CN103417597A - 油菜花粉总甾醇有效部位及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种油菜花粉总甾醇有效部位及其制备方法和应用。本发明有效部位总甾醇化合物含量为50%-90%(wt%)，总甾醇化合物为24-亚甲基胆甾醇、菜籽甾醇、31-去甲基环木菠萝烯醇、异岩藻甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇6种；该油菜花粉总甾醇有效部位以油菜花粉为原料，经破壁后有机溶剂提取，硅胶柱层析和C18反相中压色谱柱分离纯化，得到油菜花粉总甾醇有效部位。本发明通过动物实验说明油菜花粉总甾醇有效部位具有很好的抗前列腺增生和前列腺炎作用，可应用于制备治疗前列腺增生及前列腺炎症的药物制剂中，为前列腺疾病患者提供一种疗效更佳的药物，具有较大的实际应用价值和较好的社会效益。

Description

油菜花粉总甾醇有效部位及其制备方法和应用

(一)技术领域：本发明属于天然产物制药技术领域，具体涉及油菜花粉总甾醇有效部位及其制备方法和在制备治疗和预防前列腺增生、前列腺炎症药物中的应用。

(二)背景技术：前列腺是男性体内比较小的一个器官，成人仅类似栗子大小，但是几乎所有的成年男性一生中都会受其影响，最常见的前列腺疾病为前列腺炎和良性前列腺增生。其中，儿童较少发生前列腺疾病，青壮年和老年人发病率则较高，且随着年龄的不同，发生病种也不同；如前列腺炎好发于青壮年，35岁以上男子的发病率可达35%-40%；良性前列腺增生是常见的老年男性多发病，60-69岁的老年人发病率可达50-60%，70-80岁的老年人发病率则高达80%以上。

目前，国内外对前列腺炎的治疗手段以氨苄西林、红霉素等抗生素治疗为主，但许多抗生素药物难以进入到前列腺里面或难以在前列腺内形成有效的抑菌浓度，且对衣原体、支原体等病菌几乎无效。抗前列腺增生常采用坦洛新等α1-肾上腺素受体阻滞剂和非那雄胺等5α-还原酶抑制剂，当前列腺增生达到一定程度时，则采用手术方法去除增生组织；但坦洛新等并不能缩小增生的前列腺，只能临时扩张尿道，解决症状，而非那雄胺虽然可以缩小前列腺增生，但存在性功能障碍等不良反应。市场上还有部分中成药(如前列倍喜等)、天然植物药(如舍尼通等)用于治疗前列腺炎、前列腺增生，但这些药物起效慢，临床疗效个体差异大。

现代研究表明，油菜花粉含有多糖、甾醇、脂肪酸、黄酮等多种有效成分，在营养保健和药品中广泛应用。近年来流行病学研究表明，油菜花粉中的植物甾醇具有良好的抗前列腺增生、前列腺炎作用。如Berges采用Boyarsky法、IPSS法以及尿流量、前列腺体积等多项指标，对甾醇的抗良性前列腺增生作用进行药效评价，结果显示植物甾醇具有良好的抗前列腺增生作用。另外，植物甾醇还有类似于氢化可的松、强的松等的较强的抗炎作用，以及对机体某些癌症的发生和发展有一定的抑制作用。目前国内临床上也广泛应用以油菜花粉为原料的制剂(如普乐安片、胶囊)于治疗慢性前列腺炎和前列腺增生。但由于花粉中有效成分含量低，前列腺炎、前列腺增生患者每日服用油菜花粉量大；且不同产地油菜花粉有效成分含量不均一，但中国药典2010版收载的普乐安片质量标准仅检测槲皮素和山奈酚的含量，缺乏其他指标，而目前的研究表明，抗前列腺增生和前列腺炎的有效成分主要为总甾醇物质，故其药物临床疗效不稳定，甚至部分药物无效。因此，建立一种有效控制油菜花粉中总甾醇化合物含量的提取工艺，并对其含量进行控制，是解决目前药物疗效不稳定的重要途径之一。

(三)发明内容：本发明的目的在于提供一种以油菜花粉为原料提取分离纯化得到总甾醇化合物含量为50%-90%(wt%)的油菜花粉总甾醇有效部位，还提供油菜花粉总甾醇有效部位在制备治疗和预防前列腺疾病药物中的应用。本发明所述的油菜花粉总甾醇有效部位总甾醇化合物为24-亚甲基胆甾醇、菜籽甾醇、31-去甲基环木菠萝烯醇、异岩藻甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇，其通过下述方法和步骤制得：

