CN103333133A - 一种Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生产天然抗癌药物Tubulysin家族化合物的关键中间体——TUV的制备方法，以（R）-苹果酸为起始原料，首先采用文献方法得化合物1，然后用DIBAL-H还原成醛后不经纯化直接引入手性控制试剂（R）-叔丁基亚磺酰胺得化合物2，与格氏试剂作用后合成高选择性，高产率得到化合物3，然后经适当保护后氧化成相应醛不经纯化与（R）-半胱胺酸甲酯盐酸盐作用一锅法得到化合物5，再用活性MnO2氧化最终得到TUV。此合成大大简化了反应，缩短了反应周期；原料及各种试剂均价廉易得，成本低，后处理工艺简单，收率高；采用的原料无毒，生产过程无污染，环境友好，为产品的工业化规模生产和商品化创造了良好的条件。
Description
技术领域
本发明属于化学合成技术领域，涉及一种天然抗癌药物Tubulysin的关键中间体TUV的制备方法。
背景技术
TUV是天然抗癌药物Tubulysin家族化合物（结构式如下）的关键中间体（虚线圈内区域所示）。
Tubulysin家族化合物
其中， Tubulysin D表现出的抗癌活性，其对人类KB-V1（多药耐药宫颈癌）细胞株的P-糖蛋白表达保有很强的抑制作用（IC50=0.31nM），并且Tubulysin
A对HCT-15（多药耐药结肠癌癌）细胞系也有积极的抑制作用（GI50=0.12
nm）。前期活性研究表明Tubulysin A在抗血管生成方面也具有潜在的应用前景。Tubulysin A非竞争性抑制长春碱与微管蛋白的结合表明，Tubulysins结合肽的结合位点类似于长春花生物碱与肽结合的b-微管蛋白位点。与上市的抗癌药物如长春碱、紫杉醇、埃博霉素等相比，Tubulysin的活性是可达20-1000倍以上。此外，在水溶性方面Tublysins相比其它抗癌药物有着明显的优势，其对特定的癌细胞表现出超强的抗癌活性，使其成为新型抗癌新药研发中颇受关爱的目标分子之一。
TUV的化学结构式：
目前关于TUV的合成方法，国内外文献报道还不是很多,主要有以下几种路线：
2006年，德国化学家Alexander Dömling小组在路易斯酸BF3·Et2O存在下采用一锅法，制得了TUV片段的前体，可惜的是产率仅有40%。而且与羟基相连的碳上发生的严重的差向异构化，其dr=3:1。然后主要构型的产物在强碱NaOH作用下水解得TUV，产率为62%（反应路线如下），
试剂与条件：a.BF3·Et2O,Boc-L-homovaline aldehyde,THF,-78℃;40%, 3:1 major isomer separated; b).NaOH,THF/H2O
(3:1), 62%.
2007年，Matteo Zanda小组对TUV的合成从半胱氨酸乙酯的盐酸盐出发，与丙酮醛反应后，用MnO2氧化成所需的噻唑环得化合物，在路易斯酸催化下与异丁醛反应后迈克尔加成，在CBS-BH3·Me2S体系还原选择性得其异构体再经水解得TUV（反应路线如下）。该方法原料不易得，路线稍长，而且使用了HPLC纯化，难以应用。
试剂与条件：a) Pyruvaldehyde, NaHCO3,EtOH/H2O
(1:1), 18 h, rt; b) activated MnO2, acetonitrile, 50℃, 2 h,52% for 2 steps;c) isobutyraldehyde, TiCl4,Et3N,
dry THF,-78℃ to rt,77%; d) BocNH2,Sn(OTf)2,
acetonitrile, 3 h, RT,60%; e) (S)-CBS, BH3Me2S, dry THF,
0℃ to RT, 2 h,67; f) LiOH, THF/H2O
4:1, 5 h, rt,98%.
