CN103417555A - 脑苷类化合物在制备镇痛药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种脑苷脂类化合物在制备镇痛药物中的应用。本发明通过药理学动物实验证实，所述的脑苷脂类化合物通过腹腔注射、灌胃、皮肤涂抹等途径给药，均能剂量依赖地提高小鼠对热疼痛、机械刺激痛的阈值；能显著地改善神经病理性疼痛、炎性疼痛、醋酸诱导内脏痛。脑苷脂A或脑苷脂B抑制辣椒素受体TRPV1的活性，提示脑苷脂类化合物通过降低痛觉感受器受体TRPV1活性，提高痛觉阈值，达到镇痛作用。本发明开拓了脑苷脂类化合物作为内用型和外用型镇痛药物的用途。

Description

脑苷类化合物在制备镇痛药物中的应用

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，涉及脑苷类化合物在制备镇痛药物中的应用。 

背景技术

疼痛(pain)是一种复杂的生理心理活动，是临床上最常见的症状之一。疼痛经常困扰着人们的健康和生活质量，长期的剧烈疼痛（如癌性疼痛、顽固性疼痛等）是一种难以忍受的折磨。1970年，发现内源性脑啡肽、外源性吗啡具有强大的镇痛作用，此后5-羟色胺等神经递质及其相应的受体也被报道参与控制内源性疼痛系统。除非麻醉性镇痛药（如阿司匹林）和麻醉性镇痛药（如吗啡）等用于止痛外，一些非固醇类抗炎药也已开始应用。但是，迄今仍然缺乏疗效显著和可靠、副作用少、长期使用无依赖（成瘾）性的镇痛药物。 

神经病理性疼痛是由中枢或外周神经系统的病理损伤造成的痛觉过敏。神经病理性疼痛又可分为自发性或诱发性疼痛。自发性疼痛常表现为持续的烧灼感，也可为间断的刺痛、撕裂样痛、触电样疼痛。糖尿病、病毒感染、神经创伤以及自身免疫性疾病等都是引起神经病理性疼痛的病因。炎症性疼痛是由外周的创伤、灼烧、低温、免疫系统疾病、感染等因素造成的神经炎症反应所致。诱发性疼痛由机械、温度或化学刺激所引发，常表现为痛觉过敏。外周或中枢敏化被认为是神经病理性疼痛的重要机制。外周敏化是指初级伤害感受性神经元尤其是其外周末梢发生的超敏感化。外周神经敏化时诱导初级神经元可塑性变化，释放多种细胞因子和神经递质，导致神经元功能稳态失衡，引起疼痛的发生。伤害性感受器的辣椒素受体TRPV亚型1（transient receptor potential vanilloid 1，TRPV1），是非选择性阳离子通道型受体。TRPV1主要表达在伤害性感觉神经元，如背根神经节、三叉神经节和脊髓背角。TRPV1由838个氨基酸组成，6个跨膜区，可被辣椒素、H ⁺(pH<6.0)、机械、热刺激(>43℃)、重金属等激活。TRPV1参与炎性痛、内脏痛、热痛觉过敏和癌性疼痛的发生。在完全弗氏佐剂（CFA）致炎的动物模型，TRPVl受体表达量升高。 

脑苷类化合物（cerebrosides）是存在于动物、植物、真菌和海洋生物的一类含量很低而活性很强的内源性物质。它与神经节糖苷（gangliosides）、鞘磷脂（sphingomyelins）共同组成为鞘脂类化合物（sphingolipids）。脑苷和神经节苷脂属于糖脂，鞘磷脂属于磷脂。它们都是由一个极性头（D-半乳糖、葡萄糖、多糖和磷酰胆碱）和两条非极性尾（鞘氨醇和脂肪酰长链）组成。脑苷脂属于糖基鞘脂类，是单糖或低聚糖与神经酰胺末端羟基结合所形成的苷，是细胞膜的结构成分。 

