CN105175304A - 抗胆碱药物格隆溴铵及组合物 - Google Patents

抗胆碱药物格隆溴铵及组合物 Download PDF

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CN105175304A CN201510727148.XA CN201510727148A CN105175304A CN 105175304 A CN105175304 A CN 105175304A CN 201510727148 A CN201510727148 A CN 201510727148A CN 105175304 A CN105175304 A CN 105175304A
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Abstract

本发明涉及抗胆碱药物格隆溴铵及组合物。具体地说，本发明涉及一种可用于制药的药物，其中包含下式化合物。本发明还提供了该药物的制剂，它们作为一种抗胆碱能药，在临床上可用于麻醉、消化性溃疡、流涎等。该原料药或制剂具有抑制胃液分泌及调节胃肠蠕动作用；具有比阿托品更强的抗唾液分泌作用，但没有中枢性抗胆碱活性。临床上通常用于胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃酸分泌过多等症。

Description

抗胆碱药物格隆溴铵及组合物
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种作为抗胆碱剂的药物组合物，特别是涉及一种作为抗胆碱剂的包含格隆溴铵的药物组合物。
背景技术
格隆溴铵，其英文名为GlycopyrroniumBromide或Glycopyrrolate，其典型的中文化学名为：(3RS)-3-[(2SR)-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰基)氧基]-1,1-二甲基吡咯烷鎓溴化物，典型的英文化学名为：(3RS)-3-[(2SR)-(2-Cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenylacetyl)oxy]-1,1-dimethylpyrrolidiniumbromide，其分子式为C19H28BrNO3，分子量为398.3，其典型的化学结构式为：
及其对映体
即，作为药用的格隆溴铵是(3R)-3-[(2S)-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰基)氧基]-1,1-二甲基吡咯烷鎓溴化物和(3S)-3-[(2R)-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰基)氧基]-1,1-二甲基吡咯烷鎓溴化物一组对映体。
格隆溴铵为白色或几乎白色的结晶性粉末，易溶于水、甲醇、乙醇，在三氯甲烷或乙醚中几乎不溶。
CN101133021A(中国专利申请号200680006901.5，索塞，授权公告号CN101133021B)公开了格隆溴铵的结晶和纯化方法。包括格隆胺碱与溴甲烷在溶剂中的反应，其中对所述溶剂进行选择以便所述产物的非对映异构体中非对映异构体R,S和S,R的比例相对于非对映异构体R,R和S,S的比例占优势。并通过一个或多个控制结晶步骤分离所期望的非对映异构体。从该专利文献可见，在制备的后期阶段，将格隆胺碱(可简称为GP碱或GP碱杂质)在适宜的溶剂中与溴甲烷反应，得到格隆溴铵，基本操作过程是：
本发明涉及的是作为药用的格隆溴铵，在与其对映体杂质一起描述并便于区别时，本发明作为药用的格隆溴铵亦可称为3R2S/3S2R格隆溴铵，而其另外存在的一对对映体杂质可称为3S2R/3S2S杂质或3S2R/3S2S格隆溴铵或者其它类似的称谓，正如CN101133021B说明书[0032]段所述的，本发明涉及的是作为药用物质的R,S/S,R格隆溴铵，而与相对的是两个构型分别为R,R和S,S的杂质，它们在本发明中可简称为R,R/S,S杂质或者称为赤型异构体或者称为R,R/S,S格隆溴铵。所述R,R/S,S杂质或者称为赤型异构体即是：(3RS)-3-[(2RS)-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰基)氧基]-1,1-二甲基吡咯烷鎓溴化物，英文名(3RS)-3-[(2RS)-(2-cyclopentyl-2-hydroxy-2-phenylacetyl)oxy]-1,1-dimethylpyrrolidiniumbromide，化学结构式为：
及其对映体
除了R,R/S,S杂质外，根据上述CN101133021A及其它文献的制备方法，作为药用的格隆溴铵中还可能残余有微量的GP碱杂质。
例如，CN103159659A(中国专利申请号201110426038.1，沈阳药科)公开了毒蕈碱受体拮抗剂格隆溴铵的制备方法，其特征在于：苯乙酮酸经格氏反应、酯化反应制得α-环戊基扁桃酸甲酯，再与N-甲基吡咯烷-3-醇经酯交换、季铵化反应制得格隆溴铵。
以及例如，CN102627595A(中国专利申请号201210069208.X，徐奎)公开了格隆溴铵的制备方法，更具体地说，涉及富集高纯度(3R,2’S)和(3S,2’R)格隆溴铵以及合成方法中涉及到新的中间体的制备方法。据信该发明克服了现有技术存在收率低、污染大等缺陷，提供了一种收率高、环境污染小、纯化简便的制备式(I)的格隆溴铵的制备方法，该方法制备的格隆溴铵熔点为195℃～198℃。
作为一种抗胆碱能药，在临床上可用于麻醉、消化性溃疡、流涎病等。格隆溴铵为季铵类抗胆碱药，具有抑制胃液分泌及调节胃肠蠕动作用；本品还有比阿托品更强的抗唾液分泌作用，但没有中枢性抗胆碱活性。临床上通常用于胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃酸分泌过多等症。疗效与普鲁苯辛相仿或超过。静注或肌注可用于麻醉前给药，以抑制腺体分泌，作用可持续约7小时。用量用法：口服，每次1～2mg，1日3～4次，饭后及睡前服；维持量每次1mg，每日2次；1次极量为4mg，1日极量为12mg；麻醉前给药，静注或肌注0.2～0.4mg。临床上已经可使用的剂型有其片剂(0.5mg/片、1mg/片)、口服溶液、注射液(0.2mg/mL)等。
市售药品的安全、有效、可控是业界极为关注的。即使已成功地应用于临床，本领域技术人员仍然期待为格隆溴铵提供一种具有良好药学性能的药物产品例如药物制剂。
发明内容
本发明人已经发现，使用特定的处理工艺可以同时有效地降低格隆溴铵中R,R/S,S杂质和GP碱杂质的含量，并且显示具有低杂质的药用格隆溴铵及其制备的制剂例如其注射液显示出人意料的药学性质例如稳定性和/或生物学性质例如安全性。本发明因此发现而得以而完成。
为此，本发明第一方面提供了一种供药用的原料药的制备方法，该原料药的活性成分为格隆溴铵，该方法包括使用有机溶剂对包含格隆溴铵的原料药进行精制的步骤。
在本发明中，术语格隆溴铵为下式I化合物：
及其对映体。
在本发明方法中，上述“对包含格隆溴铵的原料药进行精制的步骤”中，所述术语“包含格隆溴铵的原料药”其可以是粗制原料药或粗品，例如可以是按照现有技术方法制备得到的原料药，尽管现有技术方法制备得到的原料药同样可以用于制剂例如注射液的制备，但是通过本发明方法对该现有技术的原料药进一步加工，以使它和由它制备成的制剂赋予更优良的性能，例如更好的稳定性、更好的安全性。
本发明所述“供药用的原料药”或“原料药”其可作为药物组合物例如药物制剂生产用的原料药，因此其亦可理解为式I化合物及其对映体即格隆溴铵的原料药。众所周知的，作为制备药物制剂的供药用的原料药，它们中包括作为主要组分的式I化合物及其对映体，还可以包含符合规定限度的微量杂质。
根据本发明第一方面的方法，其包括对包含格隆溴铵的原料药进行重结晶以达到精制目的的步骤。
根据本发明第一方面的方法，所述重结晶是将原料药溶解于第一溶剂中，接着向该溶液中添加第二溶剂，以使格隆溴铵从溶剂中沉淀出结晶。
根据本发明第一方面的方法，所述第一溶剂选自：水、甲醇、乙醇、1-辛醇、苯甲醇、二甲亚砜、二氯甲烷、乙酸乙酯、及其组合。在一个实施方案中，所述第一溶剂选自：乙醇、1-辛醇、二甲亚砜、二氯甲烷、乙酸乙酯、及其组合。在一个实施方案中，所述第一溶剂是乙醇和乙酸乙酯的混合物。在一个实施方案中，所述第一溶剂是乙醇与乙酸乙酯体积比100：7～20的混合物，优选是乙醇与乙酸乙酯体积比100：10～16的混合物。在本发明中，如未另外说明，提及的乙醇是无水乙醇。
根据本发明第一方面的方法，所述第二溶剂选自：乙醚、甲乙醚、叔丁基甲基醚、正庚烷、正己烷、正戊烷及其组合。在一个实施方案中，所述第二溶剂选自：乙醚、甲乙醚、叔丁基甲基醚及其组合。在一个实施方案中，所述第二溶剂是甲乙醚。
根据本发明第一方面的方法，所述第一溶剂与第二溶剂的体积比为1：7～25，例如1：10～20，例如1：10～15。
根据本发明第一方面的方法，其中所述的重结晶是照本领域技术人员的一般操作方法进行的，特别是在较高温度例如在40°以上直至溶剂回流温度以下的温度范围内(例如在55～60℃的温度下)将溶质溶解于溶剂中，接着在较低温度下例如在0～10°范围内使物料结晶，接着滤出结晶，干燥，以获得本发明的原料药。根据需要可进行多次重结晶。
根据本发明第一方面的方法，将原料药溶解于第一溶剂中时，本领域技术人员通常理解此时所用溶剂量越低越好，通常是只要达到稍高于溶解量的体积，例如达到2～4倍溶解量的溶剂体积，以便为后续结晶和后处理创造条件。因此在本发明中不必对该第一溶剂用量作特别规定。但是为了获得良好的分离效果，在本发明一个实施方案中，可以使原料药以0.1～0.5g/ml(例如0.1～0.2g/ml)的浓度溶解于第一溶剂中的比例进行处理。
已经发现，使用本发明的结晶方法可以同时有效地除去赤型异构体杂质和GP碱杂质。
在本发明中，赤型异构体是指以下式Ix化合物
及其对映体。其作为杂质任选地存在于本发明原料药或者制剂中。其在本发明中亦可称为杂质Ix或Ix杂质或Ix或者其它类似称谓(为式Ix化合物及其对映体的混合物)。
在本发明中，格隆胺碱(可简称为GP碱或GP碱杂质)是指以下式Iy化合物
其作为杂质任选地存在于本发明原料药或者制剂中。其在本发明中亦可称为杂质Iy或Iy杂质或Iy或者其它类似称谓。
在本发明中，以下式Iz化合物
其作为杂质任选地存在于本发明原料药或者制剂中。其在本发明中亦可称为杂质Iz或Iz杂质或Iz或者其它类似称谓。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的原料药中包括作为主要组分的格隆溴铵，以及任选的作为杂质的赤型异构体，赤型异构体相对于格隆溴铵而言含量低于0.5％(例如低于0.4％，例如低于0.3％)。
在本发明的原料药(其中包含作为活性成分的式I化合物及其对映体即格隆溴铵)中，赤型异构体杂质的含量是以其本身相对于格隆溴铵的重量百分量计，即：对于某一批本发明原料药或以其为原料制成的药物组合物例如制剂的物料，计算其中杂质赤型异构体的含量时，可以用下式计算：
杂质赤型异构体含量(％)＝(该物料中杂质赤型异构体的质量÷该物料中格隆溴铵的质量)×100％
根据以上定义，上述物料既可以是以式I化合物及其对映体为主要组成的原料药，亦可以是以式I化合物及其对映体为活性成分并添加有其它药用辅料的药物组合物，例如药物制剂，例如注射液。由此，杂质赤型异构体含量的计算不会因其它成分例如药用辅料的存在而受到影响。本发明涉及的其它杂质例如杂质Iy和杂质Iz以及其它杂质的计算时，亦是以相同方式处理的。下面【HPLC-A】和【HPLC-B】测定并计算赤型异构体、杂质Iy、杂质Iz以及其它杂质相对于格隆溴铵的含量中虽然是通过供试品溶液中二者的浓度比较计算的，由于在配制供试品溶液时杂质与格隆溴铵的稀释倍数相同或者可以确定，因此这种浓度比较与上式中的质量比较在本质上是相同的。
