CN103417544B - 甲氨叶酸复方制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种甲氨叶酸复方制剂及其制备方法和用途。所述甲氨叶酸复方制剂包括(a)甲氨蝶呤部分和(b)叶酸部分，其中：所述甲氨蝶呤部分包含：(a1)甲氨蝶呤；(a2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；所述叶酸部分包含：(b1)叶酸；(b2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；其中，(a1)与(b1)的重量比为1：1‑4:1；优选2:1。本发明还提供了制备所述甲氨叶酸复方制剂的方法和在治疗自身免疫性疾病中的用途。

Description

甲氨叶酸复方制剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种用于治疗自身免疫性疾病的甲氨叶酸复方制剂及其制备方法。

背景技术

甲氨蝶呤（Methotrexate,MTX）与二氢叶酸还原酶的底物叶酸结构十分相似，它与二氢叶酸还原酶的亲和力比二氢叶酸与该酶的亲和力高100000倍，故竞争性地抑制二氢叶酸还原酶，阻止二氢叶酸还原为活泼的四氢叶酸，耗竭胸腺嘧啶和嘌呤核苷酸合成的原料，抑制DNA和RNA的合成，从而抑制细胞免疫和体液免疫，被较多地应用于自身免疫性疾病如类风湿关节炎、银屑病等的治疗。但遗憾的是，用该药治疗患者涉及具有显著风险的严重副作用，如胃肠道反应、口腔炎、骨髓抑制、肝功能损害等。

叶酸是由蝶啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸残基组成的一种水溶性B族维生素，为机体细胞生长和繁殖所必需的物质，帮助蛋白质的代谢。在服用甲氨蝶呤一段时间后补充小剂量叶酸不但不降低甲氨蝶呤的疗效，还会减轻甲氨蝶呤所致的肝损害、减少胃肠不耐受及口腔炎的发生率，提高治疗的依从性。补充叶酸能拮抗甲氨蝶呤治疗所引起的血浆同型半胱氨酸水平升高，从而降低心血管病的风险。本发明甲氨蝶呤复方制剂中的叶酸用来降低甲氨蝶呤的毒副作用，同时不减低甲氨蝶呤的治疗效应。图1显示了甲氨蝶呤与叶酸血浆与红细胞内浓度随时间变化情况。

在颁布的公开甲氨蝶呤用法的许多专利中，多个专利例如CN101330909、CN102014919、CN101031305、CN101027049、CN101926860、US20020037899、CN102014919等，均公开了用甲氨蝶呤用于治疗自身免疫性疾病的治疗，但几乎所有有关专利也提到了甲氨蝶呤的副作用。在WO2005097120中有关于叶酸(Folic acid,FA)能够降低甲氨蝶呤副作用的报道，建议叶酸的剂量为5mg至50mg，并制备了普通片，用于降低因服用甲氨蝶呤而造成的对肺的损伤。而美国专利US20020037899提到甲氨蝶呤与叶酸应该分时服用，否则叶酸会影响甲氨蝶呤的疗效，并参考US5051263和US5879714两项专利制备了叶酸缓释颗粒，与甲氨蝶呤一起压片或灌制胶囊。而叶酸缓释颗粒在释放介质中会缓慢非恒速释放叶酸，在小于甲氨蝶呤的Tmax的时间内会影响甲氨蝶呤的疗效。专利CN102014919将甲氨蝶呤和甲氨蝶呤毒性减少佐剂（包括叶酸）联合给予患者，“联合”表示在同时至给予甲氨蝶呤前或后至多5小时或更长例如10小时、15小时、20小时或更长时间点给予一定量的甲氨蝶呤毒性减少佐剂。可见将甲氨蝶呤和叶酸组合物服用存在顺应性差，易误服、漏服等缺点。

因此，本领域迫切需要提供一种可以有效克服上述缺点的甲氨蝶呤制剂。

发明内容

本发明的目的正是提供一种施用后能有效改善甲氨蝶呤副作用的甲氨叶酸复方制剂。

本发明的第一方面，提供了一种甲氨叶酸复方制剂，它包括(a)甲氨蝶呤部分和(b)叶酸部分，其中：

所述甲氨蝶呤部分包含：

(a1)甲氨蝶呤；

(a2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；

所述叶酸部分包含：

(b1)叶酸；

(b2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；

其中，(a1)与(b1)的重量比为1：1-4:1；优选2:1。

在另一优选例中，(a)甲氨蝶呤部分占所述复方制剂总重量的10-90wt％，(b)叶酸部分占所述复方制剂总重量的10-90wt％，(a)与(b)的重量之和为100wt％。

