CN103432070A

CN103432070A - 左乙拉西坦注射液和制法

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Publication number: CN103432070A
Application number: CN2013104166196A
Authority: CN
Inventors: 赵东明; 衣林; 杨晓勤; 杨蔚达; 贾红军; 方专; 罗隽
Original assignee: CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL Co Ltd; Sichuan Dingnuo Taichen Science & Technology Co Ltd
Current assignee: CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL CO LTD; SICHUAN DINGNUO TAICHEN SCIENCE & TECHNOLOGY CO LTD
Priority date: 2013-09-13
Filing date: 2013-09-13
Publication date: 2013-12-11
Anticipated expiration: 2033-09-13
Also published as: CN103432070B

Abstract

本发明涉及左乙拉西坦注射液和制法。具体地说，本发明涉及一种左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦、氯化钠、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水。本发明还涉及制备该左乙拉西坦注射液的方法。本发明出人意料地发现本发明左乙拉西坦注射液具有良好的药学性质。

Description

左乙拉西坦注射液和制法

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种新的包含左乙拉西坦的药物组合物，特别是涉及一种新的左乙拉西坦注射液，本发明还涉及该药物组合物的制备方法。本发明的左乙拉西坦注射液具有优良的药学性质。

背景技术

欧洲专利EP0162036B公开了一种左旋化合物左乙拉西坦，其化学名为(-)-(S)-[α]-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺((-)-(S)-α-ethyl-2-oxo-1-pyrrolidine acetamide)，其分子式为C8H14N2O2，分子量为170.21，结构式为

左乙拉西坦为白色至类白色结晶性粉末，易溶于水(104.0g/100mL)，氯仿(65.3g/100mL)和甲醇(53.6g/100mL)，溶于乙醇(16.5g/100mL)，微溶于乙腈(5.7g/100mL)，不溶于正己烷。

左乙拉西坦可以作为治疗和预防中枢神经系统低氧和局部缺血型攻击的保护剂。该化合物可有效治疗癫痫，对于该治疗指征已经证明其右旋对映异构体(R)-(-)-[α]-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺完全没有活性(AJ.Gowe等，Eur.J.Pharmacol.，222，1992，193-203)。

左乙拉西坦是一种吡咯烷酮衍生物，其化学结构与现有抗癫痫药物无相关性。在多种抗癫痫动物模型中评估了左乙拉西坦的抗癫痫作用。左乙拉西坦对电流或多种致惊剂最大刺激诱导的单纯癫痫发作无抑制作用，并在亚最大刺激和阈值试验中仅显示微弱活性。但对毛果芸香碱和红藻氨基酸诱导的局灶性发作继发的全身性发作观察到保护作用，这两种化学致惊厥剂能模仿一些人伴有继发性全身发作的复杂部分性发作的特性。左乙拉西坦对复杂部分性发作的大鼠点燃模型的点燃过程和点燃状态均具有抑制作用。这些动物模型对人体特定类型癫痫的预测价值尚不明确。

体内、体外试验显示，左乙拉西坦抑制海马癫痫样突然放电，而对正常的神经元兴奋性无影响，提示左乙拉西坦可能选择性地抑制癫痫样突发放电超同步性和癫痫发作的传播。

左乙拉西坦在浓度高至10μM时，对多种已知受体无亲合力，如苯并二氮卓类、GABA、甘氨酸、NMDA、再摄取位点和第二信使系统。体外试验显示左乙拉西坦对神经元电压门控的钠离子通道或T-型钙电流无影响。左乙拉西坦并不直接易化GABA能神经传递，但研究显示对培养的神经元GABA和甘氨酸门控电流负调节子活性有对抗作用。在大鼠脑组织中发现了左乙拉西坦的可饱和和立体选择性的神经元结合位点，但该结合位点的鉴定和功能目前尚不明确。

左乙拉西坦的确切抗癫痫作用机制尚不完全明确。目前普遍认为其与传统抗癫痫药物的作用机制不同，对γ-氨基丁酸能及谷氨酸能神经传导通路无直接作用，与苯二氮卓受体无亲和力，对神经元的电压门控钠离子通道、低电压门控T型钙离子通道无直接联系。主要通过以下途径发挥作用：①与中枢神经元内广泛分布的突触小泡蛋白2A发生作用，调节突触囊泡的胞外分泌功能和突触前神经递质的释放。动物实验表明SV2A基因敲除小鼠表现出生长受限、神经元兴奋性增加及严重的惊厥易感性。左乙拉西坦与SV2A在脑内有很高的亲和性，并与抑制痫性放电密切相关。②对抗γ-氨基丁酸受体阻滞剂，从而间接增强γ-氨基丁酸受体的作用、抑制海马CA3区等处神经元的兴奋性。③抑制高电压激活的N型钙离子通道，似对钾离子通道也有作用。④一些分子研究表明，神经元兴奋性增高与海马内用于合成脑源性神经营养因子及神经肽γ的mRNA水平上调有关。左乙拉西坦则可减少这些基因表达的上调，从而抑制与之相关的神经元兴奋性增高。

