CN103347511B - 化学治疗剂的抗肿瘤活性的增强剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性的药剂，所述药剂含有至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐。本发明还涉及一种用于治疗含有癌症干细胞的癌症的药剂，所述药剂含有至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐和化学治疗剂的组合。本发明还涉及一种用于预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的药剂，所述药剂含有至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐和化学治疗剂的组合。

Description

化学治疗剂的抗肿瘤活性的增强剂
技术领域
本发明涉及用于增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性的、含有支链氨基酸的药剂，用于诱导癌症干细胞的分化的、含有支链氨基酸、含有支链氨基酸的药剂，以及用于抑制或治疗含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的、含有支链氨基酸和化学治疗剂的组合的药剂，等。
背景技术
癌症干细胞是在肿瘤中含有的癌细胞亚群之一，具有自我复制能力和多潜能性，且当常位（orthotopically）转移时具有引起癌症的能力(非专利文献1)。
在不同的癌症中，已知在癌症干细胞中特异性地表达的标志物的存在，并且基于这类标志物的表达可以评价癌细胞是否是癌症干细胞。作为肝癌干细胞的标志物，已知EpCAM、AFP等(非专利文献2)。作为结直肠癌干细胞的标志物，已知CD44、CD24等(非专利文献3)。作为乳腺癌干细胞的标志物，已知CD44、CD24、EpCAM等(非专利文献1)。
由于癌症干细胞通常具有慢的生长速度，它们表现出对化学治疗剂的抗性。相反，由于分化的癌细胞(癌症非干细胞)具有快速的生长速度，它们对化学治疗剂高度敏感。由于许多化学治疗剂靶向癌细胞的生长机制，仅仅靶向癌症非干细胞的化学治疗剂的治疗可能不会有效地杀死癌症干细胞。甚至当大多数癌细胞表现出通过化学治疗剂治疗实现的消退时，极少数目的潜在剩余的癌症干细胞可以造成复发，这被视作在癌症中经常发生的转移或复发的原因。因此预见到，促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化和增强对化学治疗剂的敏感性，将能够有效地治疗或预防包括癌症干细胞在内的全部癌症。
迄今已经报道了支链氨基酸(BCAA)会抑制肝癌的发生和进展(专利文献1-4)。此外已经报道，支链氨基酸的长期施用会抑制肝细胞瘤的复发(非专利文献4)。此外，已经报道，支链氨基酸会抑制Akt的活化，这又会抑制癌症在具有高胰岛素血症或具有高胰岛素血症风险的患者中的发生和进展(专利文献5)。此外已经报道，支链氨基酸会增强IFN药剂的抗丙型肝炎病毒活性(专利文献6)。
尽管如此，迄今为止尚未阐明支链氨基酸对癌症干细胞向癌症非干细胞的分化的影响。
文献列表
专利文献
专利文献1: WO2003/16208
专利文献2: WO2004/058243
专利文献3: WO2007/018278
专利文献4: WO2006/06729
专利文献5: WO2007/018281
专利文献6: WO2007/013677
非专利文献
非专利文献1: PNAS, 第100卷, 第7期, 第3983-3988页, 2003
非专利文献2: Cancer Research, 第65卷, 第8期, 第1451-1461页, 2008
非专利文献3: PNAS, 第171卷, 第8期, 第3722-3727页, 2010
非专利文献4: Nisshoshi (Journal of Japanese Society of Gastroenterology), 第105卷, 第808-816页, 2008。
发明内容
本发明要解决的问题
本发明的目的是，开发用于促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化和增强对化学治疗剂的敏感性的技术，并提供基于所述技术来有效地治疗含有癌症干细胞的癌症和预防癌症复发的手段。
解决问题的方式
本发明的发明人在解决前述问题的尝试中已经进行了深入研究，并发现，特定BCAA会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化和增强对化学治疗剂的敏感性，从而导致本发明的完成。
因此，本发明提供了下述方面。
[1] 一种用于增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性的药剂，所述药剂包含至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐。
[2] 根据[1]所述的药剂，所述药剂与化学治疗剂联合施用给罹患了含有癌症干细胞的癌症的哺乳动物、或具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的哺乳动物。
[3] 根据[1]所述的药剂，所述药剂包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐。
[4] 根据[1]所述的药剂，其中所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
[5] 根据[1]所述的药剂，其中所述化学治疗剂是5-FU。
[6] 根据[1]所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
[7] 根据[1]所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
[8] 一种用于治疗含有癌症干细胞的癌症的药剂，所述药剂包含化学治疗剂和至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐的组合。
[9] 根据[8]所述的药剂，所述药剂包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐。
[10] 根据[8]所述的药剂，其中所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
[11] 根据[8]所述的药剂，其中所述化学治疗剂是5-FU。
[12] 根据[8]所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
[13] 根据[8]所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
[14] 一种用于预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的药剂，所述药剂包含化学治疗剂和至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐的组合。
[15] 根据[14]所述的药剂，所述药剂包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐。
[16] 根据[14]所述的药剂，其中所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
[17] 根据[14]所述的药剂，其中所述化学治疗剂是5-FU。
[18] 根据[14]所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
[19] 根据[14]所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
[20] 一种用于诱导癌症干细胞的分化的药剂，所述药剂包含至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐。
[21] 根据[20]所述的药剂，所述药剂包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐。
[22] 根据[20]所述的药剂，其中所述癌症干细胞是胃癌干细胞、肝癌干细胞或结直肠癌干细胞。
[23] 一种用于抑制含有癌症干细胞的癌症的转移的药剂，所述药剂包含至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐。
[24] 根据[23]所述的药剂，所述药剂包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐。
[25] 根据[23]所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
[26] 至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐，其用于增强化学治疗剂的抗肿瘤活性。
[27] 用于治疗含有癌症干细胞的癌症的组合产品，所述组合产品包含至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐、和化学治疗剂。
[28] 用于预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的组合产品，所述组合产品包含至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐、和化学治疗剂。
[29] 至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐，其用于诱导癌症干细胞的分化。