发明内容

本发明的目的是提供一种脑苷脂类化合物在制备镇痛药物中的应用，所述脑苷脂类化合物具有以下通式： 

其中：R₁是-Glu或者-Gal，R₂是-OH或者H，R₃是碳原子数从7至21的饱和或不饱和，直链或支链的烷基、烯基，特别是C₁₃ ，R₄ 是-OH或者H，R₅是碳原子数从2至28的饱和或不饱和，直链或支链的烷基、烯基，特别是C₁₄-C₁₆，虚线代表有或无双键。

脑苷脂A的结构： 

脑苷脂B的结构：

脑苷脂-Ⅰ的结构：

脑苷脂-Ⅱ的结构：

脑苷脂-Ⅲ的结构：

脑苷脂-Ⅳ的结构：

脑苷脂-Ⅴ的结构：

脑苷脂-Ⅵ的结构：

。

本发明提供的镇痛药物的制剂形式为内用剂型或外用剂型，包括注射剂，口服制剂，外用制剂。 

本发明的有益效果在于：脑苷脂类化合物对神经病理性疼痛和炎性疼痛具有显著的镇痛作用。具体的说，用脑苷脂类化合物，如脑苷脂A、脑苷脂B等，通过腹腔注射、灌胃、皮肤涂抹等途径处理正常小鼠、神经病理性疼痛模型小鼠、炎性疼痛模型小鼠、腹腔痛模型小鼠。观察到如下实验结果：（1）脑苷脂能剂量依赖地增加小鼠对热疼痛、机械刺激痛的阈值；（2）脑苷脂能显著地提高神经病理性疼痛和炎性疼痛小鼠对热疼痛、机械刺激痛的阈值——镇痛作用；（3）脑苷脂能缓解醋酸诱导的内脏痛；（4）脑苷脂能被胃肠道吸收、能透过血脑屏障、能被皮肤吸收；（5）脑苷脂抑制辣椒素受体TRPV1的活性，提示脑苷脂通过降低痛觉感受器受体（TRPV1）活性，提高痛觉阈值，达到镇痛的作用。因为腹腔注射、灌胃、皮肤涂抹等途径给药都显示有镇痛作用，提示脑苷脂类化合物可作为内用剂型、外用剂型的镇痛药。 

附图说明

图1是脑苷脂A和脑苷脂B能剂量依赖地抑制TRPV1的活性。 

图2是脑苷脂A腹腔注射能剂量依赖地增加小鼠的热疼痛、机械痛阈值。 

图3 是脑苷脂A灌胃能增加小鼠的热疼痛、机械痛阈值。 

图4A-D是脑苷脂A皮肤涂用能剂量依赖地增加小鼠的热疼痛、机械痛阈值。 

图5A-C是脑苷脂A能显著地改善神经病理性疼痛（机械痛的阈值）。 

图6 脑苷脂A能显著地改善神经病理性疼痛（热疼痛的阈值）。 

图7A-D是脑苷脂A能显著地改善炎性疼痛。 

图8 脑苷脂A能缓解醋酸诱导的内脏痛。 

图9 脑苷脂B腹腔注射能增加小鼠的机械痛阈值。 

图10 脑苷脂B灌胃能增加小鼠的机械痛阈值。 

图11 脑苷脂B皮肤涂用增加小鼠的机械痛阈值。 

图12 脑苷脂B能显著地改善神经病理性疼痛（机械痛的阈值）。 

图13脑苷脂-Ⅰ、脑苷脂-Ⅱ、脑苷脂-Ⅲ、脑苷脂-Ⅳ、脑苷脂-Ⅴ、脑苷脂-Ⅵ灌胃能显著地改善小鼠的神经病理性疼痛。 

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明。以下实施例利用相应的与临床疼痛症状相似的动物模型，以证明脑苷脂A和脑苷脂B的镇痛作用及其机制，以及在制备镇痛药物中的应用。 