左乙拉西坦是一种新型的抗癫痫药物，与其他抗癫痫药物的结构不同，具有全新的抗癫痫机制。左乙拉西坦的确切抗癫痫机制尚不明，但与传统抗癫痫药物作用于离子通道或兴奋性、抑制性神经递质系统不同。左乙拉西坦几乎具备了较好的抗癫痫药物的所有药动学特性：生物利用度高、线性曲线、低蛋白结合率、无肝酶诱导作用。多种动物模型显示左乙拉西坦具有抗癫痫特性。

全球每年大约新发生200万例癫痫。其中发达国家中癫痫的发病率约为每年每十万人中有50人。同样，癫痫的发病率在发展中国家中也显著增高，为每十万人中有100人。我国约有900万癫痫患者，其中600万病人每年仍有发作，而且每年都会出现40万新发病例。

癫痫患者的死亡危险性大约是普通人群的二至四倍(死亡可能和基础疾病，自杀，事故或者癫痫状态有关)。根据国际抗癫痫联盟(ILAE)的调查，患有癫痫的年轻人的死亡率是正常年轻人的4倍。

理想的抗癫痫药物除有较好的疗效外，还应具备：生物利用度接近100%，达稳态时间快，药代动力学呈线性，服药最好l～2次1d，不与血浆蛋白结合，不经肝脏代谢，无药物相互作用等。

左乙拉西坦就是这样的一种新型抗癫痫药，且注射液可作为口服左乙拉西坦的补充剂型，当口服左乙拉西坦不可行时用于部分性癫痫发作及肌阵挛性癫痫患者少年肌阵挛性癫痫病。

左乙拉西坦由比利时UCB公司研发，于1999年左乙拉西坦片获FDA批准，从2004年开始，其以强势增长态势迈入全球畅销药行列。并且在此后几年，其全球销售继续稳步攀升尤其在2007和2008年其销售额均超过了10亿美元，分别达到14.07亿和18.64亿美元，成为了名副其实的重镑炸弹级产品。

左乙拉西坦良好的效果及安全性带动了众多剂型的开发上市，目前除了注射剂之外，均为口服剂型，有片剂、口服溶液、缓释片。国外多项大型临床试验均显示了左乙拉西坦注射液优良效果及良好的安全性，并且目前左乙拉西坦注射液已上市。

国外上市的左乙拉西坦注射液(KEPPRA injection)含有100mg/ml左乙拉西坦，每瓶5mL注射液中含有：500mg左乙拉西坦、45mg氯化钠、8.2mg醋酸钠三水合物、冰醋酸适量调节至pH5.5、注射用水至全量。在该配方中，本领域技术人员通常还可以将其中的醋酸钠三水合物改用醋酸或冰醋酸与氢氧化钠组合，达到基本上与8.2mg相当量的缓冲盐量而配制获得。

例如，中国专利申请号200810116329.9(CN101623250A，德众万全)公开了一种左乙拉西坦注射液配方，包括：左乙拉西坦10%、氯化钠0.9%、冰醋酸0.5%、氢氧化钠0.7%、注射用水87.9%，使用常规的注射液配制工艺进行制备。

中国专利申请号200910086292.4(CN101919811A，博时安泰)公开了一种左乙拉西坦注射液配方，每1000ml包括：左乙拉西坦100g、氯化钠9g、醋酸钠1g、注射用水至全量，使用常规的注射液配制工艺进行制备。

中国专利申请号201210016087.2(CN102525900A，南京恒道)亦公开了例如以下配方的左乙拉西坦注射液：左乙拉西坦100g、氯化钠9g、醋酸钠1.6g、醋酸0.2g、注射用水加至1000ml，使用常规的注射液配制工艺进行制备。

在左乙拉西坦合成工艺中，工艺中间体2-吡咯烷酮-正丁酸(即，(2RS)-2-(2-oxopyrrolidin-1-yl)butanoic acid)会引入终产物中，因此在英国药典以及欧洲药典中均要控制该杂质的限度，并且显示在左乙拉西坦中存在较高含量的该工艺中间体杂质。由此，在配制注射液时，有效地控制该工艺中间体杂质是有益的。

因此，本领域仍然需要有一种新的方法，以配制出高品质的左乙拉西坦注射液。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的方法，以配制出高品质的左乙拉西坦注射液。本发明人出人意料地发现，在制备过程中使用特殊的工艺处理，特别是使用纸浆和活性炭混合使用，和/或在过滤时使用聚四氟乙烯膜作为微孔滤膜过滤，可以有效地制备得到高品质的左乙拉西坦注射液，特别是该注射液在基本上无活性成分损失的情况下能够有效地去除较大量的工艺中间体杂质。