在另一优选例中，所述甲氨蝶呤部分是甲氨蝶呤微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层和保护层；所述叶酸部分是叶酸微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层，隔离层和功能层；

所述药物层含有甲氨蝶呤或叶酸，和粘合剂；

叶酸微丸的功能层含有增塑剂、抗粘剂和肠溶包衣材料。

在另一优选例中，肠溶包衣材料与叶酸的重量比为1：1-29.8:1；更优选1.3：1-12.2:1。

在另一优选例中，所述功能层中肠溶材料是肠溶型丙烯酸树脂包衣材料；更优选，所述肠溶型丙烯酸树脂包衣材料选自：Eudragit L 30D-55、EudragitL 100-55、EudragitL100、Eudragit S100、Kollicoat MAE 30DP、Kollicoat MAE 100P或它们的组合。

在另一优选例中，所述复方制剂形式选自片剂或胶囊。

在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的甲氨叶酸复方制剂的制备方法，所述方法包括步骤：

(i)提供甲氨蝶呤部分物料和叶酸部分物料，其中

所述甲氨蝶呤部分物料包含：(a1)甲氨蝶呤；；(a2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；

所述叶酸部分物料包含：(b1)叶酸；(b2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；和

(ii)将所述甲氨蝶呤部分物料和所述叶酸部分物料制成复方制剂。

在另一优选例中，所述甲氨蝶呤部分是甲氨蝶呤微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层和保护层；所述叶酸部分是叶酸微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层，隔离层和功能层；

所述甲氨蝶呤微丸的制备包括下述步骤：采用底线喷流化床或切线喷流化床，依次在空白丸芯上包覆药物层、保护层；

所述叶酸微丸的制备包括下述步骤：采用底线喷流化床或切线喷流化床，依次在空白丸芯上包覆药物层、隔离层、功能层。

在另一优选例中，叶酸微丸的功能层外包覆甲氨蝶呤药物层和保护层，将甲氨蝶呤和叶酸制成同一微丸。

在另一优选例中，将甲氨蝶呤微丸和叶酸微丸混合，灌装胶囊或压片或将同时载有甲氨蝶呤和叶酸的微丸灌装胶囊或压片。

在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的甲氨叶酸复方制剂的用途，用于制备治疗自身免疫性疾病的药物。

据此，本发明提供了一种可以有效克服现有技术中存在的缺点的甲氨蝶呤制剂。

附图说明

图1是甲氨蝶呤与叶酸血浆与红细胞内浓度随时间变化情况。

图2是甲氨蝶呤单药及复方对与大鼠佐剂关节炎治疗的效果。

图3是甲氨叶酸复方制剂的释放度曲线。

具体实施方式

本发明人经过大量摸索和深入研究，发现使用适当的包衣材料可以将甲氨蝶呤和叶酸置于同一复方制剂中，从而增加服用者的顺应性。在此基础上完成了本发明。

具体而言，本发明人发明了甲氨蝶呤的复方制剂，其同时含有一个甲氨蝶呤部分和一个叶酸部分。为了使给药后叶酸能在甲氨蝶呤达到最大血药浓度后再进入血液循环，以使最大限度发挥甲氨蝶呤的药效的同时能有效改善其副作用，发明人在叶酸部分中加入优选的肠溶型包衣材料，所述优选的肠溶型包衣材料是肠溶型丙烯酸树脂包衣材料，在具备这些特性的丙烯酸树脂中，发明人优选Eudragit L30D-55、Eudragit L 100-55、Eudragit L100、Eudragit S100、Kollicoat MAE30DP、Kollicoat MAE 100P或它们的组合。

本发明的甲氨蝶呤复方制剂服用后既可迅速达到所需血药浓度，又可在较长时间内保持有效血药浓度，一周只需一次给药，极大地提高了药物的效力以及患者的顺应性。

术语说明

本发明中，术语“微丸”是指一种含有活性成分的小而圆的球状物，球径小于2.5毫米；所述活性成分是甲氨蝶呤或叶酸。

本发明中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

本发明中，术语“药学上可接受的”成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。

本发明中，术语“有效量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。因此，预先指定准确的有效量是没用的。然而，对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。

本发明中，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，其本身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体，且给药后或给予保健品后没有过分的毒性。在《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991年)中可找到关于药学上可接受的载体的充分讨论。

甲氨蝶呤部分

本发明中，术语“甲氨蝶呤部分”是指含有甲氨蝶呤的药物速释部分，其可在胃液中迅速释放出甲氨蝶呤，从而达到有效血药浓度。

在本发明实施方式中，甲氨蝶呤部分中的甲氨蝶呤含量为2.9-26.7wt％，优选为5.7-15.4wt％。甲氨蝶呤占所述复方制剂总重量的10-90wt%，优选30-60.5wt％。

