CN103405618B - 一种补肾壮阳的中药组合物及其制备和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种补肾壮阳的中药组合物及其制备和检测方法，该中药组合物是本发明中药组合物由如下原料药组成：淫羊藿、鹿茸、补骨脂、巴戟天、红参、黄芪、肉桂、韭菜子、牛鞭、人参、熟地黄、生地黄、枸杞子、桑螵蛸、当归、川木通；本发明组合物加入药剂学上的常用辅料制成胶囊剂，其制备和检测方法具有简单可行、科学，专属性强等特点。

Description

一种补肾壮阳的中药组合物及其制备和检测方法

技术领域

本发明涉及一种补肾壮阳的中药组合物及其制备和检测方法，属于医药制剂技术领域。

背景技术

随着人们身体脏器功能的自然衰减，加之现代人饮食起居的严重失衡，随之而来的就是在强压力的现实竞争中，多数人明显的表现出了肾虚的种种症状。肾虚是祖国医学的辩证称谓，其是根据中医五脏辩证学说而得之。通常，肾之阴阳俱虚，则肾气化生不足，症见滑精、早泄，尿后滴沥不尽，小便次数多而清，腰膝酸软，听力减退，气短，四肢不温，脉细弱等。在传统中医学中，肾脏属于五脏之一，其为先天之本，是人体生命的先天根本和原动力，关系着人类的生存繁衍。肾气盈亏除了反应肾脏及其相关的组织健康与否，也代表生命力是旺是弱。

中医诊断学将肾虚分成肾阴虚和肾阳虚两大类，肾阳虚的症状：腰膝酸软，或腰背冷痛，畏寒肢冷，尤以下肢为甚；头晕目眩，精神萎靡，面色苍白；舌淡胖苔白，脉沉弱；其中男性易阳痿早泄，女性易宫寒不孕等；肾阴虚可见：腰膝酸软，眩晕耳鸣，盗汗失眠，口干，尿黄，舌红少津，脉细数；男子易遗精早泄，女子则多为经少经闭、崩漏，形体消瘦。现代医学对以上症状，没有明确的治疗办法。因此，中医药对此疾病具有独特的治疗效果，我们应充分利用中药的四气五味、功效主治和配伍原则，整体发挥治疗肾虚病症的作用。

本发明的技术方案是在公开的一件中药组合物专利技术的基础上研发、探索得来的，该现有技术的公开号为CN1335177A，公开日是2002年2月13日，然而本申请人在实际研究过程中发现，以上现有技术方案存在药物的制备方法公开不充分，仅概括性给出了较宽的技术范围，不具有可操作性，从而其给出的技术手段无法解决技术问题并达到相应的技术效果，这是本领域的技术人员，运用现有的技术水平和实验手段无法实现的。因此本申请专利是通过大量实验摸索，并找到了更为合理的处方组成、用量配比及其制备方法，最终通过临床药效学实验效果为考察指标，以提高制剂稳定性和生物利用度为目的，而创造性的研制成功的一种补肾壮阳的中药组合物及其制备工艺。

发明内容

本发明的目的在于提供一种补肾壮阳的中药组合物，该组合物具有疗效明确、质量可控之特点。

本发明的另一目的在于保护该组合物的制备方法及其检测方法。

本发明的中药组合物由如下原料药及方法制备而成：

A:原料组成：淫羊藿195份、鹿茸14份、补骨脂143份、巴戟天143份、红参65份、黄芪316份、肉桂65份、韭菜子254份、牛鞭27份、人参33份、熟地黄266份、生地黄130份、枸杞子92份、桑螵蛸71份、当归28份、川木通6份；

B:将上述重量配比的16味原料药，按以下步骤操作：

⑴将鹿茸、红参、肉桂、牛鞭、人参分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61份、韭菜子10份粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿和韭菜子，与补骨脂、巴戟天、黄芪、枸杞子、桑螵蛸、当归和川木通混合，加入与原料药重量比为6-12倍量、pH为3.0-9.0的水，浸泡20-60min，加热煎煮3次，每次0.5-2h，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.10-1.50，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21份，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄、生地黄，加入与原料药重量比为6-12倍量、pH为3.0-9.0的水，浸泡20-60min后，加热煎煮3次，每次0.5-2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10-1.50，冷至30℃-50℃时，加入乙醇使得含醇量达到70%-90%，冷藏静置24-48h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.10-1.50，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，即得。