[30] 至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐，其用于抑制含有癌症干细胞的癌症的转移。
[31] 一种增强化学治疗剂在哺乳动物中的抗肿瘤活性的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐。
[32] 一种治疗哺乳动物的含有癌症干细胞的癌症的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐、和化学治疗剂。
[33] 一种预防含有癌症干细胞的癌症在哺乳动物中的转移或复发的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐、和化学治疗剂。
[34] 一种在哺乳动物中诱导癌症干细胞的分化的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐。
[35] 一种抑制含有癌症干细胞的癌症在哺乳动物中的转移的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐。
本发明的效果
由于支链氨基酸会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化和增强对化学治疗剂的敏感性，通过给罹患含有癌症干细胞的癌症的患者联合施用支链氨基酸和化学治疗剂，可以有效地治疗癌症。
另外，通过给具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的患者联合施用支链氨基酸和化学治疗剂，可以有效地预防癌症的转移和复发。
附图简要说明
图1显示了BCAA对HAK4细胞中EpCAM1、AFP和CYP3A4的mRNA表达的影响，其中垂直轴显示了每个基因的相对mRNA表达水平，假定LC2.5%处理后的表达为1。T-检验，n=6，*p<0.05，均值+SE。
图2显示了5-FU和BCAA的联合使用对HAK4细胞的细胞凋亡的诱导，其中垂直轴显示了膜联蛋白V阳性细胞的百分比。T-检验，n=7，*p<0.05，均值+SE。
图3显示了BCAA对HAK1B细胞中EpCAM1、AFP和CYP3A4的mRNA表达的影响，其中垂直轴显示了每个基因的相对mRNA表达水平，假定LC2.5%处理后的表达为1。T-检验，n=6，*p<0.05，均值+SE。
图4显示了移植HAK1B细胞的Balb/c裸鼠的肿瘤体积的时程变化，其中组1：媒介物+ 酪蛋白-混合饲料(对照组)，组2:5-FU + 酪蛋白-混合饲料，组3：媒介物+ BCAA-混合饲料，组4:5-FU + BCAA-混合饲料。
图5显示了在第15天的肿瘤体积。Dunnet检验，n=6，*p<0.05，***p<0.001，均值+SE。
图6显示了在第15天的肿瘤体积。Dunnet检验，n=6，*p<0.05，***p<0.001，均值+SE。
图7显示了BCAA对HCT116细胞中的CD44表达的影响，其中垂直轴显示了CD44阳性细胞的百分比。T-检验，n=7，*p<0.05，均值+SE。
图8显示了5-FU和BCAA的联合使用对HCT116细胞的细胞凋亡的诱导，其中垂直轴显示了膜联蛋白V阳性细胞的百分比。T-检验，n=14，*p<0.05，均值+SE。
图9显示了BCAA对HCT116细胞的肝转移的影响，其中垂直轴显示了每只小鼠的肝转移的数目。
图10显示了5-FU和BCAA的联合使用对MKN45细胞的细胞死亡的诱导，其中垂直轴显示了OD450 nm的相对值。T-检验，*p<0.05，n=8。
图11显示了5-FU和BCAA的联合使用对MKN45细胞的细胞凋亡的诱导，其中垂直轴显示了细胞凋亡的细胞的百分比。T-检验，*p<0.05，n=8。
图12显示了BCAA对MKN45细胞中的CD44表达的影响，其中垂直轴显示了CD44阳性细胞的百分比。T-检验，*p<0.01，n=8。
图13显示了6周后的肿瘤体积。Dunnet检验，n=6，**p<0.01，均值+SE。
图14显示了5-FU和BCAA的联合使用对MDA-MB231细胞的生长的抑制。相对于5-FU的Student检验，***p<0.001，均值+SE。
图15显示了BCAA对MDA-MB231细胞中的CD44表达的影响，其中垂直轴显示了CD44阳性细胞的百分比。相对于RPMI-10%的Student检验，均值+SE。
图16显示了BCAA对体内HAK1B细胞中的EpCAM mRNA表达的影响。T-检验，n=6，*p<0.05。
图17显示了BCAA对体内MKN45细胞中的CD44、nanog和ABCB5的mRNA表达的影响。Dunnet检验，n=8，相对于对照，*p<0.05，**p<0.01，*** p<0.005。
具体实施方式
本发明提供了用于增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性的药剂(或组合物)，和/或用于诱导癌症干细胞的分化的药剂(或组合物)，所述药剂包含至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐) (在下文中这些制品也被称作本发明的药剂或组合物)。
在另一个实施方案中，本发明的药剂(或组合物)可以是用于抑制含有癌症干细胞的癌症的转移的药剂(或组合物)。
本发明的药剂或组合物已经基于下述发现而完成：至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合)会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并且，通过该作用，增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性。由于癌症干细胞通常具有慢的生长速度，它们表现出对化学治疗剂的抗性。相反，由于分化的癌细胞(癌症非干细胞)具有快速的生长速度，它们对化学治疗剂高度敏感。因此，至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合)向含有癌症干细胞的癌症的应用会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，这又会增强癌症对化学治疗剂的敏感性，并最终增强化学治疗剂对所述癌症的抗肿瘤活性。
在另一个实施方案中，本发明的药剂或组合物已经基于下述发现而完成：至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合)会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并且，通过该作用，抑制含有癌症干细胞的癌症的转移能力。
在本发明中，癌症干细胞是指这样的癌细胞：其具有自我复制能力和多潜能性，且当常位（orthotopically）转移时具有引起肿瘤的能力(在这里形成的肿瘤是癌症干细胞的来源的肿瘤的表型模拟) (Nat Rev Cancer, 第5卷, 第425-436页, 2006)。
在不同的癌症中，由于已知在癌症干细胞中特异性地表达的标志物的存在，基于这类标志物的表达可以评价癌细胞是否是癌症干细胞或者癌症是否含有癌症干细胞。在一个实施方案中，肝癌干细胞是EpCAM+AFP+ (Cancer Research, 第65卷, 第8期, 第1451-1461页, 2008)。在一个实施方案中，结直肠癌干细胞是CD44+CD24+ (PNAS, 第171卷, 第8期, 第3722-3727页, 2010)。在一个实施方案中，乳腺癌干细胞是CD44+CD24低 +EpCAM+ (PNAS, 第100卷, 第7期, 第3982-3988页, 2003)。在一个实施方案中，胰腺癌干细胞是CD44+。在这里，使用针对这些标志物蛋白的特异性抗体，通过流式细胞计量术或免疫组织化学染色，评价这些标志物的表达，并且当通过至少一种方法发现特异性染色时，确定是标志物表达阳性的(+)。由于可用于流式细胞计量术或免疫组织化学染色的、针对这些标志物蛋白的特异性抗体可广泛地商购得到，本领域普通技术人员通过使用这样的抗体可以容易地评价癌细胞是否是癌症干细胞或者癌症是否含有癌症干细胞。
在另一个实施方案中，胃癌干细胞是CD44+。
此外，使用癌症干细胞的标志物表达的减少作为指标，可以评价癌症干细胞向癌症非干细胞的分化。当在特定条件下治疗以后癌症中的癌症干细胞的标志物表达与治疗之前相比减少时，可以认为，所述治疗诱导了癌症干细胞向癌症非干细胞的分化。当表达癌症干细胞的标志物蛋白的细胞的数目相对于总癌细胞的比例下降时，或者当癌症干细胞的标志物蛋白的量相对于癌症整体的比例下降时，确定癌症干细胞的标志物的表达减少了。
在本发明中，癌症包括源自任何组织的癌症。癌症的例子包括、但不限于：肝癌、结直肠癌、肾癌、黑素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、脑肿瘤、子宫癌、乳腺癌、多发性骨肉瘤、卵巢癌、慢性白血病、前列腺癌、急性成淋巴细胞性白血病、生殖细胞瘤、急性髓性白血病、恶性淋巴瘤、绒毛膜癌、儿科恶性肿瘤、胆囊或胆管癌等。
在一个实施方案中，向其施用本发明的药剂的、含有癌症干细胞的癌症对化学治疗剂具有抗性。“对化学治疗剂具有抗性”是指，当以允许应用于人类的最大剂量施用化学治疗剂时，没有表现出显著地可检测的应答的性质。如上所述，化学治疗剂抗性的癌症可以含有许多癌症干细胞，因为癌症干细胞具有缓慢的生长速度和对化学治疗剂的抗性。因此，预见到，本发明的药剂或组合物向特定化学治疗剂抗性的癌症的应用会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并增加所述癌症对所述化学治疗剂的敏感性。