为此，本发明第一方面提供了一种左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦、氯化钠、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其pH值为4.5～6.5，例如其pH值为5.0～6.0。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中所述的醋酸钠缓冲盐是以醋酸钠形式加入的，或者是以醋酸和氢氧化钠的形式加入的。在一个实施方案中，在使用该醋酸钠缓冲盐时，必要时可以使用醋酸和/或氢氧化钠的溶液来调节注射液的pH值。由此，本发明注射液中还可含有添加pH值调节剂，其优选使用醋酸和/或氢氧化钠的溶液。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中左乙拉西坦的浓度为8～12%(w/v)，例如9～11%(w/v)，例如约10%(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中氯化钠的浓度为0.35～1.00%(w/v)，例如0.40～0.95%(w/v)，例如0.45～0.90%(w/v)。由于本发明在临床上使用时，需要用较大量的输液例如葡萄糖注射液、氯化钠注射液进行稀释，因此氯化钠的浓度可以在较宽范围内使用而不致产生因渗透压而出现的安全性问题。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中所述醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L，例如为15～30mmol/L。在计算该醋酸钠缓冲盐浓度时，以醋酸根离子浓度计，该醋酸根离子包括以各种形式添加的醋酸根离子，例如包括以作为pH调节剂加入的醋酸以及以缓冲盐加入的醋酸钠或醋酸。在本发明中，通过计算加入的醋酸根离子以及控制注射液的值，可以容易地确定处方组成，而不必特别是容易确定处方中的“醋酸钠缓冲盐”的量。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦8～12%(w/v)、氯化钠0.35～1.00%(w/v)、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为4.5～6.5；醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦9～11%(w/v)、氯化钠0.45～0.90%(w/v)、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为5.0～6.0；醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为15～30mmol/L。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，相对于左乙拉西坦的量而言，该注射液中包含低于0.5%的2-吡咯烷酮-正丁酸，优选低于0.4%，优选低于0.3%，优选低于0.25%。该2-吡咯烷酮-正丁酸是左乙拉西坦原料药合成过程中引入的工艺中间体，作为一种杂质，本领域技术人员公知应尽可能地降低其在注射液中的含量，以确保药品的优良品质。本发明人出人意料地发现，在注射液的工艺处理过程中，在活性炭吸附时添加一定量的纸浆，以及在微孔滤膜过滤时使用特定膜材质的微孔滤膜进行过滤，一方面可以有效地降低上述2-吡咯烷酮-正丁酸杂质，另一方面可以有效地避免主成分的损失。

因此，根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其是通过包括以下步骤的方法制备得到的：

(1)使用大约处方量的60～80%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、氯化钠和醋酸钠缓冲盐溶解，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1；

(2)向上述溶液中加入0.05～0.2%(w/v)活性炭，并加入纸浆，搅拌10～30分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(4)补加注射用水至全量，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1，再依次用0.45um和0.22um的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中所述微孔滤膜是选自下列材质的微孔滤膜：醋酸纤维素膜材质、硝酸纤维素膜材质、聚酰胺膜材质、聚碳酸酯膜材质、聚砜膜材质、聚四氟乙烯膜材质。优选是聚四氟乙烯膜材质。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中所述步骤(2)中加入的纸浆以是干滤纸配制的。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中所述步骤(2)中加入的纸浆的量，以干滤纸计，在溶液中的浓度为0.1%～0.5%(w/v)，优选0.1%～0.3%(w/v)。本领域技术人员公知在配制注射液时纸浆的使用方式，例如可照以下方式配制纸浆：取普通大张滤纸撕成碎片，用适量注射用水浸泡适时，用捣碎机打碎成粥状即可。本领域还有其它制备纸浆的方法，例如记载中侯玉嵩的文献(侯玉嵩，等，中成药，1997年第19卷第4期第4页)。纸浆的浓度通常可以根据使用需要确定，例如通常可以是10%～50%的宽泛范围内。在本发明下文配制注射液的工艺中，如未另外说明，所用纸浆是使用30%的纸浆(相当于30g干滤纸用注射用水适量制成100ml的浆)；步骤(2)中加入的纸浆的量，拆算成干滤纸计算，干滤纸在溶液中的浓度为0.1%～0.5%(w/v)。

出人意料地是，在配液过程中使用活性炭和纸浆组合，并在过滤过程中使用聚四氟乙烯膜材质的微孔滤膜进行过滤，不但可以避免活性成分的损失，而且可以有效地降低原料药中2-吡咯烷酮-正丁酸杂质的量。但是完全令人遗憾的是，当使用其它材质(尽管是注射液配制中常用的)微孔滤膜进行过滤时，不但活性成分损失大，而且无法有效地降低原料药中2-吡咯烷酮-正丁酸杂质的量。