其中，优选制备本发明组合物的方法步骤为：

⑴将鹿茸、红参、肉桂、牛鞭、人参分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61份、韭菜子10份粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿和韭菜子，与补骨脂、巴戟天、黄芪、枸杞子、桑螵蛸、当归和川木通混合，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.5的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.0的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.5的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21份，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄、生地黄，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.0的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.5的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.0的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，冷至40℃时，加入乙醇使得含醇量达到80%，冷藏静置24h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，即得。

上述技术方案中所发明的中药组合物，再加入药物制剂技术中常见的药用辅料可制备成胶囊剂。

上述技术方案中所发明的中药组合物，其薄层色谱鉴别方法和结果包括如下方法中的一种或几种：

⑴补骨脂的鉴别方法：取组合物4g，研细，加醋酸乙酯20ml，置水浴中加热回流30min,滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯=2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

⑵肉桂的鉴别方法：取组合物3g，加乙醚15ml，密塞，振摇10min，分取乙醚液，自然挥散至干，残留物加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液;另取桂皮醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程60-90℃石油醚-醋酸乙酯=17:3展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1%2,4-二硝基苯肼溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

⑶人参的鉴别方法：取组合物5g，加7%硫酸溶液50ml，研磨10min，置水浴中加热回流1h，冷却，滤过，滤渣加60～90℃沸程的石油醚研磨提取3次，每次15ml，合并石油醚液，挥干，残渣物加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参二醇对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯=3:2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，于105℃加热5-10min后，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

上述技术方案中本发明的中药组合物，其含量测定方法包括以下步骤：

⑴色谱条件与系统适用性试验：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈：水=26:74为流动相，检测波长是270nm,理论塔板数以淫羊藿苷峰计算应不低于2000；

⑵供试品溶液的制备：取组合物0.75g，加入70%乙醇100ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，加70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜0.45μm滤过，即得；

⑶对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

⑷分别精密吸取上述⑵、⑶中制备的对照品溶液，供试品溶液，注入液相色谱仪，按照⑴中的条件测定。

本发明的中药组合物，组方中以淫羊藿和黄芪为君药，其中，主以淫羊藿补肾壮阳，显著提升肾阳之气，配以黄芪益气生血，调理气血、阴阳之平衡，两药相伍共同调理肾脏之功能；再以鹿茸、补骨脂、巴戟天、韭菜子、牛鞭、人参、红参等药材为臣药，以提升君药之补肾壮阳、益气之作用。其次组方中佐以熟地黄、地黄、枸杞子、当归等药物，以滋阴养血来平衡君、臣阳性药烈燥之性，从而整体调理机体达到阴平阳秘的最佳状态；最后使之以川木通清热利尿、引药下行。综观全方，16味药材精简配比、相互契合，共同调理发病者机体阴平阳秘，最终整体发挥补肾壮阳、益气养血之功效。

本发明在实际研究过程当中，相比于在先申请发明专利，其主要的创造点在于：通过对组合物的制备方法进行了创新性的研究，确定出了半仿生提取，超微粉碎（粉末粒径﹤75μm）等技术方案的合理参数范围，同时，我们对本发明组合物的质量检测方法也进行了深入的研究，最终确定出了组合物的显微鉴别、薄层鉴别特征及其含量测定方法，以上方法为该药物的产业化的有效性及质量可控性提供了坚实的保障。经过申请人的检索，与本发明技术方案最为接近的对比文件是CN1335177A，以下着重以此现有技术为比对阐述本发明中相关技术方案的有益效果。

⑴半仿生提取：

在本发明组合物制备方法的研究过程中，我们对不同药味分别进行醇提、渗漉、浸渍、水提等等常规提取方法的探索，偶然创造性的探索出了以上技术方案中半仿生提取的参数范围，并且具有特别突出的技术效果。半仿生法是现代药剂学新兴的药物提取技术，其具有符合药物经胃肠道转运过程、适合工业化生产、体现中医治病综合成分作用的特点，并非等同于纯化学观点的“酸碱法”。该方法最为核心的技术点在于提取出适合人体胃肠吸收的药物“活性混合物”，这与中医药的整体、统一发挥疗效的指导思想相吻合。为了科学、充分的体现本技术特征的有益效果，为了研究结果的整齐可比性，我们将本发明方案和接近的对比技术按照平行的处理方式（即上述：本发明组合物的优选制备方法的技术方案）进行药材提取，其二者唯一的区别点在于本发明采用半仿生法（下述为组1），而对比技术则采用水煎煮（下述为组2），其余的参数和影响因素均与上述优选制备方法中保持一致，以此考察半仿生法与水煎煮法的区别效果。

