CN103409468B - 一种免疫缺陷小鼠模型的建立方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的免疫缺陷小鼠模型的建立方法，包括如下步骤：(1)构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA；(2)步骤(1)构建出的DNA纯化后经逆转录酶经体外转录为mRNA；(3)mRNA纯化并冻存于RNAase free的超纯水中；(4)在SPF级别饲养条件下，饲养受孕雌鼠和假孕雌鼠；(5)从步骤(4)的受孕雌鼠腹腔中获取输卵管，收集受精卵；(6)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进步骤(5)得到的受精卵的原核内；(7)将步骤(6)获得的受精卵移植入步骤(4)获得的假孕雌鼠体内，假孕雌鼠开始培育第二代；(8)建立稳定的缺陷小鼠品系。本发明的优点，能够得到完全对异体移植无免疫排斥作用的小鼠模型用于试验。
Description
技术领域
本发明涉及用于试验的动物模型的建立方法，具体是一种免疫缺陷小鼠模型的建立方法。
背景技术
建立免疫缺陷的小鼠模型普遍用于治疗肿瘤药物的筛选、癌症的治疗方法等试验。利用免疫缺陷的小鼠模型对研究肿瘤药物、及其它疾病的治疗机理有着极大的作用，从而可以达到对疾病的预防控制、提高治愈率的目的。
目前，常用作免疫缺陷小鼠模型的品种有Rag1基因敲除小鼠、NOD/SCID小鼠、Rag2基因敲除小鼠。衡量机体免疫缺陷的程度，主要是测量机体内T、B淋巴细胞、NK细胞所占的比例。Rag基因敲除小鼠不能在体内产生成熟的T、B淋巴细胞，但可以产生正常水平的NK细胞，对异体移植物还是具有一定的免疫排斥作用；NOD/SCID小鼠缺少发育成熟的T、B淋巴细胞，NK细胞的活性也较低。相对于Rag小鼠而言，NOD/SCID小鼠对异体移植物免疫排斥较低，对于这些小鼠还需作出进一步的人工化的处理，使之成为完全对异体移植无影响的、符合试验指标的小鼠。在现有方法中，美国的杰克逊实验室(The Jackson Laboratory)和日本的实验动物研究中心(Central Institute for Experimental Animals，CIEA)都是将NOD/SCID小鼠和敲除IL2rg基因的小鼠进行交配，再经过遗传筛选的办法得到缺少成熟T、B和NK细胞的免疫缺陷小鼠，并分别命名为NSG小鼠和NOG小鼠。但是利用此种方法建立免疫缺陷小鼠品系需要两年的时间，存在周期漫长、品系背景不纯等缺陷。而且，美国和日本为了对我国进行技术封锁，至今不肯向中国市场出售NSG和NOG小鼠，给我国科研事业的发展制造障碍。
发明内容
为了解决现有技术中建立免疫缺陷小鼠品系周期漫长、品系背景不纯的技术缺陷，以及冲破美国、日本对我国的技术封锁，本发明公开了一种免疫缺陷小鼠模型的建立方法，使我国得到符合试验指标、品系背景更纯的免疫缺陷小鼠模型，同时缩短了得到免疫缺陷小鼠的时间，通过本发明建立的免疫缺陷小鼠是一种良好的人源化小鼠的载体。通过向本发明建立的免疫缺陷小鼠体内移植人CD34+造血干细胞，小鼠模型无排斥人体组织的反应，可以建立造血系统人源化小鼠模型。本发明所建立的免疫缺陷小鼠可以应用于肿瘤生物学，人源化抗体制造，HIV等研究领域。
实现上述目的的技术方案是，一种免疫缺陷小鼠模型的建立方法，包括如下步骤：(1)利用TEALN基因敲除术，构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA；
(2)将步骤(1)构建出的DNA纯化，纯化后使用SP6逆转录酶经体外转录为mRNA；
(3)将步骤(2)得到的mRNA纯化，并冻存于RNAase free的超纯水中，以备显微注射之用；
(4)在SPF级别饲养条件下，饲养受孕雌鼠和假孕雌鼠；
(5)从步骤(4)的受孕雌鼠腹腔中获取输卵管，用质量浓度为0.9％的生理盐水清洗后，放在显微镜下观察，挑取并收集受精卵；
(6)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进步骤(5)得到的受精卵的原核内，受精卵将mRNA翻译成蛋白，蛋白结合到免疫相关基因，从而使免疫相关基因的功能丧失。
(7)将步骤(6)获得的受精卵移植入步骤(4)获得的假孕雌鼠体内，假孕雌鼠开始培育第二代；