2007年，Peter Wipf小组从氨基醇出发，经还原，氧化，加成等步骤制得一对异构体化合物（dr=2：1），然后制得TUV（反应路线如下）。该路线所用试剂昂贵，立体选择性差，难以应用。
试剂与条件：a) H2,Pd/C,MeOH,Boc2O,92%;b)Dess-Martin,89%;c)sec-BuMgLi,60%;d)
Ac2O,Py;e)TBAF,63%;f)Dess-Martin;g)NaClO2,2-methyl-2-butene,90%.
2010年，Osamu Tamura小组先用手性的糖和手性樟脑磺酸制得手性试剂（dr=85：15）后， 保护氨基，水解成酸后与半胱氨酸乙酯缩合，然后用Ph3P=O-Tf2O体系合环，氧化成噻唑环，开环后脱去保护基得TUV（反应路线如下）。该路线所有手性试剂昂贵，对应的立体选择性不高，难以应用。
试剂与条件：a) LiOH, THF/H2O, 89%;b) HClO4
aq., CH3CN; c) Fmoc-Cl, NaHCO3, dioxane/H2O,
99% for 2 steps); d)l-(S)-Tr-cysteine methyl ester, HATU, DIPEA, CH2Cl2,82%;
e) Ph3P=O, Tf2O, CH2Cl2; f) MnO2,CH2Cl2,
75% (2 steps);g) Mo(CO)6,CH3CN/H2O, 89%, h) Et2NH,
CH3CN, quant.
根据目前文献报道的制备TUV的方法，这些方法虽然各有特点，但存在很多不足：如试剂价格昂贵，需要加入多种催化剂，操作很不方便。另外，路线及反应时间较长等。而目前文献从（R）-苹果酸制备TUV的方法的还未见报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种新的生产天然抗癌药物Tubulysin家族化合物的关键中间体——TUV的合成方法。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：
一种Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，用（R）-苹果酸作为起始原料，经过多步转化最终制得目标产物，反应路线如下，
步骤一：先用（R）-苹果酸制得化合物1，结构式如下，
化学命名为：（R）-甲基-3,4-二（（叔丁基二甲基甲硅烷基）氧基）丁酸乙酯
（参考文献：The Journal of Organic Chemistry 2003, 68 (5),
1780-1785.）
步骤二、化合物2的合成，结构式如下，
(R,E)-N-((R)-3,4-bis((tert-butyldimethylsilyl)oxy)butylidene)-2-methy-lpropane-2-sulfinamide
a.将步骤一所得化合物1溶于干燥的甲苯中，在-70℃至-80℃氮气保护下与二异丁基氢化铝(DIBAL-H)反应得相应的醛；
b.将上述粗品溶于干燥的二氯甲烷（简称：DCM）中，分别加入R-叔丁基亚磺酰胺、CuSO4和吡啶对甲苯磺酸盐（简称：PPTS）室温下反应得化合物2；
步骤三：化合物3的合成，结构式如下，
(R)-N-((3R,5R)-5,6-bis((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-methylhexan-3-yl)-2-methylpropane-2-sulfinamide
将步骤二所得化合物2溶于干燥的DCM中，于-40℃至-50℃下滴加格氏试剂反应得化合物3；
步骤四：化合物4的合成，结构式如下，
tert-butyl((3R,5R)-5-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-6-hydroxy-2-methylhexan-3-yl)carbamate
将步骤三所得化合物3溶于无水乙醇中，于0℃下加入HCl/dioxane溶液，反应后抽除HCl，再加入DCM、TEA和Boc2O，反应得化合物4；
步骤五：化合物5）的合成，结构式如下，
methyl2-((5R,7R)-7-isopropyl-2,2,3,3,11,11-hexamethyl-9-oxo-4,10-dioxa-8-aza-3-siladodecan-5-yl)thiazole-4-carboxylate
以DCM为反应介质，-78℃下草酰氯、DMSO和化合物4反应后，再与半胱氨酸甲酯盐酸盐反应得化合物5；
步骤六：终产物TUV的合成，结构式如下，
（TUV）
将步骤五所得化合物5溶于无水CH3CN中，氮气保护与活化的MnO2反应得终产物TUV。
所述步骤二中，
化合物1：DIBAL-H：R-叔丁基亚磺酰胺：CuSO4：PPTS的摩尔比为1：1-1.5：1-1.1：1.8-2.1：0.045-0.050；
所述步骤a中的反应时间为30-45min，用盐酸淬灭反应，分液，乙酸乙酯萃取，合并有机相后用饱合食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩抽干，得粗品；
所述步骤b中反应时间为19h-24h，反应完后过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=10：1为洗脱液柱层析得无色液体，即化合物2。
