CN103462886B - 稳定的左乙拉西坦注射液 - Google Patents

Abstract

本发明涉及稳定的左乙拉西坦注射液。具体地说，本发明左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦、酸性物质、碱性物质和作为注射液溶媒的注射用水。本发明左乙拉西坦注射液的pH值为4.5～6.5。本发明还涉及制备该左乙拉西坦注射液的方法。本发明出人意料地发现本发明左乙拉西坦注射液具有良好的药学性质。

Description

稳定的左乙拉西坦注射液

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种新的包含左乙拉西坦的药物组合物，特别是涉及一种稳定的左乙拉西坦注射液，本发明还涉及该药物组合物的制备方法。本发明的左乙拉西坦注射液具有优良的药学性质，例如其显示出良好的稳定性。

背景技术

欧洲专利EP0162036B公开了一种左旋化合物左乙拉西坦，其化学名为(-)-(S)-[α]-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺((-)-(S)-α-ethyl-2-oxo-1-pyrrolidine acetamide)，其分子式为C8H14N2O2，分子量为170.21，结构式为以下式I(在本发明中亦可称为式I化合物)：

左乙拉西坦为白色至类白色结晶性粉末，易溶于水(104.0g/100mL)，氯仿(65.3g/100mL)和甲醇(53.6g/100mL)，溶于乙醇(16.5g/100mL)，微溶于乙腈(5.7g/100mL)，不溶于正己烷。

左乙拉西坦可以作为治疗和预防中枢神经系统低氧和局部缺血型攻击的保护剂。该化合物可有效治疗癫痫，对于该治疗指征已经证明其右旋对映异构体(R)-(-)-[α]-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺完全没有活性(AJ.Gowe等，Eur.J.Pharmacol.，222，1992，193-203)。

左乙拉西坦是一种吡咯烷酮衍生物，其化学结构与现有抗癫痫药物无相关性。在多种抗癫痫动物模型中评估了左乙拉西坦的抗癫痫作用。左乙拉西坦对电流或多种致惊剂最大刺激诱导的单纯癫痫发作无抑制作用，并在亚最大刺激和阈值试验中仅显示微弱活性。但对毛果芸香碱和红藻氨基酸诱导的局灶性发作继发的全身性发作观察到保护作用，这两种化学致惊厥剂能模仿一些人伴有继发性全身发作的复杂部分性发作的特性。左乙拉西坦对复杂部分性发作的大鼠点燃模型的点燃过程和点燃状态均具有抑制作用。这些动物模型对人体特定类型癫痫的预测价值尚不明确。

体内、体外试验显示，左乙拉西坦抑制海马癫痫样突然放电，而对正常的神经元兴奋性无影响，提示左乙拉西坦可能选择性地抑制癫痫样突发放电超同步性和癫痫发作的传播。

左乙拉西坦在浓度高至10μM时，对多种已知受体无亲合力，如苯并二氮卓类、GABA、甘氨酸、NMDA、再摄取位点和第二信使系统。体外试验显示左乙拉西坦对神经元电压门控的钠离子通道或T-型钙电流无影响。左乙拉西坦并不直接易化GABA能神经传递，但研究显示对培养的神经元GABA和甘氨酸门控电流负调节子活性有对抗作用。在大鼠脑组织中发现了左乙拉西坦的可饱和和立体选择性的神经元结合位点，但该结合位点的鉴定和功能目前尚不明确。

左乙拉西坦的确切抗癫痫作用机制尚不完全明确。目前普遍认为其与传统抗癫痫药物的作用机制不同，对γ-氨基丁酸能及谷氨酸能神经传导通路无直接作用，与苯二氮卓受体无亲和力，对神经元的电压门控钠离子通道、低电压门控T型钙离子通道无直接联系。主要通过以下途径发挥作用：①与中枢神经元内广泛分布的突触小泡蛋白2A发生作用，调节突触囊泡的胞外分泌功能和突触前神经递质的释放。动物实验表明SV2A基因敲除小鼠表现出生长受限、神经元兴奋性增加及严重的惊厥易感性。左乙拉西坦与SV2A在脑内有很高的亲和性，并与抑制痫性放电密切相关。②对抗γ-氨基丁酸受体阻滞剂，从而间接增强γ-氨基丁酸受体的作用、抑制海马CA3区等处神经元的兴奋性。③抑制高电压激活的N型钙离子通道，似对钾离子通道也有作用。④一些分子研究表明，神经元兴奋性增高与海马内用于合成脑源性神经营养因子及神经肽γ的mRNA水平上调有关。左乙拉西坦则可减少这些基因表达的上调，从而抑制与之相关的神经元兴奋性增高。

左乙拉西坦是一种新型的抗癫痫药物，与其他抗癫痫药物的结构不同，具有全新的抗癫痫机制。左乙拉西坦的确切抗癫痫机制尚不明，但与传统抗癫痫药物作用于离子通道或兴奋性、抑制性神经递质系统不同。左乙拉西坦几乎具备了较好的抗癫痫药物的所有药动学特性：生物利用度高、线性曲线、低蛋白结合率、无肝酶诱导作用。多种动物模型显示左乙拉西坦具有抗癫痫特性。