在前述癌症中，已知肝癌、结直肠癌、肾癌、黑素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌和非小细胞肺癌通常表现出对化学治疗剂的低敏感性，并且对化学治疗剂的反应较差。因此，预见到，本发明的药剂或组合物向这些癌症(优选胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌)的应用会促进在这些癌症中含有的癌症干细胞的分化，增加这些癌症对化学治疗剂的敏感性。
在本发明中，化学治疗剂表示这样的化合物：其直接地作用于癌细胞，且具有通过抑制其分裂而杀死它们的能力。化学治疗剂的例子包括抗代谢药、铂制剂、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱、分子靶标治疗剂等。
抗代谢药表示这样的化学治疗剂：其具有与当癌细胞分裂和增殖时作为核酸材料的物质类似的化学结构，其阻止DNA的合成、抑制癌细胞的代谢和抑制增殖。抗代谢药的例子包括：嘧啶抗代谢药诸如5-氟尿嘧啶(5-FU)、替加氟、卡莫氟、去氧氟尿苷、溴尿苷、阿糖胞苷、依诺他滨、羟基吡啶、羟基脲、甲氨蝶呤、磷酸氟达拉滨等；嘌呤抗代谢药诸如6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、硫代肌苷、盐酸吉西他滨等，等。在一个实施方案中，所述抗代谢药优选地是嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟。
铂制剂表示这样的化学治疗剂：其通过经由2个氯原子部分与鸟嘌呤和腺嘌呤（其是DNA构成碱基）的N-7-位结合，在DNA链中形成交联，并抑制DNA合成而表现出抑制癌细胞增殖的作用。铂制剂的例子包括顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂等。
烷化剂表示这样的化学治疗剂：其通过烷基化而切断DNA，从而表现出抑制癌细胞增殖的作用。烷化剂的例子包括：氮芥烷化剂诸如氮芥、氮芥N-氧化物、苯丁酸氮芥等；乙烯亚胺衍生物诸如卡波醌、塞替派等；磺酸酯诸如白消安、甲苯磺酸英丙舒凡等；亚硝基脲衍生物诸如盐酸尼莫司汀等，等。
抗肿瘤抗生素的例子包括：蒽环类抗生素抗生素抗肿瘤剂诸如丝裂霉素C、博来霉素、培洛霉素、柔红霉素、阿柔比星、多柔比星、吡柔比星、THP-阿霉素、4’-表阿霉素、表柔比星等；色霉素A3、放线菌素D等。
植物生物碱的例子包括：长春花生物碱类诸如长春碱、长春新碱、长春地辛等；表鬼臼毒素类诸如依托泊苷、替尼泊苷等；紫杉烷生物碱类诸如紫杉醇、多西他赛（docetaxel）等等。
分子靶标治疗剂表示这样的化合物：其具有通过靶向和抑制在癌细胞增殖中涉及的分子而杀死癌细胞的活性。分子靶标治疗剂的例子包括：伊马替尼、吉非替尼、厄洛替尼、凡他尼布、舒尼替尼、索拉非尼、利妥昔单抗、西妥昔单抗、英夫利昔单抗、曲妥单抗、贝伐单抗等。
在一个实施方案中，本发明的药剂或组合物是用于增强抗代谢药(优选嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟)对含有肝癌干细胞的肝癌的抗肿瘤活性。
在一个实施方案中，本发明的药剂或组合物是用于增强抗代谢药(优选嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟)对含有结直肠癌干细胞的结直肠癌的抗肿瘤活性。
在一个实施方案中，本发明的药剂或组合物是用于增强抗代谢药(优选嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟)对下述癌症的抗肿瘤活性：含有胃癌干细胞的胃癌、含有结肠癌干细胞的结肠癌、含有子宫颈癌干细胞的子宫颈癌、含有子宫内膜癌干细胞的子宫内膜癌、含有胃肠癌干细胞的胃肠癌、含有胰腺癌干细胞的胰腺癌、含有直肠癌干细胞的直肠癌、含有乳腺癌干细胞的乳腺癌、或含有卵巢癌干细胞的卵巢癌。
作为本发明的药剂或组合物的活性成分(支链氨基酸)的异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸可以是L-形式、D-形式和DL-形式（优选L-形式或DL-形式，更优选L-形式）中的任一种。
异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸不仅可以以游离形式使用，而且可以作为盐使用。盐形式的例子包括酸加成盐、碱加成盐等，且可以呈任意形式，只要它是化学上可接受的盐即可。由于本发明的药剂或组合物通常用于医药目的，盐形式优选地是药学上可接受的盐。
药学上可接受的盐的例子包括：与酸形成的盐和与碱形成的盐。可以添加给异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸以形成作为药物产品可接受的盐的酸的例子包括：无机酸诸如氯化氢、溴化氢、硫酸、磷酸等，有机酸诸如乙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、富马酸或单甲基硫酸等。可以添加给异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸以形成作为药物可接受的盐的碱的例子包括：诸如钠、钾等金属的氢氧化物，诸如钙等金属的碳酸盐，无机碱诸如氨等，和有机碱诸如乙二胺、丙二胺、乙醇胺、单烷基乙醇胺、二烷基乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。
本发明的药剂或组合物仅需要含有至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐，并且本发明包括下述实施方案：
一个实施方案，其中仅含有异亮氨酸或其盐作为支链氨基酸；
一个实施方案，其中仅含有亮氨酸或其盐作为支链氨基酸；
一个实施方案，其中仅含有缬氨酸或其盐作为支链氨基酸；
一个实施方案，其中含有异亮氨酸或其盐和亮氨酸或其盐作为支链氨基酸；
一个实施方案，其中含有异亮氨酸或其盐和缬氨酸或其盐作为支链氨基酸；
一个实施方案，其中含有亮氨酸或其盐和缬氨酸或其盐作为支链氨基酸；和
一个实施方案，其中含有异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐作为支链氨基酸。
本发明的药剂或组合物优选地含有异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐。
在本发明的药剂具有期望的活性(例如，诱导癌症干细胞分化的活性，或增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性的活性)的范围内，本领域普通技术人员可以适当地调节在本发明的药剂或组合物中含有的支链氨基酸的混合比(重量比)。例如，在含有异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的实施方案中，按重量比计，3种氨基酸(异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸)的混合比通常为1:1-3:0.5-2.0，优选1:1.5-2.5:0.8-1.5，更优选1:1.9-2.2:1.1-1.3，最优选1:2:1.2。当本发明的药剂含有异亮氨酸的盐、亮氨酸的盐或缬氨酸的盐时，通过将每种支链氨基酸的盐转化成游离形式来计算重量比。
本发明的药剂和组合物可以施用给动物(优选哺乳动物诸如人等)。
当将本发明的药剂或组合物用作用于增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性的药剂(或组合物)时，或用作用于诱导癌症干细胞的分化的药剂(或组合物)时，其施用模式和剂型可以是口服施用或胃肠外施用，并且可以提及固体（诸如粉末剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、可咀嚼药剂等）和液体（诸如溶液剂、糖浆剂等）作为用于口服施用的药剂，并且可以提及注射剂、输液剂、经鼻或经肺喷雾剂等作为用于胃肠外施用的药剂。通过常规方法，可以将本发明的药剂或组合物配制为呈这些剂型的药剂。
从减轻患者负担的方面，优选地给受试者口服施用支链氨基酸。当难以给患者口服施用时，可以将支链氨基酸作为氨基酸输注剂静脉内地或经动脉地施用。
当制剂需要时，通过与适当的药理学上可接受的载体混合来生产本发明的药剂，所述载体例如赋形剂、粘合剂、润滑剂、溶剂、崩解剂、溶出助剂、助悬剂、乳化剂、等渗剂、稳定剂、安抚剂、防腐剂、抗氧化剂、矫正药、着色剂等。此外，本发明的组合物可以用上述载体一起制备。
作为赋形剂，可以提及：有机赋形剂诸如糖(例如乳糖、葡萄糖、D-甘露醇等)、淀粉、纤维素(例如结晶纤维素等)等，无机赋形剂诸如碳酸钙、高岭土等，等；作为粘合剂，可以提及：胶化淀粉、明胶、阿拉伯树胶、甲基纤维素、羧甲纤维素、羧甲纤维素钠、结晶纤维素、D-甘露醇、海藻糖、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等；作为润滑剂，可以提及：硬脂酸、脂肪酸盐诸如硬脂酸盐等、滑石、硅酸盐等；作为溶剂，可以提及：净化水、盐水等；作为崩解剂，可以提及：低取代的羟丙基纤维素、化学修饰的纤维素、淀粉等；作为溶出助剂，可以提及：聚乙二醇、丙二醇、海藻糖、苯甲酸苄酯、乙醇、碳酸钠、柠檬酸钠、水杨酸钠、醋酸钠等；作为助悬剂或乳化剂，可以提及：月桂基硫酸钠、阿拉伯树胶、明胶、卵磷脂、单硬脂酸甘油酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素诸如羧甲纤维素钠等、聚山梨酯、氢化聚氧乙烯蓖麻油等；作为等渗剂，可以提及：氯化钠、氯化钾、糖、甘油、尿素等；作为稳定剂，可以提及：聚乙二醇、硫酸葡聚糖钠、其它氨基酸等；作为安抚剂，可以提及：葡萄糖、葡萄糖酸钙、盐酸普鲁卡因（procain hydrochloride）等；作为防腐剂，可以提及：对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、脱氢乙酸、山梨酸等；作为抗氧化剂，可以提及：次硫酸盐、抗坏血酸等；作为矫正药，可以提及：在药剂和食品领域中常规使用的甜味剂、调味剂等；作为着色剂，可以提及：在药剂和食品领域中常规使用的人工颜料。
