CN103411897A - 一种判别蜂胶原料类型的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种判别蜂胶原料类型的方法，包括步骤：1)将待测蜂胶样品粉碎，溶于无水乙醇，样品和无水乙醇的质量体积比为1:25，制得混合物；2）震荡混合物1.5～3h、超声处理1～1.5h，在低温下离心分离，取分离后的液体；3）分离后的液体使用色差仪测定其色度值，代入线性判别模型计算Y值，把待测样品判定为Y值最大的胶源类型。本发明提出的方法操作简单，对仪器和检测人员水平要求不高，易于在生产实际中推广；正确判别率高；对胶源植物的判别范围广，几乎包含了我国蜂胶原料市场常见的胶源类型；测定结果可量化，不受检测人员主观判断的影响；判定结果清晰明确，易于标准化。
Description
技术领域
本发明涉及一种蜂产品品种识别方法，具体是涉及判别蜂胶原料类型的方法。
背景技术
蜂胶是蜜蜂从植物的芽苞、树皮或茎干伤口采集的树脂等分泌物，与部分蜂蜡和花粉以及蜜蜂上颌腺的分泌物混合而成的芳香黏性固体。蜂胶化学成分复杂，含有丰富的黄酮类、萜烯类、酚酸类等生物活性物质。现代大量的生理药理学研究表明，蜂胶具有抗菌、抗病毒、抗氧化、防衰老、抗肿瘤、消炎、增强机体免疫力、降低血糖血脂、镇静、麻醉等多种生物学活性。因此，近十几年来蜂胶成为蜂产品研究开发的热点，越来越受到食品、保健品、医药、日化、农牧业及广大人民群众的关注。
目前国内外对蜂胶的研究主要集中在药理活性上，其他研究主要的分布于蜂胶的化学成分，质量控制，产品开发与应用等方面。国内外专业检测机构和蜂胶制品企业对蜂胶原料的品质检测重点包括：乙醇提取物含量、总黄酮含量、重金属含量等，而在判别蜂胶原料植物来源这一方面是缺乏的，甚至是空白的。
我国疆土辽阔，胶源植物种类丰富，但最主要的胶源植物有杨树、桦树、桉树、橡胶树等，蜂群采集的蜂胶主要来源于上述四种胶源植物，另外榆树、松树、橡树、栗树也是补充蜂胶源。根据蜜蜂采集蜂胶的植物来源将蜂胶原料划分为杨树型蜂胶、桦树型蜂胶、桉树型蜂胶、橡胶树型蜂胶等。巴西蜂胶是我国所进口主要蜂胶类型，其胶源植物主要是南美洲所特有的酒神菊属植物。国际上多个研究团队都对蜂胶的化学成分和植物来源进行了研究，但是众多的研究思路主要集中于鉴别蜂胶中新的未知成分，通过蜂胶中新成分和特征成分与植物中成分的比较研究，证明或发现新的胶源植物。巴西Y.K.Park等人通过反相高效薄层色谱法(RP-HPTLC)，反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，气-质联用(GC-MS)等技术的综合使用明确了12种根据物理化学性质分类的蜂胶的胶源植物为杨树、山香属植物和酒神菊属植物。巴西K.shigenori等人通过观测蜜蜂采胶行为结合液质联用技术分析一种蜂胶的化学成分，证明杨树和B.dracunculifolia是这种蜂胶的植物来源。但以上研究所用仪器精密昂贵，对检测人员水平要求极高，检测过程繁琐费时，检测费用昂贵，不适合在生产实践中应用和推广。
在蜂胶保健品市场中，一些不法企业炒作其蜂胶产品是由“高纯度××胶源型蜂胶原料”制成，严重误导和欺骗消费者。蜂胶保健品市场需要逐步实现由原料型向高科技含量和高附加值转变，产品由单一化向多元化转变，开发不同植物来源的蜂胶产品从某种程度上有利于该问题的解决。广大科技工作者需要尽快发明出一种快速判别蜂胶原料植物来源的方法，为繁荣丰富蜂胶保健品市场提供技术支持。
发明内容
本发明涉及一种判别蜂胶原料类型的方法，通过测定蜂胶原料乙醇溶液的L*a*b*值，将所测数据值代入已建立好的六种常见蜂胶类型判别模型中，从而达到判别蜂胶是否为人工熬制杨树胶、并同时判断出原料类型的目的。
实现本发明上述目的的技术方案为：
一种判别蜂胶原料类型的方法，包括步骤：
1)将待测蜂胶样品粉碎，称取粉碎样品溶于无水乙醇，样品和乙醇的质量体积比为1:25，制得混合物；
2）震荡混合物1.5～3h、超声处理1～1.5h，在低温下离心固液分离，取分离后的液体；
3）分离后的液体使用色差仪测定色度值，分别代入下面六个线性判别模型中，可计算出六个Y值，比较Y值的大小，把样品判定为Y值最大的模型所对应的胶源类型：