(8)将步骤(7)获得的免疫缺陷小鼠自交，扩大种群数量，建立稳定的缺陷小鼠品系。
所述的小鼠为Rag1基因敲除小鼠、NOD/SCID小鼠或Rag2基因敲除小鼠。
所述的免疫相关基因为IL2rg基因。
所述步骤(1)的操作步骤为：①利用TELAN Targeter软件对免疫相关基因序列分析，从小鼠细胞中的免疫相关基因序列中选择合适做敲除的基因位点为AGATCCTTCTTAGTCCTTCAGCTGCTCCTGCTGAGGGCAGGGTGGAGCTCC
②步骤①中的基因位点中，从首端碱基A开始的基因片段AGATCCTTCTTAG即为L，尾端的基因片段AGGCAGGGTGGAGCTCC即为R，剩余中间部分的基因片段即为M，分别编码与L、R结合的DNA。构建的DNA所编译的蛋白与L和R结合，破坏M序列。
所述步骤(4)中的受孕雌鼠的获得方法是将雌鼠注射激素后，与相同品种的雄鼠发生交配行为，发生交配行为后的雌鼠即为受孕雌鼠。向雌鼠注射激素的方法是，向性成熟的雌鼠注射孕马血清促性腺激素，48小时后，再注射人绒毛膜促性腺激素，即可得到注射激素的雌鼠。
所述步骤(4)中假孕雌鼠的获得方法是，雌鼠与同一品种结扎处理过的雄鼠发生交配行为后，即为假孕雌鼠。
本发明的有益效果：本发明方法中构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA时，经过了大量试验，选择出了合适的免疫相关基因敲除位点，能够得到完全对异体移植无免疫作用的小鼠模型用于试验，而且建立小鼠模型的周期由现在的两年时间缩短到两个月，使NOD/SCID小鼠、RAG基因敲除小鼠的T、B、NK淋巴细胞比例更少，进一步得到免疫缺陷程度高的小鼠。此种小鼠用作肿瘤药物筛选、治疗疾病机理的试验时，异体移植成功率高，是一种理想的人源化小鼠载体，并且，小鼠品系背景更加纯净，例如母代是NOD/SCID小鼠，其进一步免疫缺陷的小鼠品系也是稳定的NOD/SCID小鼠。
附图说明
图1为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、NOD/SCID小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(NSI)的T细胞仪器谱图；
图2为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、NOD/SCID小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(NSI)的B细胞仪器谱图；
图3为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、NOD/SCID小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(NSI)的NK细胞仪器谱图；
图4为使用本发明方法获得的免疫缺陷NSI小鼠在移植脐带血造血干细胞后，注射造血干细胞的NSI小鼠和实验组移植造血干细胞4周之后的NSI小鼠骨髓中人源细胞比例的对比图谱。
图5为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、Rag1-/-小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(Rag1-/-IL2-/-)的T细胞仪器谱图；
图6为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、Rag1-/-小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(Rag1-/-IL2-/-)的B细胞仪器谱图；
图7为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、Rag1-/-小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(Rag1-/-IL2-/-)的NK细胞仪器谱图；