在本发明中，测定杂质Ix含量的方法可以有许多，例如根据本领域技术人员公知的方式确定的测定方法。一种典型的方法是高效液相色谱法。另外，可以通过制备型高效液相色谱法分离获得高纯度的例如色谱纯度达98％以上的杂质对照品(例如杂质Ix，以及例如下文提及的杂质Iy和杂质Iz)，以该杂质对照品为对照，通过本领域技术人员已知可行的方法来测定本发明包含式I化合物及其对映体的原料药以及由它们制备得到的药物制剂中该些杂质的相对含量。本发明涉及的杂质包括杂质Ix、杂质Iy和杂质Iz等，它们都是现有技术已知的或者可通过现有技术方法制备得到，并且可从商业途径购得，例如可从Sigma-Aldrich公司订购得到。在本发明中，如杂质Iz是从Sigma-Aldrich公司购得的货号706396的α-环戊基扁桃酸，纯度在98％以上，作为本发明化学试验或生物学试验使用，其在本发明【HPLC-B】法中色谱纯度99.1％，且在该色谱法中相对于本发明3R2S/3S2R格隆溴铵的相对保留时间在2.67～2.69范围内。
一种典型的高效液相色谱法是下文所述的高效液相色谱法A(在本发明中可简称【HPLC-A】)，其可用于测定本发明各种物料(包括原料药和制剂)中各种杂质特别是杂质Ix在该物料中相对于格隆溴铵的量。当然，本领域技术人员理解，分析方法是容易进行完善和改进的，任何可用的和潜在的测定本发明各种物料中的各种杂质的方法均可用于本发明；鉴于本发明各种物料中的各种杂质的含量不会因分析方法的完善和改进而发生变化，因此本发明各种物料中的杂质含量或相对含量的测定方法可以不受特别限制。当然，在本发明中，如未另外说明，测定各种物料(包括原料药和制剂)中各种杂质特别是杂质Ix的含量或相对含量的方法均是采用本文所述【HPLC-A】。
一种典型的高效液相色谱法是下文所述的高效液相色谱法B(在本发明中可简称【HPLC-B】)，其可用于测定本发明各种物料(包括原料药和制剂)中各种杂质特别是杂质Iy和/或杂质Iz在该物料中相对于格隆溴铵的量。当然，本领域技术人员理解，分析方法是容易进行完善和改进的，任何可用的和潜在的测定本发明各种物料中的各种杂质的方法均可用于本发明；鉴于本发明各种物料中的各种杂质的含量不会因分析方法的完善和改进而发生变化，因此本发明各种物料中的杂质含量或相对含量的测定方法可以不受特别限制。当然，在本发明中，如未另外说明，测定各种物料(包括原料药和制剂)中各种杂质特别是杂质Iy和/或杂质Iz的含量或相对含量的方法均是采用本文所述【HPLC-B】。
已经发现，对于包含格隆溴铵即式I化合物及其对映体的本发明原料药或者由它们制成的药物制剂，随着贮藏时间的延长，杂质Iz含量显示出渐渐增加的趋势。特别是在杂质Iy含量较高的情况下，例如相对于格隆溴铵计的杂质Iy含量在高于0.15％(特别是高于0.20％，特别是高于0.25％，特别是高于0.30％，特别是高于0.50％)时，显示本发明原料药或者由它们制成的药物制剂随着贮藏时间的延长，杂质Iz含量显示出渐渐增加的趋势。在本发明中，已经出人意料地发现，通过纯化包含式I化合物及其对映体的本发明原料药，使得其中包含的源于工艺的杂质Iy降低到一定程度以后，特别是使得Iy含量(相对于格隆溴铵计)低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iy含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.500％范围内(例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内、例如在0.003％～0.250％范围内、例如在0.003％～0.200％范围内、例如在0.003％～0.150％范围内、例如在0.003％～0.130％范围内)时，这些原料药或药物制剂在长时间贮藏后杂质Iz含量增加速度得到显著抑制，这是完全出人意料的。
尽管本发明涉及的各种化学物质，例如式I化合物及其对映体、杂质Ix、杂质Iy、杂质Iz，它们的化学结构是已知的并且可以从市场上以商业途径直接获得，但是本领域技术人员公知，这些杂质还可以通过规定的高效液相色谱法来定性或表征，例如通过规定的高效液相色谱法操作，通过测定杂质在该规定高效液相色谱法中的保留行为(即相对保留时间，RRT)来确定该杂质。特别是，本发明已经发现，在本发明所述【HPLC-A】系统中，相对于式I化合物而言，杂质Ix的相对保留时间在0.86～0.92范围内(通常RRT大约0.89)，从而本发明亦可将该杂质Ix称为RRT0.89杂质、杂质RRT0.89、或RRT0.89。
而在本发明所述【HPLC-B】系统中，相对于式I化合物而言，杂质Iy的相对保留时间在1.10～1.18范围内(通常RRT大约1.14)，从而本发明亦可将该杂质Iy称为RRT1.14杂质、杂质RRT1.14、或RRT1.14。
另外，在本发明所述【HPLC-B】系统中，相对于式I化合物而言，杂质Iz的相对保留时间在2.63～2.73范围内(通常RRT大约2.68)，从而本发明亦可将该杂质Iz称为RRT2.68杂质、杂质RRT2.68、或RRT2.68。
因此，在本发明下文中，提及RRT0.89杂质时，均指在【HPLC-A】系统中，相对于式I化合物的保留时间而言，相对保留时间在0.86～0.92范围内出现杂质，该杂质为杂质Ix；同样地，在本发明中，提及RRT1.14杂质时，均指在【HPLC-B】系统中，相对于式I化合物的保留时间而言，相对保留时间在1.10～1.18范围内出现杂质，该杂质为杂质Iy；同样地，在本发明中，提及RRT2.68杂质时，均指在【HPLC-B】系统中，相对于式I化合物的保留时间而言，相对保留时间在2.63～2.73范围内出现杂质，该杂质为杂质Iz。
相对保留时间的含义在本领域是公知的，例如，杂质Ix的相对保留时间(缩写为RRT)是指在色谱图中，杂质Ix色谱峰的保留时间除以式I化合物色谱峰的保留时间所得的值，即Ix的RRT＝杂质Ix保留时间÷式I化合物保留时间，而格隆溴铵本身的相对保留时间为1或者1.00，这种算法是本领域技术人员公知的。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药中，Ix杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.5％(例如低于0.4％，例如低于0.3％)。该含量可以使用高效液相色谱法测定并计算，特别是使用【HPLC-A】测定并计算。
在本发明中，【HPLC-A】的测定方法如下：
(i)溶液：
缓冲溶液：2.8g/L的磷酸二氢钠水溶液，用10％氢氧化钠溶液调节至pH值6.50±0.05；
流动相：甲醇:乙腈:缓冲溶液体积比50:10:40的混合液；
系统适用性溶液：用流动相配制的溶液，其中含赤型异构体对照品和格隆溴铵对照品的浓度分别为40μg/mL；
标准溶液A：精密称取格隆溴铵对照品约50mg，置于100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度约为500μg/mL的标准溶液A；
[本领域技术人员公知，上述称取格隆溴铵对照品“约50mg”，在实际操作上是需要用“约”来修饰的，原因在于精密称量固体物料时，例如使用万分之一天平，通常难以直接称得50.00mg，而是常常会有所偏离，例如偏离此数值±2％，例如精密称量到50.40mg，则偏离0.8％，但这种偏离使得后面的浓度继续偏离并延续到最终的数值计算中，而在最终的数值计算中考虑此称量偏离，因而最终该偏离理论上不会引起计算误差，从而此处“约”的表述是允许的，这也是各种版本的中国药典中在进行精密称量时通常都是称取“约”某量的物料。另外，在一个实施方案中，本发明涉及的用于修饰一个数值的“约”被定义为允许偏离其修饰的数值的±2％，例如上述“精密称取格隆溴铵对照品约50mg”亦可表示为“精密称取格隆溴铵对照品50mg±1mg”或者其它类似表述。本发明其它类似表述语境中亦有类似含义]
标准溶液B：精密量取1ml的以上标准溶液A，置于100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成浓度约为5μg/mL的标准溶液B；
供试品溶液：精密称取含格隆溴铵约为50mg的供试品，置于100ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，制成含格隆溴铵浓度约为500μg/mL的供试品溶液(其中所述供试品可以是包含格隆溴铵的各种样品，例如可以是格隆溴铵粗品、原料药、精制品以及由它们制成的制剂，根据具体测定需要而定，当测定的是制剂时，折算成该制剂中包含的格隆溴铵适量以便配制成相应浓度——这些操作技术是本领域技术人员公知的)；
(ii)色谱系统：
色谱操作照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行，色谱条件如下：
检测器：紫外检测器，检测波长UV222nm；
色谱柱：β环糊精键合硅胶柱，填料粒度5μm，柱内径4.0mm，柱长25cm；[注：上述β环糊精键合硅胶柱的填料是一种β环糊精键合多孔硅胶，此类色谱柱可容易地从市场上购得，例如可以是购自MerckKGaA公司的Chiradex品牌产品，可以是购自YMC公司的YMCCHIRALCDBRβ品牌产品，等等。下文具体试验中使用该YMC公司产品]
柱温：30℃；
流速：1mL/min；
进样量：10μL；
系统适用性：系统适用性溶液色谱图中赤型异构体与格隆溴铵之间的分离度不低于1.2，标准溶液B色谱图中托尾因子不超过2.0，标准溶液B色谱图中相对标准偏差不超过6.0％，通过系统适用性溶液色谱图和标准溶液B确定赤型异构体与格隆溴铵的保留时间以及二者的相对保留时间；
(iii)测定：
分别将供试品溶液、标准溶液A、标准溶液B注入液相色谱仪进行测定，读取所得三个色谱图中格隆溴铵的峰面积，以及供试品溶液色谱图中赤型异构体的峰面积(当该色谱峰存在时)，以及它们的保留时间；
根据供试品溶液色谱图和标准溶液A色谱图按外标法以峰面积计算供试品溶液中格隆溴铵的浓度，记为Ci(单位为μg/mL；众所周知的外标法计算Ci的计算式为：Ci＝(供试品溶液色谱图中主峰面积÷标准溶液A色谱图中主峰面积)×标准溶液A中格隆溴铵浓度；单位为μg/mL，此格隆溴铵浓度排除杂质、辅料、水分等干扰，对于原料药而言该浓度可能与配液浓度接近，但是对于杂质和/或水分等较多的粗品以及添加了辅料的药物组合物例如药物制剂而言，该浓度可以准确地反映溶液中格隆溴铵的浓度)；
按下式计算供试品溶液中赤型异构体(当其存在时)的浓度，记为Cx(单位为μg/mL)：
按下式计算样品中相对于格隆溴铵而言赤型异构体含量(为百分含量，％)：
赤型异构体含量(％)＝(Cx÷Ci)×100％。
以上【HPLC-A】中，以格隆溴铵的相对保留时间为1或者为1.00计，赤型异构体的相对保留时间在0.86～0.92范围内，下文具体测定结果中均在该范围内，特别是约为0.89。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药中，Iy杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iy杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.500％范围内(例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内、例如在0.003％～0.250％范围内、例如在0.003％～0.200％范围内、例如在0.003％～0.150％范围内、例如在0.003％～0.130％范围内)。该含量可以使用高效液相色谱法测定并计算，特别是使用【HPLC-B】测定并计算。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药中，Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iz杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.002％～0.500％范围内(例如在0.002％～0.400％范围内、例如在0.002％～0.300％范围内、例如在0.002％～0.250％范围内、例如在0.002％～0.200％范围内、例如在0.002％～0.150％范围内、例如在0.002％～0.130％范围内)。该含量可以使用高效液相色谱法测定并计算，特别是使用【HPLC-B】测定并计算。