a.对君药淫羊藿指标性成分淫羊藿苷提取率的影响

我们按照2010版《中国药典》一部中淫羊藿药材淫羊藿苷含量的测定方法，分别对组1和组2技术方案所得的组合物进行测定，其结果为：组1和组2的淫羊藿苷含量分别为1.5%、0.6%。该研究结果显示：组1（即本发明半仿生提取）的技术手段，能够是的组方中君药淫羊藿的有效成分提取率显著提高，进一步提示该中药组合物的疗效得到显著提高。

b.对组合物浸出物得率的影响：对组1和组2所得的组合物，我们分别按照2010版中国药典附录X中热浸法进行水溶性浸出物的测定，结果见表1。

表1两种方法制得的组合物浸出物结果的影响(n=3)

注：^＊＊＊P<0.001。

由表1可知：组1浸出物得率，无论是在15、30、45min任一时间点，均明显的高于组2并达到了极显著的差异性（P<0.001），依据目前对中药制剂的质量评价观点可知：本发明的技术方案组1（半仿生法）所制得的药物具有较高的有效组分，表明其制备的药物能够达到良好的临床疗效。

⑵超微粉碎技术研究：

在本发明的技术内容中，我们将最终制得的总混合药粉进行了超微粉碎（即平均粒径小于75μm）,这将使得本发明组合药物在作用于人体后，其有效物质更容易被分布、吸收，并能快速起效等优势。为了科学、合理的体现本技术特征的有益效果，为了研究结果的整齐可比性，我们将本发明方案和接近的对比技术按照平行、科学的处理方式（即上述：本发明组合物的优选制备方法的技术方案）进行药材提取，其二者唯一的区别点在于本发明采用超微粉碎-药粉粒径小于75μm（下述为组1），而对比技术则采用常规粉碎-药粉粒径范围是90μm～250μm（下述为组2），其余的参数和影响因素均与优选组技术方案保持一致，最终通过单因素变量的考察方法区别二者的技术效果。下面我们将此技术特征进行的有关研究结果总结如下：

a细菌数量的比对：比较组1、组2制得的药粉，我们对二者制成药粉中的细菌数量进行测定，其结果如下：组1药粉的细菌数为5100个/g，组2药粉的细菌数为14.2万个/g，该结果提示：组1即本发明技术方案所制的药粉，其细菌数明显低于组2所述的常规粉碎物，即从生产过程中带来的污染会明显减少，从而有利于该组合物的疗效及其后续的灭菌保质工艺，这与本发明所述的技术方案的独特设计分不开的。

b吸湿性研究:

取以上组1和组2所制得的药粉，平摊于玻璃平皿上（约7～10mm厚），室温条件（考察的参数范围，其中温度变化为24～29℃，湿度变化为50%～70%）自然放置2周，并于1d、3d、7d分别称重，比较考察各组粉末的吸湿情况，结果见表2。

表2各组药粉在不同时间的吸湿情况（n=3）

表2的结果显示：暴露在空气中的组1和组2无论在放置1d、3d、7d后任一时间点的含水量的比较，组1（即本发明技术组）的测定结果均低于组2，表明本发明技术特征组具有较低的吸湿率，这一特点对于该药物制剂后续的保存和药效的发挥具有良好的作用。

⑶质量检测方法：

我们对于本发明的组合物，建立起了科学、专属性良好的质量检测方法，该技术方案通过大量的实验参数筛选，并且充分结合本发明组合物的组成特点，最终确定出专属性强的显微特征、薄层特征及其指标性成分淫羊藿苷的含量限度等方法条件，从而有力的确保组合物的应用安全和疗效稳定。