图8为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、Rag2-/-小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(Rag2-/-IL2-/-)的T细胞仪器谱图；
图9为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、Rag2-/-小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(Rag2-/-IL2-/-)的B细胞仪器谱图；
图10为利用流式细胞技术测量出的正常野生小鼠(WT)、Rag2-/-小鼠、通过本发明方法建立出的小鼠模型(Rag2-/-IL2-/-)的NK细胞仪器谱图
图11为对免疫相关基因IL2rg的基因敲除位点中可以识别序列L的DNA构建载体成功的示意图；
图12为对免疫相关基因IL2rg的基因敲除位点中可以识别序列R的DNA构建载体成功的示意图；
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明内容作出进一步的说明，以下实施例中所用到的NOD/SCID小鼠，Rag1基因缺陷小鼠，Rag2基因缺陷小鼠均为商品化的小鼠模型，可以从Jackson公司(The Jackson Laboratory)购买。。
实施例一：利用本发明的方法对NOD/SCID品种小鼠作出进一步的免疫相关基因敲除，构建免疫缺陷小鼠模型用于筛选肿瘤药物和治疗疾病试验，该方法包括以下步骤：(1)利用TEALN基因敲除术，构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA；
(2)将步骤(1)构建出的DNA纯化，纯化后使用SP6逆转录酶经体外转录为mRNA；
(3)将步骤(2)得到的mRNA纯化，并冻存于RNAase free的超纯水中，以备显微注射之用；
(4)在SPF级别饲养条件下，饲养受孕雌鼠和假孕雌鼠；
(5)从步骤(4)的受孕雌鼠腹腔中获取输卵管，用质量浓度为0.9％的生理盐水清洗后，放在显微镜下观察，挑取并收集受精卵；
(6)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进步骤(5)得到的受精卵的原核内，受精卵将mRNA翻译成蛋白，蛋白结合到免疫基因，破坏免疫相关基因序列，从而使免疫基因的功能丧失。
(7)将步骤(6)获得的受精卵移植入步骤(4)获得的假孕雌鼠体内，假孕雌鼠开始培育第二代；
(8)将步骤(7)获得的免疫缺陷小鼠自交，扩大种群数量，建立稳定的缺陷小鼠品系。
所述的免疫相关基因为IL2rg基因。
所述步骤(1)的操作步骤为：①利用TELAN Targeter软件对免疫相关基因序列分析，从小鼠细胞中的免疫相关基因序列中选择合适做敲除的基因位点为AGATCCTTCTTAGTCCTTCAGCTGCTCCTGCTGAGGGCAGGGTGGAGCTCC
②步骤①中的基因位点中，从首端碱基A开始的基因片段AGATCCTTCTTAG即为L，尾端的基因片段AGGCAGGGTGGAGCTCC即为R，剩余中间部分的基因片段即为M。构建成功的能够识别L序列的DNA载体见图11，其序列在DNA序列表中第1条DNA序列，与之相对应的转录成的mRNA见第2条DNA序列，构建成功的能够识别R序列的DNA载体见图12，其序列在DNA序列表的第3条DNA序列，与之相对应的转录成mRNA序列见第4条DNA序列。
上述步骤选择合适的敲除基因位点时，根据IL2rg基因序列，在DNA序列表中第5条DNA序列选择某一位点，无限次的重复本发明方法，最终得到的小鼠，测量小鼠体细胞中T、B、NK细胞的比例，才确定出的最佳敲除基因位点。
步骤(2)中DNA纯化的步骤如下：
1、50ul的酶切产物加入85ul的超纯水，和15ul的3M醋酸钠溶液，充分混匀.
2、加入等体积的苯酚/氯仿混合物(1∶1比例)抽提后再用等体积氯仿抽提两次。收集水相转移至新离心管。
3、加入2倍体积乙醇沉淀DNA，-20摄氏度静置30分钟后离心收集沉淀。
4、弃上清，50ul70％冰乙醇漂洗沉淀。
5、加入20ul超纯水重溶DNA。
6、紫外分光光度计测定DNA浓度。
7、DNA冻存于-20摄氏度备用。
步骤(3)中mRNA纯化的步骤为：
1、50ul的转录产物加入85ul的RNase free水，和15ul的3M醋酸钠溶液，充分混匀.