实施例1  脑苷脂A和脑苷脂B能剂量依赖地抑制TRPV1的活性 

实验主要材料：ICR小鼠（雄性和雌性各10只），体重25 g～30 g，购自江苏省实验动物中心。

实验操作：取成年ICR小鼠，用颈椎脱臼法处死，断头去除脑组织后，取颅底一对米粒大小的三叉神经节置冰冷的Hank’s平衡盐溶液中洗净，然后将其放入Ⅰ型胶原酶（1.5mg/ml）和胰酶（0.5mg/ml）中，置37℃水浴锅消化15分钟后，用标准细胞外液清洗组织3次，用抛光的巴斯德管轻轻吹打组织，直至神经节分散。200目滤网过滤后置于35mm培养皿中，室温下贴壁1-6小时后，用电生理膜片钳的技术，记录TRPV1的功能活性。空心横棒：脑苷脂A或脑苷脂B的给药时间。 

实验结果：（图-1A）用TRPV1的受体激动剂辣椒素（1 μM）喷射三叉神经节神经细胞，能记录到TRPV1的电流。用脑苷脂A（10μM）进行细胞外灌流，能明显减弱TRPV1电流。洗出脑苷脂A后，再次用辣椒素喷射能记录到脑苷脂A处理前的TRPV1电流。（图-1B）用脑苷脂B（10μM）进行细胞外灌流也能明显减弱三叉神经节神经细胞的TRPV1电流。同样，脑苷脂B洗出后，TRPV1电流能恢复。 

实施例2  脑苷脂A腹腔注射(i.p.)能增加小鼠对热疼痛、机械痛的阈值 

实验主要材料：ICR小鼠（雄性和雌性各20只），体重25 g～30 g，购自江苏省实验动物中心。

实验操作：脑苷脂A具有较难溶于水的特点。因此，先将提取的脑苷脂A溶解于99.5%乙醇中，然后再用生理盐水将母液稀释到治疗所需浓度（以保持乙醇的最终浓度在1%以下），得到药物制剂按照5.0mg/kg的剂量进行腹腔注射。 

疼痛阈值测定：（1）机械性痛觉阈值测定(paw withdrawal threshold, PWT)：用von Frey纤维丝推算50%PWT。50%PWT的测定是指多次机械刺激能够引起50%缩足反应的机械力度，本实验使用一系列的标准化的von Frey纤维采用up-and-down的方法测定小鼠50%缩足阈值。依次用0.02，0.04，0.07，0.16，0.4，0.6，1.0，1.4和2.0g的力度刺激后肢。将一有机玻璃箱(20cm×20cm×20cm)置于金属筛网上，待小鼠在有机玻璃箱中适应30min后，用von Frey纤维丝垂直刺激小鼠后肢足底中部，持续时间≤4s，小鼠出现抬足或舔足行为视为阳性反应，反之为阴性反应。开始使用0.6的力度刺激，若没有阳性反应，则选择其上的一个力度1.0刺激后足；若有阳性反应，则选择其下的一个力度0.4刺激后足，依次类推，在出现一次与前一次不同的反应(有阳性反应至阴性反应或阴性反应至阳性反应)时，继续依次刺激4次，一共6次，即完成50%缩足阈值的测定。若需要使用的力度超过2.0或低于0.02，该阈值则直接极为2.0或0.02，每次刺激间隔30s。在实验中尽量保持一致的测定方法，如力方向，加力速度和纤维丝弯曲程度，保持力的稳定性，力的撤离速度等。另外，对小鼠的反应判断标准尽量一致。50%缩足阈值的计算使用公式：50%缩足阈值=10^log(X)+κδ（X为最后刺激使用的力度；κ为不同刺激方式的系数，在系数表中查找；δ是指各刺激力度相邻距离间距的平均数，此处δ=0. 224）。（2）热痛觉阈值测定：用UGO BASILE 37370型热辐射缩足测试仪测定热痛缩足潜伏期（paw withdrawal latency, PWL）。将有机玻璃箱(20cm×10cm×10cm)置于测痛实验台顶部的石英玻璃板上，待小鼠在有机玻璃箱中适应30分钟后，聚焦红外光源（红光强度在01-99级间可调，本次实验投照强度设定为70）于小鼠后脚足底刺激，小鼠出现抬足或舔足行为视为阳性反应，反之为阴性反应。足底同一点照射3次，每次照射之间间隔10 分钟，取平均值作为热辐射缩足潜伏期。两侧足底照射之间间隔5 分钟。如果照射时间大于15秒小鼠仍无反应则停止照射，以免造成足底组织过度热损伤。热辐射缩足潜伏期为开始照射至动物自动将脚移开红外光源的时间。 