Y杨树型蜂胶=-476.237+19.741L*+16.409a*-1.477b* (1)
Y桦树型蜂胶=-459.842+19.803L*+15.116a*-2.432b* (2)
Y桉树型蜂胶=-332.836+16.994L*+14.574a*-2.864b* (3)
Y橡胶型蜂胶=-540.975+21.715L*+13.202a*-3.732b* (4)
Y人工熬制杨树胶=-278.476+15.633L*+12.512a*-3.329b* (5)
Y巴西蜂胶=-422.298+18.549L*+20.070a*-2.017b* (6)
一个样品可计算出6个Y值，最大的Y值所对应的计算式即表示该样品为该计算式对应的蜂胶类型。即可判别蜂胶是否为人工熬制杨树胶、并同时判断出原料类型。
因国内蜂胶样品极少不属于上述六种类型之一，因此本发明的方法基本可判断国内可见的全部类型。
其中，所述待测蜂胶样品先于-15～-5℃下放置3～5h，然后粉碎。所述粉碎是先用锤子破碎，然后高速粉碎，粉碎后取粒度小于20目的样品（过20目筛）；
其中，所述步骤2）中固液分离的离心条件为温度-4～0℃，转速8000～20000r/min，离心时间8-20min。
优选地，所述离心条件为温度0℃，转速10000r/min，离心时间10min。
其中，所述步骤2）中，将固液分离后的液体50mL转移至透明的、直径规格为9cm的容器中，通常是使用一次性塑料培养皿。
其中，所述步骤3）中使用色差仪测定分离液体的色度值，在盛放液体的培养皿下设置为白色背景以确保背景光一致。可垫放一张白色滤纸、或白色打印纸。
本发明的有益效果在于：
（1）操作简单，对仪器和检测人员水平要求不高，易于在生产实际中推广；
（2）正确判别率高，判别范围广，几乎包含了我国蜂胶原料市场上所有常见蜂胶类型；
（3）测定结果可量化，不受检测人员主观判断的影响；
（4）判定结果清晰明确，判定方法易于标准化；
（5）为实现市场监管提供方法基础。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。
实施例中，蜂胶原料为市购。
超声波清洗机购自昆山舒美超声波清洗机厂，型号KQ-100DB。
色差仪购自柯尼卡美能达公司，型号CR-400便携式色差计。
实施例1：
取胶源植物为杨树、桦树、桉树、橡胶、巴西蜂胶、人工熬制杨树胶的六个蜂胶原料（粗胶）样品，放置于-10℃冰箱中冷冻处理24小时，用皮锤破碎后再于2000r/min高速粉碎机内粉碎；
各粉碎样品准确称取2.0g于离心管中，加入50ml的无水乙醇，旋转摇床震荡2小时，超声提取1小时，0℃、10000r/min条件下低温高速离心10min，上清液用吸管转移至透明的一次性塑料培养皿中（规格9cm），在培养皿下垫放一张白色滤纸；
借助色差仪分别测定蜂胶原料醇溶液的L*a*b*值，所测数据值代入下式（1）-（6）六种胶源判别模型中，结果见表1。
Y杨树型蜂胶=-476.237+19.741L*+16.409a*-1.477b* (1)
Y桦树型蜂胶=-459.842+19.803L*+15.116a*-2.432b* (2)
Y桉树型蜂胶=-332.836+16.994L*+14.574a*-2.864b* (3)
Y橡胶型蜂胶=-540.975+21.715L*+13.202a*-3.732b* (4)
Y人工熬制杨树胶=-278.476+15.633L*+12.512a*-3.329b* (5)
Y巴西蜂胶=-422.298+18.549L*+20.070a*-2.017b* (6)
表1蜂胶原料植物来源模型判别表
| 样品类型 | L* | a* | b* | Y杨树型 | Y桦树型 | Y桉树型 | Y橡胶型 | Y人工熬制 | Y巴西蜂胶 |
| 杨树型蜂胶 | 50.32 | 0.47 | 23.09 | 492.31 | 480.60 | 413.50 | 428.43 | 387.83 | 459.32 |
| 桦树型蜂胶 | 47.19 | 0.98 | 13.79 | 454.46 | 468.87 | 441.36 | 441.36 | 425.16 | 440.12 |