本发明的甲氨叶酸复方制剂的甲氨蝶呤部分可以是甲氨蝶呤微丸，其中含有空白丸芯、药物层和保护层。

空白丸芯是药用空白丸芯，选自蔗糖丸芯、淀粉丸芯和微晶纤维素芯中的一种或多种。

药物层包括药物活性成分甲氨蝶呤、粘合剂和适宜的溶剂。所述的粘合剂是指本领域中适宜将药物活性成分配成上药液，并有助于药物活性成分粘附、包覆于空白丸芯上的物质，本发明中可选用药剂领域常规的粘合剂如羟丙基甲基纤维素（HPMC）、羟丙基纤维素（HPC）或聚乙烯吡咯烷酮（PVP），较佳地为PVP。其中，若粘合剂的含量太少，则上药率低；反之，如含量太高，则上药悬浮液粘度太高从而导致上药不均。以甲氨蝶呤微丸的总重量计，含有的粘合剂为2.2-33.4wt%，优选4.3-19.3wt％。适宜的溶剂可选用有机溶剂或水，由于甲氨蝶呤在有机溶剂和水中均不溶解，故选择水为适宜的溶剂。

保护层包括保护层材料和适宜的溶剂。保护层使甲氨蝶呤微丸上的药物与外界隔离，从而达到防潮、隔绝空气氧化、增强药物稳定性的目的。保护层材料较佳为HPMC或HPC。所述的保护层的含量太少，则保护效果差；反之，则影响释药的速度。以甲氨蝶呤微丸的总重量计，含有的保护层材料为2-10wt%，优选4-8wt％。本发明的适宜的溶剂可选用有机溶剂或水，由于HPMC或HPC均在水中溶解，故选择水为适宜的溶剂。

在胃液中，所述甲氨蝶呤部分优选在5分钟-30分钟内释放甲氨蝶呤部分中30%-100%的甲氨蝶呤，更优选在10分钟-15分钟内释放甲氨蝶呤部分中50%-90%的甲氨蝶呤。

叶酸部分

本发明中，术语“叶酸部分”是指含有叶酸的药物延迟释放部分，其在胃内不释药且可在小肠内延迟一到两小时，而后在一到两小时内完全释药。

在本发明实施方式中，叶酸部分中的叶酸含量为1.7-14.6wt％，优选为4.1-7.9wt％。叶酸占所述复方制剂总重量的10-90wt%，优选40-60wt％。

本发明的甲氨叶酸复方制剂的叶酸部分可以是叶酸微丸，其中含有空白丸芯，药物层，隔离层和功能层。

空白丸芯是药用空白丸芯，选自蔗糖丸芯、淀粉丸芯和微晶纤维素芯中的一种或多种。

药物层包括药物活性成分叶酸、粘合剂和适宜的溶剂。所述的粘合剂是指本领域中适宜将药物活性成分配成上药液，并有助于药物活性成分粘附、包覆于空白丸芯上的物质，本发明中可选用药剂领域常规的粘合剂如HPMC、HPC或PVP，较佳地为PVP。本发明中可选用本领域常用的各种规格的PVP作为粘合剂。其中，若粘合剂的含量太少,则上药率低；反之，如含量太高，则上药悬浮液粘度太高从而导致上药不均。以叶酸微丸的总重量计，含有的粘合剂为1.3-18.3wt%，优选3.3-9.5wt％。适宜的溶剂可选用有机溶剂或水，由于叶酸在有机溶剂和水中均不溶解，故选择水为适宜的溶剂。

隔离层包括隔离层材料和适宜的溶剂。隔离层使微丸上的药物与功能层隔离，以避免药物在进一步包衣过程中产生的药物迁移，也可以降低载药微丸的脆碎度。本发明的隔离层材料较佳为HPMC或HPC。所述的隔离层的含量太少，则隔离效果差；反之，则影响释药的速度。以叶酸微丸的总重量计，含有的隔离层材料为1.7-9.2%，优选3.3-6.7wt％。适宜的溶剂可选用有机溶剂或水，由于HPMC或HPC均可在水中溶解，故选择水为适宜的溶剂。

功能层包括肠溶型包衣材料、增塑剂、抗粘剂和适宜的溶剂，还可包含色淀的其他药用辅料。所述的抗粘剂可为本领域常用抗粘剂，优选滑石粉和/或单硬脂酸甘油酯。所述的增塑剂可为本领域常用增塑剂，较佳的选自丙二醇、聚乙二醇、癸二酸二丁酯和柠檬酸三乙酯中的一种或多种，更佳的是丙二醇或柠檬酸三乙酯。适宜的溶剂可选用有机溶剂或水，较佳的为乙醇和水。