检测机械缩足阈值或热痛觉20分钟后，确定基础阈值水平，然后按每公斤体重5.0 mg剂量进行脑苷脂A腹腔注射，持续8小时检测小鼠机械缩足阈值和热痛觉阈值。 

实验结果：（1）脑苷脂A腹腔注射60分钟后，小鼠的机械性痛觉阈值开始上升，100分钟达到高峰（比基础水平增加38%），并持续3小时以上。给药6小时后，机械性痛觉阈值恢复到基础水平的10%以下（图-2A）。（2）脑苷脂A腹腔注射30分钟后，小鼠的热痛觉阈值开始上升，90分钟达到高峰（比基础水平增加2-3倍），持续6小时以上，给药后6小时恢复到基础水平的10%以下（图-2B）。 

实施例3  脑苷脂A灌胃(o.p.)能增加小鼠的热疼痛、机械痛的阈值 

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：因此，先将提取的脑苷脂A溶解于99.5%乙醇中，然后再用生理盐水将母液稀释到治疗所需浓度（以保持乙醇的最终浓度在1%以下），得到药物制剂进行灌胃。机械缩足阈值检测或热痛觉阈值检测20分钟后，确定基础阈值水平，然后按每公斤体重5.0mg剂量进行脑苷脂A灌胃，然后持续8小时检测小鼠机械缩足阈值和热痛觉阈值。 

实验结果：（1）脑苷脂A灌胃60分钟后，小鼠的机械性痛觉阈值开始增加，180分钟达到高峰（比基础水平增加62%），持续3小时以上，给药后4-5小时恢复到基础水平（图-3A）。（2）脑苷脂A腹腔注射30分钟后，小鼠的热痛觉阈值开始上升，90分钟达到高峰（比基础水平增加2.2倍），持续6小时以上，恢复到基础水平的10%以下（图-3B）。 

实施例4  脑苷脂A皮肤抹用(s.s.)能增加小鼠的热疼痛、机械痛的阈值 

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：（1）处方-1：将单硬脂酸甘油酯、石蜡于水浴上加热熔化，再加入白凡士林、液体石蜡、司盘80，加热熔化后保持温度80℃，准确称取脑苷脂A溶于油相中，完全溶解后加入同温的OP乳化剂、氯甲酚及适量水，边加边不断顺向搅拌至乳白色半固体状乳剂，得到药物制剂进行皮肤抹用。（2）处方-2：将硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、液体石蜡、白凡士林和羊毛脂置蒸发皿中，于水浴上加热至80℃，准确称取脑苷脂A溶于油相中，将等温的三乙醇胺和蒸馏水缓缓倒入，并于水浴上不断搅拌至乳白色半固体状，再在室温下搅拌至近冷凝。（3）处方-3：将羧甲基纤维素钠加水溶胀，待完全溶解后加入甘油、尼泊金乙酯，准确称取脑苷脂A溶于二甲基亚砜中再加入到上述基质中，搅匀即可。（4）实验前24h使用机械脱毛法给小鼠备皮，即用润滑后的刀片刮去其背部皮肤上的毛发，面积4×3cm²。对照组涂抹等量空白佐剂。机械缩足阈值检测20分钟后，确定基础阈值水平，然后按每公斤体重15.0 mg、50.0mg剂量进行脑苷脂A皮肤抹用，然后持续8小时检测小鼠机械缩足阈值和热痛觉阈值。 