(a)有机溶剂提取：

将油菜花粉粉碎破壁，破壁率控制在90%以上，采用6-8倍体积量的75%-95%有机溶剂加热回流提取3-4次，每次1-3小时，将提取液浓缩成浸膏备用；所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇或丙酮中一种；所述的浓缩浸膏的相对密度为1.1-1.3（50℃）。

(b)硅胶层析等分离纯化

(Ⅰ)将步骤(a)制成的浸膏用甲醇溶解，加入层析硅胶拌样，硅胶的用量为与浸膏的重量比为1：1-2：1，将拌有样品的硅胶与层析硅胶按重量比1：4-1：10装柱；用有机溶剂第一组试剂中的石油醚或正已烷与第二组试剂中的乙酸乙酯或甲醇，按体积比10：0.5-10：5的混合溶剂洗脱至无色带流出，收集洗脱液，在50℃下浓缩成相对密度为1.1-1.3的浸膏备用；

(Ⅱ)取上述(Ⅰ)制备的浸膏加甲醇溶解制成供试品溶液，经C18反相中压制备色谱柱，采用10%-50%(vt%)的甲醇水溶液或10%-50%(vt%)的乙腈水溶液为流动相洗脱分离，同时使用紫外检测器在波长为210nm处检测，根据紫外检测器信号检测到有甾醇化合物出来时开始收集洗脱液直至结束，合并收集洗脱液，浓缩成稠膏；真空减压干燥，得到油菜花粉总甾醇有效部位。

所述的C18反相中压色谱柱的梯度洗脱体系10%-50%(vt%)的甲醇水溶液，或10%-50%(vt%)的乙腈水溶液。

本发明中，对上述所得油菜花粉总甾醇有效部位进行含量测定：采高效液相色谱外标法测定，C18反相柱，以甲醇-乙腈(50：50)为流动相，柱温30℃，检测波长210nm。结果总甾醇含量为50%-90%(wt%)，达到有效部位的要求。

本发明中油菜花粉总甾醇有效部位的甾醇化合物成分为24-亚甲基胆甾醇、菜籽甾醇、31-去甲基环木菠萝烯醇、异岩藻甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇6种。

将本发明所制备的油菜花粉总甾醇有效部位，以其为有效成分，与药用制剂辅料载体组合，制备应用于治疗前列腺增生、前列腺炎症的药物组合物。所述药物组合物可以是任何形式的剂型，这些剂型包括：片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液等。

为进一步说明本发明制得的油菜花粉总甾醇有效部位在制备前列腺疾病药物中的应用，本发明人开展了油菜花粉总甾醇有效部位的大鼠药代动力学研究，通过油菜花粉总甾醇有效部位制剂与市售的等生药量未经提纯的油菜花粉普乐安制剂比较，结果显示，总甾醇有效部位制剂比市售的普乐安制剂具有吸收更快、血药达峰更快、生物利用度高等优势。

为进一步说明本发明制得的油菜花粉总甾醇有效部位在制备治疗抗前列腺疾病药物中的应用，本发明人采用油菜花粉总甾醇有效部位制备的制剂开展了对大鼠前列腺增生的药效试验研究和对大鼠前列腺炎症的药效试验研究。结果显示，油菜花粉总甾醇有效部位可显著的抑制大鼠前列腺增生出现的病理性改变，降低前列腺和精囊腺的重量，表明具有很好的抗大鼠前列腺增生的作用。且其可显著抑制大鼠前列腺炎出现的病理性改变，可增加其卵磷脂小体的密度，降低其白细胞的数量，表明具有很好的抗大鼠前列腺炎的作用。通过油菜花粉总甾醇有效部位制剂与市售的等生药量未经提纯的油菜花粉普乐安制剂比较，结果显示，总甾醇有效部位制剂比市售的普乐安制剂在抑制前列腺增生及治疗前列腺炎症方面均具有明显优势。

本发明的创新点在于：

(1)本发明制备的油菜花粉总甾醇有效部位，总甾醇主要成分为24-亚甲基胆甾醇、菜籽甾醇、31-去甲基环木菠萝烯醇、异岩藻甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇6种，总甾醇含量为50%-90%(wt%)，该油菜花粉总甾醇有效部位质量稳定，纯度高。