以下是我们对本发明组合物的药效学研究，由于本发明的核心创新点在于：药材的提取纯化工艺方面，我们以公开号CN1335177A的技术方案为最接近的对比技术，因此我们在药效学实验中以二者的技术内容为对比，结合现代药理学的研究水平，并通过研究本发明中药组合物对实验用大鼠的补肾试验、壮阳试验和交配试验的影响，充分的阐明了本发明中药组合物补肾壮阳的显著疗效。为了简化实验操作，节省研究费用，遵循平行对照的实验原则，摒除各个药物组因剂型本身带来的疗效差异，从而更加科学的突出本发明技术方案的创造性，我们以其中一个最为接近的技术方案的中间品组为代表进行研究，然这对于本领域技术人员完全可以由此推导，理解本申请中其它参数点技术方案的有益效果，因此本发明技术内容和药效结果决不限于此范围。

1.试验材料及结果处理方法：

1.1试验药物的制备：

A本发明试验药物的制备：

⑴将鹿茸14g、红参65g、肉桂65g、牛鞭27g、人参33g分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61g、韭菜子10g粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿134g和韭菜子244g，与补骨脂143g、巴戟天143g、黄芪316g、枸杞子92g、桑螵蛸71g、当归28g和川木通6g混合，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.5的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.0的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.5的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21g，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄266g、生地黄130g，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.0的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.5的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.0的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，冷至40℃时，加入乙醇使得含醇量达到80%，冷藏静置24h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，备用；临用前，加蒸馏水配制成混悬药液，即得本发明药物中间品组。

B.CN1335177A中间品组的制备:由于在CN1335177A的公开文本中对制备工艺的描述仅有宽泛的工艺流程，未能充分公开任何可操作的技术参数，因此对于试验性较强的药物制剂领域，本领域的普通技术人员是难以通过其所公开的技术信息得到所述的能够实际解决技术问题的药物制剂，这也正好体现了本发明是具有创造性的一个重要方面；因此，为了充分、合理的体现出本发明技术方案的优越性和创新性，我们选择平行对比原则来进行验证研究，即在CN1335177A公开的无数个不明确的制备工艺中选择与本发明最佳制备工艺流程相同的参数，验证在工艺流程中起相同作用参数值带来的不同效果。我们在制备对比技术CN1335177A的中间品组时，对于在先技术中未能给出的技术参数，二者均以本发明探索出的最优参数点来操作，具体制备方法如下：

⑴将鹿茸14g、红参65g、肉桂65g、人参33g分别粉碎成细粉，过筛，留用；

⑵取淫羊藿58g、韭菜子11g粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿137g和韭菜子243g，与补骨脂143g、巴戟天143g、黄芪316g、枸杞子92g、桑螵蛸71g、当归28g和川木通6g混合，加入与原料药重量比为8倍量水，加热煎煮3次，每次1.5h，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21g，混匀，干燥并粉碎成中粉，过筛，留用；

⑷取熟地黄266g、生地黄130g，加入与原料药重量比为10倍量水，加热煎煮3次，每次1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，加入乙醇使得含醇量达到80%，冷藏静置24h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将牛鞭27g取其茎加水浸泡至软，煎煮后捞出，逐个去除鞭上脂肪、肌肉、尿道粘膜、筋膜等非药用部位，用绞肉机绞碎，干燥，粉碎，过筛，得牛鞭粉备用；

⑹将⑴、⑸中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，粉碎，过筛备用；临用前，加蒸馏水配制成混悬药液，即得CN1335177A中间品组。

C.其它试验用药：

丙酸睾丸素，上海第九制药厂生产；苯甲酸雌二醇，天津金耀氨基酸有限公司生产。

1.2试验动物：SD大鼠，由山东大学实验动物中心提供；

1.3统计学处理：实验结果以表示，采用t检验，测定组间差异的显著性。

2.药效试验及结果：

2.1补肾试验

取40只雄性大鼠,体重为120～150g，用12.5%乌拉坦0.6mL/只注射使其浅麻醉，背位固定，消毒阴囊皮肤，摘去双侧睾丸。术后肌注青霉素钠2万U/kg以防感染，共3d。3d后，将40只大鼠随机均分为4组，每组10只。其中①模型组，每天给等容积的生理盐水灌胃；②丙酸睾丸素组，每天2mg/kg皮下注射；③本发明中间品组，每天1.6g生药量/kg灌胃给药；④CN1335177A中间品组，每天1.6g生药量/kg灌胃给药。另取同批大鼠10只不做任何处理作为正常对照组，每天给等容积的生理盐水灌胃。各组连续30d灌胃后，末次给药后24h，分别处死并解剖各组大鼠，立即称取包皮腺、精囊腺和前列腺、提肛肌的质量，计算脏器系数，结果见表3。