在本发明中，短语“作为注射液溶媒的注射用水”其在注射液中的加入量不必作特别的限定，本领域技术人员通常以“定容至全量”、“平衡至全量”、“加至处方全量”等类似表述确定，例如5ml注射液中当其它固体物料确定并加入后时，由于它们存在体积效应，因此注射用水可以以类似于“加至5ml”或“加至全量”或“加至处方全量”的方式记载。

进一步地，本发明第二方面提供了一种制备左乙拉西坦注射液的方法，所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦、氯化钠、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该方法包括以下步骤：

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述微孔滤膜是选自下列材质的微孔滤膜：醋酸纤维素膜材质、硝酸纤维素膜材质、聚酰胺膜材质、聚碳酸酯膜材质、聚砜膜材质、聚四氟乙烯膜材质。优选是聚四氟乙烯膜材质。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述步骤(2)中加入的纸浆以是干滤纸配制的。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述步骤(2)中加入的纸浆的量，以干滤纸计，在溶液中的浓度为0.1%～0.5%(w/v)，优选0.1%～0.3%(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，所述左乙拉西坦注射液的pH值为4.5～6.5，例如其pH值为5.0～6.0。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的醋酸钠缓冲盐是以醋酸钠形式加入的，或者是以醋酸和氢氧化钠的形式加入的。在一个实施方案中，在使用该醋酸钠缓冲盐时，必要时可以使用醋酸和/或氢氧化钠的溶液来调节注射液的pH值。由此，本发明注射液中还可含有添加pH值调节剂，其优选使用醋酸和/或氢氧化钠的溶液。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，所述左乙拉西坦注射液中，左乙拉西坦的浓度为8～12%(w/v)，例如9～11%(w/v)，例如约10%(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，所述左乙拉西坦注射液中，氯化钠的浓度为0.35～1.00%(w/v)，例如0.40～0.95%(w/v)，例如0.45～0.90%(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，所述左乙拉西坦注射液中，醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L，例如为15～30mmol/L。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦8～12%(w/v)、氯化钠0.35～1.00%(w/v)、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为4.5～6.5；醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，相对于左乙拉西坦的量而言，所述左乙拉西坦注射液中包含低于0.5%的2-吡咯烷酮-正丁酸，优选低于0.4%，优选低于0.3%，优选低于0.25%。

进一步地，本发明第三方面提供了本发明第一方面任一实施方案所述左乙拉西坦注射液或者本发明第二方面任一实施方案所制备的左乙拉西坦注射液在制备用于治疗或预防选自下列疾病或病症的药物中的用途：致癫痫性疾病、癫痫发作病症、惊厥、帕金森氏病、由多巴胺替代治疗诱发的运动障碍、由施用安定类药物诱发的迟发性运动障碍、亨廷顿舞蹈病以及其它神经障碍包括双相性精神障碍、躁狂、抑郁、焦虑、注意缺陷障碍(ADHD)、偏头痛、三叉神经痛及其他神经痛、慢性痛、神经性疼痛、脑局部缺血、心律失常、肌强直、可卡因滥用、中风、肌阵挛、震颤、特发性震颤、简单型或复杂性抽搐、图雷特多综合征、腿多动综合征及其他运动失调、新生儿脑出血、肌萎缩性侧索硬化、痉挛状态和变性疾病、支气管性哮喘、哮喘持续状态和过敏性支气管炎、哮喘综合征、支气管高反应性和bronchospastic syndromes以及过敏性和血管舒缩性鼻炎和鼻结膜炎；特别是在制备用于治疗或预防选自下列疾病或病症的药物中的用途：癫痫、帕金森氏病、运动障碍、偏头痛、震颤、特发性震颤、双相性精神障碍、慢性疼痛、神经性疼痛、或者支气管、哮喘或者过敏病症。

在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

经由术语“疾病”，我们理解疾病选自：致癫痫性疾病(或者可以理解为癫痫)、癫痫发作病症、惊厥、帕金森氏病、由多巴胺替代治疗诱发的运动障碍、由施用安定类药物诱发的迟发性运动障碍、亨廷顿舞蹈病以及其它神经障碍包括双相性精神障碍、躁狂、抑郁、焦虑、注意缺陷障碍(ADHD)、偏头痛、三叉神经痛及其他神经痛、慢性痛、神经性疼痛、脑局部缺血、心律失常、肌强直、可卡因滥用、中风、肌阵挛、震颤、特发性震颤、简单型或复杂性抽搐、图雷特多综合征、腿多动综合征及其他运动失调、新生儿脑出血、肌萎缩性侧索硬化、痉挛状态和变性疾病、支气管性哮喘、哮喘持续状态和过敏性支气管炎、哮喘综合征、支气管高反应性和bronchospasticsyndromes以及过敏性和血管舒缩性鼻炎和鼻结膜炎(rhinoconjunctivitis)。