全球每年大约新发生200万例癫痫。其中发达国家中癫痫的发病率约为每年每十万人中有50人。同样，癫痫的发病率在发展中国家中也显著增高，为每十万人中有100人。我国约有900万癫痫患者，其中600万病人每年仍有发作，而且每年都会出现40万新发病例。

癫痫患者的死亡危险性大约是普通人群的二至四倍(死亡可能和基础疾病，自杀，事故或者癫痫状态有关)。根据国际抗癫痫联盟(ILAE)的调查，患有癫痫的年轻人的死亡率是正常年轻人的4倍。

理想的抗癫痫药物除有较好的疗效外，还应具备：生物利用度接近100%，达稳态时间快，药代动力学呈线性，服药最好l～2次1d，不与血浆蛋白结合，不经肝脏代谢，无药物相互作用等。

左乙拉西坦就是这样的一种新型抗癫痫药，且注射液可作为口服左乙拉西坦的补充剂型，当口服左乙拉西坦不可行时用于部分性癫痫发作及肌阵挛性癫痫患者少年肌阵挛性癫痫病。

左乙拉西坦由比利时UCB公司研发，于1999年左乙拉西坦片获FDA批准，从2004年开始，其以强势增长态势迈入全球畅销药行列。并且在此后几年，其全球销售继续稳步攀升尤其在2007和2008年其销售额均超过了10亿美元，分别达到14.07亿和18.64亿美元，成为了名副其实的重镑炸弹级产品。

左乙拉西坦良好的效果及安全性带动了众多剂型的开发上市，目前除了注射剂之外，均为口服剂型，有片剂、口服溶液、缓释片。国外多项大型临床试验均显示了左乙拉西坦注射液优良效果及良好的安全性，并且目前左乙拉西坦注射液已上市。

国外上市的左乙拉西坦注射液(KEPPRA injection)含有100mg/ml左乙拉西坦，每瓶5mL注射液中含有：500mg左乙拉西坦、45mg氯化钠、8.2mg醋酸钠三水合物、冰醋酸适量调节至pH5.5、注射用水至全量。在该配方中，本领域技术人员通常还可以将其中的醋酸钠三水合物改用醋酸或冰醋酸与氢氧化钠组合，达到基本上与8.2mg相当量的缓冲盐量而配制获得。

例如，中国专利申请号200810116329.9(CN101623250A，德众万全)公开了一种左乙拉西坦注射液配方，包括：左乙拉西坦10%、氯化钠0.9%、冰醋酸0.5%、氢氧化钠0.7%、注射用水87.9%，使用常规的注射液配制工艺进行制备。

中国专利申请号200910086292.4(CN101919811A，博时安泰)公开了一种左乙拉西坦注射液配方，每1000ml包括：左乙拉西坦100g、氯化钠9g、醋酸钠1g、注射用水至全量，使用常规的注射液配制工艺进行制备。

中国专利申请号201210016087.2(CN102525900A，南京恒道)亦公开了例如以下配方的左乙拉西坦注射液：左乙拉西坦100g、氯化钠9g、醋酸钠1.6g、醋酸0.2g、注射用水加至1000ml，使用常规的注射液配制工艺进行制备。

在左乙拉西坦为(-)-(S)-[α]-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺，由于手性中心的存在使得其存在光学异构体，即R-乙拉西坦[(2R)-2-(2-oxopyrrolidin-1-yl)butanamide](在本发明中可称为异构体或R异构体)，其化学结构式为：