表3对肾虚型大鼠生殖器官脏器系数的影响（n=10）

注：与正常组比较，^■■■P<0.001；与模型组比较，^**P<0.01,^***P<0.001；与CN1335177A中间品组比较，^△P<0.05,^△△P<0.01。

表3结果显示：与正常组对比，模型组大鼠各生殖器官脏器系数均具有极显著的差异性（P<0.001），这充分的表明了本试验中所采用的造模方法取得成功；与模型组对比，本发明中间品组和阳性丙酸睾丸素组的试验用大鼠，其各个生殖器官的脏器系数均达到了极显著的疗效差异（P<0.001），而CN1335177A中间品对比组，在包皮腺和将囊腺+前列腺的脏器系数数值中取得了P<0.001的差异性，在提肛肌的脏器系数中具有显著的差异性（P<0.01）；因此，我们可以明显的得出：无论是阳性对照组，还是本发明和CN1335177A中间品组，均能够对试验中模型大鼠具有显著的治疗效果，亦即，各试验组均具有较强的补肾、强肾的治疗作用。与CN1335177A中间品组比较，本发明中间品组对于试验中大鼠的包皮腺和提肛肌的脏器系数具有更为显著的治疗作用，并达到了显著的差异性（P<0.01），对于大鼠的精囊腺+前列腺则有较好的增强作用，其达到了统计学意义上的差异性（P<0.05）;通过以上试验充分表明：本发明组的药物组合物具有非常显著的补肾作用，并且比CN1335177A对比组具有更为显效的治疗肾虚证的作用。

2.2壮阳试验

本试验的造模、分组及其给药方式同上述“2.1补肾试验”中的方法，将各组试验用大鼠连续给药30d，于末次给药后1h后，将电刺激器的刺激电极放置于大鼠阴茎部位，给予表面部电刺激，其中电流强度4mA，周期50ms，脉宽1ms。记录从刺激开始至阴茎勃起时间(勃起潜伏期)和阴茎勃起持续时间，结果见表4。

表4对肾虚型大鼠阴茎勃起功能的影响（n=10）

注：与正常组治比较，^■■■P<0.001；与模型组比较，^*P<0.05,^**P<0.01,^***P<0.001；与CN1335177A中间品组比较，^△P<0.05,^△△P<0.01。

表4结果显示：将正常组和模型组相比较，对于肾虚型大鼠阴茎勃起功能二者具有极显著的差异性（P<0.001），模型组大鼠的此项功能明显的低于正常组，这将充分表明本试验中肾虚型模型的成功建立。与模型组相比，对于大鼠的阴茎勃起持续时间，丙酸睾丸素组、本发明及CN1335177A中间品组均能够显著的延长时间，并且统计学数据达到了极显著的差异性效果（P<0.001）；而对于试验大鼠的勃起潜伏期，上述3组也具有较好的治疗作用，其差异性达到了统计学意义。将本发明中间品组与CN1335177A组相比，本发明组对肾虚型大鼠的勃起功能均具有非常显效的治疗效果，其各项数值结果均优于对比组，亦具有统计学意义上的差异性。以上补阳试验启示；本发明组对于阴茎勃起功能具有显著的治疗作用，其有益效果绝对优于CN1335177A对比组。

2.3交配试验

取大鼠80只，雌雄各半，将雄性大鼠随机分成4组，每组10只，其中①正常对照组，每天给等容积的生理盐水灌胃；②丙酸睾丸素组，每天2mg/kg皮下注射；③本发明中间品组，每天1.6g生药量/kg灌胃给药；④CN1335177A中间品组，每天1.6g生药量/kg灌胃给药。各组连续10d，于末次给药后1h，与雌鼠合笼进行交配。雌鼠合笼交配前15d，用戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，无菌条件下手术切除双侧卵巢，缝合创口。交配前48h，皮下注射苯甲酸雌二醇100ng/kg，交配前4h，再次皮下注射黄体酮注射液2.5mg/kg。交配时先将雄性大鼠单只放入笼中5min,待其适应环境后,再放入1只雌鼠，分别记录雄鼠扑捉雌鼠的潜伏期、交配潜伏期、30min内扑捉次数和交配次数。结果见表5。

