CN102276569A

CN102276569A - 一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法

Info

Publication number: CN102276569A
Application number: CN2011101628298A
Authority: CN
Inventors: 张镜
Original assignee: Jiaying University
Current assignee: Jiaying University
Priority date: 2011-06-16
Filing date: 2011-06-16
Publication date: 2011-12-14
Anticipated expiration: 2031-06-16
Also published as: CN102276569B

Abstract

本发明公开一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，旨在提供一种提取方法简单，提取率高，成本低，纯度高的原花青素提取方法；其技术要点依次包括下述步骤：(1)采摘八成熟海南蒲桃果实，清洗，干燥后粉碎为10～140目的粉末；(2)将步骤(1)得到的粉末加溶剂混合均匀，调节pH值，加热至30～90℃，搅拌20～360分钟后进行固液分离，收集清液；(3)将步骤(2)得到清液减压蒸馏，得到海南蒲桃原花青素提取液；(4)将步骤(3)得到的海南蒲桃原花青素提取液用大孔吸附树脂吸附分离海南蒲桃原花青素，溶剂解吸，收集洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，真空喷雾干燥即得原花青素粉末；属于天然生物活性物质的提取技术领域。

Description

一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法

技术领域

本发明涉及一种提取方法，具体的说，是一种从未成熟海南蒲桃果实中提取原花青素的方法，属于天然活性产物提取技术领域。

背景技术

原花青素(Procyanidins，简称PC)是植物中广泛存在的一大类多酚类化合物的总称，由不同数量的儿茶素、表儿茶素或没食子酸等的单体、二聚体、三聚体直至十聚体聚合而成。原花青素是清除自由基、抗氧化很强的天然活性产物，如葡萄籽原花青素体内抗氧化能力是Vc的20倍，Ve的50倍。原花青素具有抗氧化、抗肿瘤、保护心血管等多种生物学活性，是近年开发保健食品的重要功能性成分。但目前原花青素商品生产的原料来源受季节与区域的限制，产品供不应求，价格昂贵。所以，寻求原花青素含量丰富、原料生产成本低廉的植物资源，从而开发生产成本较低的原花青素的新的商品将可获得极大的经济效益。

海南蒲桃，别名叫紫蒲桃、乌墨树，属桃金娘科的常绿乔木，为我国热带和南亚热带阳性树种。海南蒲桃皮色灰黑，粗厚，含水量高，耐低温干瘠，有火烧不死之称。木质抗虫耐腐是建筑、家具的上好材料。海南蒲桃花多实丰，浆果有呈椭圆形、矩圆形、橄榄形，成熟果实果皮呈紫色至黑色，富含色素成分和葡萄糖、果糖、麦芽糖、叶酸等。海南蒲桃种子、树皮用于治疗糖尿病、痢疾和其它疾病；叶片能入药治疗毒蛇咬伤等均有良效。鲜果生食，果肉味甜可食，对慢性咳嗽和哮喘有治疗效果。干果研末，肉汤送服，还可治寒性哮喘和过敏性哮喘，是一种药效很好的水果。研究表明海南蒲桃果实的原花青素含量达5％以上，是开发原花青素类天然、廉价保健品的重要资源。在华南地区海南蒲桃是大量用于园林与行道绿化的树种，而且近年在广东用于生态水源涵养林种植。而海南蒲桃果实一直没开发利用，大量的海南蒲桃原花青素资源被白白浪费。

发明内容

本发明的目的是提供一种提取方法简单，提取率高，产品纯度高的从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法。