本发明复方制剂叶酸部分中的肠溶型包衣材料为本领域常用肠溶型包衣材料，可选自例如但不限于Eudragit L 30D-55、Eudragit L 100-55、EudragitL100、EudragitS100、Kollicoat MAE 30DP、Kollicoat MAE 100P中的一种或一种以上的组合。

以叶酸微丸的总重量计，含有的肠溶型包衣材料为10-50wt%，优选15-35wt％；

叶酸部分中所述肠溶材料与叶酸的重量比为1:1-29.8:1，优选1.3：1-12.2:1。

所述叶酸部分在体内优选在第3-5小时内缓慢平稳释放5%-100%的叶酸，更优选在4-5小时(同前一个时间段相同。以下同)小时内释放10%-85%的叶酸。

复方制剂

术语“复方制剂”、“本发明的复方制剂”或“甲氨叶酸复方制剂”可互换使用，均指包含了本发明的甲氨蝶呤部分和叶酸部分的制剂，其具有在体内胃液中溶解释放甲氨蝶呤，从而达到有效血药浓度，而随后在肠内时滞一到两小时后释放叶酸，以维持平稳的甲氨蝶呤有效血药浓度，并减少其副作用的效果。

本发明的复方制剂，可以是适宜口服的任何可达到本发明目的的剂型，如：片剂、胶囊剂等，优选的是胶囊剂。每剂中可含有甲氨蝶呤2.5-30mg，叶酸1-10mg，所述每剂指每粒胶囊或每片。

本发明的甲氨蝶呤复方制剂中甲氨蝶呤与叶酸的重量比为1-4:1；优选2:1。

本发明的复方制剂可以是将甲氨蝶呤微丸与叶酸微丸混合填装胶囊或与一种或多种乳糖、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、滑石粉、硬脂酸镁和其他赋形剂、稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、矫味剂等压片，所得。

在本发明中，还可在所制的叶酸微丸的功能层外包甲氨蝶呤微丸的药物层和保护层，然后直接填装胶囊或与一种或多种乳糖、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、滑石粉、硬脂酸镁和其他赋形剂、稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、矫味剂等压片，得到本发明的复方制剂。

制备工艺

甲氨叶酸复方制剂中甲氨蝶呤部分和叶酸部分都可以制成药用微丸。药用微丸的制备方法主要包括两个步骤：载药和包衣。载药是将药物微粉直接涂敷在圆形的芯粒外表（也称上药）或者采用不同技术将药物与辅料混匀后直接制成圆形微丸。本发明的载药的方法主要有：1.丸芯上药法，2.直接成丸法。

本发明中，当采用丸芯上药法制备甲氨蝶呤微丸和叶酸微丸时，甲氨蝶呤微丸从内到外依次包括空白丸芯，药物层和保护层；叶酸微丸从内到外依次包括空白丸芯，药物层，隔离层和功能层。其中甲氨蝶呤微丸和叶酸微丸所采用的空白丸芯为蔗糖丸芯、淀粉丸芯和微晶纤维素芯中的一种或多种。

所述的药物层的包覆方法为：将药物活性成分和药物层中的粘合剂与水和/或有机溶剂配成上药液，将上药液喷于所述空白丸芯的表面上形成药物层；所述的溶剂较佳的为水；

所述的隔离层或保护层的包覆方法为：将所述隔离层或保护层材料溶于水和/或有机溶剂中配成溶液，将该溶液喷于所述药物层的表面形成隔离层或保护层；所述的溶剂较佳的为水；

所述的功能层的包覆方法为：将所述功能层中的肠溶材料、抗粘剂和增塑剂溶于水或有机溶剂中配成包衣液，将该包衣液喷于所述隔离层的表面形成功能层。

在本发明提供的一个直接成丸法制备复方制剂的实施方式中，可将甲氨蝶呤或叶酸与微丸的稀释剂均匀混合，加入适量粘合剂，采用挤出滚圆法制备含药丸芯。稀释剂主要有淀粉和微晶纤维素（MCC），较佳的是MCC，可选用本领域常用的各种规格的MCC做稀释剂。粘合剂可选用药剂领域常规的粘合剂，如水、HPMC、PVP等溶液。接下来可按丸芯上药法中包保护层、药物层和功能层的方法依次在甲氨蝶呤含药丸芯外包保护层，在叶酸含药丸芯外包隔离层和功能层；也可在叶酸微丸的功能层外包甲氨蝶呤药物层和保护层。将制得微丸直接填装胶囊或与一种或多种乳糖、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、滑石粉、硬脂酸镁和其他赋形剂、稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、矫味剂等压片，即得本发明所述的复方制剂。