2、加入等体积的苯酚/氯仿混合物(1∶1比例)抽提后再用等体积氯仿抽提两次。收集水相转移至新离心管。
3、加入2倍体积乙醇沉淀mRNA，-20摄氏度静置30分钟后离心收集沉淀。
4、弃上清，50u170％冰乙醇漂洗沉淀。
5、加入20u1RNase free水重溶mRNA。
6、紫外分光光度计测定RNA浓度。
7、mRNA冻存于-20摄氏度备用。
所述步骤(4)中的受孕雌鼠的获得方法是将雌鼠注射激素后，与相同品种的雄鼠发生交配行为，发生交配行为后的雌鼠即为受孕雌鼠。
向雌鼠注射激素的方法是，向性成熟的雌鼠注射100U/ml孕马血清促性腺激素75μl，48小时后，再注射100U/ml人绒毛膜促性腺激素75μl，即可得到注射激素的雌鼠。所用到的孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素均是商业化成品，购自于prospec-tany公司。
所述步骤(4)中假孕雌鼠的获得方法是，雌鼠与同一品种结扎处理过的雄鼠发生交配行为后，即为假孕雌鼠。
应用本发明方法得到免疫缺陷小鼠，利用PCR和DNA测序技术检验免疫缺陷小鼠体细胞中的IL2rg基因是否被成功突变，被成功突变的IL2rg基因序列见DNA序列表，由DNA序列表第6条DNA序列可知，由于DNA序列的移码突变，IL2rg基因功能已丧失。
使用流式细胞计数测量野生小鼠、NOD/SCID小鼠、本发明的免疫缺陷小鼠即NSI小鼠外周血中的相关免疫细胞比例，证明通过本发明建立的方法，所获得的NSI小鼠确实为进一步免疫缺陷小鼠，具体步骤如下：
一、试验涉及到的仪器及试剂材料：B220-PERCP，NKp46-PE和CD3-APC流式抗体为ebioscience公司产品。流式细胞仪BD Accuri C6为BD公司产品。红细胞裂解液为BD公司产品。野生小鼠、NOD/SCID小鼠、NSI小鼠的饲养和繁育于中科院广州生物医药与健康研究院实验动物中心(SPF级)完成。
二、野生小鼠、NOD/SCID小鼠、NSI小鼠断尾取血，约200微升。使用BD公司的红细胞裂解液裂解红细胞后，300g离心10分钟，获取血液中的白细胞。将每份白细胞分为5等份，取其中的4份分别于如下流式抗体中4摄氏度孵育30分钟：B220-PERCP，NKp46-PE，CD3-APC，NKp46-PE+CD3-APC。流式抗体的用量和使用方法可以参考产品说明书。孵育完成后，PBS清洗一遍，重悬于200微升的PBS中，上机检测。
三、下述表格为按照上述方法建立的野生小鼠、NOD/SCID小鼠、NSI小鼠细胞中的的T、NK和B淋巴细胞的流失细胞数据比较。
由上表可看出与正常野生型小鼠相比，NSI免疫缺陷小鼠缺少发育成熟的T、NK和B淋巴细胞，主要表现为流式细胞技术检测到表达CD3，NKp46和B220表面分子的淋巴细胞很少，不足以对异体移植物产生免疫排斥反应。与NOD-SCID小鼠相比，NSI免疫缺陷小鼠缺少发育成熟的NK淋巴细胞。三种小鼠利用流式细胞测量出的T、B、NK细胞比例见图1、图2、图3。
使用本发明方法获得的免疫缺陷NSI小鼠在移植脐带血造血干细胞后可以在小鼠体内重建人类造血系统的试验：
一、试验中所用试剂材料及其来源包括：
脐带血由广州脐带血干细胞库提供。流式抗体CD34-APC和CD38-PE为Biolengend产品。Diamond CD34 Isolation Kit为MACS公司产品。Lymphoprep淋巴细胞分离液为Axis-shield公司产品。
二、试验步骤：脐带血使用生理盐水1∶1稀释之后，使用Lymphoprep淋巴细胞分离液分离白细胞，随后对分离到的细胞进行计数。使用DiamondCD34 Isolation Kit分离白细胞中的CD34+细胞。取0.5X106个造血干细胞，通过尾静脉注射入NSI小鼠体内。