(2)本发明制备的总甾醇有效部位在治疗前列腺疾病方面应用广范，与市售等生药量的普乐安制剂比较，该有效部位疗效更加确切，特别是具有更高的生物利用度；在缩小前列腺体积、抑制前列腺炎上，都具有更好的疗效；且服用次数减少，提高了患者的依从性；

(3)本发明所制备的油菜花粉总甾醇有效部位，成分明确，质量可控，动物试验未见明显不良反应；

(4)本发明的制备方法简单，适用于工业化大生产，且所用的有机溶剂可以有效回收，环境污染小，具有较大的社会经济价值。

(四)附图说明：

图1油菜花粉总甾醇有效部位高效液相测定色谱图，

图中：1是24-亚甲基胆甾醇，2是菜籽甾醇，3是31-去甲环木菠萝烯醇，4是异岩藻甾醇，5是豆甾醇，6是β-谷甾醇

图224-亚甲基胆甾醇质谱图，24-亚甲基胆甾醇的分子式C₂₈H₄₆O，分子量为398.68。

图331-去甲基环木菠萝烯醇质谱图，31-去甲基环木菠萝烯醇的分子式C₂₉H₄₉O，分子量为413.7。

图4菜籽甾醇质谱图，菜籽甾醇的分子式C₂₈H₄₆O，分子量为398.66。

图5异岩藻甾醇质谱图，异岩藻甾醇的分子式C₂₉H₄₈O，分子量为412.7。

图6豆甾醇质谱图，豆甾醇的分子式C₂₉H₄₈O，分子量为412.67。

图7β-谷甾醇质谱图，β-谷甾醇的分子式C₂₉H₅₀O，分子量为414.69。

图8两种药物的血浆药物浓度-时间曲线，其中1为油菜花粉片，2为本发明油菜花粉总甾醇有效部位片。

图9病理报告图片:模型对照组:大鼠前列腺，高柱状上皮细胞大量增生，形成乳头状突入腺腔，间质纤维增生。

图10病理报告图片:普乐安片组:大鼠前列腺，局部柱状上皮细胞增生，形成乳头状突入腺腔。

图11病理报告图片:油菜花粉总甾醇有效部位片组：大鼠前列腺,前列腺间质未见纤维明显增生，上皮细胞形态未见异常，间质血管充血。

图12病理报告图片:模型对照组：大鼠前列腺，间质大量纤维增生，大量嗜中性粒细胞浸润，局部区域形成脓包，腺腔坏死。

图13病理报告图片:普乐安片组：大鼠前列腺，局部间质水肿扩张，大量纤维增生，伴有嗜中性粒细胞浸润。

图14病理报告图片:油菜花粉总甾醇有效部位片组：大鼠前列腺，间质轻度扩张，腺腔内可见红染分泌物，上皮细胞轻度肿胀。

(五)具体实施方式：

下面结合实施例对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。

实施例1：油菜花粉总甾醇有效部位的制备

将油菜花粉20kg粉碎破壁（破壁率达到90%以上），加入120L80%(vt%)乙醇提取3次，每次2小时，过滤，合并提取液，在50℃下浓缩得到相对密度为1.1的浸膏2.9kg；加6L甲醇溶解，加入层析硅胶3kg，搅拌，蒸干溶剂，得到拌样硅胶；将拌样硅胶加入到已填充好的硅胶柱(12kg)中；采用石油醚：乙酸乙酯（体积比为10：0.8）的混合溶剂洗脱至无色；收集洗脱液，在50℃下浓缩成相对密度为1.1的浸膏；加甲醇溶解制成供试品溶液，采用手动进样器，BUCH中压色谱分离，检测波长210nm，流动相50%(vt%)甲醇水溶液，流速25ml/min，当检测器显示有甾醇流分出来后开始收集直至结束，合并洗脱液，浓缩得稠膏；将稠膏转入减压干燥托盘中，80℃真空减压干燥，粉碎过80目筛，得到油菜花粉总甾醇有效部位53g。

实施例2：油菜花粉总甾醇有效部位的制备

将油菜花粉15kg粉碎破壁（破壁率达到90%以上），加入120L90%(vt%)丙酮提取4次，每次3小时，过滤，合并提取液，在50℃下浓缩得到相对密度为1.2的浸膏1.7kg；加4L甲醇溶解，加入层析硅胶3.4kg，搅拌，蒸干溶剂，得到拌样硅胶；将拌样硅胶加入到已填充好的硅胶柱(16kg)中；采用V石油醚：V乙酸乙酯(10：0.5)的混合溶剂洗脱至无色；收集洗脱液，在50℃下浓缩成相对密度为1.2的浸膏；加适量甲醇溶解制成供试品溶液，采用手动进样器，BUCH中压色谱分离，检测波长210nm，流动相50%(vt%)乙腈水溶液，流速20ml/min，当检测器显示有甾醇流分出来后开始收集直至结束，合并洗脱液，浓缩得稠膏；将稠膏转入减压干燥托盘中，80℃真空减压干燥，粉碎过80目筛，得到油菜花粉总甾醇有效部位36g。