本发明的甲氨蝶呤复方制剂的优点在于：

1.首次制备了甲氨叶酸复方制剂；

2.本发明提供的复方制剂，克服了组合物服用顺应性差，易误服、漏服等缺点，且叶酸部分是在小肠内时滞一到两小时后释药，开始释药的时间大于甲氨蝶呤的Tmax,故不会对甲氨蝶呤的疗效产生影响，且能减轻甲氨蝶呤的不良反应。

3.制备所述甲氨叶酸复方制剂的方法简便，原料易于获得，成本较低，适于大规模生产。

实施例

以下通过实施例对本发明进行进一步的描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制备厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

1.1甲氨蝶呤微丸处方（10000粒）

(0.9-1.12mm)蔗糖丸芯1160.5g

甲氨蝶呤36.2g

PVP S630 27.5g

HPMC 24.9g

水2049ml

制备工艺：将27.5g PVP S630与36.2g甲氨蝶呤加入1500ml水中制成上药液；将24.9gHPMC加入549ml水中制成保护层液体。将1160.5g平均粒径为0.9-1.12mm蔗糖空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷上药液，保护层液体，即得甲氨蝶呤微丸（上药液和保护层液体在整个上药、包衣过程中持续搅拌）。本过程均采用流化床底喷工艺。

1.2叶酸微丸处方（10000粒）

(0.9-1.12mm)蔗糖丸芯105.3g

叶酸9.1g

PVP S630 1.8g

HPMC 2.3g

Eudragit S 100 11.1g

Eudragit L 100 2.8g

柠檬酸三乙酯82.1g

滑石粉4.3g

水186ml

95%乙醇268ml

制备工艺：将1.8g PVP S630与9.1g叶酸加入75ml水中制成上药液；将2.3gHPMC加入111ml水中制成隔离层液体；Eudragit S 100和Eudragit L 100醇溶液的配制：将11.1gEudragit S 100、2.8 Eudragit L 100溶于适量乙醇中、82.1g柠檬酸三乙酯和4.3g滑石粉加入余下95%乙醇中，将含有增塑剂和抗粘剂的溶液倒入尤特奇溶液中，制成功能层包衣液。将105.3g平均粒径为0.9-1.12mm蔗糖空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷上药液，隔离层液，功能层液即得叶酸微丸（上药液、隔离层和功能层液体在整个上药、包衣过程中持续搅拌）。本过程均采用流化床底喷工艺。

最后，将甲氨蝶呤微丸与叶酸微丸均匀混合，一起填装硬胶囊，即得本发明所述的复方制剂。

实施例2

2.1甲氨蝶呤微丸处方（10000粒）

0.8-1.0mm淀粉丸芯99.6g

甲氨蝶呤21.8g

PVP VA64 6.8g

HPC 14.2g

水85ml

制备工艺：将6.8g PVP VA640与21.8g甲氨蝶呤加入40ml水中制成上药液；将14.2gHPC加入45ml水中制成保护层液体。将99.6g平均粒径为0.8-1.0mm淀粉空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷上药液，保护层液体，即得甲氨蝶呤微丸（上药液和保护层液体在整个上药、包衣过程中持续搅拌）。本过程均采用流化床底喷工艺。

同实施例1.1

2.2叶酸微丸处方（10000粒）

0.6-0.8mm淀粉丸芯607.5g

叶酸21.8g

PVP VA64 25.7g

HPC 117.9g

Eudragit S 100 157.3g

Eudragit L 100-55 98.9g

NaOH溶液（1mol/L/4%）32.9g

氨水（1mol/L/1.7%）115.5g

丙二醇11.8g

聚乙二醇138.6g

单硬脂酸甘油酯98.9g

水4441ml

制备工艺：上药液与隔离层的配制方法同实施例1.2。功能层的配制方法为：（1）Eudragit L 100-55水分散体包衣液的配制：在烧杯中加入272ml水，在搅拌下分次撒入98.9g Eudragit L 100-55。在搅拌下慢慢加入32.9g氢氧化钠溶液，继续搅拌30min，得水分散体；再将27.2g单硬脂酸甘油酯、11.8g丙二醇加入636ml水中，搅拌10min，将此混悬液加入水分散体中，继续搅拌。（2）EudragitS 100水分散体包衣液的配制：在烧杯中加入636ml水，再搅拌下分次撒入157.3gEudragit S 100，滴加1N氨水，搅拌60min，加入138.6g聚乙二醇，将71.7g单硬脂酸甘油酯倒入3805ml水中，再将单硬脂酸甘油酯溶液倒入尤特奇溶液中，混匀。将（1）（2）混匀得功能层包衣液。将607.5g平均粒径为0.6-0.8mm淀粉空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷上药液，隔离层和功能层液体，即得叶酸微丸（制备过程中所有液体持续搅拌）。本过程均采用流化床底喷工艺。