由于本发明的药剂或组合物的活性成分是具有优良安全性的氨基酸，在一个实施方案中，本发明的药剂或组合物可以作为食品或饮料来提供。当本发明的药剂或组合物作为食品或饮料来提供时，不会发生特殊的困难，并且，可以如下制备：例如，将活性成分支链氨基酸(优选异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)与食品和饮料（诸如汁、奶、甜食、果冻等）混合。还可以加入维生素和其它添加物。得到的食品和饮料还可以作为具有健康要求的食品来提供。
具有健康要求的食品是这样的食品：其含有影响身体的生理功能或生物活性的健康功能组分，且预期通过摄入而达到为了这样的健康目的而在饮食生活中摄取所述食品的个人的特定健康目的。
在某些情况下，具有健康要求的食品有时被称作功能食品、保健食品(包括营养添加物)等。功能食品是指利用食品中含有的生物调节组分的功能而生产的食品，保健食品是指通常被认为对促进良好健康有用的食品。它们也包括含有特定营养源作为主要组分的营养添加物。
具有健康要求的食品包括用于指定健康用途的食品和具有营养物功能要求的食品，并且罹患含有癌症干细胞的癌症并在施用化学治疗剂的患者或者具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的患者对所述食品作为日常营养食品的摄取可以增强癌症对化学治疗剂的敏感性。
这样的具有健康要求的食品可以与下述指示一起提供：它用于增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性。
尽管本发明的药剂或组合物中含有的支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)的含量随制剂的形式等而变化，相对于整个制剂，所述含量通常为1-100重量%、优选10-100重量%、更优选30-100重量%、进一步优选50-100重量%。
本发明的药剂和组合物的优选实施例包括，含有重量比为1:2:1.2 (异亮氨酸: 0.952 g, 亮氨酸: 1.904 g, 缬氨酸: 1.144 g)的异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸制剂LIVACT (注册商标)颗粒(Ajinomoto Co., Inc.) (用于口服施用的药剂)。
作为用于胃肠外施用的优选药剂，可以提及高浓度-氨基酸输注剂诸如AMINIC((注册商标) 静脉内滴注(Ajinomoto Co., Inc.)),和MORIHEPAMIN ((注册商标) 静脉内滴注(Ajinomoto Co., Inc.))。
尽管本发明的药剂或组合物的剂量随受试患者的年龄、体重、疾病状态、施用方法等而变化，在一个含有异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的实施方案中，正常成年人的每日剂量通常为异亮氨酸0.5-30.0 g、亮氨酸1.0-60.0 g和缬氨酸0.5-30.0 g。优选地，每日剂量为异亮氨酸2.0-10.0 g、亮氨酸3.0-20.0 g和缬氨酸2.0-10.0 g，更优选异亮氨酸2.5-3.5 g、亮氨酸5.0-7.0 g和缬氨酸3.0-4.0 g。3种支链氨基酸的总量优选为约2.0 g-50.0 g/天，该量在必要时分成1–6份、优选1–3份施用。当本发明的药剂或组合物含有支链氨基酸的盐时，通过将每种支链氨基酸的盐转化成游离形式来计算剂量。
当计算支链氨基酸（其为在本发明中使用的活性成分）的上述剂量(摄取量) 时，由于前述计算范围已经被确定为用于本发明中的目标疾病的治疗、预防等的药剂的活性成分，在前述计算中不需要包括为了上述目的以外的目的（例如，正常饮食生活的需要，或不同疾病的治疗）而摄入或施用的支链氨基酸。例如，不需要从本发明的前述活性成分的每日剂量中减去每天在正常饮食生活中摄入的支链氨基酸的量。
在其中本发明的药剂含有2种或3种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐一个实施方案中，异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸或其盐（它们是本发明的活性成分）可以各自单独配制成制剂，或者它们的任意组合可以包含在制剂中。可替换地，它们全部可以包含在一种制剂中。就单独配制的制剂的施用而言，施用途径及其施用剂型可以相同或不同。另外，其施用时机可以是同时的或不同的。在考虑要并行使用的药剂的种类和作用中适当地确定它们。也就是说，本发明的药剂可以是同时含有多种支链氨基酸或其盐的制剂，或者联合使用单独配制的制剂的伴随药物。所述药剂包括所有这些形式。具体地，由于可以方便地施用，下述实施方案是优选的：其中所有支链氨基酸或其盐被包含在单一制剂中(例如，含有异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的单一制剂的实施方案)。
在本发明中，“重量比”是指本发明的药剂和组合物中的每种氨基酸组分的重量比。例如，当在单一制剂中含有异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸中的每种成分时，所述比例是各个内容物的比例。当在多个制剂中含有所述活性成分中的每一种或任意组合时，所述比例是每个制剂中含有的每种活性成分的重量比。
在本发明中，此外，实际的剂量比是每个施用受试者(即，患者)的每种活性成分的单次剂量或每日剂量的比例。例如，当异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸中的各种活性成分被包含在单一制剂中并施用给施用受试者时，重量比相当于剂量比。当各种活性成分被单独地或以任意组合包含在多个制剂中并施用时，要单独或每天施用的各个制剂中的各种活性成分的总量的比例相当于重量比。
异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸已经被广泛地用在药剂和食品领域中，并且已经确立它们的安全性。例如，本发明的药剂和组合物（其含有比例为1:2:1.2的这些支链氨基酸）在给小鼠口服施用时的急性毒性(LD50)是不小于10 g/Kg。
如上所述，至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合) 会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并通过该作用增强化学治疗剂对含有癌症干细胞的癌症的抗肿瘤活性。因此，在一个实施方案中，将本发明的药剂或组合物施用给罹患含有癌症干细胞的癌症的哺乳动物(例如，人)。对哺乳动物中的癌症中含有的癌症干细胞起作用的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合)会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并增强化学治疗剂对癌症的抗肿瘤活性。
在另一个实施方案中，至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合)会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，抑制在癌症的转移中涉及的粘附分子（诸如CD44等）的表达，并通过该作用抑制含有癌症干细胞的癌症的转移能力。因此，在一个实施方案中，将本发明的药剂或组合物施用给罹患含有癌症干细胞的癌症的哺乳动物(例如，人)。对哺乳动物中的癌症中含有的癌症干细胞起作用的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合)会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并抑制癌症的转移，甚至无需联合使用化学治疗剂。
在另一个实施方案中，将本发明的药剂或组合物施用给具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的哺乳动物(例如，人)。癌症干细胞通常具有缓慢的生长速度和对化学治疗剂的抗性。因此，一旦形成含有癌症干细胞的癌症，甚至当患者显示出癌症的明显减轻和癌症症状消失（作为化学治疗剂等的治疗的结果）时，认为癌症干细胞仍然留在体内，并造成癌症的转移和复发。癌症的复发是指，在通过治疗使癌症的症状表现出完全或部分减轻以后的癌细胞生长，并且癌症的症状再次出现或者恶化。因此，通过给具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的哺乳动物(例如，人)施用本发明的药剂或组合物，会促进可能留在哺乳动物体内的癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并增强对化学治疗剂的敏感性。
因此，在一个优选的实施方案中，将本发明的药剂或组合物与化学治疗剂联合施用给哺乳动物。通过将本发明的药剂或组合物与化学治疗剂联合施用给罹患了含有癌症干细胞的癌症的哺乳动物，可以有效地治疗癌症。此外，通过将本发明的药剂或组合物与化学治疗剂联合施用给具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的哺乳动物，可以有效地预防癌症的转移和复发。
因此，本发明也提供了用于治疗含有癌症干细胞的癌症的药剂(或组合物)和/或用于预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的药剂(或组合物)，所述药剂(或组合物)包含与化学治疗剂相组合的至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐) (在下文中有时简称作支链氨基酸)(在下文中，这些制品也被称作本发明的预防性的或治疗性的药剂)。