实施例3：油菜花粉总甾醇有效部位的制备

将油菜花粉50kg粉碎破壁（破壁率达到90%以上），加入400L95%(vt%)甲醇提取4次，每次1小时，过滤，合并提取液，在50℃下浓缩得到相对密度为1.3的浸膏4.5kg；加10L甲醇溶解，加入层析硅胶5kg，搅拌，蒸干溶剂，得到拌样硅胶；将拌样硅胶，加入到已填充好的硅胶柱(20kg)中；采用V石油醚：V甲醇(10：2)的混合溶剂洗脱至无色；收集洗脱液，在50℃下浓缩得到相对密度为1.3的浸膏；加甲醇溶解制成供试品溶液，采用手动进样器，BUCH中压色谱分离，检测波长210nm，流动相20%(vt%)乙腈水溶液，流速30ml/min，当检测器显示有甾醇流分出来后开始收集直至结束，合并洗脱液，浓缩得稠膏；将稠膏转入减压干燥托盘中，70℃真空减压干燥，粉碎过80目筛，得到油菜花粉总甾醇有效部位109g。

实施例4：油菜花粉总甾醇有效部位的制备

将油菜花粉30kg粉碎破壁（破壁率达到90%以上），加入210L75%(vt%)甲醇提取3次，每次3小时，过滤，合并提取液，在50℃下浓缩得到相对密度为1.2的浸膏6.0kg；加10L甲醇使溶解加入层析硅胶7.2kg，搅拌，蒸干溶剂，得到拌样硅胶；将拌样硅胶，加入到已填充好的硅胶柱(37kg)中；采用V正已烷：V甲醇(10：1)的混合溶剂洗脱至无色；收集洗脱液，在50℃下浓缩得到相对密度为1.2的浸膏；加适量甲醇溶解制成供试品溶液，采用手动进样器，BUCH中压色谱分离，检测波长210nm，流动相30%(vt%)甲醇水溶液，流速30ml/min，当检测器显示有甾醇流分出来后开始收集直至结束，合并洗脱液，浓缩得稠膏；将稠膏转入减压干燥托盘中，80℃真空减压干燥，粉碎过80目筛，得到油菜花粉总甾醇提取物45g。

实施例5：油菜花粉总甾醇有效部位甾醇含量测定。

依据实施例1制备花粉总甾醇有效部位三批，每批精密称取50mg，加入甲醇溶解，并用甲醇定容至25ml，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。色谱条件：V流动相：V乙腈-甲醇(50：50)；检测波长：210nm；流速：1ml/min；柱温：30℃。测定结果花粉总甾醇有效部位的含量为：52.9%(wt%)。供试品液相色谱图1。

实施例6：油菜花粉总甾醇有效部位甾醇含量测定。

依据实施例2制备花粉总甾醇有效部位三批，每批精密称取50mg，加入甲醇溶解，并用甲醇定容至25ml，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。色谱条件：V流动相：V乙腈-甲醇(50：50)；检测波长：210nm；流速：1ml/min；柱温：30℃。测定结果花粉总甾醇有效部位的平均含量为：87.5%(wt%)。

实施例7：油菜花粉总甾醇有效部位甾醇含量测定。

依据实施例3制备的花粉总甾醇有效部位三批，每批精密称取50mg，加入甲醇溶解，并用甲醇定容至25ml，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。色谱条件：V流动相：V乙腈-甲醇(50：50)；检测波长：210nm；流速：1ml/min；柱温：30℃。测定结果花粉总甾醇有效部位的含量为：61.3%(wt%)。