在本发明中，【HPLC-B】的测定方法如下：
(i)溶液：
缓冲溶液：将1.0g的无水硫酸钠和200mg的1-己烷磺酸钠一水合物溶于650mL水中，向此溶液中加入3.0mL的1N硫酸，混合，即得；
稀释溶液：将1.0g的无水硫酸钠、6.8g磷酸二氢钾和200mg的1-己烷磺酸钠一水合物溶于650mL水中，向此溶液中加入3.0mL的1N硫酸、150mL的甲醇和200mL的乙腈，混合，用磷酸调节pH值为2.8，即得；
溶液A：乙腈:甲醇:缓冲溶液体积比20:15:65的混合液；
溶液B：乙腈:甲醇:缓冲溶液体积比50:15:35的混合液；
标准溶液A：精密称取格隆溴铵对照品约100mg，置于100ml量瓶中，用稀释溶液溶解并稀释至刻度，必要时经超声处理以促使溶解，摇匀，制成浓度约为1000μg/mL的溶液，为标准溶液A；
标准溶液B：分别精密称取杂质Iy对照品和杂质Iz对照品各约15mg，置于100ml量瓶中，另精密量取15ml的以上标准溶液A置于同一量瓶中，加稀释溶液稀释至刻度，必要时经超声处理以促使溶解，摇匀，得到含格隆溴铵、杂质Iy、杂质Iz三者浓度均约为150μg/mL的溶液，为标准溶液B；
标准溶液C：精密量取1ml的以上标准溶液B置于100ml量瓶中，加稀释溶液稀释至刻度，摇匀，制成含格隆溴铵、杂质Iy、杂质Iz三者浓度均约为1.5μg/mL的溶液，为标准溶液C；
标准溶液D：精密称取杂质Iy对照品约15mg，置于100ml量瓶中，加稀释溶液稀释至刻度，必要时经超声处理以促使溶解，摇匀，得到含杂质Iy浓度约为150μg/mL的溶液，为标准溶液Dy；另精密称取杂质Iz对照品约15mg，置于100ml量瓶中，加稀释溶液稀释至刻度，必要时经超声处理以促使溶解，摇匀，得到含杂质Iz浓度约为150μg/mL的溶液，为标准溶液Dz；
供试品溶液：精密称取含格隆溴铵约为100mg的供试品，置于100ml量瓶中，用稀释溶液溶解并稀释至刻度，必要时经超声处理以促使溶解，摇匀，必要时过滤，制成含格隆溴铵浓度约为1000μg/mL的供试品溶液(其中所述供试品可以是包含格隆溴铵的各种样品，例如可以是格隆溴铵粗品、原料药、精制品以及由它们制成的制剂，根据具体测定需要而定，当测定的是制剂时，折算成该制剂中包含的格隆溴铵适量以便配制成相应浓度——这些操作技术是本领域技术人员公知的)；
(ii)色谱系统：
色谱操作照中国药典2010年版二部附录ⅤD所载高效液相色谱法进行，色谱条件如下：
检测器：紫外检测器，检测波长UV222nm；
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，填料粒度5μm，柱内径4.6mm，柱长15cm；[注：这是一种本领域极为常用的色谱柱]
梯度洗脱程序：
时间(min) 溶液A(％) 溶液B(％)
0 100 0
10 100 0
25 10 90
35 10 90
37 100 0
43 100 0
柱温：40℃；
流速：1mL/min；
进样量：50μL；
系统适用性：标准溶液C色谱图中杂质Iy与格隆溴铵之间的分离度不低于2.0，格隆溴铵峰的托尾因子不超过2.0，各色谱峰的相对标准偏差不超过6.0％；通过标准溶液Dy和标准溶液Dz的色谱图主峰保留时间确定在此色谱条件下杂质Iy和杂质Iz的保留时间，并通过标准溶液B色谱图确定杂质Iy、杂质Iz、格隆溴铵的保留时间以及三者的相对保留时间；
(iii)测定：
分别将供试品溶液、标准溶液A、标准溶液C注入液相色谱仪进行测定，读取所得三个色谱图中格隆溴铵的峰面积，供试品溶液色谱图中杂质Iy和杂质Iz以及其它任选存在的杂质的峰面积(当这些色谱峰存在时)，标准溶液C色谱图中杂质Iy和杂质Iz的峰面积，以及它们的保留时间；
根据供试品溶液色谱图和标准溶液A色谱图按外标法以峰面积计算供试品溶液中格隆溴铵的浓度，记为Ci(单位为μg/mL；众所周知的外标法计算Ci的计算式为：Ci＝(供试品溶液色谱图中主峰面积÷标准溶液A色谱图中主峰面积)×标准溶液A中格隆溴铵浓度；此格隆溴铵浓度排除杂质、辅料、水分等干扰，对于原料药而言该浓度可能与配液浓度接近，但是对于杂质和/或水分等较多的粗品以及添加了辅料的药物组合物例如药物制剂而言，该浓度可以准确地反映溶液中格隆溴铵的浓度)；
按下式计算供试品溶液中杂质Iy或杂质Iz的浓度，分别记为Cy或Cz(单位为μg/mL，当其存在时)：
按下式计算供试品溶液中任选存在的其它单个杂质的浓度，记为Cn(单位为μg/mL；当存在多个其它杂质时，这些其它杂质各自分别计算)：
按下式计算样品中相对于格隆溴铵而言杂质Iy或杂质Iz或其它单个杂质含量(为百分含量，％)：
杂质Iy含量(％)＝(Cy÷Ci)×100％，
杂质Iz含量(％)＝(Cz÷Ci)×100％，
其它单个杂质含量(％)＝(Cn÷Ci)×100％。
以上【HPLC-B】中，以格隆溴铵的相对保留时间为1或者为1.00计，杂质Iy的相对保留时间在1.10～1.18范围内(下文具体测定结果中均在该范围内，特别是约为1.14)，杂质Iz的相对保留时间在2.63～2.73范围内(下文具体测定结果中均在该范围内，特别是约为2.68)。
在本发明的【HPLC-A】或【HPLC-B】测试方法中，配制样品溶液所用的试样，其可以是包含式I化合物及其对映体的本发明原料药，也可以是包含辅料的药物制剂。如是后者，则所称取或量取的物料中包含式I化合物及其对映体的量与原料药中所含式I化合物及其对映体的量相当。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药照本发明【HPLC-A】测定，其中相对保留时间在0.86～0.92处的杂质(在本发明中亦可称为RRT0.89杂质或称为RRT0.89，其实质上为杂质Ix)相对于格隆溴铵而言含量低于0.5％(例如低于0.4％，例如低于0.3％)。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药照本发明【HPLC-B】测定，其中相对保留时间在1.10～1.18处的杂质(在本发明中亦可称为RRT1.14杂质或称为RRT1.14，其实质上为杂质Iy)相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iy含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.500％范围内(例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内、例如在0.003％～0.250％范围内、例如在0.003％～0.200％范围内、例如在0.003％～0.150％范围内、例如在0.003％～0.130％范围内)。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药照本发明【HPLC-B】测定，其中相对保留时间在2.63～2.73处的杂质(在本发明中亦可称为RRT2.68杂质或称为RRT2.68，其实质上为杂质Iz)相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iz含量(相对于格隆溴铵计)在0.002％～0.500％范围内(例如在0.002％～0.400％范围内、例如在0.002％～0.300％范围内、例如在0.002％～0.250％范围内、例如在0.002％～0.200％范围内、例如在0.002％～0.150％范围内、例如在0.002％～0.130％范围内)。
本发明发现，使杂质Iy含量控制在低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iy含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.500％范围内(例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内、例如在0.003％～0.250％范围内、例如在0.003％～0.200％范围内、例如在0.003％～0.150％范围内、例如在0.003％～0.130％范围内)时，可以使得本发明原料药及其制备得到的药物组合物中杂质Iz随着贮藏时间的延长而不会有显著的增加。在本发明中有生物学意义的发现是，杂质Iz是一种毒性特别是对小鼠和大鼠的半数致死量明显比格隆溴铵强的物质，并且杂质Iz有引起中性粒细胞减少的不良作用，特别是当本发明药物化合物及其制备得到的药物组合物中杂质Iz相对于式I化合物的含量低于2.0％(例如低于1.5％，例如低于1.0％，例如低于0.75％，例如低于0.50％，例如低于0.40％)时，该原料药或其制备得到的药物组合物不会对受试动物引起明显的中性粒细胞减少，但是当该原料药或其制备得到的药物组合物中杂质Iz相对含量高于0.40％(特别是高于0.50％，特别是高于0.75％，特别是高于1.0％，特别是高于1.5％，特别是高于2.0％)时，该原料药或其制备得到的药物组合物仍然会引起受试动物明显的中性粒细胞减少这种副作用。因此，根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药中，特别是由该原料药制成的药物组合物例如药物制剂中，杂质Iz相对于式I化合物的含量低于2.000％(例如低于1.500％，例如低于1.000％，例如低于0.750％，例如低于0.500％，例如低于0.400％)。
根据本发明第一方面的方法，其所制得的包含格隆溴铵的本发明原料药在40℃条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中照【HPLC-B】测定相对保留时间在2.63～2.73处的杂质含量增加百分数低于200％，例如低于150％，例如低于100％，例如低于75％，例如低于50％，例如低于40％。该试验方法在本发明中可简称为40℃-6月考察。所述的术语“杂质含量增加百分数”是照下式计算的：
以上计算式中，杂质0月含量或杂质6月含量是指该杂质在物料中相对于格隆溴铵的相对含量。
进一步地，本发明第二方面提供了一种供药用的原料药，该原料药的活性成分为格隆溴铵。
或者，进一步地，本发明第二方面提供了一种供药用的原料药，该原料药的活性成分为以下式I化合物：
及其对映体。
即，在本发明中，格隆溴铵是指以上式I化合物及其对映异构体的混合物例如消旋混合物。
根据本发明第二方面的原料药，其中包括作为主要组分的式I化合物及其对映体，以及任选的作为杂质的Ix杂质。
根据本发明第二方面的原料药，其中Ix杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.5％(例如低于0.4％，例如低于0.3％)。
根据本发明第二方面的原料药，其中包括作为主要组分的式I化合物及其对映体，以及任选的作为杂质的Iy杂质。
根据本发明第二方面的原料药，其中Iy杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iy杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.500％范围内(例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内、例如在0.003％～0.250％范围内、例如在0.003％～0.200％范围内、例如在0.003％～0.150％范围内、例如在0.003％～0.130％范围内)。
