127679A (ko) * | 2011-05-11 | 2012-11-23 | 주식회사 파나진 | Ｐｎａ 기반의 실시간 ｐｃｒ 클램핑을 이용한 ｉｄｈ1, ｉｄｈ2 돌연변이 검출 방법 및 키트 |
| CN102329885A (zh) * | 2011-10-26 | 2012-01-25 | 李艳 | 一种用于检测vkorc1和cyp2c9基因多态性的试剂盒 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| A TEFFERI等: ""IDH1 and IDH2 mutation studies in 1473 patients with chronic-, fibrotic- or blast-phase essential thrombocythemia, polycythemia vera or myelofibrosis"", 《LEUKEMIA》 * |
| 汪峻等: "《基因操作技术》", 31 August 2010, 武汉：华中师范大学出版社 * |
| 黄璐琦等: "《分子生药学》", 30 September 2006, 北京：北京大学医学出版社 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107002131A (zh) * | 2014-11-12 | 2017-08-01 | 尼欧基因组学实验室股份有限公司 | 作为确认骨髓增生异常综合征诊断的可靠测试的外周血血浆dna深度测序 |
| CN107002131B (zh) * | 2014-11-12 | 2022-04-29 | 尼欧基因组学实验室股份有限公司 | 作为确认骨髓增生异常综合征诊断的可靠测试的外周血血浆dna深度测序 |
| CN105154547A (zh) * | 2015-09-09 | 2015-12-16 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 一种检测idh1和idh2基因突变的引物与方法 |
| CN105154547B (zh) * | 2015-09-09 | 2017-06-13 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 一种检测idh1和idh2基因突变的引物与方法 |
| CN105238871A (zh) * | 2015-11-13 | 2016-01-13 | 北京泛生子基因科技有限公司 | 一种检测人idh1基因突变的探针法及其试剂盒 |
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