如本文所用，术语“治疗”指治愈性治疗和预防性治疗。

经由术语“治愈性”指治疗障碍或病症正在发作的症状的效力。

经由“预防性”指障碍或病症发生或复发的预防。

本发明还涉及通过使用药物组合物例如本发明注射液治疗人类患者的方法。

本发明还涉及用作治愈上述疾病的药剂的药物组合物例如本发明注射液。

本发明还涉及药物组合物例如本发明注射液制备在上述疾病中用于治疗应用的药剂的用途。

优选地，上述疾病选自：致癫痫性疾病、帕金森氏病、运动障碍、偏头痛、震颤、特发性震颤、双相性精神障碍、慢性疼痛、神经性疼痛、或者支气管、哮喘或者过敏病症。更优选地上述疾病为癫痫。

本发明还涉及制备在上述疾病中用于治疗应用的药剂例如本发明注射液的方法，其特征在于使用根据本发明的药物组合物例如本发明注射液。

本发明还涉及通过施用药物组合物例如本发明注射液对人类进行治疗以缓解疾病的方法。

如上下文所述的，已经出人意料地发现，在配液过程中使用活性炭和纸浆组合，并在过滤过程中使用聚四氟乙烯膜材质的微孔滤膜进行过滤，不但可以避免活性成分的损失，而且可以有效地降低原料药中2-吡咯烷酮-正丁酸杂质的量。

具体实施方式

所提供的以下实施例仅用于解释目的而不是用于，也不应被解释为以任何方式限制本发明。本领域那些技术人员将会认识到在不超越本发明的精神或范围的情况下可对以下实施例做出常规变化和修改。

以下各实施例和比较例中，制备的各种注射液，每批次以5000ml的量配制，但是处方表述时均以每100ml量的物料表述。

以下各实施例和对照例中，制备注射液时，如未另外说明，使用的原料药左乙拉西坦含有0.41%杂质A。

A、测试方法例部分

测试方法例1：注射液中左乙拉西坦的含量测定方法

本测试方法例的方法，可用于测定本发明左乙拉西坦注射液以及各种物料例如制剂中间体物料中左乙拉西坦的浓度。

照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐溶液(取1.5g磷酸二氢钠和1.2g己烷磺酸钠，加水1000ml，氢氧化钠试液调节pH值至6.5)-乙腈(80：20)为流动相；检测波长为205nm。理论板数按左乙拉西坦计算应不低于3000。

测定法：精密量取注射液1ml(对于其它物料，例如制剂中间体物料，可以取相当含量的活性成分的物料进行配制)，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取左乙拉西坦对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得注射液中左乙拉西坦的含量。

测试方法例2：注射液中特殊杂质2-吡咯烷酮-正丁酸的含量测定方法

本测试方法例的方法，可用于测定本发明左乙拉西坦注射液、原料药以及各种物料例如制剂中间体物料中，原料合成工艺中引入的工艺中间体杂质2-吡咯烷酮-正丁酸(在本发明中可称为杂质A)的含量。如无另外说明，其量的表示可以是该杂质量相对于左乙拉西坦的量的百分数(例如每1ml注射液中，包含100mg左乙拉西坦，0.22mg杂质A，则该注射液中杂质A的含量为0.22%；又例如，对于某一批左乙拉西坦原料药，其中左乙拉西坦的绝对量为200mg，经测定其中杂质A的量为0.46mg，则该原料中杂质A的含量为0.23%)。

测定方法：精密量本发明注射液1ml(对于其它物料，可取与其活性成分相当的量)，置20ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

另精密称取杂质A(2-吡咯烷酮-正丁酸)对照品约10mg，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密称取上述溶液1ml，置20ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为杂质A对照品溶液。

照测试方法例1中的色谱条件，精密量取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰约为满量程的20%。再精密量取供试品溶液、对照溶液和杂质A对照品溶液各10μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的3倍。扣除杂质2-吡咯烷酮-正丁酸之前的溶剂峰(辅料峰)，杂质2-吡咯烷酮-正丁酸按外标法以峰面积计算(通常而言其量应不得过0.5%)。

B、实施例部分

实施例1：

【处方】：

注：在本实施例的上述处方中，氢氧化钠既作为与冰醋酸形成醋酸钠缓冲盐的物料，又作为pH调节剂，因此其量可以不作特别确定，以“适量”标注即可(下同)，在上面处方中，氢氧化钠的实际用量约～0.072g。另外，“总醋酸根离子浓度22mmol/L”是指在配制注射液的过程中以各种形式(包括冰醋酸、pH调节剂)添加的醋酸根离子在最终注射液中的浓度。下面的实施例亦有类似含义

【制法】：

(1)使用处方量的70%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、氯化钠和醋酸钠缓冲盐溶解，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1；