如图4所示，对照组为未注射造血干细胞的NSI小鼠，实验组为移植造血干细胞4周之后的NSI小鼠。流式数据显示，通过注射脐带血造血干细胞，可以在小鼠骨髓中检测到表达人体白细胞表面分子标记(CD45)的造血细胞。在CD45阳性的细胞中，可以检测到CD34阳性的造血干细胞。试验结果证明，通过移植造血干细胞，可以在NSI小鼠体内成功重建人类造血系统。
实施例二：利用本发明的方法对Rag1基因敲除小鼠作出进一步的免疫缺陷小鼠模型用于筛选肿瘤药物和治疗疾病试验，该方法包括以下步骤：(1)利用TEALN基因敲除术，构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA；
(2)将步骤(1)构建出的DNA纯化，纯化后使用SP6逆转录酶经体外转录为mRNA；
(3)将步骤(2)得到的mRNA纯化，并冻存于RNAase free的超纯水中，以备显微注射之用；
(4)在SPF级别饲养条件下，饲养受孕雌鼠和假孕雌鼠；
(5)从步骤(4)的受孕雌鼠腹腔中获取输卵管，用质量浓度为0.9％的生理盐水清洗后，放在显微镜下观察，挑取并收集受精卵；
(6)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进步骤(5)得到的受精卵的原核内，受精卵将mRNA翻译成蛋白，蛋白结合到免疫相关基因的敲除位点，破坏免疫相关基因的序列，从而使免疫相关基因的功能丧失。
(7)将步骤(6)获得的受精卵移植入步骤(4)获得的假孕雌鼠体内，假孕雌鼠开始培育第二代；
(8)将步骤(7)获得的免疫缺陷小鼠自交，扩大种群数量，建立稳定的免疫缺陷小鼠品系。
所述的免疫相关基因为IL2rg基因。
所述步骤(1)的操作步骤为：①利用TELAN Targeter软件对免疫相关基因序列分析，从小鼠细胞中的免疫相关基因序列中选择合适做敲除的基因位点为AGATCCTTCTTAGTCCTTCAGCTGCTCCTGCTGAGGGCAGGGTGGAGCTCC
②步骤①中的基因位点中，从首端碱基A开始的基因片段AGATCCTTCTTAG即为L，尾端的基因片段AGGCAGGGTGGAGCTCC即为R，剩余中间部分的基因片段即为M。构建能够编码与L和R结合蛋白的DNA序列。
上述步骤选择合适的敲除基因位点时，根据IL2rg基因序列，选择某一位点，无限次的重复本发明方法，最终得到的小鼠，测量小鼠体细胞中T、B、NK细胞的比例，才确定出的最佳敲除基因位点。对RAG1小鼠作进一步的免疫缺陷如图5-7所示
所述步骤(4)中的受孕雌鼠的获得方法是将雌鼠注射激素后，与相同品种的雄鼠发生交配行为，发生交配行为后的雌鼠即为受孕雌鼠。
向雌鼠注射激素的方法是，向性成熟的雌鼠注射100U/ml孕马血清促性腺激素75μl，48小时后，再注射100U/ml人绒毛膜促性腺激素75μl，即可得到注射激素的雌鼠。所用到的孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素均是商业化成品，购自于prospec-tany公司。
所述步骤(4)中假孕雌鼠的获得方法是，雌鼠与同一品种结扎处理过的雄鼠发生交配行为后，即为假孕雌鼠。
实施例三：利用本发明的方法对Rag2基因敲除小鼠作出进一步的免疫缺陷小鼠模型用于筛选肿瘤药物和治疗疾病试验，该方法包括以下步骤：(1)利用TEALN基因敲除术，构建使小鼠细胞中免疫相关基因功能丧失的DNA；
(2)将步骤(1)构建出的DNA纯化，纯化后使用SP6逆转录酶经体外转录为mRNA；
(3)将步骤(2)得到的mRNA纯化，并冻存于RNAase free的超纯水中，以备显微注射之用；
(4)在SPF级别饲养条件下，饲养受孕雌鼠和假孕雌鼠；