实验结果：（1）脑苷脂A（15mg/kg）皮肤抹用后90分钟后，小鼠的机械性痛觉阈值开始增加，150分钟时高于基础水平的22%，持续3小时以上，给药后6小时恢复到基础水平（图-4A）。（2）脑苷脂A（50mg/kg）皮肤抹用后60分钟后，小鼠的机械性痛觉阈值开始增加，90分钟时高于基础水平的130%，持续3小时以上，给药后6小时恢复到基础水平的20%以下（图-4B）。（3）脑苷脂A（15mg/kg）皮肤抹用后30分钟后，小鼠的热痛觉阈值开始增加，90分钟时比基础水平增加2倍，持续3小时以上，恢复到基础水平的5%以下（图-4C）。（4）脑苷脂A（50mg/kg）皮肤抹用后30分钟后，小鼠的热痛觉阈值开始增加，120分钟时比基础水平增加3倍，持续3小时以上，给药后6小时恢复到基础水平的20%以下（图-4D）。 

实施例5   脑苷脂A能剂量依赖地改善小鼠的神经病理性疼痛 

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：近年来国内外广泛应用的物理刺激、化学刺激、神经源性损伤等方法来制备神经病理性疼痛和炎性疼痛的动物模型。SNL神经病理性疼痛动物模型：腹腔注射2%水合氯醛(0.2ml/10g)麻醉小鼠，翻正反射消失后，固定小鼠于俯卧位。采用Kim和chung的方法制作模型：在小鼠背部从L₄-S₁水平钝性分离长约3-5cm的正中皮肤切口，分离一侧椎骨旁肌肉直至第六腰椎横突，暴露并且切除右侧L₅/L₆关节突，部分咬开右侧L₆横突，轻柔暴露分离右侧L₄和L₅脊神经，用4-0丝线结扎L₅背根神经节远端形成作古神经之前的神经根，然后逐层缝合切口，碘伏消毒皮肤，继续饲养。术后动物出现步态异常，但手术侧后肢除了轻度外翻、足趾紧收外，无其他畸形改变。全程手术过程在无菌条件下进行。 

SNL模型制备后第5-10天，确定模型小鼠的机械缩足阈值和热痛觉阈值水平，然后按每公斤体重0.1mg、0.5 mg、1.0mg、5.0mg剂量进行脑苷脂A腹腔注射，持续8小时检测小鼠机械缩足阈值和热痛觉阈值。 

实验结果：（1）SNL模型小鼠的机械缩足阈值与对照组小鼠相比降低了80%（图-5A）；（2）脑苷脂A（5 mg/kg）处理能改善机械缩足阈值到对照组水平的90%，持续3小时以上（图-5B）；（3）脑苷脂A能剂量依赖地改善小鼠的神经病理性疼痛（图-5C）。（4）SNL模型小鼠的热痛觉阈值水平与对照组小鼠相比降低了70%（图-6A）：（5）脑苷脂A（5 mg/kg）的处理几乎完全恢复SNL模型小鼠的热痛觉阈值水平，持续5小时以上（图-6B）。 

实施例6  脑苷脂A能改善小鼠的炎性疼痛 

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：CFA致炎症性疼痛动物模型：75%酒精消毒将左侧足底周围皮肤消毒，通过在小鼠右侧后足足底皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund’s Adjuvant, CFA)（原液，10μl）制作CFA足底炎性疼痛模型。拔针后用干棉球轻压片刻，避免药液沿针孔外衣。小鼠通常在数分钟内恢复正常。CFA引起的炎症疼痛是一种广泛采用的慢性疼痛模型，CFA炎症动物表现出：足部红肿、热和机械痛觉过敏。为保证实验平行性，手术由一人操作，术毕将小鼠放入鼠龙，于温暖、安静环境中自由喂养。 

（1）CFA注射后60分钟，持续8小时检测CFA炎症疼痛模型小鼠的机械缩足阈值和热痛觉阈值。（2）CFA注射后120分钟，按每公斤体重5.0mg剂量进行脑苷脂A腹腔注射，然后持续6小时检测小鼠机械缩足阈值和热痛觉阈值。（3）CFA注射后24小时，持续8小时检测CFA模型小鼠的机械缩足阈值和热痛觉阈值。（4）CFA注射后24小时，按每公斤体重5.0mg剂量进行脑苷脂A腹腔注射，然后持续6小时检测小鼠机械缩足阈值和热痛觉阈值。 