英国药典以及欧洲药典中均要控制该杂质的限度，并且显示在左乙拉西坦中存在较高含量的该异构体杂质。由此，在配制注射液时，有效地控制该异构体杂质是有益的。

因此，本领域仍然需要有一种新的方法，以配制出高品质的左乙拉西坦注射液。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的方法，以配制出高品质的左乙拉西坦注射液。本发明人出人意料地发现，使用特定的配方制备的左乙拉西坦注射液具有特别的稳定性特别是在异构体方面的稳定性。本发明基于此发现而以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦、酸性物质、碱性物质和作为注射液溶媒的注射用水。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其pH值为4.5～6.5，例如其pH值为5.0～6.0。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中所述的酸性物质选自：盐酸、磷酸、硝酸、醋酸、枸橼酸、D-酒石酸、L-酒石酸、DL-酒石酸。优选L-酒石酸。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中所述的碱性物质选自：氢氧化钠、氢氧化钾、乙二胺、三乙胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸。优选精氨酸。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中左乙拉西坦的浓度为8～12%(w/v)，例如9～11%(w/v)，例如约10%(w/v)。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中酸性物质的浓度为10～50mmol/L，例如15～40mmol/L，例如15～30mmol/L。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中碱性物质的浓度为10～50mmol/L，例如15～40mmol/L，例如15～30mmol/L。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其pH值可使用上文所述酸性物质和/或碱性物质调节，还可使用其它种类的酸性物质和碱性物质调节。当然，由于已经使用到了上述的酸性物质和碱性物质，本领域技术人员通常在制备注射液时在可以获得良好性能的注射液的情况下会使用尽可能少的种类的辅料，即尽量使用上文所述的酸性物质和碱性物质。常规的方法是，可以在注射液中添加本文所述量的酸性物质(或碱性物质)，然后根据目标pH值添加本文所述的碱性物质(或酸性物质)，使溶液pH值达到规定范围。本发明人已经通过试验确定，当以精氨酸作为碱性物质并以酒石酸作为酸性物质时，当精氨酸添加浓度达15～30mmol/L的情况下，使用酒石酸达15～30mmol/L范围时可以获得5.0～6.0的pH值的注射液；另外当酒石酸添加浓度达15～30mmol/L的情况下，使用精氨酸达15～30mmol/L范围时同样可以获得5.0～6.0的pH值的注射液。因此，在本发明中使用此对酸性物质-碱性物质时，因此添加其中一种的量达15～30mmol/L范围时，可容易的通过注射液pH值的监控来确定另一种物质的用量，即，例如当注射液中精氨酸浓度为20mmol/L时，使用适量酒石酸以使注射液pH值在5.0～6.0即可，而不必具体确定酒石酸。或者使酒石酸和精氨酸的浓度均在15～30mmol/L范围内，然后根据pH值偏离情况使用适量酒石酸或精氨酸进行调节即可。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中还可以包含渗透压调节剂。例如其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇等。这些渗透压调节剂的使用量是本领域技术员公知的，通常，氯化钠的浓度可以为0.35～1.00%(w/v)，例如0.40～0.95%(w/v)，例如0.45～0.90%(w/v)；葡萄糖或甘露醇的浓度可以为2.5%～10%，例如5～10%。由于本发明在临床上使用时，需要用较大量的输液例如葡萄糖注射液、氯化钠注射液进行稀释，因此渗透压调节剂的浓度可以在较宽范围内使用而不致产生因渗透压而出现的安全性问题。

在本发明中，短语“作为注射液溶媒的注射用水”其在注射液中的加入量不必作特别的限定，本领域技术人员通常以“定容至全量”、“平衡至全量”、“加至处方全量”等类似表述确定，例如5ml注射液中当其它固体物料确定并加入后时，由于它们存在体积效应，因此注射用水可以以类似于“加至5ml”或“加至全量”或“加至处方全量”的方式记载。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦8～12%(w/v)、酸性物质10～50mmol/L、碱性物质10～50mmol/L和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为4.5～6.5。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦9～11%(w/v)、酸性物质15～30mmol/L、碱性物质15～30mmol/L和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为5.0～6.0。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，相对于左乙拉西坦的量而言，该注射液中包含低于0.5%的R异构体，优选低于0.4%，优选低于0.3%，优选低于0.25%。本发明人出人意料地发现，常规左乙拉西坦注射液在高温加速试验条件下处置时，有R异构体增加的现象，但是通过加入本发明所述酸性物质和碱性物质后可以有效地抑制R异构体的增加，这些常规的酸性物质和碱性物质具有抑制R异构体增加的性质是现有技术完全不可预见的。

根据本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液，其在40℃温度下放置6个月后R异构体的增加百分数低于50%，优选低于40%，优选低于30%。

进一步地，本发明第二方面提供了一种制备左乙拉西坦注射液例如本发明第一方面任一实施方案的左乙拉西坦注射液的方法，所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦、酸性物质、碱性物质和作为注射液溶媒的注射用水；该方法包括以下步骤：

(1)使用大约处方量的60～80%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、酸性物质、碱性物质溶解，必要时用该酸性物质或碱性物质调节溶液的pH值至5.5±0.1；

(2)向上述溶液中加入0.05～0.2%(w/v)活性炭，搅拌10～30分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭；

(4)补加注射用水至全量，必要时用该酸性物质或碱性物质调节溶液的pH值至5.5±0.1，再依次用0.45um和0.22um的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，所述左乙拉西坦注射液的pH值为4.5～6.5，例如其pH值为5.0～6.0。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的酸性物质选自：盐酸、磷酸、硝酸、醋酸、枸橼酸、D-酒石酸、L-酒石酸、DL-酒石酸。优选L-酒石酸。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的碱性物质选自：氢氧化钠、氢氧化钾、乙二胺、三乙胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸。优选精氨酸。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得注射液中左乙拉西坦的浓度为8～12%(w/v)，例如9～11%(w/v)，例如约10%(w/v)。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得注射液中酸性物质的浓度为10～50mmol/L，例如15～40mmol/L，例如15～30mmol/L。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得注射液中碱性物质的浓度为10～50mmol/L，例如15～40mmol/L，例如15～30mmol/L。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得注射液中包含：左乙拉西坦8～12%(w/v)、酸性物质10～50mmol/L、碱性物质10～50mmol/L和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为4.5～6.5。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得注射液中包含：左乙拉西坦9～11%(w/v)、酸性物质15～30mmol/L、碱性物质15～30mmol/L和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为5.0～6.0。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得注射液中，相对于左乙拉西坦的量而言，该注射液中包含低于0.5%的R异构体，优选低于0.4%，优选低于0.3%，优选低于0.25%。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所得注射液在40℃温度下放置6个月后R异构体的增加百分数低于50%，优选低于40%，优选低于30%。