(5)从步骤(4)的受孕雌鼠腹腔中获取输卵管，用质量浓度为0.9％的生理盐水清洗后，放在显微镜下观察，挑取并收集受精卵；
(6)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进步骤(5)得到的受精卵的原核内，受精卵将mRNA翻译成蛋白，蛋白结合到免疫相关基因的敲除位点，破坏免疫相关基因的序列，从而使免疫相关基因的功能丧失。
(7)将步骤(6)获得的受精卵移植入步骤(4)获得的假孕雌鼠体内，假孕雌鼠开始培育第二代；
(8)将步骤(7)获得的免疫缺陷小鼠自交，扩大种群数量，建立稳定的免疫缺陷小鼠品系。
所述的免疫相关基因为IL2rg基因。
所述步骤(1)的操作步骤为：①利用TELAN Targeter软件对免疫相关基因序列分析，从小鼠细胞中的免疫相关基因序列中选择合适做敲除的基因位点为AGATCCTTCTTAGTCCTTCAGCTGCTCCTGCTGAGGGCAGGGTGGAGCTCC
②步骤①中的基因位点中，从首端碱基A开始的基因片段AGATCCTTCTTAG即为L，尾端的基因片段AGGCAGGGTGGAGCTCC即为R，剩余中间部分的基因片段即为M。构建能够编码与L和R结合蛋白的DNA序列。
上述步骤选择合适的敲除基因位点时，根据IL2rg基因序列，选择某一位点，无限次的重复本发明方法，最终得到的小鼠，测量小鼠体细胞中T、B、NK细胞的比例，才确定出的最佳敲除基因位点。
所述步骤(4)中的受孕雌鼠的获得方法是将雌鼠注射激素后，与相同品种的雄鼠发生交配行为，发生交配行为后的雌鼠即为受孕雌鼠。
向雌鼠注射激素的方法是，向性成熟的雌鼠注射100U/ml孕马血清促性腺激素75μl，48小时后，再注射100U/ml人绒毛膜促性腺激素75μl，即可得到注射激素的雌鼠。所用到的孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素均是商业化成品，购自于prospec-tany公司。
所述步骤(4)中假孕雌鼠的获得方法是，雌鼠与同一品种结扎处理过的雄鼠发生交配行为后，即为假孕雌鼠。对RAG2小鼠作进一步的免疫缺陷如图8-10所示。
以上仅为对本发明内容作出进一步说明所列举的实施例，一切基于本发明实质内容所作出的变化，均应落在本发明的保护范围内。
Claims (1)
1.一种免疫缺陷小鼠模型的建立方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)利用TALEN基因敲除术，构建使Rag1基因敲除小鼠、Rag2基因敲除小鼠或NOD/SCID小鼠细胞中免疫相关基因IL2rg基因功能丧失的DNA：①利用TALEN Targeter软件对免疫相关基因序列分析，从小鼠细胞中的免疫相关基因序列中选择合适做敲除的基因位点为AGATCCTTCTTAGTCCTTCAGCTGCTCCTGCTGAGGGCAGGGTGGAGCTCC；
②步骤①中的基因位点中，从首端碱基A开始的基因片段AGATCCTTCTTAG即为L，尾端的基因片段AGGCAGGGTGGAGCTCC即为R，剩余中间部分的基因片段即为M，构建的DNA所编译的蛋白与L和R结合，破坏M序列；
(2)将步骤(1)构建出的DNA纯化，纯化后使用SP6逆转录酶经体外转录为mRNA；
(3)将步骤(2)得到的mRNA纯化，并冻存于RNAase free的超纯水中，以备显微注射之用；
(4)用显微注射法将步骤(3)获得的mRNA注射进受精卵的原核内，受精卵将mRNA翻译成蛋白，蛋白结合到免疫相关基因，破坏免疫相关基因序列，从而使免疫相关基因的功能丧失。
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