实验结果：（1）CFA炎症疼痛模型小鼠的机械缩足阈值与对照组小鼠相比降低了80%（图-7A）；（2）CFA造模后60分钟，脑苷脂A（5 mg/kg）能改善小鼠的机械缩足阈值到对照组水平的60%（图-7B），持续时间约3小时。（3）CFA造模后24小时，脑苷脂A（5 mg/kg）能改善小鼠的机械缩足阈值到对照组水平的50%（图-7B），持续时间约3小时。（4）CFA模型小鼠的热痛阈值与对照组小鼠相比降低了70%（图-7C）；（5）CFA造模后60分钟，脑苷脂A（5 mg/kg）明显改善小鼠的热痛阈值，120分钟时达到正常水平，持续时间约3小时（图-7D）。（6）CFA造模后24小时，脑苷脂A（5 mg/kg）能明显改善小鼠的热痛阈值，120分钟时达到高峰，基本恢复到正常水平，持续时间约3小时（图-7D）。 

实施例7   脑苷脂A能缓解醋酸所致的内脏痛 

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：醋酸扭体内脏痛动物模型：通过小鼠腹腔注射0.7%醋酸（0.1ml/10g）制作醋酸扭体内脏痛模型。醋酸能够诱发广泛的腹腔炎造成腹壁肌紧张，进而导致伤害性反应。扭体反应模拟腹腔炎症引起的腹痛症状，是最广泛的内脏痛模型之一。 

按每公斤体重5.0mg剂量进行脑苷脂A腹腔注射1小鼠后，腹腔注射0.7%醋酸，记录给予醋酸15分钟内小鼠的扭体次数作为疼痛标准。 

实验结果：腹腔注射醋酸能引起小鼠的内脏痛，脑苷脂A（5 mg/kg）腹腔注射能30%减轻醋酸引起的内脏痛（图-8。） 

实施例8   脑苷脂B腹腔注射(i.p.)能增加小鼠对机械痛的阈值

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：脑苷脂B具有较难溶于水的特点。因此，先将提取的脑苷脂B溶解于99.5%乙醇中，然后再用生理盐水将母液稀释到治疗所需浓度（以保持乙醇的最终浓度在1%以下），得到药物制剂按照5.0mg/kg的剂量进行腹腔注射。 

疼痛阈值测定：检测机械缩足阈值20分钟后，确定基础阈值水平，然后按每公斤体重5.0 mg剂量进行脑苷脂B腹腔注射，持续8小时检测小鼠机械缩足阈值。 

实验结果：脑苷脂B腹腔注射60分钟后，小鼠的机械性痛觉阈值开始上升，90分钟达到高峰（比基础水平增加40%），并持续3.5小时以上。给药5-6小时后，机械性痛觉阈值恢复到基础水平的10%以下（图-9）。 

实施例9   脑苷脂B灌胃(o.p.)能增加小鼠的机械痛的阈值 

实验主要材料：同实验2。

实验操作：因此，先将提取的脑苷脂B溶解于99.5%乙醇中，然后再用生理盐水将母液稀释到治疗所需浓度（以保持乙醇的最终浓度在1%以下），得到药物制剂进行灌胃。机械缩足阈值检测或热痛觉阈值检测20分钟后，确定基础阈值水平，然后按每公斤体重5.0mg剂量进行脑苷脂A灌胃，然后持续8小时检测小鼠机械缩足阈值。 

实验结果：脑苷脂B灌胃90分钟后，小鼠的机械性痛觉阈值开始增加，120分钟达到高峰（比基础水平增加0.5倍），持续3小时以上，给药后6小时恢复到基础水平（图-10）。 

