CN104001006A - 一种从天冬中提取游离氨基酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,该方法包括:将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净,烘干粉碎,过滤,称取天冬粉末放入微波消解罐内,按天冬粉末与水的比例1∶15~1∶25加入水后置于微波消解仪内升温提取,过滤提取液后定容,离心取其上清液即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存,以天冬酰胺药品为对照品,采用茚三酮比色法对该游离氨基酸进行测定。本发明以水为提取溶剂,采用微波消解提取的方法提取其中游离氨基酸,测得氨基酸的含量大约为5.75%,提取效率高,同时具有简便易行、用料少、提取用时短、提取成本低、环境友好等优点,有利于工业化生产,具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,具体地涉及一种从天冬中提取游离氨基酸的方法。
背景技术
天冬(Radix Asparagi)为百合科植物天门冬Asparagus cochinchinensis(Lour)Merr的干燥块根,是一种临床常用中药材,主要用于肺燥干咳、顿咳痰粘、骨蒸潮热、腰膝酸痛、咽干口渴、内热消渴、热病津伤、肠燥便秘等病症。天冬主要药理成分有氨基酸类(主要有天冬酰胺、谷氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸等19种氨基酸)、糖类、螺甾苷类等。天冬历代用野生品药用或制蜜饯食用,国内有多个中药厂都在使用天冬原料生产中成药,并且其需求量呈大幅度增长趋势,使原料极其紧俏。
天冬提取物还具有抗肿瘤、抗炎、抗衰老、降血糖等作用。同时现代药理学研究发现氨基酸是作为发挥抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等作用的物质基础之一,其中氨基酸是抗病毒、抗肿瘤的有效成分。
游离氨基酸的提取方法常用的有超声提取、加热回流提取、浸提法等方法。提取溶剂一般为水、醇、醚等。由于氨基酸是水溶性成分,其在醇或醚中溶解度小于在水中,且醇提法和醚提提在成本及毒性方面均高于水提法,所以采用水提法更好。
《天冬中总氨基酸的水提取工艺研究》(甘肃中医学院学报,2003年1期)对天冬中总氨基酸的水提取工艺进行了研究,其主要采用了水浸提法提取氨基酸,在最佳提取工艺条件下测定氨基酸的含量为2.11%,提取率较低,而且提取时间长、用料量大。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提供一种提取率高、用料少、提取时间短、提取成本低、环境污染小的从天冬中提取游离氨基酸的方法。
为实现上述发明目的,本发明技术方案如下:
一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,包括烘干粉碎、微波提取、过滤定容、离心和测定工序,具体操作如下:
(1)烘干粉碎:将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净,沥干水后,烘干,然后切剪成小段,用粉碎机粉碎,过筛,过筛得到天冬粉末备用;
(2)微波提取:称取步骤(1)的天冬粉末放入微波消解罐内,加入一定比例的提取溶剂,将微波消解罐固定于防爆保护套中,旋紧盖子后置于微波消解仪内,升温提取,待温度降为室温时,从微波消解仪内取出微波消解罐;
(3)过滤定容:过滤提取液,将滤液定容至50ml;
(4)离心:将定容后的滤液离心,取其上清液,即得游离氨基酸提取液,将该游离氨基酸提取液于4℃储存,备用;
(5)测定:以天冬酰胺药品为对照品,采用茚三酮比色法对该游离氨基酸进行测定。
以上步骤(1)中所述的烘干条件是在恒温鼓风干燥箱内,控制烘干温度为40℃~50℃,烘干时间为8h~12h。
以上步骤(1)中所述的过筛是将粉碎的天冬经二号筛过筛。
以上步骤(2)中所述的提取溶剂为水,所述的一定比例的提取溶剂是天冬粉末与水的比例为1:15~1:25。
以上步骤(2)中所述的升温提取是将温度设为50~70℃,控制时间为10~20min。
以上步骤(4)中所述的离心控制离心转速为5000 r/min~7000r/min,离心时间为10 min~15min。
与现有技术相比,本发明的优点和积极效果如下:
1、本发明以水为提取溶剂,采用微波消解提取的方法提取其中游离氨基酸,测得氨基酸的含量大约为5.75%,提取效率高,制作简单。
2、本发明具有简便易行、用料少、提取效率高、提取用时间短、提取成本低、环境友好等优点,有利于工业化生产,具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:
一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,