本发明的技术要点是这样的：一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，依次包括下述步骤：

(1)采摘八成熟海南蒲桃果实，剔除果肉已软化的过熟果实后，用去离子水清洗，干燥后粉碎；

(2)将步骤(1)得到的海南蒲桃果实粉末加溶剂混合均匀，调节pH值为1～10，加热至30～90℃，搅拌20～360分钟，过滤或离心进行固液分离，并收集清液；

(3)将步骤(2)得到清液减压蒸馏，并回收溶剂，使清液中所含溶剂质量浓度降至10％以下，即得到海南蒲桃原花青素提取液；

(4)将步骤(3)得到的海南蒲桃原花青素提取液调节pH值为1～10，用大孔吸附树脂吸附海南蒲桃原花青素，然后用浓度10～100％醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，真空喷雾干燥，得到海南蒲桃果实中的原花青素粉末。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)用大孔吸附树脂吸附海南蒲桃原花青素的方法是：将调节pH值后得到的提取液通过吸附树脂柱床，流速0.3～4倍柱床体积/小时，当柱床流出液原花青素的质量浓度达上柱前溶液浓度的10～50％时上样停止，以正丁醇-盐酸法进行洗脱原花青素含量的检测；再以1/2倍柱床体积的去离子水清洗柱床，流速0.5～3倍柱床体积/小时；以10～100％、pH值为1～10的醇溶液通过已吸附提取物的柱床，解吸吸附于树脂上的原花青素，流速0.3～3倍柱床体积/小时；然后层析柱流出0.2～1.5倍柱床体积的洗脱液后开始收集洗脱液，至流出液体积为柱床体积的0.5～4倍时停止。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的海南蒲桃果实粉碎后的颗粒度为10～140目。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(2)中每克海南蒲桃果实粉添加1～20毫升的溶剂；所述的溶剂为20～95％乙醇溶液或者20～95％甲醇溶液或者20～95％丙酮其中之一。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的固液分离为过滤分离或离心分离。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(2)或(4)中采用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH值为1～10。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)所述的减压蒸馏回收醇溶剂的蒸馏温度：30～90℃，真空度：-0.07～-0.09MPa。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)所述的真空喷雾干燥温度为50～100℃。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的树脂为：DA201、DM301、DS401、DM-18或NKA-II的其中之一。

上述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，所述的醇溶液为乙醇水溶液或甲醇水溶液的其中之一。

本发明具有如下优点：

1.海南蒲桃原花青素的安全性高，从海南蒲桃果实提取的原花青素是可直接作用保健品原料开发的、安全天然活性物质，因为海南蒲桃产地居民一直在海南蒲桃果实成熟时采果鲜食。

2.所用的原料成本低；海南蒲桃为多年生常绿树、栽植后不用精细管理，可数十年采集果实，原料成本较低，果实内含丰富的原花青素活性物质，但一直没被开发利用，采集被废弃的果实为原料开发原花青素，其原料成本比以农产品开发相应产品的低。

3.本发明采用八成熟的海南蒲桃果实提取的原花青素量大，在八成熟的海南蒲桃果实很少有原花青素转化为花色苷，因而得到的原花青素量大。

4.采用未成熟的海南蒲果实的利用率高，八成熟的海南蒲桃果实的原花青素含量高、果肉硬，采收的果实运输与干燥过程中损耗低，果实的产量与利用率高；而充分成熟的、表面呈紫色的果实则果实内原花青素的含量降低，果肉变软，易于从树冠掉落地上，果皮受很小外力的撞击就破裂，运输与干燥中损耗大。

5.提取物的纯度较高。水果果肉若充分成熟、果肉软化后其可溶性成分的含量增加，因而充分成熟的海南蒲桃提取原花青素其纯度相对较低；而八成熟的海南蒲桃果实中不仅原花青素的含量最高，可提取的原花青素的量亦最大，而且可溶性成分较低，提取物中原花青素的纯度高。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

实施例1

1.海南蒲桃果实的采摘

9-10月果皮略带红色或褪绿色的八成熟的海南蒲桃果实，以去离子水漂洗1～2次，洗净果实表面的灰尘，捞取后除去杂物与烂果等，风干后备用。

2.海南蒲桃果实的粉碎

以粉碎机粉碎干燥后的海南蒲桃果实过60目筛，不能过筛的颗粒再次粉碎并过筛，收集过筛的粉末为提取原花青素的物料。

3.原花青素的浸提

经粉碎过筛的物料以70％的丙酮去离子水溶液为原花青素的浸提溶液，采用盐酸调溶液的pH＝2，将物料与溶剂按1∶10(质量/体积＝g/mL)混合，加热到40～50℃，搅拌器50转/分钟，搅拌120分钟后停止；过滤，收集清液；经2次提取后原花青素提取得率94.8％，即经2次提取后物料中的原花青素基本提取出来，不必再进行更多次的提取，结果见表1。

表1不同浸提次数浸提海南蒲桃果实原花青素提取效果

4.溶剂蒸发回收

收集的清液在50℃、真空度-0.07MPa下减压蒸馏回收丙酮，使清液的丙酮浓度降至5％以下，收集清液，得到海南蒲桃原花青素提取液。

5.海南蒲桃原花青素的树脂精制

除去溶剂后的海南蒲桃果实原花青素提取液用大孔吸附树脂AB-8、NKA-II、D-101、DA-201、DM-301的其中之一，吸附分离海南蒲桃果实原花青素，吸附后以0.5倍柱床体积的去离子水洗柱后，用80％的乙醇水溶液或甲醇水溶液将海南蒲桃原花青素从树脂洗脱，收集前0.5～2.0倍柱床体积的洗脱液。洗脱液以正丁醇-盐酸法加热显色、测定吸光值A535nm，以儿茶素校准品制备标准曲线，通过标准曲线方程计算树脂的吸附量及解吸率，结果见表2。