进一步地，本发明第三方面提供了酸性物质和碱性物质的组合成制备左乙拉西坦注射液中的用途。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述酸性物质选自：盐酸、磷酸、硝酸、醋酸、枸橼酸、D-酒石酸、L-酒石酸、DL-酒石酸。优选L-酒石酸。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述的碱性物质选自：氢氧化钠、氢氧化钾、乙二胺、三乙胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸。优选精氨酸。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦、酸性物质、碱性物质和作为注射液溶媒的注射用水。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液pH值为4.5～6.5，例如其pH值为5.0～6.0。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中左乙拉西坦的浓度为8～12%(w/v)，例如9～11%(w/v)，例如约10%(w/v)。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中酸性物质的浓度为10～50mmol/L，例如15～40mmol/L，例如15～30mmol/L。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中碱性物质的浓度为10～50mmol/L，例如15～40mmol/L，例如15～30mmol/L。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中还可以包含渗透压调节剂。例如其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇等。这些渗透压调节剂的使用量是本领域技术员公知的，通常，氯化钠的浓度可以为0.35～1.00%(w/v)，例如0.40～0.95%(w/v)，例如0.45～0.90%(w/v)；葡萄糖或甘露醇的浓度可以为2.5%～10%，例如5～10%。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦8～12%(w/v)、酸性物质10～50mmol/L、碱性物质10～50mmol/L和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为4.5～6.5。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦9～11%(w/v)、酸性物质15～30mmol/L、碱性物质15～30mmol/L和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为5.0～6.0。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中，相对于左乙拉西坦的量而言，该注射液中包含低于0.5%的R异构体，优选低于0.4%，优选低于0.3%，优选低于0.25%。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述酸性物质和碱性物质的组合以在左乙拉西坦注射液中抑制R异构体的增加。

根据本发明第三方面任一实施方案的用途，其中所述酸性物质和碱性物质的组合以在左乙拉西坦注射液中抑制R异构体的增加，其中该左乙拉西坦注射液在40℃温度下放置6个月后R异构体的增加百分数低于50%，优选低于40%，优选低于30%。

进一步地，本发明第四方面提供了本发明第一方面任一实施方案所述左乙拉西坦注射液或者本发明第二方面任一实施方案所制备的左乙拉西坦注射液在制备用于治疗或预防选自下列疾病或病症的药物中的用途：致癫痫性疾病、癫痫发作病症、惊厥、帕金森氏病、由多巴胺替代治疗诱发的运动障碍、由施用安定类药物诱发的迟发性运动障碍、亨廷顿舞蹈病以及其它神经障碍包括双相性精神障碍、躁狂、抑郁、焦虑、注意缺陷障碍(ADHD)、偏头痛、三叉神经痛及其他神经痛、慢性痛、神经性疼痛、脑局部缺血、心律失常、肌强直、可卡因滥用、中风、肌阵挛、震颤、特发性震颤、简单型或复杂性抽搐、图雷特多综合征、腿多动综合征及其他运动失调、新生儿脑出血、肌萎缩性侧索硬化、痉挛状态和变性疾病、支气管性哮喘、哮喘持续状态和过敏性支气管炎、哮喘综合征、支气管高反应性和bronchospastic syndromes以及过敏性和血管舒缩性鼻炎和鼻结膜炎；特别是在制备用于治疗或预防选自下列疾病或病症的药物中的用途：癫痫、帕金森氏病、运动障碍、偏头痛、震颤、特发性震颤、双相性精神障碍、慢性疼痛、神经性疼痛、或者支气管、哮喘或者过敏病症。

经由术语“疾病”，我们理解疾病选自：致癫痫性疾病(或者可以理解为癫痫)、癫痫发作病症、惊厥、帕金森氏病、由多巴胺替代治疗诱发的运动障碍、由施用安定类药物诱发的迟发性运动障碍、亨廷顿舞蹈病以及其它神经障碍包括双相性精神障碍、躁狂、抑郁、焦虑、注意缺陷障碍(ADHD)、偏头痛、三叉神经痛及其他神经痛、慢性痛、神经性疼痛、脑局部缺血、心律失常、肌强直、可卡因滥用、中风、肌阵挛、震颤、特发性震颤、简单型或复杂性抽搐、图雷特多综合征、腿多动综合征及其他运动失调、新生儿脑出血、肌萎缩性侧索硬化、痉挛状态和变性疾病、支气管性哮喘、哮喘持续状态和过敏性支气管炎、哮喘综合征、支气管高反应性和bronchospasticsyndromes以及过敏性和血管舒缩性鼻炎和鼻结膜炎(rhinoconjunctivitis)。