优选的，
化合物1：DIBAL-H：R-叔丁基亚磺酰胺：CuSO4：PPTS的摩尔比为1：1.2：1：2：0.050；
所述步骤a中的反应时间为45min；
所述步骤b中反应时间为19h。
所述步骤三中，化合物2：格氏试剂的摩尔比为1：2.0-2.2，所述格氏试剂采用异丙基溴化镁格氏试剂；
反应时间为4-6h，反应后缓慢升温至室温，加饱和NH4Cl淬灭，用DCM萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得白色固体，即化合物3。
优选的，化合物2：格氏试剂的摩尔比为1：2；反应时间为6h。
所述步骤四中，化合物3：HCl：TEA：Boc2O的摩尔比为1：3.8-4.1：4.9-5.2：1.2-1.8，1mmol化合物3加入无水乙醇2.3mL、DCM4.63mL，所述HCl/dioxane溶液的溶度为3.9M；
具体操作如下：
将化合物3溶于无水乙醇中，于0℃下加入HCl/dioxane溶液，0℃下反应25-30min，抽除HCl后分别加入DCM、TEA和Boc2O，室温搅拌10-12h，反应完后旋蒸除去溶剂，粗品溶入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得无色油状物，即化合物4。
优选的，化合物3：HCl：TEA：Boc2O的摩尔比为1：4：5：1.5，1mmol化合物3加入无水乙醇2.3mL、DCM 4.63mL；所述化合物3与HCl的反应时间为30min。
所述步骤五中，化合物4：草酸氯：DMSO：第一次加入的TEA：第二次加入的TEA：半胱氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比为1：1.9-2.2：3.8-4.1：5.7-6：1.9-2.1：1.4-1.6；
具体操作如下：
-78℃下向草酰氯的DCM溶液缓慢滴加DMSO的DCM溶液，-78℃下反应1-1.5小时后，滴加步骤四所得的化合物4的DCM溶液，继续反应2.5-3小时，滴加TEA，搅拌30-40分钟后，再置于室温搅拌45-60分钟，再加入TEA，将半胱氨酸盐酸盐溶于无水乙醇中加入反应液中搅拌2.5-3小时，浓缩，粗品溶于乙酸乙酯中，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得无色油状物，即化合物5。
优选的，化合物4：草酸氯：DMSO：第一次加入的TEA：第二次加入的TEA：半胱氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比为1：2：4：6：2：1.5，所述草酸氯的DCM溶液的浓度为0.086M；
所述草酰氯与DMSO于-78℃下反应1小时后，滴加步骤四所得的化合物4的DCM溶液，继续反应3小时，滴加TEA，搅拌30分钟后，再置于室温搅拌45分钟，再加入TEA，将半胱氨酸盐酸盐溶于无水乙醇中加入反应液中搅拌2.5小时。
所述步骤六中，化合物5：MnO2的摩尔比为1：17-19；活化的MnO2采取两次加入的方法，第一次加入一半，11h后再加入另一半，加入完毕后，加热至50-60℃，反应16-18h，反应完后过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得浅色油状物，即终产物TUV。
优选的，化合物5 ：MnO2的摩尔比为1：18，加热至60℃下反应。
本发明的有益效果：
1、本发明选用（R）苹果酸为起始原料，经过几步转化制得的亚胺与格氏试剂加成，立体选择性高，产率高，解决了文献中普遍存在的立体选择性不高的问题，并且大大简化了反应步骤，缩短了反应周期。
2、原料及各种试剂均价廉易得，成本低，后处理工艺简单，收率高，为产品的工业化规模生产和商品化创造了良好的条件。
3、采用的原料无毒，生产过程无污染，环境友好，符合国家的绿色产业政策。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明TUV的制备方法，是用（R）-苹果酸为起始原料，经过多步转化最终制得目标产物。反应路线如下所示：
实施例
1
：化合物
2
的合成
首先按文献（The Journal of Organic Chemistry 2003, 68 (5),
1780-1785.）制得化合物1 。然后称取化合物1（8.0 g，22.08 mmol）溶于干燥的甲苯中，-78℃氮气保护下滴加DIBAL-H（26.5 mL，26.5 mmol），45分钟后加1N盐酸淬灭，分液，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相用饱和食盐水洗涤一次，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩抽干，粗品溶于干燥的DCM中，分别加入R-叔丁基亚磺酰胺（2.67 g，22.08 mmol），CuSO4（7.04
g，44.16 mmol）和PPTS（279 mg，1.10 mmol）室温搅拌19小时，反应完后过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=10：1为洗脱液柱层析得化合物2为无色液体7.3 g，两步产率76%。