最后，将甲氨蝶呤微丸与叶酸微丸均匀混合，一起填装硬胶囊，即得本发明所述的复方制剂。

实施例3

微丸处方（10000粒）

0.15-0.3mm微晶纤维素丸芯800g

甲氨蝶呤300g

叶酸100g

HPC 480g

HPMC278g

Eudragit L 30D-55 1652.4g

单硬脂酸甘油酯99.1g

柠檬酸三乙酯99.1g

水13755ml

制备工艺：将120g HPC与100g叶酸加入2400ml水中制成叶酸上药液；将81.6gHPMC加入734.4ml水中制成隔离层液体；将360g HPC与300g甲氨蝶呤加入7200ml水中制成甲氨蝶呤上药液；将196.4gHPMC加入1768ml水中制成保护层液体；将1652.4g Eudragit L 30D-55用1652.4ml水中，边搅拌变加入99.1g柠檬酸三乙酯和99.1g单硬脂酸甘油酯制成功能层包衣液。将800g平均粒径为0.15-0.3mm微晶纤维素空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷叶酸上药液，隔离层液、功能层包衣液、甲氨蝶呤上药液和保护层液，即得微丸（制备过程中所有液体持续搅拌）。本过程均采用流化床切喷工艺。

最后，将制得微丸与乳糖、淀粉、羧甲基淀粉钠、滑石粉等压片，即得本发明所述的复方制剂。

实施例4

4.1甲氨蝶呤微丸处方（10000粒）

0.6-0.8mm蔗糖丸芯403.4g

甲氨蝶呤300g

HPMC 375.3g

HPC 44.9g

95%乙醇3100ml

制备工艺：将375.3gHPMC与300g甲氨蝶呤加入2500ml95%乙醇中制成上药液；将44.9gHPC加入600ml95%乙醇中制成保护层液体。将403.4g平均粒径为0.6-0.8mm蔗糖空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷上药液，保护层液体，即得甲氨蝶呤微丸（上药液和保护层液体在整个上药、包衣过程中持续搅拌）。本过程均采用流化床底喷工艺。

4.2叶酸微丸处方（10000粒）

0.4-0.6mm蔗糖丸芯182.2g

叶酸100g

HPMC 125.3g

HPC 36.6g

Kollicoat MAE 30DP 684.9g

丙二醇12.3g

滑石粉20g

钛白粉3g

水2643.7ml

制备工艺：将125.3gHPMC与50g叶酸加入1200ml水中制成叶酸上药液；将36.6gHPC加入366ml水中制成隔离层液体；将684.9g Kollicoat MAE 30DP用1077.7ml水中，边搅拌变加入12.3g丙二醇、20g滑石粉和3g钛白粉制成功能层包衣液。将182.2g平均粒径为0.4-0.6mm蔗糖空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷叶酸上药液，隔离层液和功能层包衣液即得叶酸微丸（制备过程中所有液体持续搅拌）。本过程均采用流化床切喷工艺。

最后，将制得的两种微丸与微晶纤维素、淀粉、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁等压片，即得本发明所述的复方制剂。

实施例5

5.1甲氨蝶呤微丸处方（10000粒）

0.6-0.8mm蔗糖丸芯750.1g

甲氨蝶呤35g

HPC 54.8g

HPMC 73.0g

水2510ml

制备工艺：将54.8gHPC与35g甲氨蝶呤加入2000ml水中制成上药液；将73.0gHPMC加入510ml水中制成保护层液体。将750.1g平均粒径为0.6-0.8mm蔗糖空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷上药液，保护层液体，即得甲氨蝶呤微丸（上药液和保护层液体在整个上药、包衣过程中持续搅拌）。本过程均采用流化床切喷工艺。

5.2叶酸微丸处方（10000粒）

0.6-0.8mm蔗糖丸芯150.9g

叶酸10g

HPC 17.9g

HPMC 29.8g

Kollicoat MAE 100P 298g

丙二醇35.8g

滑石粉53.6g

水2468.8ml

制备工艺：将17.9gHPC与10g叶酸加入2000ml水中制成叶酸上药液；将29.8gHPMC加入408ml水中制成隔离层液体；将298g Kollicoat MAE 100P用2403ml水中，边搅拌变加入35.8g丙二醇和53.6g滑石粉制成功能层包衣液。将150.9g平均粒径为0.6-0.8mm蔗糖空白丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷叶酸上药液，隔离层液和功能层包衣液即得叶酸微丸（制备过程中所有液体持续搅拌）。本过程均采用流化床切喷工艺。