根据本发明第二方面的原料药，其中包括作为主要组分的式I化合物及其对映体，以及任选的作为杂质的Iz杂质。
根据本发明第二方面的原料药，其中Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iz杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.002％～0.500％范围内(例如在0.002％～0.400％范围内、例如在0.002％～0.300％范围内、例如在0.002％～0.250％范围内、例如在0.002％～0.200％范围内、例如在0.002％～0.150％范围内、例如在0.002％～0.130％范围内)。
根据本发明第二方面的原料药，其照本发明【HPLC-A】测定，其中相对保留时间在0.86～0.92处的杂质(在本发明中亦可称为RRT0.89杂质或称为RRT0.89，其实质上为杂质Ix)相对于格隆溴铵而言含量低于0.5％(例如低于0.4％，例如低于0.3％)。
根据本发明第二方面的原料药，其照本发明【HPLC-B】测定，其中相对保留时间在1.10～1.18处的杂质(在本发明中亦可称为RRT1.14杂质或称为RRT1.14，其实质上为杂质Iy)相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iy含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.500％范围内(例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内、例如在0.003％～0.250％范围内、例如在0.003％～0.200％范围内、例如在0.003％～0.150％范围内、例如在0.003％～0.130％范围内)。
根据本发明第二方面的原料药，其照本发明【HPLC-B】测定，其中相对保留时间在2.63～2.73处的杂质(在本发明中亦可称为RRT2.68杂质或称为RRT2.68，其实质上为杂质Iz)相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)，例如Iz含量(相对于格隆溴铵计)在0.002％～0.500％范围内(例如在0.002％～0.400％范围内、例如在0.002％～0.300％范围内、例如在0.002％～0.250％范围内、例如在0.002％～0.200％范围内、例如在0.002％～0.150％范围内、例如在0.002％～0.130％范围内)。
根据本发明第二方面的原料药，其在40℃条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中照【HPLC-B】测定相对保留时间在2.63～2.73处的杂质含量增加百分数低于200％，例如低于150％，例如低于100％，例如低于75％，例如低于50％，例如低于40％。
根据本发明第二方面的原料药，其是通过对包含式I化合物及其对映体的原料药进行重结晶以达到精制目的而得到的。
根据本发明第二方面的原料药，所述重结晶是将原料药溶解于第一溶剂中，接着向该溶液中添加第二溶剂，以使格隆溴铵从溶剂中沉淀出结晶。
根据本发明第二方面的原料药，其中所述第一溶剂选自：水、甲醇、乙醇、1-辛醇、苯甲醇、二甲亚砜、二氯甲烷、乙酸乙酯、及其组合。在一个实施方案中，所述第一溶剂选自：乙醇、1-辛醇、二甲亚砜、二氯甲烷、乙酸乙酯、及其组合。在一个实施方案中，所述第一溶剂是乙醇和乙酸乙酯的混合物。在一个实施方案中，所述第一溶剂是乙醇与乙酸乙酯体积比100：7～20的混合物，优选是乙醇与乙酸乙酯体积比100：10～16的混合物。在本发明中，如未另外说明，提及的乙醇是无水乙醇。
根据本发明第二方面的原料药，所述第二溶剂选自：乙醚、甲乙醚、叔丁基甲基醚、正庚烷、正己烷、正戊烷及其组合。在一个实施方案中，所述第二溶剂选自：乙醚、甲乙醚、叔丁基甲基醚及其组合。在一个实施方案中，所述第二溶剂是甲乙醚。
根据本发明第二方面的原料药，其中所述第一溶剂与第二溶剂的体积比为1：7～25，例如1：10～20，例如1：10～15。
进一步地，本发明第三方面提供了一种药物组合物(例如药物制剂)，其中包含本发明第二方面任一项所述的原料药，以及任选的药学可接受的载体或辅料。在一个实施方案中，本发明所述药物组合物是使用本发明第二方面任一项所述的原料药经药物组合物(例如药物制剂)制备工艺制备得到。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是口服制剂或者注射制剂。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂(包括注射液和冷冻干燥粉针剂)、混悬剂、丸剂。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是注射液。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是注射液，该注射液每1ml中包含：0.1～0.5mg的格隆溴铵、酸碱调节剂、和加至全量的注射用水。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是注射液，该注射液每1ml中包含：0.1～0.5mg的格隆溴铵、酸碱调节剂适量以调节注射液的pH值在2.0～3.0范围内、和加至全量的注射用水。在一个实施方案中，所述酸碱调节剂是盐酸和/或氢氧化钠，亦可以是本领域技术人员公知的其它酸碱调节剂。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是注射液，该注射液每1ml中包含0.15～0.25mg的格隆溴铵。在一个实施方案中，该注射液每1ml中包含0.2mg的格隆溴铵。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是注射液，其中还任选地包含苯甲醇。在一个实施方案中，该注射液中的苯甲醇浓度为0.5～1.5mg/ml，例如苯甲醇浓度为0.7～1.2mg/ml，例如苯甲醇浓度为0.8～1.0mg/ml，例如苯甲醇浓度为0.9mg/ml。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是冷冻干燥粉针剂，该粉针剂中包含：0.2重量份的格隆溴铵、20～400重量份的冻干赋形剂。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是冷冻干燥粉针剂，该粉针剂中包含：0.2重量份的格隆溴铵、20～400重量份的冻干赋形剂、任选的pH调节剂适量以使该粉针剂用注射用水稀释至格隆溴铵浓度为0.2mg/ml时溶液的pH值在2.0～3.0范围内。
根据本发明第三方面的药物组合物，其是冷冻干燥粉针剂，该粉针剂中包含：0.2重量份的格隆溴铵、50～250重量份的冻干赋形剂、任选的pH调节剂适量以使该粉针剂用注射用水稀释至格隆溴铵浓度为0.2mg/ml时溶液的pH值在2.0～3.0范围内。
在一个实施方案中，所述冻干赋形剂可选自甘露醇、乳糖、麦芽糖、蔗糖、氯化钠等。
根据本发明第三方面的药物组合物，其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及任选的作为杂质的Ix杂质。
根据本发明第三方面的药物组合物，其中Ix杂质相对于格隆溴铵而言含量低于1.0％(例如低于0.75％，例如低于0.5％，例如低于0.4％)。
根据本发明第三方面的药物组合物，其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及任选的作为杂质的Iy杂质。
根据本发明第三方面的药物组合物，其中Iy杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.75％(例如低于0.50％、低于0.4％、低于0.3％)，例如Iy杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.750％范围内(例如在0.003％～0.500％范围内、例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内)。
根据本发明第三方面的药物组合物，其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及任选的作为杂质的Iz杂质。
根据本发明第三方面的药物组合物，其中Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量低于1.00％(例如低于0.75％、低于0.50％、低于0.4％)，例如Iz杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.002％～1.000％范围内(例如在0.002％～0.750％范围内、例如在0.002％～0.500％范围内、例如在0.002％～0.400％范围内)。
根据本发明第三方面的药物组合物，其照本发明【HPLC-A】测定，其中相对保留时间在0.86～0.92处的杂质(在本发明中亦可称为RRT0.89杂质或称为RRT0.89，其实质上为杂质Ix)相对于格隆溴铵而言含量低于1.0％(例如低于0.75％，例如低于0.5％，例如低于0.4％)。
根据本发明第三方面的药物组合物，其照本发明【HPLC-B】测定，其中相对保留时间在1.10～1.18处的杂质(在本发明中亦可称为RRT1.14杂质或称为RRT1.14，其实质上为杂质Iy)相对于格隆溴铵而言含量低于0.75％(例如低于0.50％、低于0.4％、低于0.3％)，例如Iy杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.750％范围内(例如在0.003％～0.500％范围内、例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内)。
根据本发明第三方面的药物组合物，其照本发明【HPLC-B】测定，其中相对保留时间在2.63～2.73处的杂质(在本发明中亦可称为RRT2.68杂质或称为RRT2.68，其实质上为杂质Iz)相对于格隆溴铵而言含量低于1.00％(例如低于0.75％、低于0.50％、低于0.4％)，例如Iz杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.002％～1.000％范围内(例如在0.002％～0.750％范围内、例如在0.002％～0.500％范围内、例如在0.002％～0.400％范围内)。
根据本发明第三方面的药物组合物，其在40℃条件下密封、避光放置4个月，计算在此条件下处置4个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中相对保留时间在2.63～2.73处的杂质含量增加百分数低于200％，例如低于150％，例如低于100％，例如低于75％，例如低于50％，例如低于40％。该试验方法在本发明中可简称为40℃-4月考察。
进一步地，本发明第四方面提供了本发明第一方面所述方法制备得到的原料药、第二方面所述原料药或者第三方面所述药物组合物的用途，用于制备麻醉剂或者用于制备治疗和或预防消化性溃疡的药物。
根据本发明的任一方面，其中所述的药用原料药中格隆溴铵的含量大于99.0％，例如大于99.5％。该含量可以照2010年版中国药典二部814页格隆溴铵【含量测定】项下的方法测定。
根据本发明的任一方面，其中所述的药用原料药照本发明【HPLC-A】测定的色谱纯度在98.00％～99.99％范围内，例如在98.50％～99.99％范围内，例如在99.00％～99.99％范围内。术语“色谱纯度”是对供试品色谱图进行面积归一化法计算的结果，扣除溶剂、辅料等色谱峰而获得的结果，其区别于上文所述的含量。
