CN103333856A - 人脐带间充质干细胞培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了人脐带间充质干细胞培养基。本发明由基础培养基、α-辅肌动蛋白1同种型b、α肌动蛋白、光蛋白聚糖和富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白组成；其中，所述α-辅肌动蛋白1同种型b的浓度为0.0001-1000ng/mL，α肌动蛋白的浓度为0.0001-1000ng/mL，光蛋白聚糖的浓度为0.0001-1000ng/mL，富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白的浓度为0.0001-1000ng/mL。本发明具长期保持有干细胞的活性及形态，有效保持干细胞自身分化能力，保证干细胞特性传承等优点。

Description

人脐带间充质干细胞培养基
技术领域
本发明涉及的是一种培养基，具体涉及的是人脐带间充质干细胞培养基。
背景技术
脐带间充质干细胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，脐带间充质干细胞（MSCs）具有较高的分化潜能，它能分化成许多种组织细胞，它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。
目前已出现多种干细胞培养基，但是目前该干细胞培养基的缺陷在于，均是通用性干细胞培养基，即，目前的干细胞培养基产品不是针对某一个特定的干细胞品种，而是用于多种干细胞的培养。但是由于干细胞的来源不同，干细胞表面的标记蛋白表达不同，意味着不同的干细胞品种需要的营养物质不同，因而需要专用的培养基满足每一个干细胞特定的营养和外环境的需求。目前的通用性干细胞培养基不能满足这一专业要求，而且现有干细胞培养基在使用过程中出现该干细胞生长速度慢、形态改变导致性状改变、细胞活率降低等问题。
发明内容
本发明的目的在于解决现有培养基培养人脐带间充质干细胞时，该干细胞活性、形态保持时间短，活率低的问题，提供一种解决上述问题的人脐带间充质干细胞培养基。
实现本发明的技术方案如下：
人脐带间充质干细胞培养基，包括基础培养基和富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白；所述富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白也称为人骨粘连蛋白Osteonectin,其英文名称为SPARC。
进一步，所述富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
为了达到更好的效果，本发明还包括α-辅肌动蛋白1同种型b，该α-辅肌动蛋白1同种型b在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。α-辅肌动蛋白1同种型b的英文名称为alpha-actinin-1isoform b。
进一步，所述α-辅肌动蛋白1同种型b在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
为了达到优选的效果，人脐带间充质干细胞培养基还包括肌动蛋白，该α肌动蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。α肌动蛋白的英文名称为alpha-actin。
更进一步地，所述α肌动蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
优选地，人脐带间充质干细胞培养基还包括光蛋白聚糖，该光蛋白聚糖在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。光蛋白聚糖的英文名称为lumican。
更优选地，所述光蛋白聚糖在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
作为最优的选择，所述α-辅肌动蛋白1同种型b、α肌动蛋白、光蛋白聚糖和富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白均为人体蛋白。
本发明具有以下优点及有益效果：
1、本发明使用四种蛋白质和基础培养基结合培养人脐带间充质干细胞，该干细胞的活性及形态均能长期保持，有效保持了干细胞自身的分化能力，保证了干细胞特性的传承，进而保证了干细胞的质量；
2、采用本发明的培养基培养的干细胞，其增值能力（活性）显著高于基础培养基培养的干细胞，有效增加人脐带间充质干细胞生长速度；
3、本发明的效果显著，极其适合人脐带间充质干细胞的培养，适于推广。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
本实施例是采用基础培养基分别与以下三种浓度的富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白混合而成，该三种具体浓度如表1a：
表1a
编号 浓度
① 1mg/L
② 1×10-3mg/L
③ 1×10-6mg/L
其中，基础培养基的组成成分如表1b：
表1b
Figure BDA00003570024500031
Figure BDA00003570024500041
每ML培养基中均接入5×104个细胞进行培养，其中，将表1a中三种不同浓度的培养基作为实验组，基础培养基作为对照组，对实验组和对照组进行检测，检测结果如表1c：
表1c
Figure BDA00003570024500042
在1ML培养基中细胞数最多的时候，对该细胞进行了检测，发现：实验组中细胞皆为长梭形，细胞核为圆形或椭圆型，其平均活率达到96.5%；而对照组中细胞为长梭形和扇形，该细胞形态发生了改变，且该扇形细胞内的细胞核呈不规则形状，对照组中细胞活率为87.5%。
通过上述检测结果可知：本实施例的细胞数明显多于对照组，且其生长速度也明显快于对照组，且其细胞活率明显高于对照组。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于加入基础培养基内蛋白的组成成分不同，其具体成分如表2a：
表2a
Figure BDA00003570024500051
每ML培养基中均接入5×104个细胞进行培养，其中，将表1a中三种不同浓度的培养基作为实验组，基础培养基作为对照组，对实验组和对照组进行检测，检测结果如表2b：
表2b
Figure BDA00003570024500052