最后，将甲氨蝶呤微丸与叶酸微丸均匀混合，一起填装硬胶囊，即得本发明所述的复方制剂。

实施例6

6.1甲氨蝶呤微丸处方（10000粒）

微晶纤维素759.3g

甲氨蝶呤90g

HPMC 30g

HPC 56.1g

水730ml

制备工艺：将30gHPMC与190ml水配置成粘合剂液体，与759.3g的微晶纤维素和90g甲氨蝶呤制成湿料，经挤出机筛板（孔径1.0mm）挤出，条状颗粒置滚圆机内调节转速、滚圆时间，使颗粒完全滚圆，取出微丸于60℃烘干，筛分后取20~30目间的甲氨蝶呤含药微丸进行后续实验；将56.1gHPC与540ml水配置成保护层液体。将甲氨蝶呤含药丸芯置于流化床中流化10分钟，喷保护层液体，即得甲氨蝶呤微丸（保护层液体在整个包衣过程中持续搅拌）。本过程均采用流化床切喷工艺。

6.2叶酸微丸处方（10000粒）

微晶纤维素312.6g

叶酸90g

PVP S630 78g

HPMC 26g

Eudragit S 100 80g

Eudragit L 100-55 10g

NaOH溶液（1mol/L/4%）12.1g

氨水（1mol/L/1.7%）33g

丙二醇3.4g

聚乙二醇13.6g

单硬脂酸甘油酯35.4g

水2244ml

制备工艺：将78g PVP S630与190ml水配置成粘合剂液体，与312.6g的微晶纤维素和90g叶酸制成湿料，经挤出机筛板（孔径1.0mm）挤出，条状颗粒置滚圆机内调节转速、滚圆时间，使颗粒完全滚圆，取出微丸于60℃烘干，筛分后取20~30

目间的叶酸含药微丸进行后续实验；将26gHPMC与540ml水配置成隔离层液体；包衣液的配制见实施例2.2。将叶酸含药丸芯丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷隔离层和功能层液体，即得叶酸微丸（制备过程中所有液体持续搅拌）。本过程均采用流化床切喷工艺。

最后，将甲氨蝶呤微丸与叶酸微丸均匀混合，一起填装硬胶囊或与乳糖、淀粉、羧甲基淀粉钠、滑石粉等压片，即得本发明所述的复方制剂。

实施例7

微丸处方（10000粒）

淀粉1000g

甲氨蝶呤200g

叶酸50g

HPMC 117.3g

HPC 200g

Kollicoat MAE 100P 436.8g

聚乙二醇65.5g

滑石粉87.4g

水9196ml

制备工艺：将1000g的淀粉和50g叶酸、1050ml的水制成湿料，经挤出机筛板（孔径1.0mm）挤出，条状颗粒置滚圆机内调节转速、滚圆时间，使颗粒完全滚圆，取出微丸于60℃烘干，筛分后取20~30目间的叶酸含药微丸进行后续实验；将42gHPMC与525ml水配制成隔离层液体；将436.8g Kollicoat MAE 100P用4368ml水中，边搅拌变加入65.5g聚乙二醇和87.4g滑石粉制成功能层包衣液；将200g HPC与200g甲氨蝶呤加入2500ml水中制成甲氨蝶呤上药液；将75.3gHPMC与753ml配置成保护层液体。将叶酸含药丸芯丸芯置于流化床中流化10分钟，依次喷隔离层、功能层、甲氨蝶呤上药液和保护层液体，即得微丸（制备过程中所有液体持续搅拌）。本过程均采用流化床底喷工艺。

最后，将所得微丸填装硬胶囊或与乳糖、淀粉、羧甲基淀粉钠、滑石粉等压片，即得本发明所述的复方制剂。

实施例8

将实施例2所制得的复方制剂做如下实验：

对于胶原致大鼠关节肿胀模型的治疗

将II型胶原溶于0.1mol/L的醋酸中，在4℃下充分搅拌溶解，浓度为2g/L，置4℃冰箱过夜，将灭活卡介苗至于液体石蜡中，配成2g/L完全弗氏佐剂，将二者等体积混合、乳化，制成II型胶原乳剂。在大鼠的尾根部注射0.1ml致炎，第21日腹腔注射0.1ml作为激发注射。于第二次免疫后开始灌胃给予复方制剂（甲氨蝶呤：0.15mg/kg，叶酸：0.05mg/kg）及甲氨蝶呤单药（甲氨蝶呤：0.15mg/kg），连续14天。同时，正常组和模型组灌服等容积蒸馏水。