表5对大鼠交配能力的影响（n=10）

注：与正常组比较，^■P<0.05，^■■P<0.01，^■■■P<0.001。

表5结果表明：与正常组比较：丙酸睾丸素组、本发明和CN1335177A中间品组，对于试验组大鼠的交配能力，无论是扑捉或是交配期，均有明显的治疗作用，且达到了统计学上的差异性。与CN1335177A中间品组比较，本发明组对于雄鼠扑捉雌鼠潜伏期和交配潜伏期均短于CN1335177A中间品组，而30min内雄鼠扑捉雌鼠次数和交配次数则多于CN1335177A中间品组；由此可见，二者虽然未达到统计学意义上的显著差异性，但其各试验指标均明显优于CN1335177A组。

以上药效学试验充分的说明：本发明中间品组能够增强肾虚型大鼠的各项器官的机能，显著提升大鼠的生殖、交配能力，且在上述各项试验指标均明显优于CN1335177A中间品对比组，上述研究结果充分体现出了，本发明组合物的补肾壮阳作用。

具体实施方式

以下是本发明内容的具体实施例，用于阐述本申请文件中所要解决技术问题的技术方案，有助于本领域技术人员理解本发明内容，但本发明技术方案的实现并不限于这些实施例。

实施例1

⑴将鹿茸14g、红参65g、肉桂65g、牛鞭27g、人参33g分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61g、韭菜子10g粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿134g和韭菜子244g，与补骨脂143g、巴戟天143g、黄芪316g、枸杞子92g、桑螵蛸71g、当归28g和川木通6g混合，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.5的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.0的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.5的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21g，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄266g、生地黄130g，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.0的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.5的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.0的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，冷至40℃时，加入乙醇使得含醇量达到80%，冷藏静置24h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，再与药剂学上常用的辅料混匀，装入胶囊，即得1000粒胶囊剂。

实施例2

⑴将鹿茸14g、红参65g、肉桂65g、牛鞭27g、人参33g分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61g、韭菜子10g粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿134g和韭菜子244g，与补骨脂143g、巴戟天143g、黄芪316g、枸杞子92g、桑螵蛸71g、当归28g和川木通6g混合，第一次加入与原料药重量比为12倍量、pH为3.0的水，浸泡20min，煎煮2h，第二次加入与原料药重量比为8倍量、pH为7.0的水，煎煮0.5h，第三次加入与原料药重量比为8倍量、pH为9.0的水，煎煮1.5h，合并煎液，滤过，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.10，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21g，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄266g、生地黄130g，第一次加入与原料药重量比为12倍量、pH为3.0的水，浸泡20min，煎煮2h，第二次加入与原料药重量比为8倍量、pH为7.5的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为9.0的水，煎煮0.5h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.50，冷至30℃时，加入乙醇使得含醇量达到70%，冷藏静置48h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.50，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，再与药剂学上常用的辅料混匀，装入胶囊，即得1000粒胶囊剂。

实施例3

⑴将鹿茸14g、红参65g、肉桂65g、牛鞭27g、人参33g分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61g、韭菜子10g粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿134g和韭菜子244g，与补骨脂143g、巴戟天143g、黄芪316g、枸杞子92g、桑螵蛸71g、当归28g和川木通6g混合，第一次加入与原料药重量比为10倍量、pH为4.0的水，浸泡60min，煎煮1h，第二次加入与原料药重量比为10倍量、pH为6.0的水，煎煮1.5h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为9.0的水，煎煮0.5h，合并煎液，滤过，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.50，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21g，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄266g、生地黄130g，第一次加入与原料药重量比为10倍量、pH为3.5的水，浸泡60min，煎煮2h，第二次加入与原料药重量比为10倍量、pH为8.0的水，煎煮1.5h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为9.0的水，煎煮0.5h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10，冷至50℃时，加入乙醇使得含醇量达到90%，冷藏静置32h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.10，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，再与药剂学上常用的辅料混匀，装入胶囊，即得1000粒胶囊剂。

对于上述实施例1-3中所制得的药物，我们采用以下方法进行质量检验：

1.显微鉴别：

取制得的药物少许，置于显微镜下观察：可见直径为20-68μm的草酸钙簇晶；石细胞类圆形或类方形，直径32-88μm，壁厚；纤维单个散在，长梭形，长195-920μm，壁厚，木栓化。