表2大孔吸附树对脂海南葡桃原花青素的吸附量和解吸率

6.树脂洗脱液喷雾干燥

将海南蒲桃原花青素树脂分离洗脱液加热60℃减压喷雾干燥后，得到粉末状海南蒲桃果实原花青素制品，100g海南蒲桃粉末提取原花青素为5.72g。

实施例2

将红色或褪绿色的海南蒲桃果实，以去离子水漂洗1～2次，洗净果实表面的灰尘，捞取后除去杂物与烂果等，风干；将干燥的海南蒲桃果实粉碎，140筛目过筛；以70％的乙醇去离子水溶液为原花青素的浸提溶液，调溶液的pH＝3，将粉碎过筛的海南蒲桃物料与溶剂按1∶10(质量/体积＝克/毫升、即每克的海南蒲桃物料加入10毫升的溶剂)混合，加热到55～65℃，搅拌器100转/分钟，搅拌120分钟后停止；过滤，收集滤液，滤饼重复提取1次，收集滤液，2次提取物料中原花青素的提取得率达91.11％，滤液在60℃、真空度-0.09MPa下减压蒸馏回收醇溶剂，使清液的醇浓度降至10％以下，得到海南蒲桃原花青素提取液；海南蒲桃原花青素提取液用DA201、DM301、DS401、NKA-II或DM-18大孔吸附树脂吸附精制海南蒲桃原花青素，然后用浓度80％乙醇水溶液或甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液80℃下减压干燥，得到粉末状海南蒲桃原花青素，100g海南蒲桃粉末提取原花青素为5.93g。

实施例3

将红色或褪绿色的海南蒲桃果实，以去离子水漂洗1～2次，洗净果实表面的灰尘，捞取后除去杂物与烂果等，风干；将干燥的海南蒲桃果实粉碎，10筛目过筛；以95％的甲醇去离子水溶液为原花青素的浸提溶液，调节溶液的pH＝8，将粉碎过筛的海南蒲桃物料与溶剂按1∶20(质量/体积＝克/毫升、即每克的海南蒲桃物料加入20毫升的溶剂)混合，加热到55～65℃，搅拌器100转/分钟，搅拌360分钟后停止；过滤，收集滤液，滤饼重复提取1次，收集滤液，2次提取物料中原花青素的提取得率达93.11％，滤液在60℃、真空度-0.09MPa下减压蒸馏回收醇溶剂，使清液的醇浓度降至10％以下，得到海南蒲桃原花青素提取液；海南蒲桃原花青素提取液用DA201、DM301、DS401、NKA-II或DM-18大孔吸附树脂吸附精制海南蒲桃原花青素，然后用浓度80％乙醇水溶液或甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液50℃下减压干燥，得到粉末状海南蒲桃原花青素，100g海南蒲桃粉末提取原花青素为5.87g。

Claims

1.一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：

2.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)用大孔吸附树脂吸附海南蒲桃原花青素的方法是：将调节pH值后得到的提取液通过吸附树脂柱床，流速0.3～4倍柱床体积/小时，当柱床流出液原花青素的质量浓度达上柱前溶液浓度的10～50％时上样停止，以正丁醇-盐酸法进行洗脱原花青素含量的检测；再以1/2倍柱床体积的去离子水清洗柱床，流速0.5～3倍柱床体积/小时；以10～100％、pH值为1～10的醇溶液通过已吸附提取物的柱床，解吸吸附于树脂上的原花青素，流速0.3～3倍柱床体积/小时；然后层析柱流出0.2～1.5倍柱床体积的洗脱液后开始收集洗脱液，至流出液体积为柱床体积的0.5～4倍时停止。

3.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的海南蒲桃果实粉碎后的颗粒度为10～140目。

4.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(2)中每克海南蒲桃果实粉添加1～20毫升的溶剂；所述的溶剂为20～95％乙醇溶液或者20～95％甲醇溶液或者20～95％丙酮其中之一。

5.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的固液分离为过滤分离或离心分离。

6.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(2)或(4)中采用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH值为1～10。

7.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)所述的减压蒸馏回收醇溶剂的蒸馏温度：30～90℃，真空度：-0.07～-0.09MPa。

8.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)所述的真空喷雾干燥温度为50～100℃。

9.根据权利要求1所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的树脂为：DA201、DM301、DS401、DM-18或NKA-II的其中之一。

10.根据权利要求2所述的一种从海南蒲桃未成熟果实中提取原花青素的方法，其特征在于，所述的醇溶液为乙醇水溶液或甲醇水溶液的其中之一。