以S.Cuzzocrea（2005）的文献的评分为参考，评价动物模型的质量和药物治疗效果：0为无关节炎表现，1为爪部红/肿，2为每肢两个关节受累，3为多于2个关节受累，4为全部关节受累。关节炎系数为将四肢分别的炎症情况加和所得。结果见图2。

结果表明，叶酸的加入对甲氨蝶呤的药效发挥没有影响。

实施例9

用实施例5制备得到的复方制剂进行释放度试验，释放度方法为蓝法，转速：50转/分，介质：前120分钟为0.1mol/L盐酸900ml；后180分钟为Ph6.8磷酸盐缓冲液900ml。具体操作方法参见《中国药典》2010版附录XD中的第二法。

结果见图3。

结果表明，甲氨蝶呤微丸可在胃内迅速释放，叶酸微丸在胃内不释药且可在小肠内时滞一到两小时，而后在一到两小时内完全释药。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (8)

1.一种甲氨叶酸复方制剂，它包括(a)甲氨蝶呤部分和(b)叶酸部分，其中：

所述甲氨蝶呤部分包含：

(a1)甲氨蝶呤；

(a2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；

所述叶酸部分包含：

(b1)叶酸；

(b2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；

其中，(a1)与(b1)的重量比为1：1-4:1；

所述叶酸部分是叶酸微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层，隔离层和功能层；所述功能层中肠溶材料是肠溶型丙烯酸树脂包衣材料；所述肠溶型丙烯酸树脂包衣材料选自：Eudragit L 30D-55、Eudragit L 100-55、Eudragit L100、Eudragit S100、KollicoatMAE 30DP、Kollicoat MAE 100P或它们的组合；肠溶包衣材料与叶酸的重量比为1.3：1-29.8:1。

2.如权利要求1所述的甲氨叶酸复方制剂，其特征在于，所述甲氨蝶呤部分是甲氨蝶呤微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层和保护层；

所述药物层含有甲氨蝶呤或叶酸，和粘合剂；

叶酸微丸的功能层含有增塑剂、抗粘剂和肠溶包衣材料。

3.如权利要求1所述的甲氨叶酸复方制剂，其特征在于，(a1)与(b1)的重量比为2:1。

4.如权利要求1所述的甲氨叶酸复方制剂，其特征在于，肠溶包衣材料与叶酸的重量比为1.3：1-12.2:1。

5.一种如权利要求1-4中任一项所述甲氨叶酸复方制剂的制备方法，所述方法包括步骤：

(i)提供甲氨蝶呤部分物料和叶酸部分物料，其中

所述甲氨蝶呤部分物料包含：(a1)甲氨蝶呤；(a2)任选的药学上可接受的 载体或赋形剂；

所述叶酸部分物料包含：(b1)叶酸；(b2)任选的药学上可接受的载体或赋形剂；和

(ii)将所述甲氨蝶呤部分物料和所述叶酸部分物料制成复方制剂；

(a1)与(b1)的重量比为1：1-4:1；

所述甲氨蝶呤部分是甲氨蝶呤微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层和保护层；所述叶酸部分是叶酸微丸，从内到外依次包括空白丸芯，药物层，隔离层和功能层；叶酸微丸的功能层含有增塑剂、抗粘剂和肠溶包衣材料；所述功能层中肠溶材料是肠溶型丙烯酸树脂包衣材料；所述肠溶型丙烯酸树脂包衣材料选自：Eudragit L 30D-55、Eudragit L 100-55、Eudragit L 100、Eudragit S100、Kollicoat MAE 30DP、Kollicoat MAE 100P或它们的组合；肠溶包衣材料与叶酸的重量比为1.3：1-29.8:1；

所述甲氨蝶呤微丸的制备包括下述步骤：采用底线喷流化床或切线喷流化床，依次在空白丸芯上包覆药物层、保护层；

所述叶酸微丸的制备包括下述步骤：采用底线喷流化床或切线喷流化床，依次在空白丸芯上包覆药物层、隔离层、功能层。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，叶酸微丸的功能层外包覆甲氨蝶呤药物层和保护层，将甲氨蝶呤和叶酸制成同一微丸。

7.如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，将甲氨蝶呤微丸和叶酸微丸混合，灌装胶囊或压片或将同时载有甲氨蝶呤和叶酸的微丸灌装胶囊或压片。

8.一种权利要求1-4中任一项所述甲氨叶酸复方制剂的用途，用于制备治疗自身免疫性疾病的药物。