| 桉树型蜂胶 | 37.41 | 2.7 | 5.60 | 296.18 | 306.68 | 329.04 | 287.79 | 321.48 | 306.21 |
| 橡胶型蜂胶 | 52.88 | -1.99 | 12.31 | 512.32 | 524.81 | 503.36 | 538.21 | 488.30 | 488.03 |
| 人工熬制杨树胶 | 33.91 | 2.45 | 0.19 | 242.83 | 198.27 | 260.33 | 229.19 | 283.44 | 266.06 |
| 巴西蜂胶 | 43.91 | 5.26 | 14.6 | 411.50 | 410.69 | 416.77 | 379.10 | 393.49 | 429.68 |
从表1可以看出，将色差仪测定的杨树型蜂胶原料醇溶液的L*a*b*值代入六种判别模型中，比较6个Y值的大小，结果中最大值均符合该模型对应的胶源种类。
实施例2
蜂胶样品为国内样品，已知其类型为前述六种类型之一，但具体胶源类型未知，编号为FJ-1，放置于-10℃冰箱中冷冻处理5h，用锤子破碎后于2000r/min的高速粉碎机内粉碎，粉碎样品过20目筛；准确称取2.0g于离心管中，加入50mL的无水乙醇，旋转摇床震荡2h，超声提取1h，0℃、10000r/min条件下低温高速离心10min，上清液用吸管转移至透明的一次性塑料培养皿中（规格9cm），在培养皿下垫放一张白色滤纸；
借助色差仪测定FJ-1醇溶液的L*、a*、b*值，所测数据值代入六种蜂胶类型的线性判别模型中，结果见表2。
比较6个Y值的大小，最大值为式（1）的计算结果，因此判别样品FJ-1为杨树型蜂胶。
实施例3：
已知蜂胶类型为上述六种类型之一，但具体胶源类型未知的蜂胶样品，编号为FJ-2，放置于-10℃冰箱中冷冻处理5h，用锤子破碎后于2000r/min的高速粉碎机内粉碎，粉碎样品过20目筛；准确称取2.0g于离心管中，加入50mL的无水乙醇，旋转摇床震荡2h，超声提取1h，0℃，10000r/min条件下低温高速离心10min，上清液用吸管转移至透明的一次性塑料培养皿中（规格9cm），在培养皿下垫放一张白色滤纸；
借助色差仪测定蜂胶原料醇溶液的L*、a*、b*值，所测数据值代入实施例1中判别模型式（1）～（6）中计算，结果见表2。最大值为式（2）的计算结果，因此判断样品FJ-2为桦树型的蜂胶。
实施例4：
已知蜂胶类型为上述六种类型之一，但具体胶源类型未知的蜂胶样品，编号为FJ-3，放置于-10℃冰箱中冷冻处理5h，用锤子破碎后于2000r/min的高速粉碎机内粉碎，粉碎样品过20目筛；准确称取2.0g于离心管中，加入50mL的无水乙醇，旋转摇床震荡2h，超声提取1h，0℃，10000r/min条件下低温高速离心10min，上清液用吸管转移至透明的一次性塑料培养皿中（规格9cm），在培养皿下垫放一张白色滤纸；
借助色差仪测定蜂胶原料醇溶液的L*、a*、b*值，所测数据值代入实施例1中判别模型式（1）～（6）中计算，结果见表2。最大值为式（3）的计算结果，因此判断样品FJ-3为桉树型的蜂胶。
实施例5：
已知蜂胶类型为上述六种类型之一，但具体胶源类型未知的蜂胶样品，编号为FJ-4，放置于-10℃冰箱中冷冻处理5h，用锤子破碎后于2000r/min的高速粉碎机内粉碎，粉碎样品过20目筛；准确称取2.0g于离心管中，加入50mL的无水乙醇，旋转摇床震荡2h，超声提取1h，0℃，10000r/min条件下低温高速离心10min，上清液用吸管转移至透明的一次性塑料培养皿中（规格9cm），在培养皿下垫放一张白色滤纸；
借助色差仪测定蜂胶原料醇溶液的L*、a*、b*值，所测数据值代入实施例1中判别模型式（1）～（6）中计算，结果见表2。最大值为式（4）的计算结果，因此判断样品FJ-4为橡胶型的蜂胶。
实施例6：