除非另外指出，与本发明的预防性的或治疗性的药剂有关的每个术语的定义与关于前述本发明的药剂或组合物的每个术语的定义相同。
本发明的预防性的或治疗性的药剂可适用的癌症与上述本发明的药剂或组合物可适用的癌症相同。在一个实施方案中，本发明的药剂可适用的含有癌症干细胞的癌症对化学治疗剂具有抗性。
在癌症中，通常已知肝癌、结直肠癌、肾癌、黑素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌和非小细胞肺癌对化学治疗剂具有低敏感性，并且对化学治疗剂的应答较差。因此，当将本发明的预防性的或治疗性的药剂应用于这些癌症(优选胃癌、肝癌、乳腺癌和结直肠癌)时，本发明的预防性的或治疗性的药剂中含有的支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)会促进癌症中含有的癌症干细胞的分化，以实现这些癌症对化学治疗剂的高敏感性。然后，本发明的预防性的或治疗性的药剂中含有的化学治疗剂作用于它们，因此预期会有效地杀死癌症干细胞。
在一个实施方案中，本发明的预防性的或治疗性的药剂含有抗代谢药(优选嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟)作为化学治疗剂，并用于预防或治疗含有肝癌干细胞的肝癌。
在一个实施方案中，本发明的预防性的或治疗性的药剂含有抗代谢药(优选嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟)作为化学治疗剂，并用于预防或治疗含有结直肠癌干细胞的结直肠癌。
在另一个实施方案中，本发明的预防性的或治疗性的药剂含有抗代谢药(优选嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟)作为化学治疗剂，并用于预防或治疗含有胃癌干细胞的胃癌。
在一个实施方案中，本发明的预防性的或治疗性的药剂含有抗代谢药(优选嘧啶抗代谢药，更优选5-氟尿嘧啶或替加氟)作为化学治疗剂，并用于预防或治疗：含有胃癌干细胞的胃癌、含有结肠癌干细胞的结肠癌、含有子宫颈癌干细胞的子宫颈癌、含有子宫内膜癌干细胞的子宫内膜癌、含有胃肠癌干细胞的胃肠癌、含有胰腺癌干细胞的胰腺癌、含有直肠癌干细胞的直肠癌、含有乳腺癌干细胞的乳腺癌、或含有卵巢癌干细胞的卵巢癌。
就支链氨基酸和化学治疗剂的联合施用而言，支链氨基酸和化学治疗剂的施用时机没有限制，并且支链氨基酸和化学治疗剂可以同时施用给受试者，或者可以以错开的方式施用。支链氨基酸和化学治疗剂的剂量没有特别限制，只要可以实现目标作用(治疗含有癌症干细胞的癌症的作用，预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的作用)即可，并且所述剂量可以根据施用的受试者、施用途径、症状、组合等适当地选择。所述支链氨基酸优选地以促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化的量施用，且所述化学治疗剂以杀死所述癌症非干细胞的量施用。
支链氨基酸和化学治疗剂的施用模式没有特别限制，只要支链氨基酸和化学治疗剂在施用中相组合即可。这样的施用模式的例子包括：(1)施用通过同时加工支链氨基酸和化学治疗剂得到的单一制剂，(2)通过相同施用途径同时施用已经单独生产的支链氨基酸和化学治疗剂的两种制剂，(3)通过相同施用途径以错开的方式施用已经单独生产的支链氨基酸和化学治疗剂的两种制剂，(4)通过不同的施用途径同时施用已经单独生产的支链氨基酸和化学治疗剂的两种制剂，(5)通过不同的施用途径以错开的方式施用已经单独生产的支链氨基酸和化学治疗剂的两种制剂(例如，以支链氨基酸和化学治疗剂的次序施用，或者以相反次序施用)等。
本发明的预防性的或治疗性的药剂的施用模式和剂型可以是口服施用和胃肠外施用中的任一种，并且可以提及固体（诸如粉末剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、可咀嚼药剂等）和液体（诸如溶液剂、糖浆剂等）作为用于口服施用的药剂，并且可以提及注射剂、输液剂、经鼻或经肺喷雾剂等作为用于胃肠外施用的药剂。通过一般方法，可以将本发明的药剂或组合物配制为呈这些剂型的药剂。
此外，当制剂需要时，通过与适当的药理学上可接受的载体混合来生产本发明的预防性的或治疗性的药剂，所述载体例如赋形剂、粘合剂、润滑剂、溶剂、崩解剂、溶出助剂、助悬剂、乳化剂、等渗剂、稳定剂、安抚剂、防腐剂、抗氧化剂、矫正药、着色剂等。
当单独配制支链氨基酸和化学治疗剂时，在含有支链氨基酸的制剂中的支链氨基酸的含量与在前述本发明的药剂或组合物中相同。
当单独配制支链氨基酸和化学治疗剂时，在含有化学治疗剂的制剂中的化学治疗剂的含量没有特别限制，只要与支链氨基酸的联合使用可以治疗含有癌症干细胞的癌症或可以预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发即可，并且所述含量随制剂形式和化学治疗剂的种类而变化。所述含量通常是整个制剂的约0.1-99.9重量%、优选约1-99重量%、更优选约10-90重量%。
当同时配制支链氨基酸和化学治疗剂并用作单一制剂时，所述含量也可以遵循上述含量。在该情况下，根据施用受试者、施用途径、症状、化学治疗剂的种类等，可以适当地选择支链氨基酸和化学治疗剂的混合比。
支链氨基酸的剂量与前述本发明的药剂或组合物中的支链氨基酸的剂量相同。在一个含有异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的实施方案中，正常成年人的每日剂量通常是：异亮氨酸0.5-30.0 g、亮氨酸1.0-60.0 g和缬氨酸0.5-30.0 g。优选地，每日剂量是异亮氨酸2.0-10.0 g、亮氨酸3.0-20.0 g和缬氨酸2.0-10.0 g，更优选异亮氨酸2.5-3.5 g、亮氨酸5.0-7.0 g和缬氨酸3.0-4.0 g。3种支链氨基酸的总量优选为约2.0 g-50.0 g/天，该量在必要时分成1–6份、优选1–3份施用。
化学治疗剂的剂量没有特别限制，只要与支链氨基酸的联合使用可以治疗含有癌症干细胞的癌症或可以预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发即可，并且所述剂量可以根据施用受试者、症状、施用途径、抗肿瘤剂的种类等适当地选择。
尽管支链氨基酸和/或化学治疗剂的施用频率随施用受试者、症状、施用途径、抗肿瘤剂的种类等而变化，所述频率为，例如，1–7天1次，优选1–3天1次。尽管支链氨基酸和/或化学治疗剂的施用次数随施用受试者、症状、施用途径、抗肿瘤剂的种类等而变化，所述次数通常为1–15次，优选约2–10次。
当前述支链氨基酸和化学治疗剂单独配制并联合施用时，可以在施用含有化学治疗剂的制剂之后施用含有支链氨基酸的制剂，或者可以在施用含有支链氨基酸的制剂之后施用含有化学治疗剂的制剂，尽管它们可以同时施用。当以错开的方式施用时，间隔随要施用的有效成分、药物形式和施用方法而变化，例如，当首先施用含有支链氨基酸的制剂时，可以提及这样的方法：其中在施用含有支链氨基酸的制剂以后1 min至14天的时间范围内，施用含有化学治疗剂的制剂。当首先施用含有化学治疗剂的制剂时，可以提及这样的方法：其中在施用含有化学治疗剂的制剂以后1 min至14天的时间范围内，施用含有支链氨基酸的制剂。
如上所述，由于癌症干细胞具有缓慢的生长速度，它们对化学治疗剂具有抗性。相比而言，由于分化的癌细胞(癌症非干细胞)通常表现出高生长速度，它们对化学治疗剂高度敏感。因此，通过将至少一种选自异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的支链氨基酸或其盐(优选异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)应用于癌症干细胞以促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，会增强含有癌症干细胞的癌症对化学治疗剂的敏感性，并且由此可以非常有效地杀死含有癌症干细胞的癌症。
基于这样的理论，化学治疗剂优选地与前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)的施用同时施用，或者在前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)施用后的给定时间施用。也就是说，本发明的治疗性的或预防性的药剂的一个施用实施方案优选地包括：同时施用前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)和化学治疗剂的步骤，或施用前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)并在此后施用化学治疗剂的步骤。
因此，本发明的预防性的或治疗性的药剂的施用方案优选地包括下述步骤：
(1)与化学治疗剂同时施用前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)1次或多次，
(2)施用前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)1次或多次作为第一阶段，并施用化学治疗剂1次或多次作为第二阶段，
(3)施用前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)1次或多次作为第一阶段，并与化学治疗剂同时施用前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)1次或多次作为第二阶段，
(4)重复步骤(2)或(3)多次，
等。