1.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净,沥干水后,在烘干温度为40℃的恒温鼓风干燥箱内进行烘干8h,然后切剪成小段,用粉碎机粉碎,过二号筛,过筛得到天冬粉末备用。
2.游离氨基酸的提取:(1)精密称取0.2500g天冬粉末放入微波消解罐内,用水作为提取溶剂,并按照天冬粉末与水重量比为1:20的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水,将微波消解罐固定于防爆保护套中,旋紧盖子后置于微波消解仪内,升温提取,温度设为50℃,控制时间为15min。待温度降为室温时,从微波消解仪内取出微波消解罐;(2)采用抽滤的方式过滤出提取液,将滤液定至50ml;(3)将定容后的滤液离心,控制离心转速为5000 r/min,离心时间为15 min,取其上清液,即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存,备用;以上三个处理按顺序重复三次。
3.标准溶液的制备:精密称取0.01000g(精确至0.00001g)的天冬酰胺标准物质,定容于100ml容量瓶中,此溶液质量浓度为0.1mg/ml。
4.标准曲线的制备:精密量取0.1mg/ml的天冬酰胺标准溶液0, 1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml,3.0ml,3.5ml分别置于25ml比色管中,各加水至10ml,再分别加入磷酸盐(pH为8.04)2ml和2%的茚三酮溶液2ml,摇匀,置于沸水中显色15min,取出后立即用冷水冷却至室温,静放5min,定容至25ml,摇匀,再放置15min,于566nm处测定各标准溶液的吸光度A,以试剂空白调零。以吸光度(A)为横坐标,质量浓度(C)为纵坐标进行线性回归。结果表明,天冬素在1~14μg/mL与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为C=0.4953A-0.0029,R2=0.9992。
5.游离氨基酸的测定:精密量取上述提取上清液(即游离氨基酸提取液)5ml置于25ml比色管中,并加水至10ml,再加入磷酸盐(pH为8.04)2ml和2%的茚三酮溶液2ml,摇匀,置于沸水中显色15min,取出后立即用冷水冷却至室温,静放5min,定容至25ml,摇匀,再放置15min,于566nm处测定其的吸光度(A)。将测定得到的吸光度值代入回归方程,该方法下测得游离氨基酸的含量为5.75%。
实施例2
1.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净,沥干水后,在烘干温度为45℃的恒温鼓风干燥箱内进行烘干9h,然后切剪成小段,用粉碎机粉碎,过二号筛,过筛得到天冬粉末备用。
2. 游离氨基酸的提取:(1)精密称取0.3334g天冬粉末放入微波消解罐内,用水作为提取溶剂,并按照天冬粉末与水重量比为1:15的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水,将微波消解罐固定于防爆保护套中,旋紧盖子后置于微波消解仪内,升温提取,温度设为60℃,控制时间为15min。待温度降为室温时,从微波消解仪内取出微波消解罐;(2)采用抽滤的方式过滤出提取液,将滤液定至50ml;(3)将定容后的滤液离心,控制离心转速为6000 r/min,离心时间为12 min,取其上清液,即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存,备用;以上三个处理按顺序重复三次。
3.标准溶液的制备同实施例1。
4.标准曲线的制备同实施例1。
5.游离氨基酸的测定同实施例1,将测定得到的吸光度值代入回归方程,该方法下测得游离氨基酸含量为5.22%。
实施例3
1.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净,沥干水后,在烘干温度为50℃的恒温鼓风干燥箱内进行烘干12h,然后切剪成小段,用粉碎机粉碎,过二号筛,过筛得到天冬粉末备用。
2. 游离氨基酸的提取:(1)精密称取0.2000g天冬粉末放入微波消解罐内,用水作为提取溶剂,并按照天冬粉末与水重量比为1:25的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水,将微波消解罐固定于防爆保护套中,旋紧盖子后置于微波消解仪内,升温提取,温度设为70℃,控制时间为15min。待温度降为室温时,从微波消解仪内取出微波消解罐;(2)采用抽滤的方式过滤出提取液,将滤液定至50ml;(3)将定容后的滤液离心,控制离心转速为7000 r/min,离心时间为10 min,取其上清液,即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存,备用;以上三个处理按顺序重复三次。