根据本发明的任一方面，其中所述的药用原料药照本发明【HPLC-B】测定的色谱纯度在98.00％～99.99％范围内，例如在98.50％～99.99％范围内，例如在99.00％～99.99％范围内。
本发明的任一方面的任一实施方案，可以与任一方面的其它任一实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。
在本发明中，“％”的含义可根据具体使用环境而定，特别是其具有如2010年版中国药典二部凡例中“计量”项下第二十八条(4)款所述含义。
在本发明中，单独提及时，“乙醇”是指无水乙醇。
在本发明中，格隆溴铵的各碳原子可编号标示如下：
及其对映体，即格隆溴铵表示3R2S格隆溴铵和3S2R格隆溴铵两者。
亦有文献例如CN102627595A中以以下方式标示各碳原子的编号：
及其对映体，即格隆溴铵表示3R2’S格隆溴铵和3S2’R格隆溴铵两者。
另外，格隆溴铵还可以命名为：溴化(3RS)-3-[(2SR)-(2-环戊基-2-羟基-2-苯基乙酰基)氧基]-1,1-二甲基吡咯烷。
在本发明中，尽管本发明人已经清楚RRT0.89、RRT1.14、RRT2.68三个特定杂质的具体化学结构，但是这些杂质还可通过其在本发明具体明确的【HPLC-A】和【HPLC-B】中来定性表征，特别是使用在特定HPLC条件下呈现出的RRT参数来表征。本领域技术人员公知，可以完全独立使用RRT表征而完全不必考虑其具体化学结构，原因在于在规定HPLC条件下RRT是一个基本上恒定的参数，即RRT表征与结构表征可以是相互独立或相互组合地使用的。而这种表征方法是药学领域对原料药或者制剂质量标准所允许的，完全具备产业实用性。
在本发明中，如未另外说明，在确定各种物料(例如各种作为药物制剂用原料药、药物组合物例如药物制剂等)中格隆溴铵或者其它杂质的含量时，以及确定这些物料中的色谱纯度时，可以均采用上文所述【HPLC-A】和【HPLC-B】的方法进行测定。
本发明药物组合物中使用的“药学可接受的载体”可以是药物制剂领域中任何常规的载体。特定载体的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。
本发明的药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、注射乳剂(注射用无菌粉针)等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
中性粒细胞(Neutrophil或Neutrophilgranulocyte，在本发明中可缩写为NG)是血液白细胞的一种，也是哺乳动物血液中最主要的一种白细胞。中性粒细胞在血液的非特异性细胞免疫系统中起着十分重要的作用，它处于机体抵御微生物病原体，特别是在化脓性细菌入侵的第一线，当炎症发生时，它们被趋化性物质吸引到炎症部位。由于它们是借糖酵解获得能量，因此在肿胀并血流不畅的缺氧情况下仍能够生存，它们在这里形成细胞毒存在破坏细菌和附近组织的细胞膜。由于中性粒细胞内含有大量溶酶体酶，因此能将吞噬入细胞内的细菌和组织碎片分解，这样，入侵的细菌被包围在一个局部，并消灭，防止病原微生物在体内扩散。当中性粒细胞本身解体时，释出各溶酶体酶类能溶解周围组织而形成脓肿。中性粒细胞的细胞膜能释放出一种不饱和脂肪酸——花生四烯酸，在酶的作用下，由它再进一步生成一组旁分泌激素物质，如血栓素和前列腺素等，这类物质对调节血管口径和通透性有明显的作用，还能引起炎症反应和疼痛，并影响血液凝固。由此，人体血液中中性粒细胞减少对于人体的正常生理机能的发挥是不利的。
现已上市销售的格隆溴铵药剂(例如片剂、口服液、注射液等)，其作为一种抗胆碱药可用于治疗消化性溃疡以及用于手术时的麻醉等。本发明提供一种新的格隆溴铵原料药，其在稳定性能方面具有优良的特点，并且显示出良好的生物安全性，因此本发明原料药物同样可用于治疗消化性溃疡以及用于手术麻醉并且具有低的副反应发生率。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。
在下面测定各物料的RRT0.89含量时使用的是【HPLC-A】法测定，而测定RRT1.14含量和RRT2.68含量则使用的是【HPLC-B】法测定。
实施例1：制备格隆溴铵原料药
步骤(1)、合成式I化合物及其对映体：
照US2956062A中的方法使羟基环戊基扁桃酸甲酯(MCPM)与N-甲基吡咯烷-3-醇(NMP)反应得到格隆胺碱(GP碱)，接着照CN101133021B说明书[0015]-[0017]段所载方法使格隆胺碱与溴甲烷反应接着对所得产物进行重结晶精制，得到格隆溴铵。
RRT0.89含量＝4.63％、RRT1.14含量＝1.78％、RRT2.68含量＝1.14％。
步骤(2)、重结晶精制：
在55～60℃的温度下，将步骤(1)所得产物1.5g溶解于无水乙醇-乙酸乙酯混合溶剂(100：12，v/v)10ml中，缓缓向其中滴加甲乙醚120ml，在4～5°静置使充分沉淀(约24小时)，滤出沉淀，用甲乙醚洗涤，真空干燥，即得(重结晶收率90.2％)。
RRT0.89含量＝0.77％、RRT1.14含量＝0.39％、RRT2.68含量＝0.23％。经测定，其MSm/z:318(M-Br-)，1HNMR与CN103159659A说明书最后一段所载格隆溴铵相同。
此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低83％【即(4.63-0.77)÷4.63×100％，此含量降低百分数计算方法在下文中同样适用】，RRT1.14含量降低78％，RRT2.68含量降低80％。
步骤(3)、再次重结晶精制：
在55～60℃的温度下，将步骤(2)所得产物1.0g溶解于无水乙醇-乙酸乙酯混合溶剂(100：10，v/v)10ml中，缓缓向其中滴加甲乙醚100ml，在8～10°静置使充分沉淀(约36小时)，滤出沉淀，用甲乙醚洗涤，真空干燥，即得(重结晶收率94.1％)。
RRT0.89含量＝0.12％、RRT1.14含量＝0.08％、RRT2.68含量＝0.05％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低84％，RRT1.14含量降低79％，RRT2.68含量降低78％。
步骤(4)、再次重结晶精制：
在55～60℃的温度下，将步骤(3)所得产物0.5g溶解于无水乙醇-乙酸乙酯混合溶剂(100：16，v/v)2.5ml中，缓缓向其中滴加甲乙醚37.5ml，在0～2°静置使充分沉淀(约18小时)，滤出沉淀，用甲乙醚洗涤，真空干燥，即得(重结晶收率91.6％)。
RRT0.89含量＝0.021％、RRT1.14含量＝0.018％、RRT2.68含量＝0.011％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低83％，RRT1.14含量降低78％，RRT2.68含量降低78％。
步骤(5)、再次重结晶精制：
将步骤(4)所得产物照步骤(4)方法再次重结晶精制，真空干燥后使在105℃下测定干燥失重小于0.1％，经中国药典2010年版二部814页格隆溴铵【含量测定】项下的方法测定，干燥品格隆溴铵(C19H28BrNO3)含量为99.97％，RRT0.89含量＝0.004％，RRT1.14＝0.003％、RRT2.68＝0.002％。
在对以上各批次试样进行测试时，【HPLC-A】法中RRT0.89杂质的相对保留时间均在0.88～0.91范围内，格隆溴铵保留时间均约为11.3～11.7min；【HPLC-B】法中RRT1.14杂质的相对保留时间均在1.12～1.16范围内，RRT2.68杂质的相对保留时间均在2.65～2.71范围内，格隆溴铵保留时间均约为8.2～8.6min。
上文步骤(2)至步骤(5)所得产物，特别是步骤(3)至步骤(5)所得产物均可作为本发明的格隆溴铵原料药，例如用于制备药物制剂用。另外步骤(5)所得产物还可作为格隆溴铵对照品，作为测试用。
实施例2：制备格隆溴铵原料药
步骤(1)、合成式I化合物及其对映体：
照CN103159659A说明书具体实施方式部分的方法即说明书[0010]段至[0013]段4行所载方法制备得到格隆溴铵粗品。RRT0.89含量＝4.76％、RRT1.14含量＝1.61％、RRT2.68含量＝1.21％。
步骤(2)、重结晶精制：
取以上步骤(1)所得产物照本发明实施例1步骤(2)方法进行重结晶(重结晶收率89.7％)。
RRT0.89含量＝0.83％、RRT1.14含量＝0.34％、RRT2.68含量＝0.20％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低82％，RRT1.14含量降低79％，RRT2.68含量降低83％。
步骤(3)、再次重结晶精制：
取以上步骤(2)所得产物照本发明实施例1步骤(3)方法进行重结晶(重结晶收率93.5％)。
RRT0.89含量＝0.17％、RRT1.14含量＝0.06％、RRT2.68含量＝0.04％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低80％，RRT1.14含量降低82％，RRT2.68含量降低80％。
步骤(4)、再次重结晶精制：
取以上步骤(3)所得产物照本发明实施例1步骤(4)方法进行重结晶(重结晶收率91.2％)。
RRT0.89含量＝0.023％、RRT1.14含量＝0.010％、RRT2.68含量＝0.007％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低86％，RRT1.14含量降低83％，RRT2.68含量降低82％。经测定，其MSm/z:318(M-Br-)，1HNMR与CN103159659A说明书最后一段所载格隆溴铵相同。
在对以上各批次试样进行测试时，【HPLC-A】法中RRT0.89杂质的相对保留时间均在0.86～0.92范围内，【HPLC-B】法中RRT1.14杂质的相对保留时间均在1.10～1.18范围内，RRT2.68杂质的相对保留时间均在2.63～2.73范围内。
以上步骤(2)至步骤(4)所得产物，特别是步骤(3)至步骤(4)所得产物均可作为本发明的格隆溴铵原料药，例如用于制备药物制剂用。
实施例3：制备格隆溴铵原料药
步骤(1)、合成式I化合物及其对映体：
照CN102627595A说明书具体实施方式部分的方法即说明书[0043]段至[0046]段所载方法制备得到格隆溴铵。RRT0.89含量＝4.13％、RRT1.14含量＝1.36％、RRT2.68含量＝1.03％。
步骤(2)、重结晶精制：
取以上步骤(1)所得产物照本发明实施例1步骤(2)方法进行重结晶(重结晶收率92.4％)。
RRT0.89含量＝0.70％、RRT1.14含量＝0.24％、RRT2.68含量＝0.16％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低83％，RRT1.14含量降低82％，RRT2.68含量降低84％。
步骤(3)、再次重结晶精制：
取以上步骤(2)所得产物照本发明实施例1步骤(3)方法进行重结晶(重结晶收率92.0％)。
RRT0.89含量＝0.12％、RRT1.14含量＝0.048％、RRT2.68含量＝0.027％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低83％，RRT1.14含量降低80％，RRT2.68含量降低83％。
步骤(4)、再次重结晶精制：
取以上步骤(3)所得产物照本发明实施例1步骤(4)方法进行重结晶(重结晶收率93.1％)。
RRT0.89含量＝0.021％、RRT1.14含量＝0.009％、RRT2.68含量＝0.005％。此次重结晶纯化，RRT0.89含量降低85％，RRT1.14含量降低81％，RRT2.68含量降低81％。经测定，其MSm/z:318(M-Br-)，1HNMR与CN103159659A说明书最后一段所载格隆溴铵相同。