(1)的一个具体实施方案是，例如，含有肝癌干细胞的肝癌的预防或治疗，其中当进行肝内动脉注射化学疗法时，与化学治疗剂一起动脉内注射含有前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)的输液。此外，可以与上述输液和化学治疗剂一起动脉内注射干扰素。
在(2)-(4)中，尽管第一阶段中的最后一次施用和第二阶段中的最后一次施用之间的间隔会随施用受试者、症状、施用途径、化学治疗剂种类等而变化，所述间隔通常是在1分钟至14天内。
在(2)-(4)中，在第一阶段中施用前述支链氨基酸(优选地，异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐)以后，可以确认癌症干细胞是否分化成癌症非干细胞。这样的确认可以如下进行：例如，如上所述，使用特异性地识别所述标志物蛋白的抗体，通过免疫学方法测量癌症干细胞的标志物的表达。当癌症中的癌症干细胞的标志物的表达在前述支链氨基酸施用后与施用前相比减少时，可以认为所述施用诱导了癌症干细胞向癌症非干细胞的分化。在确认癌症干细胞向癌症非干细胞的分化的诱导以后，可以进行第二阶段中的化学治疗剂的施用。
在另一个实施方案中，通过将本发明的药剂或组合物施用给具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的哺乳动物(例如，人)，会促进可能留在哺乳动物体内的癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并抑制在癌症转移中涉及的粘附分子（诸如CD44等）的表达，并通过该作用抑制含有癌症干细胞的癌症的转移能力。因此，通过将本发明的药剂或组合物施用给具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的哺乳动物，可以有效地预防癌症的转移和复发，而无需联合使用化学治疗剂。
实施例
在下面通过参考实施例更详细地解释了本发明。下述实施例具体地解释了本发明的一个实施方案，并且不限制本发明。
实施例 1 ： BCAA 对人肝癌细胞系 HAK4 中的干细胞标志物和分化标志物的表达的影响
以12000个细胞/孔的浓度，将人肝癌细胞系HAK4细胞铺板，并在2 mM BCAA或LC 2.5% 培养基中培养72小时。BCAA是异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸(重量比: 异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸=1:2:1.2)的混合物。BCAA的浓度“2 mM”是异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的所有氨基酸的总浓度。
LC 2.5%培养基的组成显示在下表中。应当指出，LC 2.5%中的“2.5%”是牛血清含量。
表1
组成(nmol/ml)
甘氨酸 280
L-丙氨酸 307
L-丝氨酸 151
L-苏氨酸 138
L-胱氨酸 2HCl 67
L-蛋氨酸 75
L-谷氨酰胺 689
L-天冬酰胺 64
L-谷氨酸 53
L-天冬氨酸 4
L-缬氨酸 175
L-亮氨酸 100
L-异亮氨酸 53
L-苯丙氨酸 99
L-酪氨酸 133
L-色氨酸 45
L-赖氨酸-HCl 184
L-精氨酸-HCl 92
L-组氨酸HCl-H2O 85
L-脯氨酸 176
Fischer比 1.42
Fischer比是指缬氨酸+亮氨酸+异亮氨酸/酪氨酸+苯丙氨酸。
培养72小时后，回收细胞，通过向细胞沉淀物中加入1 ml ISOGEN (NIPPON GENE)进行裂解，并在室温静置5 min。向得到的裂解物中加入0.2 ml氯仿，并将混合物剧烈摇动15秒，在室温静置2-3 min，并在12000×g、4℃离心15 min。除去有机相和中间相，向得到的水相中加入0.5 ml异丙醇，并将混合物在室温静置5–10 min，并在12000×g、4℃离心10 min。除去上清液，将至少1 ml 75(v/v)%乙醇加入沉淀物中，并将混合物涡旋，在7500×g、4℃离心5 min。除去上清液，将沉淀物短时间干燥，并溶解于蒸馏水中，得到总RNA溶液。
通过使用RT-PCR 7500进行RT-PCR，定量EpCAM (上皮细胞粘附分子；肝癌干细胞的标志物)、AFP (甲胎蛋白；肝癌的标志物和肝癌干细胞的标志物)和CYP3A4 (细胞色素P450 3A4；分化标志物)的mRNA表达。用于RT-PCR的引物显示在下表中。
表2
EpCAM F(人) GCTGGTGTGTGAACACTGCT (序列号1)
EpCAM R(人) ACGCGTTGTGATCTCCTTCT (序列号2)
AFP F(人) AAATGCGTTTCTCGTTGCTT (序列号3)
AFP R(人) GCCACAGGCCAATAGTTTGT (序列号4)
CYP3A4 F(人) AAGGTCGCCTCAAAGAGACA (序列号5)
CYP3A4 R(人) TGCACTTTCTGCTGGACATC (序列号6)
结果显示在图1中。BCAA造成了HAK4细胞中EpCAM和AFP（它们是肝癌干细胞的标志物）的表达的减少和CYP3A4（它是分化标志物）的表达的增加。
实施例 2: 5-FU (5- 氟尿嘧啶 ) 和 BCAA 的联合使用对人肝癌细胞系 HAK4 的影响 ( 体外试验 )
以3000个细胞/孔的浓度，将人肝癌细胞系HAK4细胞铺板，并在下述条件下培养72小时：
･LC 2.5% 培养基
･BCAA (2 mM)
･5-FU (2.5 μg/ml)
･BCAA (2 mM)+5-FU (2.5 μg/ml)。
72小时后，使用ApoAlert膜联蛋白V-FITC细胞凋亡试剂盒(Clontech)，用膜联蛋白V将细胞染色，并固定，并且通过Array Scan (Thermo Fisher)检测细胞凋亡的细胞(%)。
具体而言，用1X结合缓冲液冲洗96孔板中的细胞，将40 μl含有膜联蛋白V (1 μl)的1X结合缓冲液加入每个孔中，将细胞在暗处在室温温育5–15 min。洗涤细胞，并用2%甲醛固定。加入100 μl含有Hoechst33258溶液的PBS，并将细胞在暗处温育5 min，并通过Array Scan检测细胞凋亡的细胞(%)。
结果显示在图2中。单独的BCAA处理没有造成细胞凋亡的细胞的数目的显著变化。单独5-FU的处理增加了细胞凋亡的细胞，并且，当联合使用BCAA时，增强了5-FU的细胞凋亡诱导。上述结果提示，BCAA会增强5-FU的抗肿瘤作用。
实施例 3: BCAA 对人肝癌细胞系 HAK1B 中的干细胞标志物和分化标志物的表达的影响
以与实施例1相同的方式，以4000个细胞/孔的浓度，将人肝癌细胞系HAK1B细胞铺板，并在2 mM BCAA或LC 2.5% 培养基中培养72小时。培养72小时后，回收细胞，并通过ISOGEN(NIPPON GENE)纯化总RNA。通过RT-PCR定量EpCAM、AFP和CYP3A4的mRNA表达。
结果显示在图3中。像在HAK4细胞中一样，BCAA也造成了在HAK1B细胞中EpCAM和AFP（它们是肝癌干细胞的标志物）的表达的减少和CYP3A4（它是分化标志物）的表达的增加。上述结果提示，BCAA会诱导肝癌中癌症干细胞向癌症非干细胞的分化，并减少癌症干细胞。
实施例 4: 5-FU (5- 氟尿嘧啶 ) 和 BCAA 的联合使用对人肝癌细胞系 HAK1B 的影响 ( 体内试验 )
以7,000,000个细胞/小鼠，将HAK1B细胞皮下移植给7-周龄雌性BALB/c裸鼠(购自Japan Charles River)。1周后，基于肿瘤面积将小鼠分组。将5-FU 250 μg/肿瘤(媒介物10% DMSO/DW)施用进肿瘤(参见Cancer Research, 70(11), 4687-4697, 2010)，以及给予3(w/w)% BCAA混合饲料或3(w/w)%酪蛋白混合饲料达2周。也就是说，如下所述处理4组：
组1: 媒介物+ 酪蛋白混合饲料(对照组)
组2: 5-FU + 酪蛋白混合饲料
组3: 媒介物+ BCAA混合饲料
组4: 5-FU + BCAA混合饲料。
使用游标卡尺，从肿瘤的外侧测量肿瘤体积(最长直径x最短直径x高度(mm3))，以监测肿瘤体积的时程变化。在第43天，进行尸体剖检，并测量肿瘤的重量和体积。
结果显示在图4-6中。与对照组(组1)相比，单独BCAA的处理组(组3)没有显示出肿瘤重量和肿瘤体积的显著变化。单独5-FU处理(组2)显著减小了肿瘤重量和肿瘤体积，并且当联合使用BCAA时，增强了5-FU的减小肿瘤重量和肿瘤体积的作用。上述结果提示，BCAA也会在体内增强5-FU的抗肿瘤作用。
实施例 5: BCAA 对人结直肠癌细胞系 HCT116 中的干细胞标志物的表达的影响
以4000个细胞/孔的浓度，将HCT116细胞(人结直肠癌细胞系)铺板，并在2 mM BCAA或LC 2.5% 培养基中培养72小时。培养72小时后，回收细胞，并与抗-CD44抗体(第一抗体)一起在室温温育1小时，并进一步与Cy5偶联的第二抗体一起在室温温育1小时。用4%多聚甲醛固定细胞，用Hoechst 33258溶液染色(在室温温育5 min)，用PBS置换染色溶液，并通过Array Scan分析CD44阳性细胞的比例。CD44是结直肠癌干细胞标志物。
结果显示在图7中。BCAA造成了HCT116细胞中CD44（它是结直肠癌干细胞标志物）的表达的显著减少。上述结果提示，BCAA不仅诱导肝癌干细胞向非干细胞的分化，而且诱导结直肠癌干细胞向非干细胞的分化。
实施例 6: 5-FU 和 BCAA 的联合使用对人结直肠癌细胞系 HCT116 的影响 ( 体外试验 )
以4000个细胞/孔的浓度，将HCT116细胞(人结直肠癌细胞系)铺板，并在下述条件下培养72小时：
･LC 2.5% 培养基
･BCAA (2 mM)
･5-FU (2 μg/ml)
･BCAA (2 mM)+5-FU (2 μg/ml)。
