CN103439450A - 脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法，其具体步骤主要包括：提取脱脂南极磷虾皂甙和薄层层析扫描检测。本发明提供了脱脂南极磷虾皂甙的提取方法和薄层层析检测方法，检测方法简单、快速、准确、可靠、稳定。

Description

脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法

技术领域

本发明涉及脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法。

背景技术

南极磷虾（Euphausia superba），是一种生活在南极洲水域的磷虾，以群集方式生活，有时密度可达每立方米10,000～30,000只。它们以微小的浮游植物作为食物，身长大约6厘米，重约2克，有6年的寿命。它们是南极生态系统的关键物种，若以生物质能来说，它们可能是地球上最成功的生物物种（大约有5亿吨）。因南极磷虾蕴藏量巨大，加上群体的生活容易捕捞，所以吸引很多国家对它进行开发。目前，南极磷虾最主要用途是作为鱼饲料。而在挪威、加拿大等国则把南极磷虾虾油提取出来作为保健品，价格约2000元人民币/kg。由于南极磷虾含有大量氟（约2400mg/kg）,不能直接食用。因而，以南极磷虾为原料，开发天然药物，对其综合利用，具有广阔的应用前景。

我们对南极磷虾的开发利用进行了数年研究。发现在蒸除南极磷虾虾油中溶剂的过程中总是有大量泡沫产生。南极磷虾的水提液和醇提液在加热搅拌时，泡沫更多；停止加热搅拌，泡沫依然持久不消。该现象说明南极磷虾中含有皂甙。目前，还没有对南极磷虾皂甙提取的研究，本发明对南极磷虾皂甙进行了提取，并对其进行了检测定量。

发明内容

本发明提供了一种操作简单、快速、准确、可靠的脱脂南极磷虾皂甙提取和检测方法。

本发明的技术方案是：

脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法，具体步骤是：

1）将疏水性溶剂除去油脂的干南极磷虾利用甲醇进行加热提取，蒸发除去甲醇，得到膏状物。

2）往步骤1）所得膏状物加入乙醚，搅拌溶解，过滤得滤液，蒸发去除乙醚得皂甙粗提取物。

3）将步骤2）所得的皂甙粗提物溶于甲醇制成样品液，用甲醇溶解齐墩果酸制成不同浓度的标准液。

4)将步骤3）所得的样品液和不同浓度的标准液分别点于同一块高效薄层硅胶板GF₂₅₄上，展开剂加入展开缸中进行预平衡，后将高效薄层硅胶板放入展开缸中进行展开，展距达到8cm，取出晾干。

5）将浓度为10%的硫酸乙醇溶液加到高效薄层硅胶板上进行烘烤染色，再用浓度10%液体石蜡氯仿溶液进行二次染色。

6）利用薄层扫描仪进行薄层层析扫描，得到皂甙R_f（比移值）和峰面积积分值；由薄层色谱仪管理软件计算出标准液质量和峰面积积分值关系，根据样品液的峰面积积分值计算出样品液皂甙的质量。

步骤1）中，所述疏水性溶剂是正己烷,、植物油抽提溶剂或石油醚。

步骤1）中，所述甲醇与南极磷虾体积质量比例为6：1，甲醇提取3次，反应温度为80℃。

步骤2）中，所述所得膏状物与乙醚的质量体积比例为1：6～10。

步骤2）中，所述的标准液为5种不同浓度，为0.6,2.4,3.0,3.6,4.2μg/μL。

步骤4）中，所述展开剂为二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸，体积比例为9～11：2～5:0.3～0.5。

步骤4）中，所述的展开剂预平衡和硅胶板展开过程的温度为10℃。

步骤5）中，所述的染色过程的烘烤温度为110℃。

本发明在进行薄层层析时，为取得有效效果，对展开剂进行了探索，并利用不同的试剂组合：氯仿-甲醇-水；正丁醇-水-冰乙酸；正丁醇-甲苯-冰乙酸；正丁醇-正己烷-冰乙酸；正丁醇-二甲苯-冰乙酸；正己醇-二甲苯-冰乙酸；正辛醇-二甲苯-冰乙酸和二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸。每一种组合，都进行了多次的比例调试，最后，以配比为二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸=9～11：2～5:0.3～0.5的展开剂和展开温度10℃时展开效果最佳。

目前动物种类中主要在棘皮动物中发现有皂甙，甲壳动物中至今未发现有皂甙，利用本发明的方法首次在南极磷虾中提取了皂甙，并对提取的皂甙进行薄层检测。检测方法简单、快速、准确、可靠、稳定。