实施例8：油菜花粉总甾醇有效部位中24-亚甲基胆甾醇和31-去甲基环木菠萝烯醇质谱分析

称取实施例1制备的油菜花粉总甾醇有效部位适量，加甲醇溶解。采用色谱条件：色谱柱为Agilent Poroshell120SB C18柱(2.1mm×50mm，2.7μm)，柱温38℃；流动相：0.1%甲酸甲醇-0.1%甲酸水，流速为0.45mL/min，梯度洗脱(min/%甲醇：0/83，1.0/83，1.1/92，5.0/92，5.01/83)，分析时间：5.6min；进样量5μL。质谱条件：离子源：大气压化学电离源(APCI)，正离子模式；采集方式：多反应检测(MRM)；干燥器温度(℃)：325；蒸发器温度(℃)：350；干燥器流量：(L/min)：4；雾化器压力(psi)：30；毛细管电压(V)：3500；电晕电流(μA)：4。结果如图2、图3。

实施例9：油菜花粉总甾醇有效部位中菜甾醇、异岩藻甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇质谱分析

称取实施例1制备的油菜花粉总甾醇有效部位适量，加甲醇溶解。采用GC-MS色谱条件：色谱柱HP-5弹性石英毛细管柱(30m×250μm×0.25μm)；载气为氦气，流量1ml/min；进样口温度220℃，程序升温：初始温度150℃，以10℃/min的速率升温至180℃保持10min，以5℃/min的速率升温至220℃保持10min，以5℃/min的速率升温至280℃保持30min；进样量：0.2μl，分流比10∶1，MS条件：EI离子源70eV；离子源温度230℃；扫描质量范围为50～550m/z。结果如图4、5、6、7。

实施例10：制备含本发明油菜花粉总甾醇有效部位的片剂

表1片剂处方

成分名称	质量
		实施例3制备的油菜花粉总甾醇有效部位	50g
微晶纤维素	200g
		羧甲基淀粉钠	6g
微粉硅胶	4g

制法：按照表1制剂处方，取油菜花粉总甾醇有效部位，加入微晶纤维素，以80%乙醇作为粘合剂，过20目筛制成软件，60℃干燥，整粒，加入羧甲基淀粉钠和微粉硅胶混合均匀，压片，制成1000片。

质量指标：每片含有油菜花粉总甾醇有效部位50mg，每片含总甾醇不少于25mg(HPLC测定)。

实施例11：制备含本发明油菜花粉总甾醇有效部位的胶囊剂。

表2胶囊剂处方

成分名称	质量
		实施例3制备的油菜花粉总甾醇有效部位	100g
淀粉	100g
		微晶纤维素	50g
硬脂酸镁	5g

制法：按照表2制剂处方，取油菜花粉总甾醇有效部位，加入淀粉和微晶纤维素，混合均匀，以50%乙醇作为粘合剂，过30目筛制软件，80℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁混合均匀，装粒，制成1000粒胶囊。

质量指标：每粒胶囊含有油菜花粉总甾醇有效部位100mg，每粒含总甾醇不少于50mg(HPLC测定)。

实施例12：本发明制备的药物组合物的生物利用度试验

取实施例10制备的总甾醇有效部位片剂、市售油菜花粉原药材片，进行生物等效性试验，采用生药量相当的剂量进行SD雄性大鼠灌胃，分别于给药前及给药后1.5、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、16.0、21.0、26.0、47.0.、75.5h于大鼠眼底静脉丛取血约500μL，肝素抗凝，离心10min(3000r/min)分离血浆，迅速移取100μL血浆2份分装，置1.5mL离心管中，-20℃冷冻保存。分别检测血浆样品中甾醇的浓度并进行加和，数据见表3、表4和图8。

表3油菜花粉总甾醇有效部位片大鼠灌胃后总甾醇的血药浓度-时间数据(ng/mL)

表4油菜花粉片大鼠灌胃后总甾醇的血药浓度-时间数据(ng/mL)

实施例13：本发明制备的药物组合物对实验性大鼠前列腺增生的治疗作用

取实施例10制备的油菜花粉总甾醇有效部位片，及市售的未经提纯的等生药量油菜花粉制成的普乐安片。

动物SD清洁级大鼠，330-450g，雄性，购于浙江省医学科学院动物中心，动物合格证：SCXK(浙)2008-0033。

1)分组与给药40只大鼠随机分为假手术组、模型对照组、普乐安片阳性对照组、甾醇有效部位片组。药物组按表5剂量灌胃给药，模型组和假手术组灌胃蒸馏水，体积均是10ml/kg；每日一次，连续给药30天。给药期间，密切观察大鼠的状态。