在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

如本文所用，术语“治疗”指治愈性治疗和预防性治疗。

经由术语“治愈性”指治疗障碍或病症正在发作的症状的效力。

经由“预防性”指障碍或病症发生或复发的预防。

本发明还涉及通过使用药物组合物例如本发明注射液治疗人类患者的方法。

本发明还涉及用作治愈上述疾病的药剂的药物组合物例如本发明注射液。

本发明还涉及药物组合物例如本发明注射液制备在上述疾病中用于治疗应用的药剂的用途。

优选地，上述疾病选自：致癫痫性疾病、帕金森氏病、运动障碍、偏头痛、震颤、特发性震颤、双相性精神障碍、慢性疼痛、神经性疼痛、或者支气管、哮喘或者过敏病症。更优选地上述疾病为癫痫。

本发明还涉及制备在上述疾病中用于治疗应用的药剂例如本发明注射液的方法，其特征在于使用根据本发明的药物组合物例如本发明注射液。

本发明还涉及通过施用药物组合物例如本发明注射液对人类进行治疗以缓解疾病的方法。

如上下文所述的，已经出人意料地发现，在本发明注射液中添加特定的酸性物质和碱性物质，可以有效地抑制R异构体的形成。

具体实施方式

所提供的以下实施例仅用于解释目的而不是用于，也不应被解释为以任何方式限制本发明。本领域那些技术人员将会认识到在不超越本发明的精神或范围的情况下可对以下实施例做出常规变化和修改。

以下各实施例和比较例中，制备的各种注射液，每批次以5000ml的量配制，但是处方表述时均以每100ml量的物料表述。

以下各实施例和对照例中，制备注射液时，如未另外说明，使用的原料药左乙拉西坦含有0.34%的R异构体杂质，在本发明中，为简便起见，该R异构体杂质亦可称为杂质A。

A、测试方法例部分

测试方法例1：注射液中左乙拉西坦的含量测定方法

本测试方法例1的高效液相色谱法方法可称为【HPLC法A】。

本测试方法例的方法，可用于测定本发明左乙拉西坦注射液以及各种物料例如制剂中间体物料中左乙拉西坦的浓度。

照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐溶液(取1.5g磷酸二氢钠和1.2g己烷磺酸钠，加水1000ml，氢氧化钠试液调节pH值至6.5)-乙腈(80：20)为流动相；检测波长为205nm。理论板数按左乙拉西坦计算应不低于3000。

测定法：精密量取注射液1ml(对于其它物料，例如制剂中间体物料，可以取相当含量的活性成分的物料进行配制)，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取左乙拉西坦对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得注射液中左乙拉西坦的含量。

测试方法例2：注射液中特殊杂质R异构体的含量测定方法

本测试方法例2的高效液相色谱法方法可称为【HPLC法B】。

本测试方法例的方法，可用于测定本发明左乙拉西坦注射液、原料药以及各种物料例如制剂中间体物料中作为杂质的R异构体的含量。如无另外说明，其量的表示可以是该杂质量相对于左乙拉西坦的量的百分数(例如每1ml注射液中，包含100mg左乙拉西坦，0.22mg杂质A，则该注射液中杂质A的含量为0.22%；又例如，对于某一批左乙拉西坦原料药，其中左乙拉西坦的绝对量为200mg，经测定其中杂质A的量为0.46mg，则该原料中杂质A的含量为0.23%)。

测定方法：精密量取本发明注射液1ml(对于其它物料，可取与其活性成分相当的量)，置于减压60℃条件下烘干（约30分钟）后，用流动相将样品配制成每1ml含左乙拉西坦1mg的溶液，滤过，作为供试品溶液；精密量取上述溶液1ml，用流动相配制成浓度为5μg/ml的对照溶液；另取消旋体适量，用流动相配制成浓度为1mg/ml的消旋体溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）测定。用DaicelOJ-H柱为色谱柱；以正己烷-异丙醇（85：15）为流动相；检测波长为205nm。理论板数按左乙拉西坦计算应不低于2000。精密量取消旋体溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，左乙拉西坦与其光学异构体之间的分离度应符合规定。精密量取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的10％。再精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至供试品溶液主峰保留时间的1.5倍。供试品溶液色谱图中如显光学异构体峰，其峰面积与对照溶液的主峰面积进行比较，以计算该试样中异构体杂质相对于主成分的百分数(通常而言其量应不得过0.5%)。

测试方法例3：测定各注射液剂样品高温放置后的残余率

测定各试验所得的注射液在40℃下放置6个月后，其中式I化合物的含量[40℃，6月，可称为高温平均含量，mg/ml，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20℃下处理相应时间时式I化合物的含量[20℃，6月，可称为常温平均含量，mg/ml，测定10瓶的平均值]的百分数，其可理解为残余百分数(%)，即可用下式计算：

其中，高温平均含量(mg/ml)和常温平均含量(mg/ml)是样品经【HPLC法A】测定并经计算得到的式I化合物的含量(10瓶的均值)，该残余百分数(%)的大小反映注射液中活性成分的变化情况，残余百分数(%)越大(越趋近于100%)则注射液经高温处理后其中活性成分保持更多，稳定性更好。