72小时后，使用ApoAlert膜联蛋白V-FITC细胞凋亡试剂盒(Clontech)，用膜联蛋白V将细胞染色，并固定，并且通过Array Scan (Thermo Fisher)检测细胞凋亡的细胞(%)。
结果显示在图8中。单独5-FU的处理增加了细胞凋亡的细胞，并且，当联合使用BCAA时，增强了5-FU的细胞凋亡的诱导。上述结果提示，BCAA不仅在肝癌中而且在结直肠癌中增强5-FU的抗肿瘤作用。
实施例 7: BCAA 对人结直肠癌细胞系 HCT116 的转移的影响 ( 体内试验 )
以1x105个细胞/小鼠，将人结直肠癌细胞HCT116移植给BALB/c裸鼠(雌性, 6-周龄，5只/组)。预先用4 mM BCAA处理HCT116细胞7天。在对照组中，没有用4 mM BCAA处理HCT116细胞。为了细胞移植，切开小鼠的肌肉层以暴露脾，用线轻轻系住脾的血管的两端，用注射针(100 μl)将HCT116细胞缓慢地转移进脾中，系住两端的线进行止血，分离脾，并缝合肌肉层，并钉合皮肤。将小鼠正常饲养3周，安乐死，并计数肝脏表面上的转移性癌的数目。
结果，在对照组中，在所有5只小鼠中发现了转移性癌在肝脏表面上的形成，而在BCAA处理组中仅在1只小鼠中发现了转移性癌的形成。BCAA处理也显著地抑制了每只小鼠的转移性癌的数目(图9)。上述结果提示，BCAA会减少结直肠癌的转移能力。与实施例5的结果相组合，提示BCAA对结直肠癌的转移抑制作用可归因于CD44的表达的减少。
实施例 8: 5-FU 和 BCAA 的联合使用对人胃癌细胞系 MKN45 的影响 ( 体外试验 )
以4000个细胞/100 μl/孔的浓度，将MKN45细胞(人胃癌细胞系)铺板在96孔板中，并在下述条件下培养72小时：
･LC培养基(10% FBS)
･LC培养基+BCAA (2 mM或4 mM)
･LC培养基+5-FU (0.05 μg/ml、0.1 μg/ml、0.5 μg/ml或1 μg/ml)
･LC培养基+BCAA (2 mM或4 mM)+5-FU (0.05 μg/ml、0.1 μg/ml、0.5 μg/ml或1 μg/ml)。
72小时后，加入WST-8试剂(10 μl/孔)，并且，在显色1小时以后，测量OD 450 nm的吸光度。通过相对值显示每个组的吸光度，前提条件是，假定未刺激组的吸光度为100%。WST-8被细胞内的脱氢酶还原以产生水溶性的甲臜。通过直接测量甲臜在450 nm的吸光度，可以容易地测量活细胞的数目。细胞数目和产生的甲臜的量具有线性比例关联。
结果显示在图10中。单独5-FU的处理减少了活细胞的数目，并且，当联合使用BCAA时，增强了5-FU对活细胞数目的减少。上述结果提示，BCAA也会在胃癌中增强5-FU的抗肿瘤作用。
实施例 9: 5-FU 和 BCAA 的联合使用对人胃癌细胞系 MKN45 的影响 ( 体外试验 )
以4000个细胞/100 μl/孔的浓度，将MKN45细胞(人胃癌细胞系)铺板在96孔板中，并在下述条件下培养72小时：
･LC培养基(10% FBS)
･LC培养基+BCAA (2 mM或4 mM)
･LC培养基+5-FU (0.05 μg/ml或0.1 μg/ml)
･LC培养基+BCAA (2 mM或4 mM)+5-FU (0.05 μg/ml或0.1 μg/ml)。
72小时后，除去上清液，用多聚甲醛固定细胞，用Hoechst试剂进行核染色，并使用ArrayScan的细胞周期模式分析细胞凋亡的细胞的比例。
结果显示在图11中。5-FU和BCAA的联合使用显著增加了细胞凋亡的细胞的数目。上述结果提示，BCAA对5-FU的针对胃癌的抗肿瘤作用的增强可归因于细胞凋亡的增强。
实施例 10: BCAA 对人胃癌细胞系 MKN45 中干细胞标志物的表达的影响
以4000个细胞/100 μl/孔，将MKN45细胞(人胃癌细胞系)铺板在96孔板中，并在RPMI1640培养基(10% FBS)或含有BCAA (2 mM或4 mM)的RPMI1640培养基(10% FBS)中培养72小时。72小时后，除去上清液，并用多聚甲醛固定细胞，与抗-CD44抗体(第一抗体)一起在室温温育1小时，并进一步与德克萨斯红-缀合的第二抗体一起温育1小时。除去上清液，用Hoechst试剂进行核染色，并使用ArrayScan的靶标活化模式，分析CD44阳性细胞的比例。
结果显示在图12中。BCAA造成了MKN45细胞中CD44（它是胃癌干细胞标志物）的表达的显著减少。上述结果提示，BCAA会诱导胃癌干细胞向非干细胞的分化。
实施例 11: TS-1 和 BCAA 的联合使用对人胃癌细胞系 MKN45 的影响 ( 体内试验 )
以1×106个细胞/小鼠，将MKN45细胞皮下移植给6-周龄雌性BALB/c裸鼠。1周后，基于肿瘤体积将小鼠分组。除了星期六和星期日以外，每天口服施用TS-1 10 mg/kg (媒介物0.5% CMC)、TS-1 10 mg/kg+BCAA 0.75 g/kg或BCAA 0.75 g/kg达6周。也就是说，如下所述处理4组：
组1: CMC (媒介物)
组2: TS-1
组3: TS-1+BCAA
组4: BCAA
TS-1是含有下述组成的替加氟、吉美拉西和奥替拉西钾的抗癌剂。
在0.2 g TS-1中
替加氟 20 mg
吉美拉西 5.8 mg
奥替拉西钾 19.6 mg。
使用游标卡尺，从肿瘤的外侧测量肿瘤体积(最长直径x最短直径x高度(mm3))，以监测肿瘤体积的时程变化。在第43天，进行尸体剖检，并测量肿瘤的重量和体积。
结果显示在图13中。在单独的TS-1或BCAA处理组中，观察到与CMC组相比的肿瘤体积的减小趋势，但是没有观察到显著变化。TS-1和BCAA的联合使用显著减小了肿瘤体积。上述结果提示，BCAA会在体内增强TS-1的抗肿瘤作用。
实施例 12: 5-FU 和 BCAA 对人乳腺癌细胞系 MDA-MB231 的生长和干细胞标志物表达的影响
将MDA-MB231细胞悬浮于RPMI-10% (含有10% FBS的RPMI培养基)中，并以2000个细胞/孔铺板。次日，将培养基更换为下面显示的培养基，并进一步培养细胞5天。
组1: RPMI-10%
组2: 含有BCAA (4 mM)的RPMI-10%
组3: 含有5-FU (0.25 μg/ml)的RPMI-10%
组4: 含有5-FU (0.25 μg/ml)的RPMI-10%+BCAA (4 mM)。
5天后，用Hoechst试剂对细胞核染色，并计数细胞数目。在组1和2中，用抗-CD44抗体将细胞染色，并使用荧光显微镜定量仪器(Thermo Fisher)通过Array Scan来分析CD44阳性细胞的比例。
结果显示在图14和15中。单独5-FU的处理减少了活细胞的数目，并且，当联合使用BCAA时，增强了5-FU对活细胞数目的减少。上述结果提示，BCAA会增强5-FU在乳腺癌中的抗肿瘤作用。另外，BCAA表现出减少CD44（它是是乳腺癌干细胞标志物）在MDA-MB231细胞中的表达的趋势。上述结果提示了BCAA的诱导乳腺癌干细胞向非干细胞分化的可能性。
实施例 13: BCAA 对人肝癌细胞系 HAK1B 中的干细胞标志物的表达的影响 ( 体内试验 )
以7,000,000个细胞/小鼠，将HAK1B细胞皮下移植给7-周龄雌性BALB/c裸鼠(购自Japan Charles River)。1周后，基于肿瘤面积将小鼠分组。将5-FU 250 μg/肿瘤(媒介物10% DMSO/DW)施用进肿瘤(参见Cancer Research, 70(11), 4687-4697, 2010)，以及给予3(w/w)% BCAA混合饲料或3(w/w)%酪蛋白混合饲料达2周。也就是说，如下所述处理4组：
组1: 媒介物+ 酪蛋白混合饲料(对照组)
组2: 5-FU + 酪蛋白混合饲料
组3: 媒介物+ BCAA混合饲料
组4: 5-FU + BCAA混合饲料。
在第15天，分离肿瘤组织，并使用TriPure分离试剂(Roche)提取RNA。使用高容量cDNA RT试剂盒(Applied Biosystems)合成cDNA。通过RT-PCR，定量EpCAM (上皮细胞粘附分子；肝癌干细胞的标志物)的mRNA表达。用于RT-PCR的引物与在实施例1中的那些相同。
结果显示在图16中。BCAA减少了HAK1B细胞中的EpCAM，它是肝癌干细胞的标志物。上述结果提示，BCAA会诱导肝癌中癌症干细胞向癌症非干细胞的分化以减少癌症干细胞，并且还在体内增加肿瘤对5-FU的敏感性。
实施例 14: BCAA 联合使用对人胃癌细胞系 MKN45 中的干细胞标志物表达的影响 ( 体内试验 )
以1×106个细胞/小鼠，将MKN45细胞皮下移植给6-周龄雌性BALB/c裸鼠。1周后，基于肿瘤体积将小鼠分组。除了星期六和星期日以外，每天口服施用TS-1 10 mg/kg (媒介物0.5% CMC)、TS-1 10 mg/kg+BCAA 0.75 g/kg或BCAA 0.75 g/kg达6周。也就是说，如下所述处理4组：
组1: CMC (媒介物)
组2: TS-1
组3: TS-1+BCAA
组4: BCAA。
在第43天，分离肿瘤组织，并使用TriPure分离试剂(Roche)提取RNA。使用高容量cDNA RT试剂盒(Applied Biosystems)合成cDNA。通过RT-PCR，定量CD44 (肝癌干细胞的标志物)、nanog (未分化状态的标志物)和ABCB5 (ABC转运蛋白，已经报道了在癌症干细胞中的表达)的mRNA表达。用于RT-PCR的引物如下所述。
表3
CD44: 5’-AAGGTGGAGCAAACACAACC-3’(序列号7)
5’-AGCTTTTTCTTCTGCCCACA-3’(序列号8)
Nanog: 5’-TTCCTTCCTCCATGGATCTG-3’(序列号9)
5’-TCTGCTGGAGGCTGAGGTAT-3’(序列号10)
ABCB5: 5’-ATGTACAGTGGCTCCGTTCC-3’(序列号11)
5’-ACACGGCTGTTGTCACCATA-3’(序列号12)