已知蜂胶类型为上述六种类型之一，但具体胶源类型未知的蜂胶样品，编号为FJ-5，放置于-10℃冰箱中冷冻处理5h，用锤子破碎后于2000r/min的高速粉碎机内粉碎，粉碎样品过20目筛；准确称取2.0g于离心管中，加入50mL的无水乙醇，旋转摇床震荡2h，超声提取1h，0℃，10000r/min条件下低温高速离心10min，上清液用吸管转移至透明的一次性塑料培养皿中（规格9cm），在培养皿下垫放一张白色滤纸；
借助色差仪测定蜂胶原料醇溶液的L*、a*、b*值，所测数据值代入实施例1中判别模型式（1）～（6）中计算，结果见表2。最大值为式（5）的计算结果，因此判断样品FJ-5为人工熬制的杨树胶。
实施例7：
已知蜂胶类型为上述六种类型之一，但具体胶源类型未知的蜂胶样品，编号为FJ-6，放置于-10℃冰箱中冷冻处理5h，用锤子破碎后于2000r/min的高速粉碎机内粉碎，粉碎样品过20目筛；准确称取2.0g于离心管中，加入50mL的无水乙醇，旋转摇床震荡2h，超声提取1h，0℃，10000r/min条件下低温高速离心10min，上清液用吸管转移至透明的一次性塑料培养皿中（规格9cm），在培养皿下垫放一张白色滤纸；
借助色差仪测定蜂胶原料醇溶液的L*、a*、b*值，所测数据值代入实施例1中判别模型式（1）～（6）中计算，结果见表2。最大值为式（6）的计算结果，因此判断样品FJ-6为巴西蜂胶。
表2蜂胶样品判别
注：表1中划线数字为最大Y值。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及实例，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对本方法的判别模型作出一定的补充和优化。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种判别蜂胶原料类型的方法，包括步骤：
1)将待测蜂胶样品粉碎，称取粉碎样品溶于无水乙醇，样品和乙醇的质量体积比为1:25，制得混合物；
2）震荡混合物1.5～3 h、超声处理1～1.5 h，在低温下离心固液分离，取分离后的液体；
3）分离后的液体使用色差仪测定色度值，分别代入下面六个线性判别模型中，可计算出六个Y值，比较Y值的大小，把样品判定为Y值最大的模型所对应的胶源类型：
Y杨树型蜂胶= -476.237+19.741L*+16.409a*-1.477b* (1)
Y桦树型蜂胶= -459.842+19.803L*+15.116a*-2.432b* (2)
Y桉树型蜂胶= -332.836+16.994L*+14.574a*-2.864b* (3)
Y橡胶型蜂胶= -540.975+21.715L*+13.202a*-3.732b* (4)
Y人工熬制杨树胶= -278.476+15.633L*+12.512a*-3.329b* (5)
Y巴西蜂胶=-422.298+18.54 L*9+20.070 a*-2.017 b* (6)。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蜂胶样品先于-15～-5℃下放置3～5 h，然后粉碎。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述粉碎是先用锤子破碎，然后高速粉碎，粉碎后取粒度小于20目的样品。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中固液分离的离心条件为温度-4～0℃，转速8000～20000r/min，离心时间8～20 min。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述离心条件为温度0℃，转速10000r/min，离心时间10min。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述步骤2）中固液分离后的液体50mL转移至透明的、直径为9cm的容器中。
7.如权利要求1～6任一所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中使用色差仪测定分离液体的色度值，在盛放液体的容器下设置白色背景。
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