在1ML培养基中细胞数最多的时候，对该细胞进行了检测，发现：实验组中细胞皆为长梭形，细胞核为圆形或椭圆型，其平均活率达到97.3%；而对照组中细胞为长梭形和扇形，该细胞形态发生了改变，且该扇形细胞内的细胞核呈不规则形状，对照组中细胞活率为88.7%。
通过上述检测结果可知：本实施例的细胞数明显多于对照组，且其生长速度也明显快于对照组，且其细胞活率明显高于对照组。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于基础培养基和蛋白质组成和浓度不同，基础培养基具体成分如表3a，蛋白质具体组成如表3b。
表3a
成分 含量（mg/L） 成分 含量（mg/L）
四水硝酸钙 100 L-丝氨酸 30
氯化钾 400 L-苏氨酸 20
无水硫酸镁 48.84 L-色氨酸 5
氯化钠 6000 L-酪氨酸 20
磷酸氢二钠 300 L-缬氨酸 20
L-精氨酸 200 D-葡萄糖 2000
L-天门冬酰胺 50 谷胱甘肽（还原型） 1
L-天门冬氨酸 20 HEPES 3000
L-胱氨酸盐酸盐 65.15 酚红 5
L-谷氨酸 20 维生素H 0.2
L-谷氨酰胺 300 D-泛酸钙 0.25
甘氨酸 10 氯化胆碱 3
L-组氨酸 15 叶酸 1
L-羟脯氨酸 20 i-肌醇 35
L-异亮氨酸 50 烟酰胺 1
L-亮氨酸 50 对氨基苯甲酸 1
L-赖氨酸盐酸盐 40 盐酸吡哆醇 1
L-蛋氨酸 15 核黄素 0.2
L-苯丙氨酸 15 盐酸硫胺 1
L-脯氨酸 20 维生素B12 0.005
表3b
Figure BDA00003570024500071
每ML培养基中均接入5×104个细胞进行培养，其中，将表1a中三种不同浓度的培养基作为实验组，基础培养基作为对照组，对实验组和对照组进行检测，检测结果如表3c：
表3c
Figure BDA00003570024500072
Figure BDA00003570024500081
在1ML培养基中细胞数最多的时候，对该细胞进行了检测，发现：实验组中细胞皆为长梭形，细胞核为圆形或椭圆型，其平均活率达到98.1%；而对照组中细胞为长梭形和扇形，该细胞形态发生了改变，且该扇形细胞内的细胞核呈不规则形状，对照组中细胞活率为90.1%。
通过上述检测结果可知：本实施例的细胞数明显多于对照组，且其生长速度也明显快于对照组，且其细胞活率明显高于对照组。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于基础培养基的组成成分以及混合于该基础培养基内的四种蛋白质不同，该四种蛋白质的具体浓度如表4a，该基础培养基的组成成分如表4b：
表4a
Figure BDA00003570024500082
表4b
每ML培养基中均接入5×104个细胞进行培养，其中，将表1a中三种不同浓度的培养基作为实验组，基础培养基作为对照组，对实验组和对照组进行检测，检测结果如表4c：
表4c
在1ML培养基中细胞数最多的时候，对该细胞进行了检测，发现：实验组中细胞皆为长梭形，细胞核为圆形或椭圆型，其平均活率达到98.9%；而对照组中细胞为长梭形和扇形，该细胞形态发生了改变，且该扇形细胞内的细胞核呈不规则形状，对照组中细胞活率为89.8%。
通过上述检测结果可知：本实施例的细胞数明显多于对照组，且其生长速度也明显快于对照组，且其细胞活率明显高于对照组。
综上所述，通过上述四个实施例中实验组和对照组的对比可知：利用本发明培养的人脐带间充质干细胞的活性及形态均能长期保持，进而有效保持了干细胞自身的分化能力和细胞特性的传承；同时，该干细胞的增值能力显著高于基础培养基培养的干细胞，有效增加人脐带间充质干细胞生长速度。
根据以上实施例，就可以很好的实现本发明。

Claims (9)

1.人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，包括基础培养基和富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白；所述富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
2.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，所述富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
3.根据权利要求1或2所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，还包括α-辅肌动蛋白1同种型b，该α-辅肌动蛋白1同种型b在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
4.根据权利要求3所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，所述α-辅肌动蛋白1同种型b在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
5.根据权利要求3所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，还包括α肌动蛋白，该α肌动蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
6.根据权利要求5所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，所述α肌动蛋白在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
7.根据权利要求5或6所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，还包括光蛋白聚糖，该光蛋白聚糖在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
8.根据权利要求7所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，所述光蛋白聚糖在总培养基中的浓度为0.0001-1000ng/mL。
9.根据权利要求8所述的人脐带间充质干细胞培养基，其特征在于，所述α-肌动蛋白1同种型b、α肌动蛋白、光蛋白聚糖和富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白均为人体蛋白。
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