β肌动蛋白: 5’-GATGAGATTGGCATGGCTTT-3’(序列号13)
5’-CACCTTCACCGTTCCAGTTT-3’(序列号14)。
结果显示在图17中。BCAA减少了MKN45细胞中CD44、nanog和ABCB5的表达。上述结果提示，BCAA会诱导胃癌中癌症干细胞向癌症非干细胞的分化以减少癌症干细胞，并且还在体内增加肿瘤对TS-1的敏感性。
工业适用性
由于支链氨基酸会促进癌症干细胞向癌症非干细胞的分化和增强对化学治疗剂的敏感性，通过给罹患含有癌症干细胞的癌症的患者联合施用支链氨基酸和化学治疗剂，可以有效地治疗癌症。
另外，通过给具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的患者联合施用支链氨基酸和化学治疗剂，可以有效地预防癌症的转移和复发。
因此，本发明可用作用于预防或治疗癌症的药剂等。
本申请是基于在日本提交的专利申请号2011-32511 (提交日：2011年2月17日)和2011-215605 (提交日：2011年9月29日)，它们的内容完整地并入本文。
序列表
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Kurume University
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<213> 人工的
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<223> 人EpCAM的正向引物
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<223> 人CD44的PCR引物
<400> 7
aaggtggagc aaacacaacc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人CD44的PCR引物
<400> 8
agctttttct tctgcccaca 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人Nanog的PCR引物
<400> 9
ttccttcctc catggatctg 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人Nanog的PCR引物
<400> 10
tctgctggag gctgaggtat 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人ABCB5的PCR引物
<400> 11
atgtacagtg gctccgttcc 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人ABCB5的PCR引物
<400> 12
acacggctgt tgtcaccata 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人β-肌动蛋白的PCR引物
<400> 13
gatgagattg gcatggcttt 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 人β-肌动蛋白的PCR引物
<400> 14
caccttcacc gttccagttt 20

Claims (32)

1.一种用于治疗含有癌症干细胞的癌症的药剂，所述药剂包含化学治疗剂和异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合，
按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
2.根据权利要求1所述的药剂，其中所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
3.根据权利要求1所述的药剂，其中所述化学治疗剂是5-FU。
4.根据权利要求1所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
5.根据权利要求1所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
6.一种用于预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的药剂，所述药剂包含化学治疗剂和异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐的组合，
按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
7.根据权利要求6所述的药剂，其中所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
8.根据权利要求6所述的药剂，其中所述化学治疗剂是5-FU。
9.根据权利要求6所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
10.根据权利要求6所述的药剂，其中所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
11.用于治疗含有癌症干细胞的癌症的组合产品，所述组合产品包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐、和化学治疗剂，
按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
12.用于预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的组合产品，所述组合产品包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐、和化学治疗剂，
按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
13.异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐在制备用于增强化学治疗剂的抗肿瘤活性的药剂中的用途，
其中，按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
14.根据权利要求13所述的用途，其中，所述药剂与化学治疗剂联合施用给罹患了含有癌症干细胞的癌症的哺乳动物、或具有罹患含有癌症干细胞的癌症的历史的哺乳动物。
15.根据权利要求13所述的用途，其中，所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
16.根据权利要求13所述的用途，其中，所述化学治疗剂是5-FU。
17.根据权利要求14所述的用途，其中，所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
18.根据权利要求14所述的用途，其中，所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
19.包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐、和化学治疗剂的组合物在制备用于治疗含有癌症干细胞的癌症的药剂中的用途，
其中，按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
20.根据权利要求19所述的用途，其中，所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
21.根据权利要求19所述的用途，其中，所述化学治疗剂是5-FU。
22.根据权利要求19所述的用途，其中，所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
23.根据权利要求19所述的用途，其中，所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
24.包含异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐、和化学治疗剂的组合物在制备用于预防含有癌症干细胞的癌症的转移或复发的药剂中的用途，
其中，按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
25.根据权利要求24所述的用途，其中，所述化学治疗剂是抗代谢药、烷化剂、抗肿瘤抗生素、植物生物碱或分子靶标治疗剂。
26.根据权利要求24所述的用途，其中，所述化学治疗剂是5-FU。
27.根据权利要求24所述的用途，其中，所述含有癌症干细胞的癌症是化学治疗剂抗性的癌症。
28.根据权利要求24所述的用途，其中，所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
29.异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐在制备用于诱导癌症干细胞的分化的药剂中的用途，
其中，按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
30.根据权利要求29所述的用途，其中，所述癌症干细胞是胃癌干细胞、肝癌干细胞或结直肠癌干细胞。
31.异亮氨酸或其盐、亮氨酸或其盐、和缬氨酸或其盐在制备用于抑制含有癌症干细胞的癌症的转移的药剂中的用途，
其中，按重量比计，3种氨基酸、即异亮氨酸:亮氨酸:缬氨酸的混合比为1:1-3:0.5-2.0。
32.根据权利要求31所述的用途，其中，所述含有癌症干细胞的癌症是胃癌、肝癌、乳腺癌或结直肠癌。
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