测试方法例4：测定各注射液样品高温放置后的特定杂质(R异构体)变化值

本试验例方法中，以【HPLC法B】测定各试验所得的注射液在40℃下放置6个月后，其中R异构体的量[40℃，6月，可称为高温杂质量，以%表示，测定10瓶的平均值]相对于该试样在20℃下处理相应时间时R异构体的量[20℃，6月，可称为常温杂质量，以%表示，测定10瓶的平均值]的变化百分数，其可用下式计算：

上述杂质R异构体变化百分数(%)的大小反映注射液中特定杂质即R异构体的变化情况，杂质变化百分数(%)越大则注射液经高温处理后注射液中该杂质量增加越多，稳定性越差。

测试方法例5：测定各注射液样品高温放置前后的pH值变化值

将注射液试样在40℃放置6个月，测定每一试样在高温处置前、后的pH值，以下式计算每一试样的pH值变化值(即高温处置前、后pH值差值的绝对值)：

pH值变化值=|6月pH值—0月pH值|

通常而言，变化值小于0.2个pH值单位是能够令人接受的。

B、实施例部分

实施例1：

【处方】：

注：在本实施例的实际制备中，以L-酒石酸为酸性物质并作为酸碱调节剂进行操作，L-酒石酸的实际用量约在22～24mmol/L范围内。下文各实例处方中以“适量”标其用量的酸性物质或碱性物质，均表示其以酸碱调节剂的方式加入。

【制法】：

(1)使用处方量的70%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、L-酒石酸和精氨酸溶解，必要时调节溶液的pH值至目标值；

(2)向上述溶液中加入0.1%(w/v)活性炭，搅拌15分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭；

(4)补加注射用水至全量，必要时调节溶液的pH值至目标值，再依次用0.45um和0.22um的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌15min，即得。

实施例2：

【处方】：

注：在本实施例的实际制备中，L-酒石酸的实际用量约15.3mmol/L。

【制法】：

(1)使用处方量的80%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、L-酒石酸和精氨酸溶解，必要时调节溶液的pH值至目标值；

(2)向上述溶液中加入0.1%(w/v)活性炭，搅拌15分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭；

(4)补加注射用水至全量，必要时调节溶液的pH值至目标值，再依次用0.45um和0.22um的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌15min，即得。

实施例3：

【处方】：

注：在本实施例的实际制备中，L-酒石酸的实际用量约在28.8mmol/L。

【制法】：

(1)使用处方量的60%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、L-酒石酸和精氨酸溶解，必要时调节溶液的pH值至目标值；

(2)向上述溶液中加入0.1%(w/v)活性炭，搅拌15分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭；

(4)补加注射用水至全量，必要时调节溶液的pH值至目标值，再依次用0.45um和0.22um的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌15min，即得。

实施例4：

【处方】：

注：在本实施例的实际制备中，精氨酸的实际用量约在23～24mmol/L范围内。

【制法】：

(1)使用处方量的75%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、L-酒石酸和精氨酸溶解，必要时调节溶液的pH值至目标值；

(2)向上述溶液中加入0.1%(w/v)活性炭，搅拌15分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭；

(4)补加注射用水至全量，必要时调节溶液的pH值至目标值，再依次用0.45um和0.22um的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌15min，即得。

实施例5：

【处方】：

注：在本实施例的实际制备中，精氨酸的实际用量约在24～27mmol/L范围内。

【制法】：

(1)使用处方量的70%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、L-酒石酸和精氨酸溶解，必要时调节溶液的pH值至目标值；

(2)向上述溶液中加入0.1%(w/v)活性炭，搅拌15分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8um和0.45um的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭；

(4)补加注射用水至全量，必要时调节溶液的pH值至目标值，再依次用0.45um和0.22um的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，5ml/瓶，密封，121℃热压灭菌15min，即得。

发明人对上文实施例1～5制备具有本发明特征的注射液，照上文测试方法例3和测试方法例4对这些注射液的性质进行考察，结果如下表1：

表1：

样品	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						残余百分数/%	99.2	98.8	98.5	98.7	99.4
R异构体变化百分数/%	26	29	21	18	25

以上结果表明，在模拟长期贮藏的高温加速试验中，本发明注射液中活性成分具有良好的化学稳定性；并且杂质R异构体增加量低，变化百分数小。各试样在高温处理后均未见有沉淀。用测试方法例5考察各试样pH值变化值，结果均不超过0.15个pH单位。

补充制备例1：

在不同的配方中，除了L-酒石酸用量改为以下表第2行(mmol/L行)所列用量外(L-酒石酸不足的使用1M盐酸溶液调节溶液pH值至5.5，精氨酸不足的使用1M氢氧化钠溶液调节溶液pH值至5.5)，处方中的其它要素以及制备工艺均同上述实施例1。表中第1行(No.行)为所得注射液样品编号，编号01的完整编号为Eb1-01，表示补充制备例1所得01号注射液，编号02的完整编号为Eb1-02，亦有类似含义。