实施例10   脑苷脂B皮肤抹用(s.s.)能增加小鼠的机械痛的阈值 

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：（1）将羧甲基纤维素钠加水溶胀，待完全溶解后加入甘油、尼泊金乙酯，准确称取脑苷脂B溶于二甲基亚砜中再加入到上述基质中，搅匀即可。（2）实验前24h使用机械脱毛法给小鼠备皮，即用润滑后的刀片刮去其背部皮肤上的毛发，面积4×3cm²。对照组涂抹等量空白佐剂。机械缩足阈值检测20分钟后，确定基础阈值水平，然后按每公斤体重15.0 mg剂量进行脑苷脂B皮肤抹用，然后持续8小时检测小鼠机械缩足阈值。 

实验结果：脑苷脂B（15mg/kg）皮肤抹用后90分钟，小鼠的机械性痛觉阈值开始增加，120分钟时高于基础水平的40%，持续3小时以上，给药后6小时恢复到基础水平（图-11）。 

实施例11   脑苷脂B能改善小鼠的神经病理性疼痛 

实验主要材料：同实施例2。

实验操作：SNL神经病理性疼痛动物模型：同实施例5。 

SNL模型制备后第5-10天，确定模型小鼠的机械缩足阈值水平，然后按每公斤体重5.0mg剂量进行脑苷脂B腹腔注射，持续8小时检测小鼠机械缩足阈值。 

实验结果：脑苷脂B（5 mg/kg）处理能改善机械缩足阈值到对照组水平的90%，持续3小时以上（图-12）。 

实施例12   高剂量脑苷脂A和脑苷脂B处理没有引起明显的毒副作用 

小鼠接受脑苷脂A（50 mg/kg）或脑苷脂B（50 mg/kg）腹腔注射后，与注射生理盐水的对照组相比，呼吸（50～60次/分钟）、心率（305～400次/分钟）、平均动脉压（90～110 mmHg）均未出现明显改变，也没有发生昏睡、狂躁等行为异常。

实施例13  脑苷脂-Ⅰ、脑苷脂-Ⅱ、脑苷脂-Ⅲ、脑苷脂-Ⅳ、脑苷脂-Ⅴ、脑苷脂-Ⅵ能显著地改善小鼠的神经病理性疼痛。 

实验操作：SNL神经病理性疼痛动物模型：同实施例5。 

SNL模型制备后第5-10天，确定模型小鼠的机械缩足阈值水平，然后按每公斤体重5.0mg剂量进行脑苷脂-Ⅰ、脑苷脂-Ⅱ、脑苷脂-Ⅲ、脑苷脂-Ⅳ、脑苷脂-Ⅴ、脑苷脂-Ⅵ灌胃给药，持续8小时检测小鼠机械缩足阈值。 

[0066] 实验结果：脑苷脂-Ⅰ（图-13A）、脑苷脂-Ⅱ（图-13B）、脑苷脂-Ⅲ（图-13C）、脑苷脂-Ⅳ（图-13D）、脑苷脂-Ⅴ（图-13E）、脑苷脂-Ⅵ灌胃给药能持续3-4小时以上增加SNL神经病理性疼痛小鼠的机械缩足阈值，缓解小鼠的疼痛行为。 

Claims (3)

1.一种脑苷脂类化合物在制备镇痛药物中的应用，所述的脑苷脂类化合物通式为： 

其中：R₁是-Glu或者-Gal，R₂是-OH或者H，R₃是碳原子数从7至21的饱和或不饱和，直链或支链的烷基、烯基，特别是C₁₃，R₄是-OH或者H，R₅是碳原子数从2至28的饱和或不饱和，直链或支链的烷基、烯基，特别是C₁₄-C₁₆，虚线代表有或无双键。 

2.权利要求1所述的脑苷脂类化合物，选自： 

脑苷脂A： 

脑苷脂B： 

脑苷脂-Ⅰ的结构： 

脑苷脂-Ⅱ的结构： 

脑苷脂-Ⅲ的结构： 

脑苷脂-Ⅳ的结构： 

脑苷脂-Ⅴ的结构： 

脑苷脂-Ⅵ的结构： 

3.根据权利要求1所述的脑苷脂类化合物在制备镇痛药物中的应用，其特征在于，所述药物的制剂形式为内用剂型或外用剂型。 

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