在对以上各批次试样进行测试时，【HPLC-A】法中RRT0.89杂质的相对保留时间均在0.86～0.92范围内，【HPLC-B】法中RRT1.14杂质的相对保留时间均在1.10～1.18范围内，RRT2.68杂质的相对保留时间均在2.63～2.73范围内。
以上步骤(2)至步骤(4)所得产物，特别是步骤(3)至步骤(4)所得产物均可作为本发明的格隆溴铵原料药，例如用于制备药物制剂用。
比较实施例1：参照本文实施例1步骤(3)的操作，不同的仅是将其中第一溶剂即无水乙醇-乙酸乙酯混合溶剂替换为乙醇与水、甲醇、1-辛醇、苯甲醇、乙酸乙酯以体积比(100：10)的混合液，制得5批产物。计算这5批产物经过此次重结晶纯化后RRT0.89、RRT1.14、RRT2.68三者含量降低程度，结果RRT0.89的含量降低均在31.3～57.4％范围内，RRT1.14的含量降低均在27.8～55.6％范围内，RRT2.68的含量降低均在33.6～53.8％范围内，远比使用本发明无水乙醇-乙酸乙酯混合溶剂时含量降低至少75％的低。
比较实施例2：参照本文实施例1步骤(3)的操作，不同的仅是将其中第一溶剂即无水乙醇-乙酸乙酯混合溶剂100：10体积比改为100：0、100：5、100：20、或100：30，制得4批产物。计算这4批产物经过此次重结晶纯化后杂质含量降低程度，结果RRT0.89的含量降低均在24.1～52.3％范围内，RRT1.14的含量降低均在17.4～58.6％范围内，RRT2.68的含量降低均在21.3～42.3％范围内。
比较实施例3：参照本文实施例1步骤(3)的操作，不同的仅是将其中第二溶剂即正己烷替换为乙醚、叔丁基甲基醚、正庚烷、正己烷，制得4批产物。计算这4批产物经过此次重结晶纯化后杂质含量降低程度，结果RRT0.89的含量降低均低于48％，RRT1.14的含量降低均低于41％，RRT2.68的含量降低均低于38％。
比较实施例4：取本发明实施例1步骤(2)的产物和实施例2步骤(2)的产物，分别照CN101133021B说明书[0021]段的方法进行重结晶，制得2批产物。计算这2批产物经过此次重结晶纯化后杂质含量降低程度，结果RRT0.89的含量降低均低于52％，RRT1.14的含量降低均低于41％，RRT2.68的含量降低均低于55％。
比较实施例5：照CN101133021B说明书[0014]至[0021]段所载方法制备得到一批格隆溴铵产物(在本发明中可记为#021B)。
#021B照本发明【HPLC-A】和【HPLC-B】测定，RRT0.89含量＝0.312％、RRT1.14含量＝0.193％、RRT2.68含量＝0.176％。
将#021B以及本发明上文实施例3步骤(3)和步骤(4)所得产物三者采用CN101133021B说明书[0022]至[0034]段所载HPLC方法进行检测，结果对于RRT0.95处的杂质，#021B样品中为0.14％，实施例3步骤(3)样品中中为0.06％，实施例3步骤(4)样品中中为0.011％。即使假设该RRT0.95与本发明RRT0.89是同一物质，则表明CN101133021B的HPLC方法灵敏度低，可能有漏测。
制备例1：制备RRT0.89杂质(杂质Ix)
照CN103012231A说明书[0049]至[0052]段方法分别制备3S,2’S-格隆溴铵和3R,2’R-格隆溴铵，分别经乙腈重结晶使它们在本发明【HPLC-A】法中色谱纯度均在98.5％以上，二者在该色谱法中相对于本发明3R2S/3S2R格隆溴铵的相对保留时间均在0.88～0.91范围内。将此二者以1：1重量比混合，得到RRT0.89杂质，即本发明格隆溴铵的赤型异构体(杂质Ix)，可作为本发明化学试验或生物学试验使用。
制备例2：制备RRT1.14杂质(即GP碱、杂质Iy)
照US2956062A所记载的方法制备格隆胺碱，经丙酮重结晶纯化至在本发明【HPLC-B】法中色谱纯度在98.5％以上，其在该色谱法中相对于本发明3R2S/3S2R格隆溴铵的相对保留时间在1.13～1.15范围内，得到RRT1.14杂质(杂质Iy)，可作本发明为化学试验或生物学试验使用。
试验例1：本发明原料药的性能测试
测试实施例1步骤(2)～步骤(5)、实施例2步骤(2)～步骤(4)、实施例3步骤(2)～步骤(4)、比较实施例1～4所得各批次的格隆溴铵物料的理化数据，结果如下：
(1)外观性状：均为白色结晶粉末。
(2)熔点：均在192～196℃范围内，熔距均不超过2℃。
(3)照中国药典2010年版二部814页所载格隆溴铵各项检测方法进行测定，结果这些批次的格隆溴铵试样均符合该标准规定。
试验例2：原料药的稳定性考察
取以上实施例1步骤(1)～步骤(5)、实施例2步骤(1)～步骤(4)、实施例3步骤(1)～步骤(4)所得各批次的格隆溴铵物料，#021B样品，以及由实施例1步骤(5)所得格隆溴铵与制备例1所得杂质Ix、制备例2所得杂质Iy、和/或市售所得杂质Iz以一定比例混合(以少许无水乙醇溶解，随即真空干燥以使它们充分混合，测定其中Ix、Iy和/或Iz相对于格隆溴铵的含量)制成组配物。
将这些物料密封，在40℃条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于该杂质在0月时的含量增加百分数。
结果发现，在各种含量情况下，杂质Ix和杂质Iy两者在6个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均低于36％。例如实施例1步骤(1)样品中的杂质Ix，在0月时为4.63％，在6月时为5.97％，杂质Ix含量增加百分数为29％[算法：(5.97％-4.63％)/4.63％×100％＝29％，下同]。又例如实施例1步骤(2)样品中的杂质Iy，在0月时为0.39％，在6月时为0.51％，杂质Iy含量增加百分数为31％。
但是对于杂质Iz，其在高温处置6个月后的含量增加百分数却显示与样品中杂质Iy含量有关：当杂质Iy含量低于0.130％时，杂质Iz含量增加百分数均低于33％；但是当杂质Iy含量大于0.150％时，杂质Iz含量增加百分数显示增加至90％以上，并且样品中杂质Iy含量越高则杂质Iz含量增加百分数越大。例如实施例1步骤(2)样品中的杂质Iy＝0.39％，该试样在6月后杂质Iz由原有的0.23％增加至0.75％，杂质Iz含量增加百分数达到226％；而实施例1步骤(3)样品中的杂质Iy＝0.08％，该试样在6月后杂质Iz由原有的0.05％增加至0.062％，杂质Iz含量增加百分数仅为24％。#021B在高温处置6个月后杂质Iz的含量增加百分数为129％。具体结果见表1。
表1：
No. 试样(来源或组配物) 特征(0月Ix、Iy、Iz％含量) 6月Iz增加百分数
1 Ex1S(1) Ix＝4.63，Iy＝1.78，Iz＝1.14 >500％
2 Ex1S(2) Ix＝0.77，Iy＝0.39，Iz＝0.23 226％
3 Ex1S(3) Ix＝0.12，Iy＝0.08，Iz＝0.05 24％
4 Ex1S(4) Ix＝0.021、Iy＝0.018、Iz＝0.011 21％
5 Ex2S(1) Ix＝4.76、Iy＝1.61、Iz＝1.21 >500％
6 Ex2S(2) Ix＝0.83、Iy＝0.34、Iz＝0.20 213％
7 Ex2S(3) Ix＝0.17、Iy＝0.06、Iz＝0.04 26％
8 Ex2S(4) Ix＝0.023、Iy＝0.010、Iz＝0.007 19％
9 Ex3S(1) Ix＝4.13、Iy＝1.36、Iz＝1.03 >400％
10 Ex3S(2) Ix＝0.70、Iy＝0.24、Iz＝0.16 151％
11 Ex3S(3) Ix＝0.12、Iy＝0.048、Iz＝0.027 19％
12 Ex3S(4) Ix＝0.021、Iy＝0.009、Iz＝0.005 24％
以上表中，第二列Ex1S(1)表示本发明实施例1步骤(1)所得产物，该产物作为试样，其中各杂质相对于格隆溴铵的含量列于第三列“特征(Ix、Iy、Iz％含量)”中，其它表述均有类似含义。
表2：
No. 试样(来源或组配物) 特征(0月Ix、Iy、Iz％含量) 6月Iz增加百分数
1 Ex1S(5) Ix＝0.004，Iy＝0.003、Iz＝0.002 17％
2 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.010、Iz＝0.002 13％
3 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.025、Iz＝0.002 23％
4 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.050、Iz＝0.002 26％
5 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.075、Iz＝0.002 19％
6 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.100、Iz＝0.002 32％
7 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.130、Iz＝0.002 29％
8 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.150、Iz＝0.002 93％
9 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.175、Iz＝0.002 115％
10 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.200、Iz＝0.002 117％
11 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.250、Iz＝0.002 156％
12 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.300、Iz＝0.002 194％
13 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.500、Iz＝0.002 258％
14 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝0.750、Iz＝0.002 >300％
15 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝1.000、Iz＝0.002 >400％
16 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝1.500、Iz＝0.002 >500％
17 Ex1S(5)+Iy Ix＝0.004，Iy＝2.000、Iz＝0.002 >500％
以上表中，第二列Ex1S(5)+Iy表示本发明实施例1步骤(5)所得产物与制备例2所得杂质Iy进行组配，组配物中各杂质相对于格隆溴铵的含量列于第三列“特征(Ix、Iy、Iz％含量)”中，其它表述均有类似含义。
表3：
No. 试样(来源或组配物) 特征(0月Ix、Iy、Iz％含量) 6月Iz增加百分数
1 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.030、Iz＝0.011 25％
2 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.050、Iz＝0.011 18％
3 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.075、Iz＝0.011 25％