(2)向上述溶液中加入0.1%(w/v)活性炭，并加入纸浆(0.2%，即每100ml药液中加入的纸浆以干滤纸计为0.2g；下同)，搅拌15分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的聚四氟乙烯膜材质的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆；

(4)补加注射用水至全量，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1，再依次用0.45um和0.22um的聚四氟乙烯膜材质的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌15min，即得。

实施例2：

【处方】：

【制法】：

(1)使用处方量的60%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、氯化钠和醋酸钠缓冲盐溶解，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1；

(2)向上述溶液中加入0.2%(w/v)活性炭，并加入纸浆(0.1%)，搅拌30分钟；

(4)补加注射用水至全量，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1，再依次用0.45um和0.22um的聚四氟乙烯膜材质的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，115℃热压灭菌30min，即得。

实施例3：

【处方】：

【制法】：

(1)使用处方量的80%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、氯化钠和醋酸钠缓冲盐溶解，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1；

(2)向上述溶液中加入0.05%(w/v)活性炭，并加入纸浆(0.3%)，搅拌10分钟；

(4)补加注射用水至全量，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至5.5±0.1，再依次用0.45um和0.22um的聚四氟乙烯膜材质的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌20min，即得。

实施例4：

【处方】：

【制法】：

(1)使用处方量的70%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、氯化钠和醋酸钠缓冲盐溶解，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至目标值；

(2)向上述溶液中加入0.15%(w/v)活性炭，并加入纸浆(0.2%)，搅拌20分钟；

(4)补加注射用水至全量，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至目标值，再依次用0.45um和0.22um的聚四氟乙烯膜材质的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌20min，即得。

实施例5：

【处方】：

【制法】：

(1)使用处方量的75%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、氯化钠和醋酸钠缓冲盐溶解，必要时用1%冰醋酸或1%氢氧化钠调节溶液的pH值至目标值；

(2)向上述溶液中加入0.2%(w/v)活性炭，并加入纸浆(0.15%)，搅拌20分钟；

测定以上各实施例制备得到的注射液中主药含量；以注射液中活性成分实际浓度与理论浓度的比值的百分数表示；例如实测浓度为98.5mg/ml，理论投料浓度为100mg/ml，则该注射液中活性成分含量为98.5%；该含量可以反映注射液配制过程中活性成分的损失，即含量在100%以下并且偏离越远，制备过程中活性成分的损失就越高。另外，还测定各注射液中杂质A的含量。结果见表1。

表1：

实施例	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						主药含量/%	99.7	99.5	100.1	99.8	99.6
杂质A含量/%	0.18	0.16	0.19	0.17	0.21

从以上结果可见，本发明方法制备注射液，其主药基本上未见有因制备工艺引起的损失。另外，使用的原料药左乙拉西坦含有0.41%杂质A，但是出人意料的是，经本发明方法配制的注射液中其杂质A含量降到了0.25%以下，这种通过制剂工艺就可以降低杂质含量的方法，是现有技术完全不可预见的，其重大意义在于：可以通过简单、便宜的制剂工艺方法来降低杂质含量，而不需要采用例如使用有机溶剂重结晶等在成本、环保等方面压力均较高的工艺来降低杂质含量。

检查以上各注射液的溶液的澄清度与颜色：取注射液依法(中国药典2010年版二部附录IX B和附录IX A第一法)检查，溶液均澄清无色。

对照例1：

处方同实施例1。制法参考实施例1，但步骤(2)使用的纸浆量分别为0%、0.02%、0.05%、0.1%、0.3%、0.4%、0.5%、或0.8%，得到8个批次的注射液，分别记为D101、D102、D103、D104、D105、D106、D107、D108。

各样品溶液的澄清度与颜色：均澄清无色。测定各样品注射液中主药含量和杂质A的含量，结果：

D104、D105的主药含量均在99.5%～99.8%范围内，杂质A含量在0.11～0.17%范围内；

D101、D102、D103主药含量均在99.4%～99.9%范围内，但杂质A含量在0.39～0.41%范围内，特别是纸浆量越低杂质A含量越高，表明纸浆用量过低时不能有效降低杂质A含量；

D106、D107、D108的主药含量均在92.3%～94.8%范围内，杂质A含量在0.16～0.22%范围内，表明纸浆用量过高时可有效降低杂质A含量，但是主药有较大量的损失。

另外，照实施例2处方并参考实施例2制法，照实施例3处方并参考实施例3制法，照实施例4处方并参考实施例4制法，以及照实施例5处方并参考实施例5制法；照以上对照例1进行试验，显示与对照例1的结果基本相同，例如纸浆量低于等于0.05%时杂质A含量大于0.37%，而纸浆量大于等于0.4%时主药含量低于93.8%。