2.薄层鉴别方法：

⑴补骨脂的鉴别方法：取制得的药物4g，研细，加醋酸乙酯20ml，置水浴中加热回流30min,滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯=2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

⑵肉桂的鉴别方法：取制得的药物3g，加乙醚15ml，密塞，振摇10min，分取乙醚液，自然挥散至干，残留物加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液;另取桂皮醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程60-90℃石油醚-醋酸乙酯=17:3展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1%2,4-二硝基苯肼溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

⑶人参的鉴别方法：取制得的药物5g，加7%硫酸溶液50ml，研磨10min，置水浴中加热回流1h，冷却，滤过，滤渣加60～90℃沸程的石油醚研磨提取3次，每次15ml，合并石油醚液，挥干，残渣物加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参二醇对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯=3:2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，于105℃加热5-10min后，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3.含量测定方法：

⑴色谱条件与系统适用性试验：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈：水=26:74为流动相，检测波长是270nm,理论塔板数以淫羊藿苷峰计算应不低于2000；

⑵供试品溶液的制备：取取制得的药物0.75g，加入70%乙醇100ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，加70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜0.45μm滤过，即得；

⑶对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

⑷分别精密吸取上述⑵、⑶中制备的对照品溶液，供试品溶液，注入液相色谱仪，按照⑴中的条件测定。

为了进一步的验证本发明成品制剂的质量稳定性及疗效，我们将上述具体实施例1-3中制备的成品药物与对比技术CN1335177A组（其制备方法，如上述试验1中1.1B项试验用药所述，最终将其制备成胶囊剂）进行了相应的对比研究，具体结果如下：

Ⅰ成品制剂的稳定性：

将以上实施例1-3及CN1335177A对比组分别置于相同的条件下进行12个月的加速稳定性试验和24个月长期稳定性试验。具体研究结果如下：实施例1、2、3及CN1335177A对比组所得的成品制剂，经放置12个月后其指标性成分淫羊藿苷含量分别减少至原来的99%、98%、98%及87%，24个月后的含量分别减少至原来的96%、95%、95%和84%；另外，本发明的3组实施例制得成品胶囊均未发生吸潮的现象，而CN1335177A对比组有明显的吸潮、结块现象。以上结果充分说明：本发明的中药组合物质量稳定，其稳定性明显优于CN1335177A对比组，这将从一定程度上反映出本发明技术方案的优越性和创造性。

Ⅱ临床观察及疗效

1.研究对象：

选取2009年2月～2012年7月在中心医院门诊受试196例，中途脱离15例，实际进行受试试验为181例，所有患者症状典型，年龄22～69岁，上述181例皆患有不同程度的阴茎勃起功能障碍。采用平行对照、随机的设计方法，随机分为4组，其中实施例1组46例；实施例2组45例；实施例3组45例；CN1335177A组45例。各组病例在性别、病程、年龄分布等方面均无显著性差异，具有可比性。

2.治疗方法：

各治疗组均口服本发明实施例1组、2组、3组、CN1335177A组，每日2次，每次口服5粒，连续服用3个月之后观察效果。

3.疗效标准：

3.1诊断标准

A西医诊断标准：参照《阴茎勃起功能障碍》中IIEF-5表评分≤21分者即可诊断。重度5～7分，中度8～11分，轻度12～21分。

B中医辨证标准：参照《中医证候鉴别诊断学》①肝阳虚证：主症为阳痿，丸冷囊湿，阴器萎缩。次症为畏寒肢冷，神疲乏力，胁下作痛，忧郁善恐，舌淡苔白，脉沉细弦迟，左关沉弱。②肾阳虚证：主症为阳痿，腰膝酸软，畏寒肢冷。次症为神疲乏力，面色觥白，夜尿频数(或小便清长)，舌淡苔白，脉沉细迟。③脾肾阳虚证：主症为阳痿．腰膝酸软，大便溏泄。次症为畏寒肢冷，神疲乏力，小腹冷痛，夜尿频数(或小便清长)，脉沉迟细弱。

C纳入病例标准：①符合西医诊断标准和中医辨证标准者；②功能性ED(心理性ED)。

D排除病例标准：①年龄<22岁，>69岁者；②内分泌性ED；③神经性ED；④血管性ED(动脉性和静脉性ED)；⑤医源性ED；⑥其它原因引起的ED(糖尿病、慢性肾功能衰竭、海绵体勃起组织异常等)。