4 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.100、Iz＝0.011 32％
5 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.130、Iz＝0.011 30％
6 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.150、Iz＝0.011 97％
7 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.200、Iz＝0.011 121％
8 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.300、Iz＝0.011 181％
9 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.500、Iz＝0.011 266％
10 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝0.750、Iz＝0.011 >300％
11 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.021、Iy＝1.000、Iz＝0.011 >400％
表4：
No. 试样(来源或组配物) 特征(0月Ix、Iy、Iz％含量) 6月Iz增加百分数
1 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.030、Iz＝0.200 27％
2 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.050、Iz＝0.200 21％
3 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.075、Iz＝0.200 24％
4 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.100、Iz＝0.200 28％
5 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.130、Iz＝0.200 31％
6 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.150、Iz＝0.200 103％
7 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.200、Iz＝0.200 132％
8 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.300、Iz＝0.200 197％
9 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.500、Iz＝0.200 271％
10 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝0.750、Iz＝0.200 >300％
11 Ex2S(4)+Iy+Iz Ix＝0.023、Iy＝1.000、Iz＝0.200 >400％
以上表中，第二列Ex2S(4)+Iy+Iz表示本发明实施例2步骤(4)所得产物与制备例2所得杂质Iy以及市售的杂质Iz进行组配，组配物中各杂质相对于格隆溴铵的含量列于第三列“特征(Ix、Iy、Iz％含量)”中，其它表述均有类似含义。表中结果可见，即使适量增加试样本体中的杂质Iz量至0.200％，其含量增加趋势仍然与样品中的杂质Iy有关。
另外，参考以上表4的组配物，不同的是在各试样中再添加适量杂质Ix至其在组合物中相对于格隆溴铵的量而言达到0.5％。得到11个组配物同样进行6个月40℃处置，结果杂质Ix和杂质Iy两者在6个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均低于33％。但杂质Iz在6个月时相对于其在0月时的含量增加百分数与表4中相应杂质Iy含量的组配物结果基本相同(均不超过5个百分点)，例如与表4编号7的试样相应的组配物的Iz增加百分数为136％。
以上这些制备的可作为原料药的格隆溴铵经测试，其中杂质Ix含量最低的试样为0.004％，杂质Iy含量最低的试样为0.003％，杂质Iz含量最低的试样为0.002％。显然，就本发明原料药而言，其中杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0.50％(例如低于0.30％、低于0.25％、低于0.20％、低于0.15％、低于0.13％)是有益的，例如Iy含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.500％范围内(例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内、例如在0.003％～0.250％范围内、例如在0.003％～0.200％范围内、例如在0.003％～0.150％范围内、例如在0.003％～0.130％范围内)是有益的。已经测试上述可作为原料药的格隆溴铵对于它们杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0.13％的试样，它们的杂质Ix相对于格隆溴铵而言含量均低于0.3％，它们的杂质Iz相对于格隆溴铵而言含量均低于0.13％。——即对于可作为本发明的格隆溴铵原料药而言，作为本发明的一个实施方案，本发明的格隆溴铵原料药中，杂质Ix相对于格隆溴铵而言含量低于0.3％(例如为0.004％～0.300％)，杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量在0.003％～0.130％范围内，杂质Iz相对于格隆溴铵而言含量在0.002％～0.130％范围内，具有这些特点的格隆溴铵原料药是本发明优选的。
组合物例1：
使用本发明实施例1步骤(4)所得格隆溴铵作为原料药，按以下配方配制注射液(以1ml量列明配方，但实际配液时批次量为1000ml)：格隆溴铵0.2mg，1N盐酸和/或1N氢氧化钠适量调节注射液的最终pH值为2.5，注射用水适量加至1ml。
按常规的注射液配制方法，制备注射液。在配液时，任选地向注射液中添加适量杂质Iy，得到具有不同杂质Iy含量的注射液。
将这些注射液熔封于1ml棕色玻璃瓶中，将这些注射液密封，在40℃条件下密封、避光放置4个月，计算在此条件下处置4个月后某杂质相对于该杂质在0月时的含量增加百分数。
结果发现，在各种含量情况下，杂质Ix和杂质Iy两者在6个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均低于51％。例如对于实施例1步骤(4)为原料未添加杂质Iy的注射液，杂质Ix在0月时为0.024％，在6月时为0.031％，杂质Ix含量增加百分数为29％；杂质Iy在0月时为0.021％，在6月时为0.028％，杂质Iy含量增加百分数为33％。
但是对于杂质Iz，其在高温处置4个月后的含量增加百分数却显示与样品中杂质Iy含量有关：当杂质Iy含量低于0.300％时，杂质Iz含量增加百分数均低于45％；但是当杂质Iy含量大于0.300％时，杂质Iz含量增加百分数显示增加至90％以上，并且样品中杂质Iy含量越高则杂质Iz含量增加百分数越大。具体结果见表5。
表5：
No. 注射液(添加的主配料) 特征(0月Ix、Iy、Iz％含量) 4月Iz增加百分数
1 Ex1S(4) Ix＝0.024、Iy＝0.021、Iz＝0.014 25％
2 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.025、Iy＝0.050、Iz＝0.013 18％
3 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.024、Iy＝0.100、Iz＝0.014 25％
4 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.024、Iy＝0.150、Iz＝0.015 32％
5 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.023、Iy＝0.200、Iz＝0.015 30％
6 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.026、Iy＝0.250、Iz＝0.014 37％
7 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.025、Iy＝0.300、Iz＝0.014 39％
8 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.024、Iy＝0.350、Iz＝0.015 97％
9 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.024、Iy＝0.400、Iz＝0.014 173％
10 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.025、Iy＝0.500、Iz＝0.014 288％
11 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.024、Iy＝0.750、Iz＝0.015 >300％
12 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.025、Iy＝1.000、Iz＝0.014 >400％
13 Ex1S(4)+Iy Ix＝0.023、Iy＝1.500、Iz＝0.015 >500％
组合物例2：
参照组合物例1进行，不同的仅仅是在注射液中补充增加9mg/ml浓度的苯甲醇。同样照组合物例1中的方法进行40℃4月处置试验，结果杂质Ix和杂质Iy两者在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均低于47％。但杂质Iz在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数与表5中相应杂质Iy含量的组配物结果基本相同(均不超过7个百分点)，例如与表5编号9的试样相应的注射液的Iz增加百分数为168％。
组合物例3：
参照组合物例1进行，不同的仅仅是在投时将使用的实施例1步骤(4)所得格隆溴铵原料药改为实施例3步骤(3)所得格隆溴铵原料药。同样照组合物例1中的方法进行40℃4月处置试验，结果杂质Ix和杂质Iy两者在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均低于53％。但杂质Iz在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数与表5中相应杂质Iy含量的组配物结果基本相同(均不超过5个百分点)，例如与表5编号7的试样相应的注射液的Iz增加百分数为38％。
组合物例4：
原料药：使用上文实施例1步骤(5)产物、制备例1产物杂质Ix、制备例1产物杂质Iy、以及市售所得杂质Iz，将它们进行混配，得到具有以下杂质含量的原料药：原料药1：RRT0.89＝0.005％，RRT1.14＝0.003％、RRT2.68＝0.002％；原料药2：RRT0.89＝0.500％，RRT1.14＝0.300％、RRT2.68＝0.400％；原料药3：RRT0.89＝0.250％，RRT1.14＝0.150％、RRT2.68＝0.200％；原料药4：RRT0.89＝0.450％，RRT1.14＝0.185％、RRT2.68＝0.330％；原料药5：RRT0.89＝0.224％，RRT1.14＝0.125％、RRT2.68＝0.255％。