对照例2：

处方同实施例1。制法参考实施例1，但步骤(2)使用的活性炭分别为0%、0.01%、0.02%、0.05%、0.2%、0.4%、0.5%、或0.8%，得到8个批次的注射液，分别记为D201、D202、D203、D204、D205、D206、D207、D208。

测定各样品注射液中主药含量和杂质A的含量，结果：

D204、D205的主药含量均在99.6%～100.1%范围内，杂质A含量在0.08～0.16%范围内，各样品溶液均澄清无色；

D201、D202、D203主药含量均在99.2%～99.8%范围内，杂质A含量在0.15～0.23%范围内，但是它们在灭菌前溶液均澄清无色而在灭菌后均淡黄色至微黄色，且D201澄清度不合格；表明在使用纸浆但是活性炭用量低或不用的情况下虽然可以有效降低杂质A的量，但是无法保证获得溶液的澄清度与颜色合格的产品；

D206、D207、D208的主药含量均在91.5%～93.7%范围内，杂质A含量在0.13～0.24%范围内，表明在有纸浆使用的情况下当活性炭用量过高时可有效降低杂质A含量，但是主药有较大量的损失。

另外，照实施例2处方并参考实施例2制法，照实施例3处方并参考实施例3制法，照实施例4处方并参考实施例4制法，以及照实施例5处方并参考实施例5制法；但均照以上对照例2进行试验，显示与对照例2的结果基本相同。例如活性炭低于等于0.02%时溶液的澄清度与颜色不合格，而活性炭量大于等于0.4%时主药含量低于93.3%。

对照例3：

处方和制法照实施例1，但步骤(3)使用醋酸纤维素膜材质的微孔滤膜进行过滤，得到D301；处方和制法照实施例1，但步骤(3)使用硝酸纤维素膜材质的微孔滤膜进行过滤，得到D302；处方和制法照实施例1，但步骤(3)使用聚酰胺膜材质的微孔滤膜进行过滤，得到D303；处方和制法照实施例1，但步骤(3)使用聚碳酸酯膜材质的微孔滤膜进行过滤，得到D304；处方和制法照实施例1，但步骤(3)使用聚砜膜材质的微孔滤膜进行过滤，得到D305。

检查以上5个注射液的溶液的澄清度与颜色，结果各溶液均澄清无色。

测定以上5个注射液中的主药含量和杂质A的含量，结果见表2。

表2：

实施例	D301	D302	D303	D304	D305
						主药含量/%	99.3	99.4	100.2	99.4	99.5
杂质A含量/%	0.38	0.42	0.39	0.40	0.37

从以上结果可见，当改用其它注射液常用材质的微孔滤膜过滤时，虽然可以获得澄清度与颜色合格的注射液，并且它们的主药基本无损失，但是出人意料的是，这些其它种类材质的常用微孔滤膜却完全无法有效地降低杂质A的含量。

另外，照实施例2处方并参考实施例2制法，照实施例3处方并参考实施例3制法，照实施例4处方并参考实施例4制法，以及照实施例5处方并参考实施例5制法；但均照以上对照例3进行更换滤膜材质的试验。显示与对照例3的结果基本相同，例如得到的全部注射液中，澄清度与颜色均合格，主药含量均在98.8%以上，但是杂质A含量均在0.37%～0.42%范围内。

对照例4：

使用与本发明实施例1相同的原料药，参考CN102525900A(恒道)说明书实施例1的配方和方法，但是在步骤9中分别采用如下材质的微孔滤膜：醋酸纤维素膜材质、硝酸纤维素膜材质、聚酰胺膜材质、聚碳酸酯膜材质、聚砜膜材质、聚四氟乙烯膜材质。结果显示，主药含量均在98.8%以上，但是杂质A含量均在0.36%～0.41%范围内，表明在不使用纸浆的情况下，使用各种材质的滤膜都无法降低杂质A的含量。

对照例5：

使用与本发明实施例1相同的原料药，参考CN102525900A(恒道)说明书实施例1的配方和方法，但是在步骤9)中分别采用如下材质的微孔滤膜：醋酸纤维素膜材质、硝酸纤维素膜材质、聚酰胺膜材质、聚碳酸酯膜材质、聚砜膜材质、聚四氟乙烯膜材质，并且在步骤7)中添加0.2%纸浆。结果显示，主药含量均在98.7%以上；使用聚四氟乙烯膜材质的样品杂质A含量为0.20%，但是使用其它材质的滤膜时杂质A含量均在0.37%～0.41%范围内，表明在使用纸浆的情况下，只有使用聚四氟乙烯膜才能有效降低杂质A的含量。

对照例6：

照实施例1的处方和方法，但是使用不同批次的左乙拉西坦原料药，其中杂质A的含量分别为0.24%、0.35%、0.48%、0.75%。结果所得不同批次的注射液：杂质A含量分别为0.06%、0.11%、0.16%、0.22%，澄清度与颜色均为澄清无色，主药含量均在99.1%～99.8%范围内。