4.观察方法

填写IIEF-5表，根据问卷表中列出的阴茎勃起功能的5个问题，由患者在治疗前后分别独立回答。问卷中每一问题的回答均按5分制表示，5分为最好，1分为最差，0分为未尝试性交。运用等级症状资料积分法，即将肝阳虚证、肾阳虚证和脾肾阳虚证的症状按照发生的频率、程度及临床表现的特点，分为无、轻、中、重4级，分别记为0、1、2、3分。并计算治疗前后中医症状总积分减分率，计算公式为：减分率=(治疗前症状总积分-治疗后症状总积分)／治疗前症状总积分×1OO%。

5.疗效标准

中医证候疗效评定标准采用总积分减分率评价方法。痊愈：治疗后总积分减分率≥9O；显效：治疗后总积分减分率≥7O，<9O％；有效：治疗后总积分减分率≥3O，<7O；无效：治疗后总积分减分率<3O％。

6.结果与分析：试验结果见表6。

表6各组药物治疗性功能障碍的疗效对比

由表6的试验结果可知：经3个月临床治疗后，本发明实施例组对于各受试者的总有效率达到了71%以上，而CN1335177A组仅为53.3%，两者存在较大的差异性。以上临床疗效结果说明：本发明技术方案制备的中药组合物在治疗性功能障碍方面的作用，明显的优于对比技术CN1335177A组。

以上研究内容显示：本发明的中药组合物具有制备工艺科学合理、疗效稳定可靠等优点，其有益效果无论从药物的提取工艺上，还是成品制剂的成型技术上，均有力地保证了本发明中药组合物的优良效果，这进一步证明，本发明中药组合物是一种疗效确切，安全有效的补肾壮阳药物，具有巨大的市场潜力，值得进一步推广。

Claims (4)

1.一种补肾壮阳的中药组合物，由如下重量配比的原料药组成：淫羊藿195份、鹿茸14份、补骨脂143份、巴戟天143份、红参65份、黄芪316份、肉桂65份、韭菜子254份、牛鞭27份、人参33份、熟地黄266份、生地黄130份、枸杞子92份、桑螵蛸71份、当归28份、川木通6份，其特征在于该组合物是按以下步骤制备而成：

⑴将鹿茸、红参、肉桂、牛鞭、人参分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61份、韭菜子10份粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿和韭菜子，与补骨脂、巴戟天、黄芪、枸杞子、桑螵蛸、当归和川木通混合，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.5的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.0的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.5的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21份，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄、生地黄，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.0的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.5的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.0的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，冷至40℃时，加入乙醇使得含醇量达到80％，冷藏静置24h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，即得。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：加入药剂学上常用的辅料制成胶囊剂。

3.制备如权利要求1所述的中药组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

⑴将鹿茸、红参、肉桂、牛鞭、人参分别粉碎成细粉，留用；

⑵取淫羊藿61份、韭菜子10份粉碎成细粉，留用；

⑶取剩余的淫羊藿和韭菜子，与补骨脂、巴戟天、黄芪、枸杞子、桑螵蛸、当归和川木通混合，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.5的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.0的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.5的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，合并煎液，滤过，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入上述⑵中所得的淫羊藿、韭菜子细粉及⑴中所得的部分红参细粉21份，混匀，干燥并粉碎成中粉，留用；

⑷取熟地黄、生地黄，第一次加入与原料药重量比为8倍量、pH为4.0的水，浸泡40min，煎煮1.5h，第二次加入与原料药重量比为6倍量、pH为6.5的水，煎煮1h，第三次加入与原料药重量比为6倍量、pH为8.0的水，煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，冷至40℃时，加入乙醇使得含醇量达到80％，冷藏静置24h，过滤并回收乙醇，滤液于50℃-60℃浓缩至相对密度为1.30，加入⑴中所得的剩余红参细粉，混匀，干燥并粉碎成细粉，留用；

⑸将⑴中的人参、鹿茸、肉桂、牛鞭细粉及⑶、⑷中留用的药粉混合，并粉碎成粒径小于75μm的药粉，即得。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：将步骤⑸中粒径小于75μm的药粉与常用的辅料混匀后，装入胶囊中，即制成胶囊剂。