3.标准溶液的制备同实施例1。
4.标准曲线的制备同实施例1。
5.游离氨基酸的测定同实施1,将测定得到的吸光度值代入回归方程,该方法下测得游离氨基酸含量为5.27%。
实施例4
1.样品预处理方法同实施例1。
2. 游离氨基酸的提取:(1)精密称取0.3334g天冬粉末放入微波消解罐内,用水作为提取溶剂,并按照天冬粉末与水重量比为1:15的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水,将微波消解罐固定于防爆保护套中,旋紧盖子后置于微波消解仪内,升温提取,温度设为60℃,控制时间为15min。待温度降为室温时,从微波消解仪内取出微波消解罐;(2)采用抽滤的方式过滤出提取液,将滤液定至50ml;(3)将定容后的滤液离心,控制离心转速为5000 r/min,离心时间为15 min,取其上清液,即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存,备用;以上三个处理按顺序重复三次。
3.标准溶液的制备同实施例1。
4.标准曲线的制备同实施例1。
5.游离氨基酸的测定同实施1,将测定得到的吸光度值代入回归方程,该方法下测得游离氨基酸含量为5.60%。
实施例5
1.样品预处理方法同实施例1。
2. 游离氨基酸的提取:(1)精密称取2.0000g天冬粉末放入三角瓶中,用水作为提取溶剂,并按照天冬粉末与水重量比为1:15的比例向装有天冬粉末的三角瓶中加入45ml水,将三角瓶放入水浴锅中,套上回流装置,水浴锅温度设为60℃,以第一滴泠凝水下滴时计时,回流时间为120min。时间到后,从水浴锅中取出三角瓶;(2)采用抽滤的方式过滤出提取液,将滤液定至50ml;(3)将定容后的滤液离心,控制离心转速为5000 r/min,离心时间为15 min,取其上清液,即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4℃储存,备用;以上三个处理按顺序重复三次。
3.标准溶液的制备同实施例1。
4.标准曲线的制备同实施例1。
5.游离氨基酸的测定:精密量取上述提取上清液(即游离氨基酸提取液)0.5ml置于25ml比色管中,并加水至10ml,再加入磷酸盐(pH为8.04)2ml和2%的茚三酮溶液2ml,摇匀,置于沸水中显色15min,取出后立即用冷水冷却至室温,静放5min,定容至25ml,摇匀,再放置15min,于566nm处测定其的吸光度(A)。将测定得到的吸光度值代入回归方程,该方法下测得游离氨基酸的含量为4.05%。
Claims (6)
1.一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,其特征在于:包括烘干粉碎、微波提取、过滤定容、离心和测定工序,具体操作如下:
(1)烘干粉碎:将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净,沥干水后,烘干,然后切剪成小段,用粉碎机粉碎,过筛,过筛得到天冬粉末备用;
(2)微波提取:称取步骤(1)的天冬粉末放入微波消解罐内,加入一定比例的提取溶剂,将微波消解罐固定于防爆保护套中,旋紧盖子后置于微波消解仪内,升温提取,待温度降为室温时,从微波消解仪内取出微波消解罐;
(3)过滤定容:过滤提取液,将滤液定容至50ml;
(4)离心:将定容后的滤液离心,取其上清液,即得游离氨基酸提取液,将该游离氨基酸提取液于4℃储存,备用;
(5)测定:以天冬酰胺药品为对照品,采用茚三酮比色法对该游离氨基酸进行测定。
2.根据权利要求1所述的一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的烘干条件是在恒温鼓风干燥箱内,控制烘干温度为40℃~50℃,烘干时间为8h~12h。
3.根据权利要求1所述的一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的过筛是将粉碎的天冬经二号筛过筛。
4.根据权利要求1所述的一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的提取溶剂为水,所述的一定比例的提取溶剂是天冬粉末与水的比例为1:15~1:25。
5.根据权利要求1所述的一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,其特征在于:步骤(2)中所述的升温提取是将温度设为50℃~70℃,控制时间为10 min~20min。
6.根据权利要求1所述的一种从天冬中提取游离氨基酸的方法,其特征在于:步骤(4)中所述的离心控制离心转速为5000 r/min~7000r/min,离心时间为10 min~15min。
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