Claims

1.左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦、氯化钠、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水。

2.根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其特征在于：

其pH值为4.5～6.5，例如其pH值为5.0～6.0；

所述的醋酸钠缓冲盐是以醋酸钠形式加入的，或者是以醋酸和氢氧化钠的形式加入的；

左乙拉西坦的浓度为8～12%(w/v)，例如9～11%(w/v)，例如约10%(w/v)；

氯化钠的浓度为0.35～1.00%(w/v)，例如0.40～0.95%(w/v)，例如0.45～0.90%(w/v)；和/或

醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L，例如为15～30mmol/L。

3.根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦8～12%(w/v)、氯化钠0.35～1.00%(w/v)、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为4.5～6.5；醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L；或者

其中包含：左乙拉西坦9～11%(w/v)、氯化钠0.45～0.90%(w/v)、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为5.0～6.0；醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为15～30mmol/L。

4.根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，相对于左乙拉西坦的量而言，该注射液中包含低于0.5%的2-吡咯烷酮-正丁酸，优选低于0.4%，优选低于0.3%，优选低于0.25%。

5.根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其是通过包括以下步骤的方法制备得到的：

6.根据权利要求5的左乙拉西坦注射液，其特征在于：

所述微孔滤膜是选自下列材质的微孔滤膜：醋酸纤维素膜材质、硝酸纤维素膜材质、聚酰胺膜材质、聚碳酸酯膜材质、聚砜膜材质、聚四氟乙烯膜材质；

所述步骤(2)中加入的纸浆以是干滤纸配制的；和/或

所述步骤(2)中加入的纸浆的量，以干滤纸计，在溶液中的浓度为0.1%～0.5%(w/v)，优选0.1%～0.3%(w/v)。

7.制备左乙拉西坦注射液例如本发明第一方面任一实施方案所述左乙拉西坦注射液的方法，所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦、氯化钠、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该方法包括以下步骤：

8.根据权利要求7的方法，其特征在于：

步骤(2)中加入的纸浆以是干滤纸配制的；和/或

步骤(2)中加入的纸浆的量，以干滤纸计，在溶液中的浓度为0.1%～0.5%(w/v)，优选0.1%～0.3%(w/v)。

9.根据权利要求7的方法，其特征在于：

所述左乙拉西坦注射液的pH值为4.5～6.5，例如其pH值为5.0～6.0；

所述左乙拉西坦注射液中，左乙拉西坦的浓度为8～12%(w/v)，例如9～11%(w/v)，例如约10%(w/v)；

所述左乙拉西坦注射液中，氯化钠的浓度为0.35～1.00%(w/v)，例如0.40～0.95%(w/v)，例如0.45～0.90%(w/v)；

所述左乙拉西坦注射液中，醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L，例如为15～30mmol/L；

所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦8～12%(w/v)、氯化钠0.35～1.00%(w/v)、醋酸钠缓冲盐和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为4.5～6.5；醋酸钠缓冲盐的浓度，以该注射液中的醋酸根离子浓度计，为10～50mmol/L；和/或

相对于左乙拉西坦的量而言，所述左乙拉西坦注射液中包含低于0.5%的2-吡咯烷酮-正丁酸，优选低于0.4%，优选低于0.3%，优选低于0.25%。

10.权利要求1-6任一项所述左乙拉西坦注射液或者权利要求7-9任一项所制备的左乙拉西坦注射液在制备用于治疗或预防选自下列疾病或病症的药物中的用途：致癫痫性疾病、癫痫发作病症、惊厥、帕金森氏病、由多巴胺替代治疗诱发的运动障碍、由施用安定类药物诱发的迟发性运动障碍、亨廷顿舞蹈病以及其它神经障碍包括双相性精神障碍、躁狂、抑郁、焦虑、注意缺陷障碍(ADHD)、偏头痛、三叉神经痛及其他神经痛、慢性痛、神经性疼痛、脑局部缺血、心律失常、肌强直、可卡因滥用、中风、肌阵挛、震颤、特发性震颤、简单型或复杂性抽搐、图雷特多综合征、腿多动综合征及其他运动失调、新生儿脑出血、肌萎缩性侧索硬化、痉挛状态和变性疾病、支气管性哮喘、哮喘持续状态和过敏性支气管炎、哮喘综合征、支气管高反应性和bronchospastic syndromes以及过敏性和血管舒缩性鼻炎和鼻结膜炎；特别是在制备用于治疗或预防选自下列疾病或病症的药物中的用途：癫痫、帕金森氏病、运动障碍、偏头痛、震颤、特发性震颤、双相性精神障碍、慢性疼痛、神经性疼痛、或者支气管、哮喘或者过敏病症。