具体实施方式

根据实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

脱脂干南极磷虾100g，加入甲醇600mL，在80摄氏度水浴中加热搅拌提取3次，每次提取30分钟之后过滤。合并提取液，旋转蒸发除去甲醇得膏状物60g。向膏状物中加入乙醚360mL，搅拌溶解，滤除沉渣得滤液。蒸除滤液中的乙醚，得皂甙粗提取物15g。

将含皂甙的粗提物溶于甲醇制成浓度为30μg/μL的样品液。齐墩果酸配制成五种不同浓度的标准液：0.6,2.4,3.0,3.6,4.2μg/μL。

将样品液（3μL/点）和标准液（1μL/点）点于同一块GF₂₅₄高效薄层硅胶板(10×10cm²）上。展开剂为二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸，体积比例为9:2:0.5。将展开剂加入展开缸（10×12×15cm³）在10摄氏度下预平衡15分钟。高效薄层板放入展开缸中，在10摄氏度以下展开，展距达到8cm时，展开结束后，将硅胶板板取出晾干。用12ml浓度为10%的硫酸乙醇溶液染色，然后置于110摄氏度下烘烤5分钟。再用10ml浓度为10%的液体石蜡氯仿溶液二次染色。样品液和标准品对应的点染成紫色。用camag3型薄层扫描仪，以530nm的吸收波长扫描，得到峰面积积分值和皂甙迁移值R_f为0.49，薄层扫描仪软件winCATS1.4.1统计计算峰面积积分值与标准液质量的关系的回归方程Y=8836.9094+5.6585X，相关性系数r=0.99928，rsd=1.40%。经检测和计算得脱脂干南极磷虾中皂甙含量为0.16g/100g。

实施例2

与实施例1的区别在于：得到的膏状物为61g，向膏状物加入乙醚488ml，得到的皂甙粗提取物15.3g；展开剂中二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸的体积比例为10:3:0.4，浓度为10%的硫酸乙醇溶液体积为10ml，其他步骤与实施例1相同，使用实施例1中所得关系回归方程，得皂甙的含量为0.17g/100g。

实施例3

与实施例1的区别在于：得到的膏状物为62g，向膏状物加入乙醚620ml，得到的皂甙粗提取物15.5g；展开剂中二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸的体积比例为11:5:0.3，浓度为10%的硫酸乙醇溶液体积为10ml，其他步骤与实施例1相同，使用实施例1中所得关系回归方程，得皂甙的含量为0.17g/100g。

Claims (8)

1.脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法，其特征是，具体步骤是：

1）将疏水性溶剂除去油脂的干南极磷虾利用甲醇进行加热提取，蒸发除去甲醇，得到膏状物；

2）往步骤1）所得膏状物加入乙醚，搅拌溶解，过滤得滤液，蒸发去除乙醚得皂甙粗提取物；

3）将步骤2）所得的皂甙粗提取物溶于甲醇制成样品液，用甲醇溶解齐墩果酸制成不同浓度的标准液；

4）将步骤3）所得的样品液和不同浓度的标准液点于同一块高效薄层硅胶板GF₂₅₄上，展开剂加入展开缸中进行预平衡，后将高效薄层硅胶板放入展开缸中进行展开，展距达到8cm，取出晾干；

5）将浓度为10%的硫酸乙醇溶液加到高效薄层硅胶板上进行烘烤染色，再用浓度10%液体石蜡氯仿溶液进行二次染色；

6）利用薄层扫描仪进行薄层层析扫描，得到皂甙比移值和峰面积积分值；由薄层色谱仪管理软件计算出标准液质量和峰面积积分值关系，根据样品液的峰面积积分值计算出样品液皂甙的质量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤1）中，疏水性溶剂是正己烷、植物油抽提溶剂或石油醚。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤1）中，甲醇与南极磷虾体积质量比例为6：1，甲醇提取3次，提取温度为80℃。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤2）中，所得膏状物与乙醚的质量体积比例为1：6～10。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤2）中，标准液为5种不同浓度，为0.6,2.4,3.0,3.6,4.2μg/μL。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤4）中，展开剂为二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸，体积比例为9～11:2～5:0.3～0.5。

7.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤4）中，展开剂预平衡和硅胶板展开过程的温度为10℃。

8.如权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤5）中，染色过程的烘烤温度为110℃。