合成的化合物，经1HNMR,13CNMR，HRMS检测，其产品为纯的化合物，其各性能指标或表征数据如下：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 4.12 – 4.05 (m, 1H), 3.63 (dd, J = 10.0, 5.2 Hz, 1H),
3.52 – 3.46 (m, 1H), 2.81 (dt, J =
15.5, 5.1 Hz, 1H), 2.68 (ddd, J = 15.5, 6.0, 4.9 Hz, 1H), 1.22 (d, J
= 2.0 Hz, 9H), 0.90 (d, J = 2.0 Hz, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.09 (s, 6H),
0.06 (s, 6H). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 168.08, 70.81, 66.90, 56.51, 40.96, 25.88, 25.77, 22.41,
22.38, 18.28, 18.00, 1.00, -4.49, -4.82, -5.38, -5.41. HRMS (ESI) calcd for [C20H45NO3SSi2+H]+
436.2737 found 436.2735.
实施例
2
：化合物
3
的合成
化合物2（3.69
g，8.52 mmol）溶于干燥的DCM中，于-48℃氮气保护下滴加异丙基溴化镁格氏试剂（9.12
mL，17.04 mmol），此温度反应6小时后，缓慢升温至室温，加饱和NH4Cl淬灭，用DCM萃取3次后合并有机相用饱和食盐水洗涤一次，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得化合物3为白色固体3.8 g，产率93%。
合成的化合物，经1HNMR,13CNMR，HRMS检测，其产品为纯的化合物，其各性能指标或表征数据如下：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.82 – 3.74 (m, 1H),
3.56 (dd, J = 9.9, 5.0 Hz, 1H), 3.38 – 3.28
(m, 2H), 3.18 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.19 – 2.09
(m, 1H), 1.55 – 1.38 (m, 2H), 1.23 (s, 9H), 0.93 (d, J
= 5.9 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.90 (s, 9H), 0.89 (s, 9H),
0.09 (s, 3H), 0.07 (s, 3H), 0.05 (s, 3H), 0.05 (s, 3H). 13C NMR (100
MHz, CDCl3) δ 70.56, 67.45,
59.26, 56.14, 36.80, 33.34, 25.89, 22.82, 18.92, 18.26, 18.03, 16.31, -3.77,
-4.45, -5.34, -5.39. HRMS (ESI) calcd for [C23H53NO3SSi2+H]+
480.3363 found 480.3361.
实施例
3
：化合物
4
的合成
化合物3（1.03
g，2.16 mmol）溶于无水EtOH（5 mL）中，于0℃下加入HCl/dioxane（2.2
mL，8.67 mmol）溶液，此温度下反应30分钟后，水泵抽除HCl后分别加入DCM（10 mL），TEA（1.51 mL，10.83 mmol），Boc2O（708
mg，3.25 mmol）室温搅12h。反应完后旋蒸除去溶剂，粗品溶入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤一次，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得化合物4为无色油状物595
mg，产率76%。
合成的化合物，经1HNMR,13CNMR，HRMS检测，其产品为纯的化合物，其各性能指标或表征数据如下：
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 4.52 (d, J = 8.9 Hz), 3.86 (dq, J = 8.1,
4.1 Hz), 3.65 – 3.44 (m), 2.10 – 2.03 (m), 1.88 – 1.79
(m), 1.75 – 1.65 (m), 1.45 (s), 0.93 (s), 0.90 (s),
0.89 (s), 0.15 (s), 0.11 (s).13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 155.60, 109.99, 78.85, 70.60, 66.84, 52.50, 35.99,
32.54, 28.38, 25.87, 18.20, 18.01, 17.91, 0.99, -4.51, -4.81. HRMS (ESI) calcd
for [C17H39NO3SSi +H]+ 366.2498
found 366.2501.