参照组合物例1进行，不同的仅仅是在投时将使用的实施例1步骤(4)所得格隆溴铵原料药改为以上原料药1、原料药2、原料药3、原料药4、原料药5，得到5批组合物，为格隆溴铵注射液。对这些格隆溴铵注射液同样照组合物例1中的方法进行40℃4月处置试验，结果杂质Ix、杂质Iy、杂质Iz三者在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均低于48％。
参照组合物例2进行，不同的仅仅是在投时将使用的实施例1步骤(4)所得格隆溴铵原料药改为以上原料药1、原料药2、原料药3、原料药4、原料药5，得到5批组合物，为格隆溴铵注射液。对这些格隆溴铵注射液同样照组合物例1中的方法进行40℃4月处置试验，结果杂质Ix、杂质Iy、杂质Iz三者在4个月时相对于其在0月时的含量增加百分数均低于45％。
以上这些组合物经测试，其中杂质Iy含量最低的为0.003％，杂质Iz含量最低的为0.002％。显然，就本发明组合物而言，其中杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0.75％(例如低于0.50％、低于0.4％、低于0.3％)是有益的，例如Iy杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.750％范围内(例如在0.003％～0.500％范围内、例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内)是有益的。
以上这些制备的可作为制剂特别是注射液的格隆溴铵组合物经测试，其中杂质Ix含量最低的试样为0.005％，杂质Iy含量最低的试样为0.003％，杂质Iz含量最低的试样为0.002％。显然，就本发明组合物而言，其中杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0.75％(例如低于0.50％、低于0.4％、低于0.3％)是有益的，例如Iy杂质含量(相对于格隆溴铵计)在0.003％～0.750％范围内(例如在0.003％～0.500％范围内、例如在0.003％～0.400％范围内、例如在0.003％～0.300％范围内)是有益的。已经测试上述可作为制剂特别是注射液的格隆溴铵组合物对于它们杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量低于0.300％的试样，它们的杂质Ix相对于格隆溴铵而言含量均低于0.5％，它们的杂质Iz相对于格隆溴铵而言含量均低于0.400％。——即对于可作为本发明的格隆溴铵组合物而言，作为本发明的一个实施方案，本发明的格隆溴铵组合物中，杂质Ix相对于格隆溴铵而言含量在0.005％～0.500％范围内，杂质Iy相对于格隆溴铵而言含量在0.003％～0.300％范围内，杂质Iz相对于格隆溴铵而言含量在0.002％～0.400％范围内，具有这些特点的格隆溴铵组合物是本发明优选的。
试验例3：生物学试验
本试验例考察相关物质对小鼠血液中的中性粒细胞的影响。
(1)动物：BALB/c小鼠，雌性6～8周龄。
(2)试药：使用本发明实施例1步骤(5)所得格隆溴铵对照品、制备例1所得杂质Ix、制备例2所得杂质Iy、市售杂质Iz、它们的混配物进行测试，使用0.9％生理盐水配制成适宜浓度的无菌溶液。
(3)分组：小鼠随机分组，每组10只；具体组别如下：a)对照组：注射与各给药组等体积的生理盐水；b)格隆溴铵组：实施例1步骤(5)所得格隆溴铵对照品；c)杂质Ix组；d)杂质Iy组；e)杂质Iz组；f)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含0.230％的Iz和余量的格隆溴铵)；g)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含0.400％的Iz和余量的格隆溴铵)；h)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含0.750％的Iz和余量的格隆溴铵)；i)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含1.50％的Iz和余量的格隆溴铵)；j)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含5.0％的Iz和余量的格隆溴铵)；k)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含10.0％的Iz和余量的格隆溴铵)；l)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含25.0％的Iz和余量的格隆溴铵)；m)格隆溴铵/杂质Iz混配组(含50.0％的Iz和余量的格隆溴铵)。
(4)剂量、给药、方法：各动物在给药前至少饲养48小时，于-24小时、0小时时眼眶取血，按常规细胞计数法(使用美国Coulter公司生产的血常规自动分析仪测定)对中性粒细胞计数，计算每组动物在每个时间点的中性粒细胞数均值(该均值在以下可简写为PNG，0小时的该均值可简写为PNG0)，对于每组动物，-24小时与0小时两个时间点的PNG相差不超过3％。分别于0小时、24小时、48小时经腹腔注射给予各组试药3次，每次给予总化合物量(以格隆溴铵、杂质Ix、杂质Iy、杂质Iz、或其总和计)50μmol/kg动物体重，例如对于m)格隆溴铵/杂质Iz混配组，Iz和格隆溴铵的总和计50μmol/kg动物体重的剂量。在第54小时(即末次给药后6小时)各动物眼眶取血，按常规细胞计数法对中性粒细胞计数，计算每组动物在第54小时时的中性粒细胞数均值(该均值简写为PNG56)。
(5)结果计算：按下式计算每组动物的中性粒细胞相对数：
中性粒细胞相对数(％)＝(PNG56÷PNG0)×100％
以上中性粒细胞相对数反映外周血中中性粒细胞的变化情况，该参数越接近于100％表明血液中的中性粒细胞变化越小，该参数低于100％时，数值越低则表明中性粒细胞减少越多，该参数大于100％时表明中性粒细胞增加。结果见表6。
表6：
组别 中性粒细胞相对数 组别 中性粒细胞相对数
a)对照组 102.5％ h)格隆溴铵/杂质Iz混配组 57.5％
b)格隆溴铵组 99.4％ i)格隆溴铵/杂质Iz混配组 38.6％
c)杂质Ix组 103.3％ j)格隆溴铵/杂质Iz混配组 23.1％
d)杂质Iy组 101.7％ k)格隆溴铵/杂质Iz混配组 15.3％
e)杂质Iz组； 1.55％ l)格隆溴铵/杂质Iz混配组 7.9％
f)格隆溴铵/杂质Iz混配组 99.5％ m)格隆溴铵/杂质Iz混配组 2.1％
g)格隆溴铵/杂质Iz混配组 94.7％
对于e)组，中性粒细胞计数由第0小时时的4530个/μL，降低至第54小时时的70个/μL。对于Iz含量低于0.4％组配物，血液中的中性粒细胞数基本没有变化，但是当Iz含量大于等于0.75％时，血液中的中性粒细胞数急剧降低，这对于受试者维持正常的机体功能特别是正常的免疫功能是极为不利的。
试验例4：生物学试验
照B.V.Franko等人的文献(B.V.Frankoetal.,Toxicol.Appl.Pharmacol.17,361(1970))中记载的方法，测定本发明实施例1步骤(4)的所得格隆溴铵以及杂质Iz的半数致死量(LD50值，小鼠，i.p.给药，72hr)，以考察相关物质对小鼠的急性毒性。结果格隆溴铵的LD50＝136mg/kg，杂质Iz的LD50＝17mg/kg，显示杂质Iz的安全性远比格隆溴铵差。
产业适用性
本发明提供的格隆溴铵原料药或制剂，作为一种抗胆碱能药，在临床上可用于麻醉、消化性溃疡、流涎等。该原料药或制剂具有抑制胃液分泌及调节胃肠蠕动作用；具有比阿托品更强的抗唾液分泌作用，但没有中枢性抗胆碱活性。临床上通常用于胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃酸分泌过多等症。

Claims (10)

1.一种供药用的原料药，该原料药的活性成分为格隆溴铵即以下式I化合物：
及其对映体；该原料药中还包括作为杂质的下式Iy杂质：
所述Iy杂质相对于格隆溴铵而言含量在0.003％～0.130％范围内；
该原料药中还包括作为杂质的以下式Iz杂质：
所述Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量在0.002％～0.500％范围内。
2.根据权利要求1的原料药，其中包括作为主要组分的式I化合物及其对映体，以及任选的作为杂质的以下式Ix杂质：
及其对映体；进一步地，Ix杂质相对于格隆溴铵而言含量低于0.5％，例如
低于0.4％，例如低于0.3％。
3.根据权利要求1的原料药，其中Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量在0.002％～0.400％范围内，例如低于0.30％，例如低于0.25％，例如低于0.20％，例如低于0.15％，例如低于0.13％。
4.根据权利要求1-3任一项的原料药，其在40℃条件下密封、避光放置6个月，计算在此条件下处置6个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中杂质Iz含量增加百分数低于50％，例如低于40％。
5.一种药物组合物，其中包含权利要求1-4任一项所述的原料药，以及任选的药学可接受的载体或辅料；进一步地，其是口服制剂或者注射制剂；进一步地，其是片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射液、冷冻干燥粉针剂、混悬剂、或丸剂；进一步地，其是注射液，该注射液每1ml中包含：0.1～0.5mg的格隆溴铵、酸碱调节剂适量以调节注射液的pH值在2.0～3.0范围内、和加至全量的注射用水。
6.根据权利要求5的药物组合物，其是注射液，其中还包含苯甲醇，例如苯甲醇浓度为0.5～1.5mg/ml，例如该注射液中的苯甲醇浓度为0.7～1.2mg/ml，例如该注射液中的苯甲醇浓度为0.8～1.0mg/ml，例如该注射液中的苯甲醇浓度为0.9mg/ml。
7.根据权利要求5的药物组合物，其是冷冻干燥粉针剂，该粉针剂中包含：0.2重量份的格隆溴铵、20～400重量份的冻干赋形剂；例如，该粉针剂中包含：0.2重量份的格隆溴铵、20～400重量份的冻干赋形剂、任选的pH调节剂适量以使该粉针剂用注射用水稀释至格隆溴铵浓度为0.2mg/ml时溶液的pH值在2.0～3.0范围内。
8.根据权利要求5至7任一项的药物组合物，其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及作为杂质的Ix杂质；其中Ix杂质相对于格隆溴铵而言含量低于1.0％，例如低于0.75％，例如低于0.5％，例如低于0.4％。
9.根据权利要求5至7任一项的药物组合物，其特征在于：
其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及作为杂质的Iy杂质；其中Iy杂质相对于格隆溴铵而言含量在0.003％～0.300％范围内；和/或
其中包括作为活性组分的格隆溴铵，以及作为杂质的Iz杂质；其中Iz杂质相对于格隆溴铵而言含量低于1.00％，例如低于0.75％，例如低于0.50％，例如低于0.4％。
10.根据权利要求5至7任一项的药物组合物，其在40℃条件下密封、避光放置4个月，计算在此条件下处置4个月后某杂质相对于0月时的含量增加百分数，其中杂质Iz含量增加百分数低于50％，例如低于40％。
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