2)试验结果

表5对前列腺增生模型大鼠前列腺重量的影响

注：与假手术组比较：##P<0.01；与模型组比较：*P<0.05；**P<0.01。

表6油菜花粉对前列腺增生模型大鼠精囊腺重量的影响

注：与假手术组比较：##P<0.01；与模型组比较：*P<0.05；**P<0.01。

结论：实验结果提示，与以未经提纯的等生药量油菜花粉制成的普乐安片比较，油菜花粉总甾醇有效部位片在对丙酸睾酮诱发去势大鼠建立前列腺增生有更显著的抑制作用，油菜花粉总甾醇有效部位片具有更好的抗大鼠前列腺增生的作用(图9-11)。

实施例14

对实验性大鼠急性前列腺炎治疗作用

取实施例实施例10制备的油菜花粉总甾醇有效部位片、市售的未经提纯的等生药量油菜花粉制成的普乐安片。

动物SD清洁级大鼠，330-450g，雄性，购于浙江省医学科学院动物中心，动物合格证：SCXK(浙)2008-0033。

1)分组与给药大鼠按体重分组，随机分为假手术组、模型对照组、普乐安片阳性对照组、甾醇有效部位片组。药物组按表7剂量灌胃给药，模型组和假手术组灌胃蒸馏水，体积均是10ml/kg；每日一次，连续给药30天。给药期间，密切观察大鼠的状态。

2)试验结果

表7对急性前列腺炎大鼠体重、卵磷脂小体、白细胞的影响

注：假手术组比较：^*P﹤0.05，^**P﹤0.01；与模型组比较：^#P﹤0.05，^##P﹤0.01。

表8对实验性大鼠急性前列腺炎前列腺重量的影响

注：假手术组比较：^*P﹤0.05，^**P﹤0.01；与模型组比较：^##P﹤0.01，^#P﹤0.05。

结果：急性前列腺炎模型大鼠前列腺液白细胞数显著增加，卵磷脂小体数量则显著减少。油菜花粉甾醇有效部位片可明显降低前列腺液中的白细胞数量，对前列腺液中卵磷脂小体数量物明显影响；油菜花粉总甾醇有效部位片可减轻大鼠致炎侧前列腺重量。实验结果表明：油菜花粉甾醇有效部位片在治疗前列腺炎症方面的疗效明显优于以不经提纯的等生药量油菜花粉为原料制备的普乐安片(图12-14)。

Claims (5)

1.一种油菜花粉总甾醇有效部位，其特征是：该有效部位为从油菜花粉中提取，其总甾醇化合物的重量比为50%-90%，该总甾醇化合物为24-亚甲基胆甾醇、菜籽甾醇、31-去甲基环木菠萝烯醇、异岩藻甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇6种。

2.根据权利要求1所述的油菜花粉总甾醇有效部位的制备方法，其特征是采用如下方法制成：（a）提取：将油菜花粉粉碎破壁，经6-8倍体积量的有机溶剂加热回流提取3-4次，每次1-3小时，所述的有机溶剂选自75%-95%的乙醇、甲醇、丙酮中的一种，将提取液在50℃下浓缩成相对密度比为1.1-1.3的浸膏备用；（b）纯化：(Ⅰ)将上述步骤(a)制成的浸膏用甲醇溶解，加入层析硅胶拌样，硅胶的用量为与浸膏的重量比为1:1-2:1，将拌有样品的硅胶与层析硅胶按重量比1:4-1:10装柱；用有机溶剂洗脱至无色带流出，收集洗脱液，在50℃下浓缩成相对密度比为1.1-1.3的浸膏备用；(Ⅱ)取上述(Ⅰ)制备的浸膏加甲醇溶解制成供试品溶液，经C18反相中压制备色谱柱，洗脱分离，根据紫外检测器信号检测到有甾醇化合物出来时开始收集洗脱液直至结束，合并收集洗脱液，浓缩至干；真空减压干燥，得到油菜花粉总甾醇有效部位。

3.根据权利要求2所述的油菜花粉总甾醇有效部位的制备方法，其特征是：所述步骤（b）中的洗脱用有机溶剂为两种洗脱试剂混合制得，第一组试剂中的石油醚或正已烷与第二组试剂中的乙酸乙酯或甲醇，按体积比10:0.5-10:5混合制得。

4.根据权利要求2所述的油菜花粉总甾醇有效部位的制备方法，其特征是：步骤(Ⅱ)中C18反相中压制备色谱柱所用的洗脱溶剂为体积比10%-50%的甲醇水溶液，或10%-50%的乙腈水溶液；紫外检测波长为210nm。

5.根据权利要求1或2所述的油菜花粉总甾醇有效部位在制备治疗或预防前列腺增生、前列腺炎症的药物中的应用。

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