实施例
4
：化合物
5
的合成
-78℃下向（ClCO）2（0.13 mL，1.52 mmol）的DCM溶液缓慢滴加DMSO（0.215 mL，3.04 mmol）的DCM溶液，此温度下1小时后，再滴加化合物4（275
mg，0.76 mmol）的DCM溶液，继续反应3小时，滴加TEA（0.64 mL，4.56 mmol），搅拌30分钟后置于室温搅拌45分钟后，加入TEA（0.2 mL，1.5 mmol），再将半胱氨酸盐酸盐（192 mg，1.12 mmol）溶于无水EtOH中加入反应液中搅拌2.5小时，浓缩，粗品溶于乙酸乙酯中用饱和食盐水洗涤一次，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得化合物 5为无色油状物265
mg，产率74%。
实施例
5
：
TUV
的合成
化合物5（770
mg，1.62 mmol）溶于无水CH3CN中，氮气保护下加入活化的MnO2（2.5 g，29.10 mmol，分两次加入，11小时后加入另一半）加热到60℃反应18小时，反应完后过虑浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得终产物TUV为浅色油状物481 mg，产率63%。
所得终产物，经1HNMR,13CNMR，HRMS检测，其产品为纯的化合物，其各性能指标或表征数据如下：
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (s, 1H), 5.19 (dd, J = 9.6, 2.0 Hz, 1H),
4.61 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.73 – 3.62 (m, 1H), 1.89 – 1.80
(m, 2H), 1.72 – 1.61 (m, 1H), 1.44 (s, 10H), 0.94 (s,
9H), 0.85 (t, J = 6.5 Hz, 6H), 0.15 (s, 3H), -0.09 (s, 3H). 13C
NMR (100 MHz, CDCl3) δ
178.46, 161.87, 155.31, 146.19, 127.47, 78.78, 70.33, 52.41, 51.80, 41.49,
32.52, 28.37, 25.72, 18.10, 17.92, 17.68, 0.99, -4.75, -5.33. HRMS (ESI) calcd
for [C22H40N2O5SSi+H]+
473.2505 found 473.2500.
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：用（R）-苹果酸作为起始原料，经过多步转化最终制得目标产物，反应路线如下，
步骤一：先用（R）-苹果酸制得化合物1，结构式如下，
步骤二、化合物2的合成，结构式如下，
a.将步骤一所得化合物1溶于干燥的甲苯中，在-70℃至-80℃氮气保护下与二异丁基氢化铝(DIBAL-H)反应得相应的醛；
b.将上述粗品溶于干燥的二氯甲烷（简称：DCM）中，分别加入R-叔丁基亚磺酰胺、CuSO4和吡啶对甲苯磺酸盐（简称：PPTS）室温下反应得化合物2；
步骤三：化合物3的合成，结构式如下，
将步骤二所得化合物2溶于干燥的DCM中，于-40℃至-50℃氮气保护下滴加格氏试剂反应得化合物3；
步骤四：化合物4的合成，结构式如下，
（化合物4），
将步骤三所得化合物3溶于无水乙醇中，于0℃下加入HCl/dioxane溶液，反应后抽除HCl，再加入DCM、TEA和Boc2O，反应得化合物4；
步骤五：化合物5的合成，结构式如下，
以DCM为反应介质，-70℃至-80℃下草酰氯、DMSO和化合物4反应后，再与半胱氨酸甲酯盐酸盐反应得化合物5；
步骤六：终产物TUV的合成，结构式如下，
将步骤五所得化合物5溶于无水CH3CN中，氮气保护下与活化的MnO2反应得终产物TUV。
2.根据权利要求1所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其在于：所述步骤二中，
化合物1：DIBAL-H：R-叔丁基亚磺酰胺：CuSO4：PPTS的摩尔比为1：1-1.5：1-1.1：1.8-2.1：0.045-0.050；
所述步骤a中的反应时间为30-45min，用盐酸淬灭反应，分液，乙酸乙酯萃取，合并有机相后用饱合食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩抽干，得粗品；