No.	01	02	03	04	05	06	07	08
									mmol/L	0	5	10	15	30	40	50	75

照上文测试方法例3和测试方法例4、测试方法例5对Eb1-01至Eb1-08这些注射液的性质进行考察，结果：

Eb1-04和Eb1-05，残余百分数均在98.6%～99.4%范围内，R异构体变化百分数均在21%-26%范围内，各试样在高温处理后均未见有沉淀，各试样pH值变化值不超过0.15个pH单位；

Eb1-01至Eb1-03，残余百分数均在95.5%～96.4%范围内，R异构体变化百分数均在124%-162%范围内，特别是L-酒石酸用量越低R异构体变化百分数越大；

Eb1-06至Eb1-08，残余百分数均在94.3%～97.1%范围内，R异构体变化百分数均在54%-74%范围内，并且各试样在高温处理后均出现有沉淀。

上述结果表明，当不用或者少用L-酒石酸时，R异构体会显著增加，但是当用量过大时注射液会出现沉淀这种物理不稳定性问题。

补充制备例2：

在不同的配方中，除了精氨酸用量改为以下表第2行(mmol/L行)所列用量外(精氨酸不足的使用1M氢氧化钠溶液调节溶液pH值至5.5，L-酒石酸不足的使用1M盐酸溶液调节溶液pH值至5.5)，处方中的其它要素以及制备工艺均同上述实施例4。表中第1行(No.行)为所得注射液样品编号，编号01的完整编号为Eb2-01，表示补充制备例2所得01号注射液，编号02的完整编号为Eb2-02，亦有类似含义。

No.	01	02	03	04	05	06	07	08
									mmol/L	0	5	10	15	30	40	50	75

照上文测试方法例3和测试方法例4、测试方法例5对Eb2-01至Eb2-08这些注射液的性质进行考察，结果：

Eb2-04和Eb2-05，残余百分数均在98.7%～99.3%范围内，R异构体变化百分数均在17%-22%范围内，各试样在高温处理后均未见有沉淀，各试样pH值变化值不超过0.15个pH单位；

Eb2-01至Eb2-03，残余百分数均在94.6%～96.2%范围内，R异构体变化百分数均在142%-188%范围内，特别是精氨酸用量越低R异构体变化百分数越大；

Eb2-06至Eb2-08，残余百分数均在94.1%～96.4%范围内，R异构体变化百分数均在52%-81%范围内，各试样pH值变化值均在0.54～0.72个pH值单位范围内(均是增加的情形，即6个月后各试样的pH值均在6.0以上，这对于左乙拉西坦这种在较高pH值情况下不稳定的药物是不利的)，并且精氨酸用量越大pH值变化值越大。

上述结果表明，当不用或者少用精氨酸时，R异构体会显著增加，但是当用量过大时注射液会出现pH值变化过大的问题。

补充制备例3：

照实施例1进行，不同的是将其中的精氨酸替换为：三乙胺、赖氨酸、或组氨酸，得到3个试样分别记为Eb3-01至Eb3-03；照实施例2进行，不同的是将其中的精氨酸替换为：三乙胺、赖氨酸、或组氨酸，得到3个试样分别记为Eb3-04至Eb3-06；照实施例3进行，不同的是将其中的精氨酸替换为：三乙胺、赖氨酸、或组氨酸，得到3个试样分别记为Eb3-07至Eb3-09；照实施例4进行，不同的是将其中的精氨酸替换为：三乙胺、赖氨酸、或组氨酸，得到3个试样分别记为Eb3-10至Eb3-12；照实施例5进行，不同的是将其中的精氨酸替换为：三乙胺、赖氨酸、或组氨酸，得到3个试样分别记为Eb3-13至Eb3-15。

照上文测试方法例3、测试方法例4、测试方法例5对Eb3-01至Eb3-15这些注射液的性质进行考察，结果：Eb3-01至Eb3-15，残余百分数均在94.9%～96.1%范围内，R异构体变化百分数均在138%-179%范围内；例如使用赖氨酸的Eb3-02样品残余百分数95.3%，R异构体变化百分数167%。以上结果显示，即使是使用类似的碱性物质，均无法实现抑制R异构体在注射液中增加的目的。

补充制备例4：

照实施例1进行，不同的是将其中的L-酒石酸替换为：醋酸、枸橼酸、D-酒石酸，得到3个试样分别记为Eb4-01至Eb4-03；照实施例2进行，不同的是将其中的L-酒石酸替换为：醋酸、枸橼酸、D-酒石酸，得到3个试样分别记为Eb4-04至Eb4-06；照实施例3进行，不同的是将其中的L-酒石酸替换为：醋酸、枸橼酸、D-酒石酸，得到3个试样分别记为Eb4-07至Eb4-09；照实施例4进行，不同的是将其中的L-酒石酸替换为：醋酸、枸橼酸、D-酒石酸，得到3个试样分别记为Eb4-10至Eb4-12；照实施例5进行，不同的是将其中的L-酒石酸替换为：醋酸、枸橼酸、D-酒石酸，得到3个试样分别记为Eb4-13至Eb4-15。