所述步骤b中反应时间为19h-24h，反应完后过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=10：1为洗脱液柱层析得无色液体，即化合物2。
3.根据权利要求2所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤二中，
化合物1：DIBAL-H：R-叔丁基亚磺酰胺：CuSO4：PPTS的摩尔比为1：1.2：1：2：0.050；
所述步骤a中的反应时间为45min；
所述步骤b中反应时间为19h。
4.根据权利要求1所述的TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤三中，
化合物2：格氏试剂的摩尔比为1：2.0-2.2，所述格氏试剂采用异丙基溴化镁格氏试剂；
反应时间为4-6h，反应后缓慢升温至室温，加饱和NH4Cl淬灭，用DCM萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得白色固体，即化合物3。
5.根据权利要求4所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤三中，
化合物2：格氏试剂的摩尔比为1：2.0；
反应时间为6h。
6.根据权利要求1所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤四中，
化合物3：HCl：TEA：Boc2O的摩尔比为1：3.0-4.0：4.9-5.2：1.2-1.8；
1mmol化合物3加入无水乙醇2.3mL、DCM4.63mL，所述HCl/dioxane溶液的溶度为3.9M；
具体操作如下：
将化合物3溶于无水乙醇中，于0℃下加入HCl/dioxane溶液，0℃下反应25-30min，抽除HCl后分别加入DCM、TEA和Boc2O，室温搅拌10-12h，反应完后旋蒸除去溶剂，粗品溶入乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得无色油状物，即化合物4。
7.根据权利要求6所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤四中，
化合物3：HCl：TEA：Boc2O的摩尔比为1：4：5：1.5；
所述化合物3与HCl的反应时间为30min。
8.根据权利要求1所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤五中，
化合物4：草酰氯：DMSO：第一次加入的TEA：第二次加入的TEA：半胱氨酸盐酸盐的摩尔比为1：1.9-2.2：3.8-4.1：5.7-6：1.9-2.1：1.4-1.6；
具体操作如下：
-78℃下向草酰氯的DCM溶液缓慢滴加DMSO的DCM溶液，-78℃下反应1-1.5小时后，滴加步骤四所得的化合物4的DCM溶液，继续反应2.5-3小时，滴加TEA，搅拌30-40分钟后，再置于室温搅拌45-60分钟，再加入TEA，将半胱氨酸盐酸盐溶于无水乙醇中加入反应液中搅拌2.5-3小时，浓缩，粗品溶于乙酸乙酯中，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水MgSO4干燥，过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得无色油状物，即化合物5。
9.根据权利要求8所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤五中，
化合物4：草酸氯：DMSO：第一次加入的TEA：第二次加入的TEA：半胱氨酸盐酸盐的摩尔比为1：2：4：6：2：1.5，所述草酰氯的DCM溶液的浓度为0.086M；
所述草酰氯与DMSO于-78℃下反应1小时后，滴加步骤四所得的化合物4的DCM溶液，继续反应3小时，滴加TEA，搅拌30分钟后，再置于室温搅拌45分钟，再加入TEA，将半胱氨酸盐酸盐溶于无水乙醇中加入反应液中搅拌2.5小时。
10.根据权利要求1所述的Tubulysin家族化合物关键中间体TUV的合成方法，其特征在于：所述步骤六中，
化合物5：MnO2的摩尔比为1：18；活化的MnO2采取两次加入的方法，第一次加入一半，11h后再加入另一半，加入完毕后，加热至60℃，反应16-18h，反应完后过滤浓缩，粗品用石油醚：乙酸乙酯=6：1为洗脱液柱层析得浅色油状物，即终产物TUV。
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