照上文测试方法例3、测试方法例4、测试方法例5对Eb4-01至Eb4-15这些注射液的性质进行考察，结果：Eb4-01至Eb4-15，残余百分数均在95.2%～96.5%范围内，R异构体变化百分数均在144%-196%范围内；例如使用枸橼酸和D-酒石酸的Eb4-02和Eb4-03样品残余百分数分别为95.6%和96.1%，R异构体变化百分数分别为164%和183%。以上结果显示，即使是使用类似的酸性物质，均无法实现抑制R异构体在注射液中增加的目的。

补充制备例5：

对照试样1：照CN101623250A说明书实施例一的处方和工艺制备得到的注射液。

对照试样2：照CN101919811A说明书实施例2的处方和工艺制备得到的注射液。

对照试样3：照CN102525900A说明书实施例1的处方和工艺制备得到的注射液。

对照试样4：国外上市的左乙拉西坦注射液(KEPPRA injection)，含有100mg/ml左乙拉西坦，每瓶5mL注射液中含有：500mg左乙拉西坦、45mg氯化钠、8.2mg醋酸钠三水合物、冰醋酸适量调节至pH5.5、注射用水至全量。

照上文测试方法例3、测试方法例4、测试方法例5对对照试样1至对照试样4，结果：残余百分数均在95.8%～97.3%范围内，R异构体变化百分数均在152%-191%范围内；例如对照试样3残余百分数为96.6%，R异构体变化百分数为172%。

补充制备例6：

分别照上文本发明实施例1-5的配方和方法，但是使用的原料药左乙拉西坦含有0.18%的R异构体杂质，得到5批注射液试样。

照上文测试方法例3、测试方法例4、测试方法例5对5批注射液试样进行测定，结果：残余百分数均在98.8%～99.7%范围内，R异构体变化百分数均在12%-21%范围内，pH值变化值均在0.15个pH单位范围内，并且各注射液在经高温处理后未见有沉淀出现。

Claims (1)

1.左乙拉西坦注射液，其中包含：左乙拉西坦、酸性物质L-酒石酸、碱性物质精氨酸和作为注射液溶媒的注射用水；其中L-酒石酸的浓度为15~30mmol/L，精氨酸的浓度为15~30mmol/L。

2．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其pH值为4.5~6.5。

3．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其pH值为5.0~6.0。

4．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其中还包含渗透压调节剂，其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇。

5．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其中左乙拉西坦的浓度为8~12%(w/v)。

6．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，其中相对于左乙拉西坦的量而言，该注射液中包含低于0.5%的R异构体。

7．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，该注射液在40°C温度下放置6个月后R异构体的增加百分数低于50%。

8．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，该注射液在40°C温度下放置6个月后R异构体的增加百分数低于40%。

9．根据权利要求1的左乙拉西坦注射液，该注射液在40°C温度下放置6个月后R异构体的增加百分数低于30%。

10．制备权利要求1-9任一项所述左乙拉西坦注射液的方法，该方法包括以下步骤：

(1)使用处方量的60~80%的注射用水将处方量的左乙拉西坦、L-酒石酸、精氨酸溶解，根据pH值偏离情况用该L-酒石酸和精氨酸调节溶液的pH值至5.5±0.1；

(2)向上述溶液中加入0.05~0.2%(w/v)活性炭，搅拌10~30分钟；

(3)将步骤(2)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8μm和0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭；

(4)补加注射用水至全量，根据pH值偏离情况用该L-酒石酸和精氨酸调节溶液的pH值至5.5±0.1，再依次用0.45μm和0.22μm的微孔滤膜进行过滤，滤液灌装入玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得。

11．酸性物质和碱性物质的组合在制备左乙拉西坦注射液中的用途，所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦、酸性物质、碱性物质和作为注射液溶媒的注射用水；所述酸性物质是L-酒石酸；所述的碱性物质是精氨酸；所述左乙拉西坦注射液中酸性物质的浓度为15~30mmol/L，所述左乙拉西坦注射液中碱性物质的浓度为15~30mmol/L。

12．根据权利要求11的用途，其中所述左乙拉西坦注射液pH值为4.5~6.5。

13．根据权利要求11的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中左乙拉西坦的浓度为8~12%(w/v)。

14．根据权利要求11的用途，其中所述左乙拉西坦注射液中还包含渗透压调节剂，其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇。

15．根据权利要求11的用途，所述左乙拉西坦注射液中包含：左乙拉西坦9~11%(w/v)、酸性物质15~30mmol/L、碱性物质15~30mmol/L和作为注射液溶媒的注射用水；该注射液的pH值为5.0~6.0。

16．根据权利要求11的用途，所述左乙拉西坦注射液中，相对于左乙拉西坦的量而言，该注射液中包含低于0.5%的R异构体。

17．根据权利要求11的用途，所述酸性物质和碱性物质的组合在左乙拉西坦注射液中抑制R异构体的增加。

18．根据权利要求11的用途，所述酸性物质和碱性物质的组合在左乙拉西坦注射液中抑制R异构体的增加，其中该左乙拉西坦注射液在40°C温度下放置6个月后R异构体的增加百分数低于50%。